拮抗放线菌F-15的生防作用及其初步分类鉴定
一株拮抗放线菌菌株的筛选与鉴定
一株拮抗放线菌菌株的筛选与鉴定郭春燕;王旭正;刘少杰;于金凤【摘要】采用平板对峙法与灰色关联度分析法从小麦和苹果根际土壤中筛选出对小麦纹枯病(Rhizoctonia cerealis)和小麦根腐病(Bipolaris sorokiniana)具有良好拮抗作用的放线菌,并依据菌落形态和培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析等进行鉴定.结果表明,菌株FX-H-51抑菌效果显著,对不利生长环境有良好的耐受性.形态学与分子鉴定结果表明,菌株FX-H-51为海棠链霉菌(Streptomyces spectabilis).%Actinomycetes with strong antagonistic activity against Rhizoctonia cerealis and Bipolaris sorokiniana were screened out from wheat and apple rhizosphere soil by plate confrontation method and grey correlation degree analysis. They were identified according to the colony morphology and culture characteristics, physiological and biochemical characteristics and 16S rDNA sequence. The results showed that the FX-H-51 strain had significant antibacterial effect and better tolerance to the unfavorable growth environment. The morphological and molecular identification results indicated that the FX-H-51 strain was to Streptomyces spectabilis.【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2018(050)004【总页数】5页(P43-47)【关键词】放线菌;灰色关联度分析;拮抗活性;海棠链霉菌【作者】郭春燕;王旭正;刘少杰;于金凤【作者单位】山东农业大学植保学院植物病理学系,山东泰安 271018;山东农业大学植保学院植物病理学系,山东泰安 271018;山东省烟台农业学校,山东烟台265100;山东农业大学植保学院植物病理学系,山东泰安 271018【正文语种】中文【中图分类】S154.3放线菌是陆生性较强的原核生物，同时也是一类具有重要经济价值和生物研究价值的微生物资源，其中链霉菌属(Steptomyces)的放线菌在植物病害生物防治中已有较多的研究报道。
土传真菌病害拮抗菌的筛选及其生防效果研究
土传真菌病害拮抗菌的筛选及其生防效果研究一、内容综述土传真菌病害是影响农作物产量和质量的重要因素，给农业生产带来了严重的经济损失。
传统的防治方法主要是化学农药的使用，但其存在一定的局限性，如对环境的污染、对人畜健康的潜在危害以及抗药性的产生等问题。
因此寻找一种安全、环保、高效的防治方法显得尤为重要。
近年来生物防治逐渐成为研究热点，其中拮抗菌在土传真菌病害防治中具有重要的应用价值。
本文将对土传真菌病害拮抗菌的筛选及其生防效果进行研究。
首先本文将对土传真菌病害的病原菌进行分类和鉴定，明确病害的主要病原菌种类及其特点。
然后通过文献调查和实验室实验，筛选出具有抗病作用的植物源或微生物源拮抗菌。
接着对筛选出的拮抗菌进行生物学特性的研究，包括拮抗菌对土传真菌病害的抑制作用、拮抗菌的安全性和稳定性等方面的评价。
此外本文还将探讨拮抗菌在田间应用的效果，包括拮抗菌的施用方式、用量、施用时间等因素对防治效果的影响。
通过对不同地区、不同作物类型的试验数据进行分析，总结拮抗菌的筛选规律和生防效果，为土传真菌病害的防治提供科学依据。
A. 研究背景和意义随着全球气候变化和人类活动对生态环境的影响，土传真菌病害在许多国家和地区呈现出日益严重的态势。
土传真菌病害不仅对农作物产量和质量造成严重影响，而且对人类健康和生态环境带来潜在风险。
因此研究和开发有效的拮抗菌以控制土传真菌病害具有重要的现实意义。
目前已有多种拮抗菌被广泛应用于农业生产，但由于土壤条件、作物种类和病原菌多样性等因素的影响，这些拮抗菌的防效往往不尽如人意。
因此筛选出具有良好生防效果且适应性强的拮抗菌显得尤为重要。
此外随着生物技术的发展，基因工程技术在植物病害防治领域的应用也日益广泛。
通过基因工程技术改良拮抗菌的抗性或提高其生防效果，将有助于实现对土传真菌病害的有效控制。
本研究旨在通过对不同来源的拮抗菌进行筛选，发掘具有良好生防效果的微生物资源，为农业生产提供高效、安全、环保的防治手段。
向日葵菌核病生防放线菌的分离筛选及拮抗作用的初探
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拮抗大豆斑疹病菌放线菌菌株的筛选和促生作用及防效研究
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2022.14108拮抗大豆斑疹病菌放线菌菌株的筛选和促生作用及防效研究王炫栋杨孙玉悦高润杰余俊杰郑丹沛倪峰蒋冬花*浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华321004摘要：大豆斑疹病在全球范围内发生，严重影响大豆生产。
为了避免化学杀菌剂的诸多缺点，添加生防菌逐渐成为防治大豆斑疹病的一种替代策略。
然而，对大豆斑疹病生防菌剂开发和防效研究却鲜有报道。
本试验采用梯度稀释涂布法从多种植物根际土壤样本中共分离出186株放线菌菌株。
利用共培养法和牛津杯法筛选到8株拮抗大豆斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv. glycines，Xag)的放线菌，其中拮抗能力最强的是Sl-3菌株，发酵滤液抑菌圈直径为(32.5±1.5) mm。
根据形态特征、生理生化试验、16S rDNA序列和系统发育分析，鉴定Sl-3菌株为丁香链霉菌(Streptromyces lilacinus)。
丁香链霉菌Sl-3菌株乙酸乙酯粗提物具有良好的抑制Xag生长的效果。
采用96孔板法测定粗提物最低抑菌浓度为64 μg mL-1。
扫描电镜观察结果显示Sl-3菌株的粗提物对Xag细胞有一定的损伤作用，影响细胞分裂、细胞膜合成，从而抑制细菌生长。
粗提物还能抑制Xag胞外多糖的产生，影响生物膜形成，降低Xag的侵染毒力。
