阿奇霉素耐药及头孢曲松低敏淋球菌基因分型

ＡＺＭ－Ｒ 菌株经 ＮＧ－ＭＡＳＴ 检测，检出６７株序列类型，其中３０株有异常。多数序列 类 型 表 现 为 单 一 表 型 。 结 论 该 地 区 出 现 的
ＡＺＭ 耐药及 ＣＲＯ 低敏淋球菌值得持续监测和进一步研究，以明确其耐药机制。
关 键 词 ：淋 球 菌 ； 阿 奇 霉 素 ； 抗 菌 药 物 耐 药 性 ； 多 抗 原 序 列 分 型 法
ＬＩ Ｘｉａｏｄｏｎｇ，ＬＩＡＮＧ Ｊｉｎｇｙａｏ，ＢＩ Ｃｈａｏ，ＹＡＮＧ Ｒｉｄｏｎｇ，ＬＩ Ｐｉｎｇ，ＬＩＡＮＧ Ｙａｎｈｕａ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｂａｏ，ＣＡＯ Ｗｅｎｌｉｎｇ△ （Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｋｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１００９５，Ｃｈｉｎａ）
摘 要：目的 分析广州地区阿奇霉素耐药及广谱头孢菌素低敏淋 球 菌 基 因 分 型 和 基 因 多 态 性 特 征 。 方 法 检 测 阿 奇 霉 素
（ＡＺＭ）和头孢曲松（ＣＲＯ）最小抑菌浓度（ＭＩＣ）。检测 ＡＺＭ 耐 药（ＡＺＭ－Ｒ）淋 球 菌 ２３ＳｒＲＮＡ、多 重 可 传 递 耐 药 调 节 （ｍｔｒＲ）基 因
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ； ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ； ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ； ＮＧ－ＭＡＳＴ
多重耐药淋球菌的传播是日益严峻的公共卫生问题之一。 淋病治疗首选经验药物广谱 头 孢 菌 素（ＥＳＣｓ）单 药 治 疗 疗 效 不 佳 ，因 此 目 前 多 采 用 联 合 抗 菌 疗 法 ，推 荐 疗 法 为 肌 肉 注 射２５０～ ５００ｍｇ头孢曲松（ＣＲＯ），或 口 服 ４００ ｍｇ头 孢 克 肟 （患 者 具 有 ＣＲＯ 禁忌 证 时）、１～２ｇ 阿 奇 霉 素 （ＡＺＭ）联 合 用 药［１－３］。２０００ 年，因具有较好的疗效，国内推 荐 ＡＺＭ 作 为 淋 病 及 淋 球 菌、沙 眼衣原体混合感染治疗的首选用药［４］。广州地区于２００９ 年 第 一次分离鉴定出 ＡＺＭ 耐 药 （ＡＺＭ－Ｒ）淋 球 菌［５］。 各 种 基 因 突 变，如２３ＳｒＲＮＡ、多重可 传 递 耐 药 调 节 （ｍｔｒＲ）基 因 和 青 霉 素 结合蛋白２（ＰＢＰ２）编码 基 因 （ｐｅｎＡ）突 变，是 染 色 体 途 径 介 导 ＡＺＭ 和 ＥＳＣｓ耐 药 的 主 要 机 制 。 ［６－８］ 本 研 究 分 析 了 广 州 地 区 ２００９年９月至２０１３年 １０ 月 ＡＺＭ－Ｒ 及 头 孢 曲 松 敏 感 性 下 降 （ＣＲＯＤ）淋球菌 流 行 情 况 及 其 基 因 特 征。 现 将 研 究 结 果 报 道
作者简介：黎小东，女，副主任技师，主要从事微生物学和免疫学研究。 △ 通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｃｌｌａｚ＠１６３．ｃｏｍ。
· １４９６ ·
国际检验医学杂志２０１７年６月第３８卷第１１期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．１１
淋球菌参考株 Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｐ。参考既 往 研 究，将 ＡＺＭ－Ｒ 淋 球 菌 分 为 ＡＺＭ 低 度 耐 药 株 （ＡＺＭ－ＬＬＲ，ＭＩＣ＝１ ｍｇ／Ｌ）、ＡＺＭ 中 度 耐药株 （ＡＺＭ－ＭＬＲ，ＭＩＣ≥２ ｍｇ／Ｌ）和 ＡＺＭ 高 度 耐 药 株 （ＡＺＭ－ＨＬＲ，ＭＩＣ≥２５６ ｍｇ／Ｌ）［１０］。 １．３ 分子序列 检 测 ＡＺＭ－Ｒ 淋 球 菌 ＤＮＡ 提 取 采 用 ＴＩＡＮａ－ ｍｐ细菌 ＤＮＡ 提取 试 剂 （北 京 天 根 公 司），按 试 剂 盒 说 明 书 操 作。２３ＳｒＲＮＡ、ｍｔｒＲ 和 ｐｅｎＡ 基因突变，及 ｐｏｒＢ 和ｔｂｐＢ 基因 多态性检测采用 聚 合 酶 链 反 应 （ＰＣＲ），ＰＣＲ 扩 增 产 物 纯 化 后 进 行 测 序 。 ［８，１１－１２］ 根 据 基 因 测 序 结 果 判 断２３ＳｒＲＮＡ 基 因 是 否 突 变。ｍｔｒＲ、ｐｅｎＡ 基 因 测 序 结 果 与 相 关 数 据 库 进 行 比 对，并 分析其编 码 的 氨 基 酸 序 列。