绵羊卵泡颗粒细胞体外培养条件的优化
不同培养时间对绵羊卵泡颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响
黑龙 江 动物繁 殖
第 ｌ ０卷
第 １期
２０ Ｏ２年
不 同 培 养 时 间 对 绵 羊 卵 泡 颗 粒 细 胞 分 泌 雌 二 醇 和 孕 酮 的 影 响
马 友 记 ， 李 发 第
（ 甘肃农 业大 学 动物科 技学 院 ，甘肃 兰州 ７０ ７ ） ３ ００
１４ １ 细胞 培 养 ． 从 屠宰 场 刚宰 杀 的 母绵 羊 体 内剪 下 卵巢 ． ＾ 敢
℃灭 菌生 理盐 水 中 ． ３ｈ内运 回实 验 室 ， 超 净工 在
作 台 内用 灭 菌 生理 盐 水 冲洗 ２—３ ， 液弃 去 ． 遍 洗 再 用 灭菌 滤纸 擦干 卵 巢 。用 装 有 ８号针 头 的 ｌ ｄ注 ０Ｉ Ｉ 射 器吸 取 ２ｍｌ 没加 血清 的 Ｍ Ｍ液 ， 针 头扎 入卵巢 Ｅ 将
培 养 时 问 壤廑 ｌ ） ２ ４ｈ ３ ６ｈ ４ ８ｈ ６∞ ｌ 】９ ・ ｌ９
知体外 培养 的卵 泡 颗粒 细 胞 几 乎 不 分 孕 酮 ， 明 说 利用颗 粒细 胞单层 培 养 系统 与 体外 受精 卵共 同培 养 可提 高受精 卵发 育 至囊胚 的 比率可 能 与孕酮 无关 。
活率 （ ５ 培 养 条件 为 卯℃ 、％Ｃ ， 大相 对 ＞９ ％） ５ 最
湿度。
Ｍ Ｍ干粉 培养 基 （ Ｅ 日车 制 药 株式 会 社生 产 ） 雌 ， 二醇 和 孕酮敢 射免 疫 测 定 试 剂 盒 （ 方 生物 制 品 研 北 究所 生 产） 犊 牛血 清 （ ｌ 生 物 药 厂 ） 其 它 药 品 均 ， 兰州 ． 来 白兰 ＿ 生物 制品 研究 所 州
Ｉ３ 培 养 液 配 制 ．
１４２ 样 品制 备 ．． 将 细胞 稀释 液分 装 入 ２ 孔 培养 板 上， ４ 每孔 ｌＩ ， Ｉ Ｉ ｌ 在ｃ２ ｏ 培养 箱 内培养 ２ 、６ ｈ ４ ４ｈ ３ 、８ ｈ时分 别 用 移｛ 馥 器吸取 ５０出 细 胞 培 养 液 ， 次 吸取 Ｉ ０ 每 Ｏ孔 ， 取 的 吸 ｛ 馥庠 一２ ℃保存 待测 。 ０
绵羊和山羊卵母细胞体外成熟研究进展
绵羊和山羊卵母细胞体外成熟研究进展王中伟，岳顺利，周佳勃∗东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨（150030）E-mail:wzw006336@摘要：本文介绍当前在绵羊和山羊卵母细胞采集和体外成熟方面的研究进展。
卵巢经过促性腺激素处理后能够提高可采集卵泡的数量。
卵母细胞采集方法分为从死亡动物和活体采卵两大类。
死亡动物采卵主要有抽吸法和切割法。
缺点是得到的是不同发育阶段的卵母细胞，而且要牺牲供体的生命。
先进的活体采卵技术有两种分别是腹腔镜采卵和超声波引导阴道穿刺采卵。
它们优点是对母羊损伤小、利用率高。
卵母细胞冷冻保存有助于提高优质卵母细胞的利用率。
最后还阐述了影响卵母细胞质量和产量的因素，例如，激素、血清、卵泡液、生长因子等一些因素的作用。
关键词：绵羊，山羊，卵母细胞，采卵，体外成熟中图分类号：S8111 引言中国养羊业历史悠久，绵羊和山羊品种多样，羊产品也十分丰富。
绵羊和山羊不但具有经济价值，而且可以作为许多疾病研究的很好的实验动物模型。
近些年，国内外在家畜生殖技术研究，特别是在绵羊和山羊的生殖技术方面取得了很大进展，例如第一个体细胞核移植成功的动物就是绵羊。
此外，这些应用在绵羊和山羊上的生殖技术还可用于保护野生濒临灭绝的小型反刍动物[1]。
众所周知，卵母细胞体外成熟（IVM）是进行体外胚胎生产（IVP）、克隆以及辅助生殖（ART）的基础。
本文介绍了目前绵羊和山羊卵母细胞成熟技术的研究进展和影响因素。