傅里叶红外光谱法测定结果显示，粗提物处理会对Xag细胞表面的脂质、蛋白质和核酸等物质的化学和生理指标造成一定的影响，导致Xag细胞表面物质的结构及组成变化。
促生试验结果显示Sl-3菌株发酵滤液能够促进大豆植株生长。
盆栽试验结果显示，丁香链霉菌Sl-3发酵滤液对大豆斑疹病有很好的防治效果，相对防效达到93.17%，且提前预防效果优于发病后治疗。
关键词：放线菌；丁香链霉菌；大豆斑疹病菌；抑菌作用；生物防治Screening Streptomyces against Xanthomonas axonopodis pv. glycines and study of growth-promoting and biocontrol effectWANG Xuan-Dong, YANG Sun-Yu-Yue, GAO Run-Jie, YU Jun-Jie, ZHENG Dan-Pei, NI Feng, and JIANG Dong-Hua*College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, Zhejiang, ChinaAbstract: Soybean bacterial pustule disease occurs globally, seriously affecting soybean production.To avoid the many shortcomings of chemical fungicides, the addition of biocontrol bacteria has gradually become an alternative strategy for the prevention and treatment of soybean bacterial pustule disease. However, there are few reports on the development and prevention of soybean bacterial pustule disease biocontrol agents. In this experiment, a total of 186 strains of actinomycetes were isolated from a variety of plant rhizosphere soil samples using the gradient dilution coating method. Eight strains of actinomycete with antagonistic resistance to Xanthomonas axonopodis pv. glycines (Xag) were screened by coculture and Oxford cup methods. Among them, the strain Sl-3 performed the strongest antibacterial activity and the inhibition zone diameter was (32.5±1.5) mm. According to morphological characteristics, physiological and biochemical experiments, 16S rDNA sequencing and phylogenetic analysis, the strain Sl-3 was identified as Streptromyces lilacinus. The crude ethyl acetate extract of Streptromyces lilacinus Sl-3 has a good inhibitory effect on the growth of Xag. The lowest inhibitory concentration of the crude extract was determined to be 64 μg mL-1 by 96-well plate method. Scanning electron microscopy revealed that the crude extract of strain Sl-3 had a certain damage effect on Xag cells, which affected cell division and cell membrane synthesis, thus inhibiting the growth of bacteria. The crude extract also本研究由国家自然科学基金项目(31570013)资助。
【精品】生防菌对植物真菌病害的作用
生防菌对植物真菌病害的作用学院：生命科学学院专业班级：学生姓名:目录摘要 ............................................... 错误!未指定书签。
1植物真菌病害...................................... 错误!未指定书签。
2生防菌的种类及生防机制............................ 错误!未指定书签。
2.1生防菌的种类................................... 错误!未指定书签。
2.2生防菌的生防机制............................... 错误!未指定书签。
2。
2。
1竞争作用............................... 错误!未指定书签。
2。
2。
2拮抗作用............................... 错误!未指定书签。
2。
2。
3诱导抗性作用........................... 错误!未指定书签。
2.2。
4促生作用................................ 错误!未指定书签。
3生防菌的筛选与鉴定................................ 错误!未指定书签。
3。
1拮抗芽孢杆菌的分离............................ 错误!未指定书签。
3.2芽孢杆菌的分类鉴定............................. 错误!未指定书签。
参考文献：错误!未指定书签。
生防菌对植物真菌病害的作用摘要:真菌病害是造成作物产量损失的主要原因,作物病害的80％由病原真菌引起,利用微生物及其代谢产物对其进行生物防治，是目前研究的热点.可用于生物防治的微生物有真菌、细菌、放线菌、病原菌弱致病菌等。
生防菌的生防机制各不相同，主要有竞争作用、拮抗作用、诱导作物抗性和促进作物生长，间接提高作物抗性等作用，许多生防微生物还可通过几种不同机制之间的联合来发挥功能。
五指山放线菌分离菌株拮抗活性初步筛选及其分布