采 用 淋 球 菌 多 抗 原 序 列 分 型 法 （ＮＧ－ＭＡＳＴ）对 淋 球 菌 分 离 株 进 行 基 因 分 型［１２］，包 括 ｐｒｏＢ （４９０ｂｐ）、ｔｂｐＢ（３９０ｂｐ）易变片段 等。 采 用 ＮＧ－ＭＡＳＴ 网 站 数 据库分析 ｐｏｒＢ、ｔｂｐＢ 及 ＳＴ 序 列 类 型 等 位 基 因 数 。 采 用 多 序 列比对软件（ＣｌｕｓｔａｌＸ 软件）和 Ｍｅｇａ软件进行进化树分析。 １．４ 统计学处理 采用 ＳＰＳＳ１３．０ 软 件 进 行 数 据 处 理 和 统 计 学分析。计数资料以例数和百分率表示，组间比较采用卡方 检 验 。Ｐ＜０．０５ 为 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义 。 ２ 结 果 ２．１ 药 敏 实 验 结 果 共 检 出 ＡＺＭ－Ｒ 淋 球 菌 ７７ 株，占 １５．９％，包 括 ＡＺＭ－ＬＬＲ 淋 球 菌 ３３ 株 （占 ６．８％）和 ＡＺＭ－ ＭＬＲ 淋球菌４４ 株 （占 ９．１％），见 表 １。ＡＺＭ－ＬＬＲ 淋 球 菌 耐 药率从２００９－２０１０ 年 的 １４．０％ （２４／１７１）下 降 到 ２０１１－２０１３ 年的２．９％（９／３１４）（Ｐ＜０．０５），而 ＡＺＭ－ＭＬＲ 淋球 菌 耐 药 率 从 ２００９－２０１０ 年 的 ４．７％ （８／１７１）上 升 至 ２０１１－２０１３ 年 的 １１．５％（３６／３１４，Ｐ＜０．０５）。２０１１－２０１３ 年 检 出 ７ 株 淋 球 菌 ＭＩＣ＞８ｍｇ／Ｌ，占 ２．２％ （７／３１４），见 图 １。 淋 球 菌 分 离 株 中， ＣＲＯＤ 菌 株 百 分 率 是 ２２．３％ （１０８／４８５），其 中 ＡＺＭ－ＬＬＲ／ ＣＲＯＤ 菌１８．２％ （６／３３），ＡＺＭ－ＭＬＲ／ＣＲＯＤ 菌 占 ４３．２％ （１９／ ４４），显 著 高 于 所 有 淋 球 菌 或 ＡＺＭ－ＬＬＲ 菌 株 的 百 分 率 （Ｐ＜ ０．０５），见 表 ２。
如下。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 一般资料 ２００９年９月 至 ２０１３ 年 １０ 月，于 本 院 就 诊 的 淋病 性 传 播 疾 病 患 者 ４８５ 例，年 龄 １７～６９ 岁，男 ４４５ 例 （占 ９１．８％）、女４０例（占８．２％），男性 均 为 尿 道 炎 患 者，女 性 均 为 宫颈炎患者。采集患者尿道或宫颈口拭子标本，经培养、分 离、 鉴 定 的 淋 球 菌 分 离 株 ４８５ 株 。 １．２ 药敏实验 ＡＺＭ 药 敏 实 验 采 用 欧 洲 抗 菌 药 物 敏 感 试 验 委 员 会 （ＥＵＣＡＳＴ）推 荐 实 验 方 法 和 标 准，ＣＲＯ 药 敏 实 验 采 用 世界卫生组织（ＷＨＯ）２０１２年 推 荐 实 验 方 法 和 标 准［９］。ＡＺＭ－ Ｒ 判断标准为最小抑菌浓度（ＭＩＣ）≥１．０ｍｇ／Ｌ，ＣＲＯＤ 判断 标 准为 ＭＩＣ≥０．１２５ｍｇ／Ｌ。产β－内酰胺酶淋球 菌 检 测 采 用 纸 片 法。淋球菌 质 控 株 采 用 ＡＴＣＣ４９２２６ 与 ２００８ 年 ＷＨＯ 推 荐 的
国际检验医学杂志２０１７年６月第３８卷第１１期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏｌ．及头孢曲松低敏淋球菌基因分型与多态性研究
黎 小 东 ，梁 景 耀 ，毕 超 ，杨 日 东 ，李 平 ，梁 艳 华 ，张 锡 宝 ，曹 文 苓 △ （广 东 省 广 州 市 皮 肤 病 防 治 所 检 验 科 ５１００９５）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ（Ｎ．ｇｏ）ｗｉｔｈ ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ（ＡＺＭ）－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＡＺＭ－Ｒ）ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ（ＣＲＯＤ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍｕｍ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ ＡＺＭ ａｎｄ ＣＲＯ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＡＺＭ－Ｒ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ２３ＳｒＲＮＡ，ｍｔｒＲ ａｎｄ ｐｅｎＡ ｇｅｎｅｓ．Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ｎ．