2 卵母细胞的采集和保存2.1采集前的促性腺激素处理绵羊或者山羊卵巢经过促性腺激素处理后能够提高可采集卵泡的数量，性未成熟羔羊经促性腺激素处理后也可做为供体[2]。
研究表明，促性腺激素处理羔羊得到的卵母细胞数量高于同样处理的成年山羊，但是二者卵母细胞的体外发育的情况却相似[3]。
绵羊经FSH处理两天得到的卵母细胞的回收率和卵裂率大于处理三天。
在绵羊同步发情实验中发现，恒定剂量处理比递减剂量FSH处理获得的卵母细胞质量更好而且对冷冻保存的耐受能力更强[4]。
绵羊卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存研究
绵羊卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存研究绵羊卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存研究概述：绵羊是重要的农牧业动物之一，其繁殖技术的发展对于提高绵羊育种效果具有重要意义。
卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存是绵羊繁殖技术中的关键环节，本文将对绵羊卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存进行研究和探讨。
第一部分：绵羊卵母细胞的体外成熟培养体外成熟培养是将绵羊卵母细胞从卵巢中取出后进行离体培养，使其在人工环境下完成卵母细胞的成熟过程。
培养基的选择是体外成熟培养的关键，常用的培养基包括TCM-199、M199和MEM等，这些培养基的成分经过优化可以提供卵母细胞生长所需的养分和激素。
在培养过程中，关注卵母细胞的质量和数量非常重要。
细胞质量的评估可以通过观察细胞形态、染色体形态和核质比等指标进行，而细胞数量则可以通过细胞计数器进行测定。
此外，培养条件的控制也对细胞成熟有着重要的影响，包括培养基的温度、pH值、营养物质浓度、氧气浓度和CO2浓度等。
第二部分：绵羊卵母细胞的冷冻保存冷冻保存是将绵羊卵母细胞置于超低温环境中，通过降低细胞活性来实现细胞的保存。
冷冻保存的过程包括细胞预处理、冷冻和解冻恢复等步骤。
在细胞预处理中，常用的方法包括低温暴露、添加保护剂和通过减小细胞体积等方式来保护细胞。
冷冻和解冻过程中，温度的降低和升高的速率、冷冻保护剂的浓度和种类、冷冻保存的时间等因素都会对细胞的存活率和功能产生影响。
绵羊卵母细胞的冷冻保存可以实现细胞资源的长期保存，便于后续的研究和利用。
并且，通过冷冻保存，可以有效地减少传染病的传播风险，保护绵羊资源的遗传多样性。
第三部分：绵羊卵母细胞体外成熟培养及冷冻保存的应用前景绵羊卵母细胞的体外成熟培养和冷冻保存技术在动物繁殖和生殖医学领域具有广阔的应用前景。
通过体外成熟培养技术，可以获取大量高质量的卵母细胞供给绵羊的人工受精或体外受精操作，提高绵羊的繁殖效益。
在冷冻保存方面，绵羊卵母细胞的成功冷冻保存，可以实现绵羊资源的长期保存，并且为绵羊的基因改良提供了有力的工具。
绵羊卵泡颗粒细胞的体外培养与保存
211绵羊卵泡颗粒细胞的体外培养与保存杨 娟 魏锁成*（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）摘 要：哺乳动物卵巢内含有数量庞大的腔前卵泡，然而在生理条件下，这些卵泡只有大约1%能发育到成熟的排卵阶段，其余都由于闭锁而退化，这是对雌性繁殖潜力的极大浪费 。
通过在体外培养复苏这些卵泡的生长，可以为体外受精，克隆和转基因等生物工程技术提供潜在的同种质卵母细胞来源[1]。
特别是随着克隆和转基因技术的发展，将来对卵母细胞的需要越来越大，只靠回收窦腔卵泡中的卵子已经不能满足需求，通过体外培养卵巢组织或者卵泡，复苏卵巢中占主导地位的腔前卵泡的生长，可以加强我们对卵泡颗粒细胞生存、发育的生理调节机制的了解，对于提高高遗传和经济价值的家畜以及在科研上具有重要价值的动物的繁殖潜力，珍稀或濒危动物的保护以及人类生育能力的保存和辅助受孕具有重大意义[2]。