采用 了物理 、 化学 和生 物等方 法 防治 ， 都不 能从 根本 上 抑 制其发 生 ， 随着 放线菌 分类 学 的发展 ， 们把 目标 放 人 在 放线 菌生 防菌 的筛选 上 Ｉ 。
五指 山位 于 海南 岛 中部 ，属 国家 自然 保 护 区 的面 积 １４４ ｋ 为 海南 省 最 大 的 自然保 护 区 ， 世 界 上 ３． ｍ ， 是 现存 地势 最高 的原 始热带 雨林 之一 ，蕴 藏着 极其 丰 富 的放 线菌 资源， 至今 未 开发利 用 。 本研 究 前期 已于 ２ ０ ０５
枯 萎病 ４号小 种有拮 抗 活性 。
从 试 验 结 果 （ １ 可 以 看 出 ， 测 定 的 ５ ｌ 放 表 ） 所 １ 株
组 分离 获得 。供试 病原 菌 为辣椒疫 霉 菌和 香蕉 枯萎 镰 刀菌 ４号小种 ． 保存 于 斜面 中 ． 为本 研究 课题 组分 离 均
收 稿 日期 ：０ ８ ０ — ４ ２ ０ — ５ １ 基 金项 目： 国热 带 农 业 科 学 院 重 点项 目 中
的 四周 等距 离 放 置 待 测 放 线 菌 分 离 菌 株 菌块 ，置 于
２ ℃温箱 中培 养 ， ８ ５ｄ后 测量 拮 抗距 离 。 以拮 抗距 离 的
长 短表 示待 测病 原菌 菌株 抑菌 活性 的大小 。
１２２ 活性 菌株 分布 测 定 在 海南 省五 指 山 ３条不 同 ＿． 路 线进 行 放线 菌活 性 菌株 的 的采集 与 分 布 测定 试 验 ，
采 集菌株 数 。 同时 ， 在五 指 山不 同高度海 拔 的地段 采集
菌 ４号小 种平 板抑菌 活性 筛选 ，希 望能 筛选 到对 两 种
病 害有拮抗 活性 的多株 放线菌 菌株 。
人参病害生物防治的研究进展
第42卷 第4期2021年11月Vol.42，No.4Nov.，2021吉林师范大学学报(自然科学版)Journal of Jilin Normal University(Natural Science Edition)doi：10.16862/ki.issn1674-3873.2021.04.018人参病害生物防治的研究进展朴京培，代越强，周晓梅”(吉林师范大学生命科学学院，吉林四平136000)摘要:人参是我国传统中药材，具有重要的药用价值并且给我国东北地区带来巨大的经济效益.人参病害严重影响人参的品质，人参的锈腐病、根腐病等病害使人参根部造成腐烂，极大影响了人参的品相、营养甚至是产量.经研究发现化学防治会带来药物残留问题且会造成不同程度的环境污染.在防治人参病害过程中生物防治效果更为安全，人参病害的生物防治主要包括利用生防细菌、生防真菌、生防放线菌进行病害的防治.上述三类生防菌均可通过竞争作用和抑菌作用达到生物防治的目的，另外生防真菌还可以通过诱导抗性并激发植物自我防护机制进而达到防治病害的作用.关键词:人参;生物防治;生防微生物中图分类号:S435.675文献标志码:A文章编号:1674-3873-(2021)04-0103_050引言人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是五加科、人参属多年生草本药用植物，其各个部位均可入药且药用价值极高,据《神农本草经》记载，人参具有补五脏、安神、止心悸、祛邪养颜、益气、明目等功效，长期服用，可轻身延年［1］.根据近代医学研究探索，逐渐发现人参中的一些成分及其功效.研究表明,人参具有促进脑部海马体细胞增殖及神经元成熟的作用，进而提高人的记忆功能［：］.H.Yang等［3］给新生小鼠口服使用人参皂苷Rb2和Rg3等，验证其对轮状病毒预防效果发现，人参皂苷对轮状病毒具有良好的预防效果.相关药理研究表明，人参挥发油具有抗肿瘤、抑菌、改善心肌缺血消炎、镇咳、抗疲劳、抗氧化等多种药理作用,而且用量不同作用也有很大区别,少量人参挥发油具有兴奋作用,适量则有镇静作用,而大剂量会有麻痹神经的作用［4-6］.随着人参的功效逐渐被发现，人参的产量、品质及安全性也随之被重视起来.人参病害一直是影响人参生产的一大问题,人参病害主要由微生物引起，其不仅能对人参的根茎造成损害，还会残留在土壤中，影响人参的连作.X.H.Lu等［7］在人参根部获得209株人参病原菌菌株，经鉴定发现导致人参锈腐病的病原菌共分为12类，其中主要致病菌为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)和土赤壳属真菌(Ilyonectra).尽管研究发现精甲霜灵和恶霉灵等化学农药对人参多种病害具有防治效果，但部分人参致病菌则对化学药品有显著的抗药性.刘琨等［8］在研究我国人参产区灰霉病菌抗药性实验中发现,灰霉病菌对多菌灵、嘧霉胺等药物具有极强的抗药性，对多菌灵的抗药性已达100%.同时,农药的施用也会造成不同程度的药物残留⑼，对人体及药用安全具有一定安全隐患，因此需要更环保有效途径对人参病害进行防治，人参病害的生物防治是利用原有根系微生物对病原微生物进行抑制，甚至杀死病原微生物且具有对收稿日期:2021-08-27基金项目：国家自然科学基金项目(31670681)第一作者简介:朴京培(1987—),朝鲜族，男，吉林省公主岭市人，讲师，博士.研究方向:微生物学.水通讯作者:周晓梅(1966—),女，吉林省四平市人，教授，博士，硕士生导师.研究方向：微生物学.104吉林师范大学学报(自然科学版)第42卷环境友好、无药物残留等优点,人参病害的生物防治已经取得一定研究进展,本文将对近年来人参病害生物防治的研究进展进行综述.1人参病害生物防治研究现状1.1利用生防细菌防治人参病害细菌具有种类多、分布广、易培养、繁殖快等优势,基于前人对人参病害的研究,从病株根系土壤或组织切片中分离获得多种对人参致病菌株具有抑制作用的细菌•常见的生防细菌主要有两种:一种是芽抱杆菌(Bacillus)，另外一种是假单胞菌(Pseudomonas).这两种生防细菌分布较广,大多生活在于植物根际土壤之中，其产生的次生代谢产物能够有效抑制病原菌的生长,而且芽抱杆菌更突出的优点在于其具有极强的抗逆性、易贮存以及耐高温，更重要的是芽抱杆菌对人畜无毒作用，因此成为比较理想的生防菌资源［10］.宋敏杰等［11］分离获得菌株B2-5,经鉴定发现为芽抱杆菌且其菌液可以使人参根腐病病原菌菌丝萎缩,表明芽抱杆菌B2-5对人参根腐病具有良好的防治效果•据张洁婧等［12］为了进一步证明了芽抱杆菌在人参种植过程中具有防治病害效果，将解淀粉芽抱杆菌接种到土壤中明显发现降低了人参土壤中真菌群落的丰富度.H.Ryu等［13］在实验室中研究发现，枯草芽抱杆菌HK-CSM-1不仅是环境友好型细菌,对人参炭疽病具有良好的抑制效果，施加枯草芽抱杆菌HK-CSM-1菌剂的植株几乎无症状,而未施加菌剂的植株明显蔫儿萎且伴有炭黑色斑点.