ｇｏ ｍｕｌｔｉ－ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ（ＮＧ－ＭＡＳＴ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｌｌ ｔｏｔａｌ ｏｆ ４８５ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｎ． ｇｏ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．７７（１５．９％）ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ＡＺＭ－Ｒ（ＭＩＣ≥１ ｍｇ／Ｌ），ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ３３（６．８％）ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ＡＺＭ ｌｏｗ－ｌｅｖｅｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ （ＡＺＭ－ＬＬＲ，ＭＩＣ＝１ ｍｇ／Ｌ）ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ４４（９．１％）ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ＡＺＭ ｍｉｄｄｌｅ－ｌｅｖｅｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＡＺＭ－ＭＬＲ，ＭＩＣ≥２ ｍｇ／Ｌ）ｓｔｒａｉｎｓ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ＣＲＯＤ（ＭＩＣ≥０．１２５ ｍｇ／Ｌ）ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ ＡＺＭ－ＭＬＲ ｉｓｏｌａｔｅｓ（４３．２％ ），ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ＡＺＭ－ＬＬＲ ｉｓｏｌａｔｅｓ （１８．２％ ，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｒａｔｅｓ ｏｆ ２３ＳｒＲＮＡ，ｍｔｒＲ，ｐｅｎＡ ｓｉｎｇｌｅ ｏｒ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＡＺＭ－ＬＬＲ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ＡＺＭ－ＭＬＲ ｉｓｏｌａｔｅｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ＡＺＭ－ＬＬＲ／ＣＲＯＤ ｉ－ ｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ＡＺＭ－ＭＬＲ／ＣＲＯＤ ｉｓｏｌａｔｅｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｎｏ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ２０５９Ｇａｎｄ ＡＺＭ ｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＡＺＭ－ＨＬＲ， ＭＩＣ≥２５６ ｍｇ／Ｌ）ｉｓｏｌａｔｅ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ．Ａｍｏｎｇ ７７ ＡＺＭ－Ｒ ｉｓｏｌａｔｅｓ，６７ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｅｓ（ＳＴ）ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＮＧ－ＭＡＳＴ，ｏｆ ｗｈｉｃｈ ３０ｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｖｅｌ．Ｍｏｓｔ ＳＴ ｗｅｒｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｓｏｌａｔｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＡＺＭ－Ｒ ａｎｄ ＣＲＯＤ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ａｒｅａ， ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｄｅｓｅｒｖｅｄ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．