关键词：绵羊；卵泡颗粒细胞；培养；保存目前对卵泡颗粒细胞培养的模式包括整个卵巢培养和皮质薄片的培养，前者主要应用与胚胎时期卵巢和小型动物卵巢的培养，后者主要应用在大型物种如人、牛、羊等动物卵巢的培养[3]。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 主要试剂胰岛素、两性霉素、MEMα、生理盐水、FSH、雄激素、青霉素、碳酸氢钠、亚硒酸钠、非必需氨基酸等。
1.1.2 主要仪器和设备组织切片机、超净工作台、光学显微镜、眼科手术刀、眼科手术剪、培养皿。
1.2 试验方法1.2.1 实验材料的采集从当地屠宰场采集绵羊的卵巢，加入含有100µg/ml 的青霉素或者链霉素的生理盐水中，27~32℃保存，要在1h 内运回实验室。
1.2.2 实验材料的处理在显微镜下去除卵巢附属物，用DPBS 冲洗2~4次，用眼科手术剪将卵泡剪下来，用刮刀轻轻刮去内壁，收集颗粒细胞。
1.2.3 颗粒细胞的培养将颗粒细胞接种于96孔板内，按试验需要加入不同浓度的FSH（0，1，5，25ng/ml），具体添加方法见表1，每孔活细胞数为2×104个，37℃，5%二氧化碳，饱和湿度条件下培养。
哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展
哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展李有为;程亚倬;商继勇;张廷龙;孙铭菊【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2024(51)3【摘要】体外成熟是哺乳动物胚胎工程获得成熟卵母细胞的主要途径,卵母细胞质量直接影响早期胚胎发育,妊娠的建立及维持,胎儿的发育等。
哺乳动物卵巢表面数量众多的小卵泡可以作为胚胎工程卵母细胞的来源,但从哺乳动物卵巢获取的卵母细胞成熟差异较大,存在处于发育各个时期的卵母细胞,小卵泡卵母细胞体外成熟质量差,发育能力不足。
如何提高小卵泡卵母细胞体外成熟的发育能力以充分挖掘优良母畜的遗传资源,提高胚胎工程效率成为研究热点。
基于此,文章概述哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展,比较大、小卵泡卵母细胞物质积累差异、卵泡的卵泡液成分及含量差异以及卵泡颗粒细胞和卵丘细胞的差异,分析哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟质量差的原因,分析总结提高哺乳动物小卵泡体外成熟卵母细胞发育能力的措施,包括抑制核成熟、成熟前培养、颗粒细胞及卵丘细胞与卵母细胞共培养,期望能够为小卵泡卵母细胞发育调控机制的研究及发育能力的提高提供理论指导。
【总页数】12页(P1171-1182)【作者】李有为;程亚倬;商继勇;张廷龙;孙铭菊【作者单位】青岛农业大学海都学院;青岛农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S814.6【相关文献】1.哺乳动物小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展2.猪卵泡液和胎牛血清对猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响3.miRNA调控哺乳动物卵泡发育和卵母细胞成熟的研究进展4.AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响5.山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