田磊等［14］从人参根际土壤中分离出TB6菌株并鉴定为解淀粉芽抱杆菌，不仅能增强土壤中多酚氧化酶和过氧化氢酶活动,还能促进人参的生长•除此之外，生防细菌不仅能改良土壤环境，还能进行生物防治，促进植物的生长发育.1.2利用生防真菌防治人参病害目前,研究发现在分离鉴定得到的具有生物防治作用的真菌属微生物大多隶属于木霉菌属(Trichoderma spp.),常见的有长枝木霉(T.longibrachiatum)、深绿木霉(T.maatroviride)、钩状木霉(T.hamatum)、哈茨木霉(T.harzianum)、多抱木霉(T.polyeporum)等［15］.据已有研究报道，木霉对立枯丝核菌(Rhizoctonia)、人参锈腐菌(Cylindrocarpon destructans)、镰刀菌(Fusarium spp)和腐霉菌(Pythium spp.)等引发的人参病害均有较好的防治效果.Y.H.Park等［16］将桔绿木霉(Trichoclorma)制成菌粉接种人参培养一段时间再用病原菌感染人参，发现接种桔绿木霉的植株表皮只出现轻微黄色而未接种生防菌的植株已腐烂，证明桔绿木霉对病原菌具有较好的抑菌效果，作为生防制剂不仅具有巨大潜力，除此之外，桔绿木霉还能促进人参皂苷的形成.K.A.Hussein等［17］研究报道，拟康宁木霉(Trichoderma)的发酵液与迷迭香精油混合溶液对人参主要病害防治效果比单独防治更加显著•此外，除大部分木霉菌外部分毛壳菌(Chaetomiaceae globosum)对人参病害亦有一定的防治作用［18］•1.3利用生防放线菌防治人参病害生防放线菌大多从根系土壤及病害切片中分离获得，且利用生防菌进行生物防治人参病害过程中放线菌的使用要早于生防细菌与真菌.20世纪90年代便有学者发现一些具有抑菌活性的放线菌菌株,并且这些菌株对人参生长发育有明显的促进作用，进而提高人参的产量和品质［19］.崔凡等［20］在94株菌株中筛获得2株放线菌YBUF5与YBUF7,这两种菌株对人参锈腐病具有很强的抑制作用，其发酵浓缩液在不同条件下对人参锈腐病菌也具有较强的抑制作用•有研究报道，利用多种类生防菌复合使用能够减少植物疾病的发病率,增强防治效果［21］.张爱华等［22］将放线菌与木霉菌进行复配使用并制成复合菌剂，使得菌剂对西洋参锈腐病和立枯病的防治效果得到很大提升,不仅如此,菌剂对西洋参的生长也具有明显的促进作用•李晓雯等［23］在染病人参根际土壤中分离出放线菌菌株F3,经拮抗试验表明，拮抗菌株F3能够抑制人参根腐病和锈腐病病原菌，此外F3菌株还能分泌植物生长素吲哚乙酸，对人参的生长具有促进作用.2生防微生物的防病机制2.1生防细菌的防病机制生防细菌防治病原菌主要利用物种竞争作用和抑菌作用达到防治病害的作用：(1)物种竞争作用第4期朴京培，等：人参病害生物防治的研究进展105就是生防细菌一方面与病原菌竞争营养物质，另一方面与病原菌竞争生长空间，致使病原菌营养不足、生长空间受限进而无法生存.(2)抑菌作用指的是生防细菌可以通过产生代谢产物抑制植物病原菌的生长.据K.S.Ben等［24］研究发现,枯草芽抱杆菌V-26能够分泌多种几丁质酶，不仅可以将病原菌菌丝细胞壁溶解，还会使其菌丝破裂、原生质体渗漏;据张清霞等［25］研究发现,绿针假单胞菌7-5能够产生多种抗生素、蛋白酶和氢氰酸等抗菌代谢物，对病原菌的防治效果可达69%,具有良好的抑菌作用.勾长龙等［26］分离获得一株解淀粉芽抱杆菌HB-3,该菌株无菌发酵液中的抗菌蛋白、多肽、生物碱等物质能抑制人参根腐病菌菌丝生长和抱子萌发,且对疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性.2.2生防真菌的防病机制生防真菌主要通过竞争作用、抑制作用和诱导抗性并激发植物自我防护机制进而达到防治病害的作用.(1)竞争作用是利用生长速度快于病原菌的真菌进行生物防治，以达到迅速抢占有利的生态位点，进而阻止病原菌获取营养来源,最终达到减轻或阻止植物被病原菌侵害的目的.研究表明,哈茨木霉菌以竞争方式抑制人参锈腐病病原菌的生长［27］.(2)生防真菌的抑制作用，有研究表明哈茨木霉的发酵液不仅能抑制人参锈腐病病原菌菌丝的生长，也能抑制人参锈腐病病原菌抱子的萌发［27］.赵玳琳等［28］研究发现，棘抱木霉GYSW-6m1菌丝不仅可以通过接触、缠绕病原菌的菌丝并导致病原菌菌丝裂解断裂，还具有促生效果，株高、根长、植株总重显著增加的作用.(3)诱导且激发植物防御机制，孙翠［29］研究结果报道，酿酒酵母细胞壁具有多种葡聚糖，这些葡聚糖可能作为信号分子被梨果实细胞内的受体识别,通过信号转导作用诱导植物激素信号(生长素,赤霉素，茉莉酸，乙烯等)的传递,进而开启植物的自我防护机制.另据L.Yan等［30］报道，植物内生真菌还可以通过和植物建立互利共生关系，并产生某些物质促进诱导植物防御反应，间接提高植物对病原菌的抵抗性.2.3生防放线菌的防病机制生防放线菌通过竞争作用、抑制作用等方面进行生物防治.(1)物种竞争作用，可分为营养与空间的竞争.放线菌在土壤中具有良好的适应能力和稳定性，因而可以快速占据土壤或植物根际环境中生态位点，通过竞争营养和生存空间的方式抑制病原菌的增长，达到抑制人参病害的目的［31］.(2)抑菌作用，于妍华等［32］在研究中发现了生防放线菌对特定病原菌的抗菌机理，即放线菌分泌纤维素酶、几丁质酶等能够水解病原菌细胞壁的酶,降解病原菌细胞壁,或使病原菌菌丝溶解,进而抑制病原菌对人参的侵染.史册［33］分离出4株放线菌菌株，对其经过发酵培养，取发酵液上清液并与菌丝体分别做抑菌实验，结果发现上清液对病原菌的抑制作用比菌丝体更加明显,且这四株放线菌的发酵液对人参愈伤组织的生长有较明显的促进作用.3存在的问题及发展方向近年来，人们越来越关注微生物对植物病害的防治，因此越来越多的生防微生物陆续被筛选出来.但由于抑菌效果良好的生防菌株一般是在实验室条件下筛选出来的，其中很多生防菌株在人参病害防治过程中会出现抑菌活性弱和菌种衰退等不良现象，因此并不能大规模推广使用,导致大多数菌株只能停留在实验室的研究阶段,能够直接应用到田间生产的菌种却很少.目前只能利用生防微生物的发酵液制成生物菌剂进行小规模试行，因此优良菌种的分离筛选工作仍需继续进行，同时可以利用诱变育种(射线诱变、化学试剂诱变等)筛选出优良、稳定的生防菌种.研究表明，利用多种类生防菌复合使用不但能够减少植物疾病的发病率，增强防治效果［21］.因此,可以考虑增加土壤微生物多样性，或将各类生防微生物发酵液混合使用，基于不同微生物的对同种或多种人参病害存在的差异化生防机制,以期实现增强防治效果的目的.大量研究表明，生防微生物的次生代谢产物对植物病原菌具有一定抑制作用甚至杀死病原菌.刘时轮等［34］制取绿色木霉Q4-2悬浮液并灭菌提取不同浓度的代谢液制成培养基，将人参立枯病菌接种培养实验中发现，不同浓度的代谢液对立枯病菌均有抑制效果,且随浓度升高呈递增趋势.X.Wang等［35］分离获得耐盐枯草芽抱杆菌JZ7,JZ7代谢产物对植物根腐病具有良好的抑制效果,其代谢产物鉴定为106吉林师范大学学报(自然科学版)第42卷蛋白酶和纤维素酶，在与根腐病菌拮抗实验中抑菌率可达64.7%.基于大量实验表明，部分生防菌分泌的各类代谢产物在生物防治病害中起重要作用，可以通过寻找产生抑菌次生代谢产物的基因，利用基因工程技术对其进行改造,使其进行超表达促进其代谢产物的生成并制成高浓度生物制剂•此外，研究其表达机制亦是一种途径，将具有抑菌次生代谢产物的基因转入更易培养的菌种中进行表达培养，以获得高浓度抑菌剂•参农已习惯使用化学农药，且对生物防治不甚了解,故推广可能会受到一定阻碍•因此，技术人员不断研发更高效的生物菌剂同时还需对参农进行专业指导，提高参农对生物防治的认知及认可，增强环保意识,培养参农针对人参病害的绿色防治理念.参考文献[1]王月，翟华强,鲁利娜，等•人参的本草考证及现代研究综述[J].世界中医药,2017,12(2)：470-473,476.[2]LEE 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Microorganisms used in biological control includes biocontrol bacteria,biocontrol fungi and biocontrol petition and bacteriostasis are the mainly mechanisms of biological control of all the three biocontrol microorganisms mentioned above.In addition,biocontrol fungi can also control ginseng disease by inducing plant self-protection mechanism.Key words：ginseng;biological control;biocontrol agents(责任编辑：林险峰)。
番茄灰霉病菌拮抗放线菌的筛选
菌， 只有 Ｅ０ 、 Ｏ６Ｗ０５ ０ １Ｗ Ｏ 、 ８ 的发酵无菌滤液有较弱的拮抗作用 ， 其他菌株 的则无拮抗作用 。 关键词 ： 灰霉病菌 ； 拮抗放线 菌 ； 筛选
中图分类号 ： ４ ６ ４ ２ １ ￥ ３ ． １ ． ３ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：０２— ３ ２ ２ １ ） ５— １８一 ３ １０ １０ 【０ １ ０ ０３ Ｏ
洲品系的玉米及 野生玉米螟在受到危害时会 释放 引诱天敌线
虫 的挥发物 ， 而美 国品 系的玉米不会 。本研究利用 改 良后
［］ ４ 魏建荣 ， 忠岐 ， 杨 杜家纬 ． 天敌 昆虫 利用信息化学物 质寻找寄主
的“ 形嗅觉仪 来测定腰带长体茧蜂对转基 因及 对照玉米经 Ｙ” 玉米螟咬食后释放的信息化学物 质的反应 ， 以研究转 基 因玉 米是否对腰带 长体 茧蜂 的寄主 搜索 能力 构成 影 响。结果 表 明， 腰带长体 茧蜂对不 同玉米品种的反应差异不显著 ， 明供 说
一
１ ８一 ３
江苏农业 科学
２ １ 年第 ３ ０１ ９卷第 ５期
李欣欣 ， 袁树忠 ， 钱兰娟 ， 番茄灰霉病菌拮抗放线菌的筛选 ［ ］ 等． Ｊ ．江苏农业科 学， １ ， （ ） １ ８ １０ ２ １３ ５ ：３ — ４ ０ ９
番茄灰霉病 菌拮抗放线菌 的筛选
李欣欣 ，袁霉病（ ｏｒｉｃ ｅ ａＰｔ． 是一种真菌性病 害 ， Ｂｔ ｓ ｉ ｒ ｅ ） ｙ ｎ ｅ ｓ 已
经成为许多作物特别是蔬菜作 物的重大病 害之一 ， 也是番茄
前 ， 用拮抗微 生物 的生物 防治方法被认 为是更 安全 、 利 更友 好、 更能在农业生产 中代 替或者至少 能作为减少 化学农药使
５ ４． ７
生物区系 ， 导致农 产品残 留严重超标 ， 甚至危及人畜健康。 目
拮抗放线菌ZZ-9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定
拮抗放线菌ZZ-9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定范万泽;薛应钰;张树武;徐秉良【摘要】为探究拮抗放线菌ZZ-9(Streptomyces rochei)菌株发酵液的抑菌谱,并明确传代培养、温度、光照、pH及紫外线等理化因素对发酵液稳定性的影响.以15种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定发酵液的抑菌谱,并以苹果树腐烂病菌(Cytospora sp.)为指示菌,测定不同条件下发酵液的稳定性.抑菌谱结果表明:ZZ-9菌株发酵液对供试的15种病原真菌均具有不同程度的抑制作用,其中对苹果树腐烂病菌和立枯丝核菌抑制效果最好,生长抑制率可达96％以上,且效果持久;而对苹果轮纹病菌、蚕豆褐斑病菌、月季叶霉病菌等抑制效果较差,抑制率在27％以下.稳定性试验结果表明:菌株传接6代时,活性稳定,从第7代开始菌株活性下降显著;发酵液耐高温,对强酸强碱处理、可见光及紫外线照射均有较好的稳定性;且在4℃及室温(20～25℃)下可贮藏至少30 d而保持其抑菌活性几乎不变.因此,拮抗放线菌ZZ-9菌株次生代谢产物具有较广谱的抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成微生物农药的潜力.%To study bacteriostatic spectrum of fermentation broth from actinomycetes strain ZZ-9 identified as Streptomyces rochei,and to verify the effect of it on stability of fermentation broth under biochemical and physical factors such as subculture,temperature,illumination,pH and ultraviolet conditions.As the tested phytopathogen,method of growth rate was used to determine antimicrobial spectrum of fermentation broth with 15 kinds of plant pathogenic fungus.With Cytospora sp.as indicator phytopathogen,the stability of fermentation broth under different conditions was measured.The bacteriostatic spectrum results showed that the fermentation broth of ZZ-9 strain had inhibitory effects at differentdegres on 15 kinds of pathogenic fungus.With growth inhibition rate of more than 96％ and the lasting effect,the fermentation broth of ZZ-9 strain had the best effect on Cytospora sp.and Rhizoctonia solani,and it had worse effect on Botryosphaeria piricola,Cladosporium cladosporioidesv and Ascochyta fabae,the inhibition rate was under 27 ％.The stability test showed that the activity of strain was stable until the 6th generation,it decreased significantly from the 7th generation,and the fermentation broth had high temperature resistance,good stability under strong acid and alkali,visible light and ultraviolet irradiation treatments.Moreover,the fermentation broth could be stored for at least 30 days at 4 ℃ and room temperature (20-25 ℃),the activity remained nearlyunchanged.Therefore,the secondary metabolites of antagonistic actinomycetes ZZ-9 strain had broad-spectrum antibacterial activity and strong stability,and the potential could be developed into the microbial pesticide.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2017(026)003【总页数】8页(P463-470)【关键词】拮抗放线菌;发酵液;抑菌谱;稳定性【作者】范万泽;薛应钰;张树武;徐秉良【作者单位】甘肃农业大学植物保护学院/甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室,兰州730070;甘肃农业大学植物保护学院/甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室,兰州730070;甘肃农业大学植物保护学院/甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室,兰州730070;甘肃农业大学植物保护学院/甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室,兰州730070【正文语种】中文【中图分类】S482.2+92中国是世界上农药和化肥污染最严重的国家之一，化学农药的滥用不仅对生态环境、人类健康产生影响，而且易造成病虫害抗性等问题。
一株拮抗纹枯病菌放线菌的筛选及鉴定
一株拮抗纹枯病菌放线菌的筛选及鉴定崔宇辉;王媛媛;汪鹏荣;高爱同;曹丽凌;蒋冬花【摘要】从采自金华市各地的68份土样中分离得到了放线菌406株,以水稻纹枯病菌为指示菌,利用平皿对峙法筛选到42株具有较好拮抗作用的放线菌菌株.其中,Sh-43菌株的拮抗作用最强,抑菌带宽度为28.3mm.根据培养特征、形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列比对分析,鉴定Sh-43菌株为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus).%Four hundred and six actinomycetes were isolated from sixty eight soil samples which were collected from different areas of Jinhua. Forty-two strains had been proved to have antagonistic activity against Rhizoctonia solani by confronting cultivation on PDA plates. Among them, the strain Sh-43 exhibited the strongest antibiosis capacity with an inhibition zone of 28. 3 mm. The strain Sh-43 was identified as Streptomyces hygro-scopicus on the cultural, morphological, physiological, biochemical characteristics and 16S rDNA gene sequence analysis.【期刊名称】《浙江师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(035)004【总页数】5页(P441-445)【关键词】纹枯病菌;放线菌;拮抗作用;筛选;鉴定【作者】崔宇辉;王媛媛;汪鹏荣;高爱同;曹丽凌;蒋冬花【作者单位】浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004【正文语种】中文【中图分类】Q93-331水稻纹枯病俗称“花脚病”，为水稻三大病害之一，尤以密植矮秆杂交稻的高产田发病最为普遍和严重，往往导致水稻叶片枯死、结实率降低、千粒质量减轻，一般发病田块能导致减产15% ～20%，严重时可达60% ～70%，甚至绝收［1-2］.该病在早、中、晚稻上均有发生，危害性极大，在世界各稻作区普遍发生，且近年来有逐年加重的趋势［3］.水稻纹枯病是由立枯丝核菌侵染引起的一种真菌病害，又称云纹病，其典型症状是云纹状病斑和菌核［4］.2010年，于艳敏等［5］筛选到一株芽孢杆菌属的生防菌R13对水稻纹枯病病原菌具有一定的抑制作用，抑菌率为67.8%，可以导致正常的纹枯病菌丝体发生扭曲、变形、原生质外溢，并且明显延迟了菌核的形成时间.2011年，农倩等［6］从水稻体内分离得到的细菌菌株B196对水稻纹枯病菌的生长有较强的抑制作用.在缺乏水稻抗纹枯病品种的情况下，生产中用的药剂有:井冈霉素、灭锈胺、苯甲丙环唑乳油等［7-8］.其中，最常用的井冈霉素自1973年由上海农药研究所开发应用以来，一直是抗纹枯病的当家药品，但因长期连续使用，造成病菌抗药性增强，从而使防治效果不理想［9］.所以，有必要探索利用拮抗微生物进行生物防治的新途径，筛选出更多的有应用价值的拮抗纹枯病的新菌种. 本研究对采自金华市各地的68份土壤中的放线菌株进行分离筛选，获得一株对纹枯病菌具有较强拮抗作用的放线菌Sh-43菌株，通过形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rDNA序列及系统发育分析等方面的研究，鉴定Sh-43菌株为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus).1 材料与方法1.1 供试菌株水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)由浙江省农业科学院提供;苦瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)和番茄叶霉病菌(Cladosporium fulvum)由浙江师范大学化学与生命科学学院微生物实验室保存.1.2 培养基放线菌的分离和保存采用高氏一号培养基;拮抗放线菌株的筛选及苦瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌和番茄叶霉病菌的培养均采用PDA培养基.高氏一号培养基:可溶性淀粉 20 g，KNO31 g，NaCl 0.5 g，K2HPO40.5 g，MgSO40.5 g，FeSO40.5 g，琼脂 20 g，水 1 000 mL，pH 7.2 ～7.4.1.3 土壤中放线菌的分离与纯化将土壤自然风干，在28℃下放置5～7 d，用研钵磨细.采用稀释涂布法对土壤中的放线菌进行分离，纯化后的单菌落转接到高氏一号斜面培养基上编号培养，保存待用.1.4 平皿对峙法筛选拮抗放线菌将PDA培养基融化后，倒入灭菌的平板中冷却凝固，以平板原点为中心，中央接入直径为6 mm的放线菌菌饼，其周围等距离处接入3个直径为6 mm的纹枯病菌菌饼(见图1(b))，每处理3次重复，置于28℃恒温箱中培养，5 d后测量各筛选菌菌落边缘和纹枯病菌菌落边缘之间的抑菌带宽度.1.5 抑菌谱的测定以筛选到的抑菌作用最强的菌株作为目的菌株，与苦瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、番茄叶霉病菌3种植物病原真菌进行对峙培养，测定抑菌谱.1.6 菌株形态特征、生理生化特征及培养特征的测定待鉴定的菌株进行插片培养，将所观察到的形态结果显微照相.培养特征及生理生化特征的测定参照文献［10］，并记录各项指标.1.7 菌体DNA的提取、16S rDNA序列PCR扩增及系统发育树的构建图1 Sh-43菌株的菌落形态和对纹枯病菌的抑菌效果按照上海生工生物工程技术服务有限公司SK1201-UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒说明书提取样品的基因组 DNA.通用引物7f的序列为5'-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3'，1540r的序列为5'-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'.聚合酶链式反应(PCR)扩增程序为:98℃预变性5 min，95℃变性35 s，55℃复性35 s，72℃延伸1 min 30 s，35个循环扩增;72℃延伸8 min.PCR产物纯化后经上海生工生物工程技术有限公司完成测序.将测得的基因序列通过Blast程序与GenBank中核酸数据库(/blast)进行对比分析，并利用 MEGA4以 N-J法绘制系统发育树.2 结果与分析2.1 放线菌菌株的获得在采集到的68份土样中，利用稀释涂布法，根据菌落形态、大小、色泽与生长速度等特征，分离纯化得到了406株放线菌.2.2 平皿对峙法筛选拮抗放线菌利用平皿对峙法测定放线菌株对纹枯病菌的拮抗作用.结果表明:分离到的406株放线菌中共有42株对纹枯病菌有不同程度的抑制作用(见表1)，占分离菌株总数的10.3%，它们产生的生物活性物质可对纹枯病菌起到抑制作用，靠近活性菌株一侧的纹枯菌菌丝表现生长速度减弱;Sh-43菌株的抑菌效果最好，抑菌带宽度为28.3 mm(见图1).表1 42株对水稻纹枯病菌有抑制作用的放线菌株菌株抑菌圈直径/mm 菌株抑菌圈直径/mm 菌株抑菌圈直径/mm Sh-3 13.4 Sh-188 11.5 Sh-287 6.3 Sh-4 12.7 Sh-190 10.2 Sh-294 17.2 Sh-11 9.3 Sh-193 14.7 Sh-301 10.3 Sh-28 12.6 Sh-196 21.2 Sh-305 12.7 Sh-43 28.3 Sh-201 7.3 Sh-311 21.4 Sh-6719.7 Sh-208 16.5 Sh-317 17.8 Sh-91 20.4 Sh-214 11.7 Sh-321 8.3 Sh-10320.3 Sh-229 14.6 Sh-328 15.6 Sh-131 18.9 Sh-232 9.5 Sh-336 12.6 Sh-147 17.9 Sh-242 15.6 Sh-341 15.4 Sh-153 8.6 Sh-247 13.8 Sh-349 11.9 Sh-163 7.4 Sh-265 11.2 Sh-352 10.2 Sh-165 18.9 Sh-272 7.4 Sh-389 9.3 Sh-173 16.3 Sh-281 10.4 Sh-403 6.72.3 抑菌谱的测定供试菌株的筛选结果表明，Sh-43菌株对纹枯病菌有较强的拮抗作用.利用对峙培养法测定Sh-43菌株的抑菌谱，结果如表2所示.由此可知，Sh-43菌株对苦瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌和番茄叶霉病菌这3种植物病原真菌也具有较强的拮抗作用.2.4 Sh-43菌株形态特征、生理生化特征及培养特征的测定菌株形态观察结果表明，Sh-43菌株能够在高氏一号培养基上生长，可形成气生菌丝，气生菌丝成熟后发育成孢子丝，孢子丝呈波曲或螺旋状(见图2).表2 Sh-43菌株抑菌谱的测定结果供试病原菌抑菌圈直径/mm实验组对照组苦瓜枯萎病菌19.3 0小麦赤霉病菌 35.5 0番茄叶霉病菌20.8 0生理生化实验结果(见表3)表明:Sh-43菌株可使明胶缓慢液化，可缓慢水解淀粉，牛奶不凝固，伏谱(V-P)实验呈阴性，可利用肌醇、麦芽糖、D-甘露醇、果糖、蔗糖、半乳糖、乳糖、可溶性淀粉等8种碳源.图2 Sh-43菌株的显微特征(×400)表3 Sh-43菌株生理生化特征的测定结果注:“+”表示阳性或能利用，“-”表示阴性或不能利用;碳源利用结果氮源利用及盐适应性结果生长条件及其他结果乳糖 + 蛋白胨 + 在42℃ -肌醇 + KNO3 + 在pH 4环境 +麦芽糖 + (NH4)2SO4 + 在pH 9环境 +D-甘露醇 + 0.8 g/L NaCl + 明胶液化 +葡萄糖 - 1 g/L NaCl + 淀粉水解 +木糖 - 5 g/L NaCl + 尿素实验 -果糖 + 10 g/L NaCl - V-P实验 -蔗糖+ 35 g/L NaCl - 1%酪蛋白 -半乳糖 + 50 g/L NaCl -乳糖 +可溶性淀粉 +鼠李糖-2.5 16S rDNA序列及系统发育分析Sh-43菌株基因组 DNA的提取结果见图3.采用细菌的16S rDNA通用引物进行PCR扩增，获得一长度为1 388 bp的基因(见图3)，序列测定由上海生工生物工程技术有限公司完成.基于16S rDNA序列分析进行细菌鉴定是国际上通用的鉴定技术.一般认为:16S rDNA序列同源性小于98%，可以认为种不同;同源性小于93% ～95%，可以认为属不同［11］.将Sh-43菌株16S rDNA基因序列通过Blast比对分析，Sh-43菌株与吸水链霉菌的遗传距离最小，同源性高达100%.基于16S rDNA基因序列建立的链霉菌属系统发育树见图4.故将Sh-43菌株鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus).图3 Sh-43菌株的电泳分析图3 结论与讨论本研究通过对不同地区土样中放线菌的分离筛选，获得了一株拮抗纹枯病菌的Sh-43菌株.通过观察菌株的形态和培养特征，分析其生理生化特性，根据文献［12］确定Sh-43菌株为链霉菌属，再结合菌株的16S rDNA序列的聚类分析结果，最后将其鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus).图4 基于16S rDNA基因序列建立的链霉菌属(Streptomyces)系统发育树国内已有不少有关应用拮抗微生物防治纹枯病的研究报道.陈宏州等［13］从水稻根围土样中筛选得到对水稻纹枯病菌有显著拮抗活性的放线菌菌株，其发酵滤液在稀释10倍时对水稻纹枯病菌的抑菌活力达46.21%.郑爱萍等［14］从健康的水稻植株、感染纹枯病水稻植株及根际土壤、秧田水、菌核上分离出了能拮抗纹枯病的细菌，从中挑选在实验室中作用效果明显的菌株，对其分别进行了抑菌率、致畸性、对菌核的萌发和形成的影响度等抗生性检测，并在液培条件下检测了其对水稻的出苗率、叶片及根系干质量的促生性，结果表明在田间试验中混合3种菌处理有较好的防治效果.生理生化实验显示，吸水链霉菌Sh-43菌株对环境具有较强的适应能力;抗菌谱测定结果表明，Sh-43菌株对真菌类病原菌表现出明显的拮抗能力.吸水链霉菌Sh-43菌株对纹枯病菌产生明显的抑菌圈，表明该菌可以合成某种抗菌物质并释放到周围环境，其对纹枯病菌的生长和繁殖具有较强的抑制作用.因此，Sh-43菌株有希望作为生防菌用于水稻纹枯病的防治.但是，这些具有生物活性的抗菌物质的结构和功能现在尚不清楚，正在进一步的研究中.参考文献:［1］任春梅，高必达，何迎春.水稻抗纹枯病的研究进展［J］.植物保护，2001，27(4):32-36.［2］李洪刚.水稻纹枯病的诊断与防治［J］.农村经济与科技，2001(8):34.［3］Zeng Yuxiang，Ji Zhijuan，Ma Liangyong，et al.Advances in mapping loci conferring resistance to rice sheath blight and mining Rhizoctonia solani resistant resources［J］.Rice Science，2011，18(1):56-66.［4］赖传雅.农业植物病理学［M］.华南本.北京:科学出版社，2003:21-27. ［5］于艳敏，赵北平，高洪儒，等.生防菌R13对水稻纹枯病病原菌的抑制作用［J］.黑龙江农业科学，2010(1):3-4.［6］农倩，陈雪凤，黎起秦，等.水稻内生细菌B196的鉴定及其对水稻纹枯病的防治作用［J］.中国生物防治学报，2011，27(1):99-103.［7］Zhang Chuanqing，Liu Yinghui，Ma Xinying，et al.Characterization of sensitivity of Rhizoctonia solani，causing rice sheath blight，to mepronil and boscalid［J］.Crop Protection，2009，28(5):381-386.［8］但汉曙.赤壁市水稻纹枯病重发原因及防治对策［J］.湖北植保，2010(6):15. ［9］朱卫刚，胡伟群，陈杰.噻呋酰胺与井冈霉素复配对防治水稻纹枯病的增效作用［J］.中国稻米，2011，17(2):54-55.［10］中国科学院微生物研究所放线菌分类组.链霉菌鉴定手册［M］.北京:科学出版社，1975.［11］Fry N K，Warwick S，Saunders N A，et al.The use of 16S ribosomal RNA analyses to investigate the phylogeny of the family Legionellaceae ［J］.Journal of General Microbiology，1991，137(5):1215-1222.［12］瓦克斯曼S A.放线菌:第二卷属和种的分类、鉴定和描述［M］.阎逊初，译.北京:科学出版社，1974.［13］陈宏州，杨敬辉，朱桂梅，等.水稻纹枯病菌拮抗放线菌的筛选与生防潜能评价［J］.江苏农业科学，2009(5):141-143.［14］郑爱萍，李平，王玲霞，等.水稻纹枯病拮抗细菌的筛选及抗生性研究［J］.西南农业学报，2001(1):78-81.。
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摘要： 从沈 阳东陵 区蔬 菜大棚 土壤 中分 离到 ｌ 株拮抗 放线 菌 ， 编号 为Ｆ １ 。采用平板 对峙培 养法和 温室盆栽 一５
第 ４ 卷第 ４期 ８
农 药
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文献标志码 ： Ａ
文章编号 ：０ ６ ０ １ （ ０ ９ ０ －３ １０ １ ０ － ４ ３２ ０ ）４ ０ ０ － ３
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防治法 测 定 了其抑 菌 活性 ， 并通 过 形态 学 、 化学 的方 法 初步 研 究 了其分 类 地位 。结 果 表 明 ： 菌株 对供 试 该 的多种植 物病 原菌 均有 抑制作 用 ， 巾对瓜 类枯 萎病 菌和 番茄 叶霉 病菌 抑制 作用较 强 ， 均抑 菌带 宽度 达 其 平
到 １ ．～１ ． ４ ８ ５０ｍｍ。温室防病实验 结果表 明 ： 发酵上清液对 番茄 叶霉 病具有 良好 的生 防作 用 ， 其 防治效果可 以