褪黑素对绵羊体外培养卵泡颗粒细胞和垂体细胞分泌激素的影响
褪黑素对绵羊体外培养卵泡颗粒细胞和垂体细胞分泌激素的影响褪黑素对绵羊体外培养卵泡颗粒细胞和垂体细胞分泌激素的影响概述：褪黑素是一种由松果腺合成的神经内分泌物质，它在生物钟调节、免疫调节以及生殖调节等方面发挥着关键作用。
本文将探讨褪黑素对绵羊体外培养卵泡颗粒细胞和垂体细胞分泌激素的影响。
引言：褪黑素是一种色素物质，广泛存在于人体各个组织和器官中，主要由松果腺产生。
褪黑素在光周期、睡眠调节、体温调节、抗氧化与抗炎等多个生理过程中发挥重要作用。
在生殖系统中，褪黑素也扮演着重要的角色。
绵羊是重要的经济性家畜，研究褪黑素对绵羊生殖系统的影响对于优化养殖管理、提高生殖效益具有重要意义。
方法：本实验中，我们利用体外培养技术，将绵羊的卵泡颗粒细胞和垂体细胞分离，并暴露于不同浓度的褪黑素处理下。
我们通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）和孕酮的浓度。
同时，我们还利用实时荧光定量PCR（qPCR）测定了各组细胞中相关基因的表达水平。
结果：实验结果显示，褪黑素处理组卵泡颗粒细胞和垂体细胞的FSH和LH分泌活性明显下降，且与褪黑素浓度呈负相关。
此外，褪黑素处理组孕酮的分泌量也呈剂量相关下降。
细胞实时荧光定量PCR结果显示，在褪黑素处理组，FSH和LH基因的表达水平显著低于对照组，而孕酮合成相关基因的表达水平则显著高于对照组。
讨论：褪黑素作为一种关键的生理活性物质，对绵羊卵泡颗粒细胞和垂体细胞的激素分泌具有显著的抑制作用。
这可能是因为褪黑素能够抑制下丘脑-垂体-性腺轴的活性，降低促卵泡激素和黄体生成素的分泌。
同时，褪黑素也可能通过调节相关基因的表达，影响孕酮的合成和分泌。
结论：本研究结果表明，褪黑素能够显著抑制绵羊体外培养卵泡颗粒细胞和垂体细胞的FSH和LH分泌，同时增加孕酮的合成和分泌。
这些发现有助于增进我们对褪黑素在生殖调节方面的理解，并为绵羊繁殖控制和生产提供新的策略和方法。
颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
摘
要： 试验 系统研究 了颗 粒细胞对山羊卵泡卵母 细胞体外成熟和体外受精 的影 响。Ｃ ｓ机械裸 卵和 ０Ｃ 、
自然裸卵的体外成熟 率 分别 为 ６ ． ％ 、５ ６ ８ ３ ４ ． ％和 ６ １ 。 间差异 显 著 （ ．％ 组 Ｐ＜０ ０ ） 卵裂 率分 别为 ４ ． 、 ．５ 。 １５ ８ １ 和 ０ 差异 显著 （ ＜Ｏ ０ ） ． 。 Ｐ ． ５ 。对 照组和 １ ×１ ‘ ｍｌ１ ０ ０ 个／ 颗 粒细胞组 卵母细胞 体外成熟率 ５ ０ 个／ 、５ ×ｉ ‘ ｍｌ 分别为 ６ ． 、０ ２ 和 ６ ． 。 ５ ９ ６ ． ４ ６ 无显 著差异 （ ＞Ｏ ０ Ｐ ． ５）。 但均显著高于 １５ ０ ０个／ （０ ０ 和 １ ５ ０ ×ｉ‘ ｍｌ５： ％） ． Ｘ １。 ｍｌ３ ． ） Ｏ个／ （０ ３ 颗粒细胞组 （ ＜Ｏ ０ Ｐ ． ５）。颗粒细胞单层共 培养系统 卵母 细胞 成熟率 为 ７ ． 。 著高于 ５８ 显 １０ ‘ ｍｌ ５ Ｘ ｉ 个／ 颗粒细胞条件培养液组 （３ ４ 和 Ｍ１ ９培养 液组 （ ６ ７ （ ＜０ ０ ０ ６． ％） ９ ６． ％） Ｐ ． ５）。颗粒 细胞单 层共 培养系卵裂率为 ５ ． 。 ０ ０ 显著 高于 １ ０ ‘ ｍｌ 件培养 液组 （ ６ ７ ） Ｍ１ ９培 养液 组 （８ ２ ） Ｐ ５ Ｘｉ 个／ 条 ０ ３ ． 和 ９ ３ ． （ ＜
Ａｂｔａ ｔ Ｔｈ ｘ ｅｉ ｎ ｓｃ ｎ ｕ ｔ ｄｔ ｔ ｄ ｈ ｆｅ ｔ ｆｇ ａ ｕ ｏ ａｃ ｌｓｏ ｉ ｏ ｍａ ｕ ｓｒ ｃ ｅｅ ｐ ｒｍｅ ｔｗａ ｏ ｄ ｃｅ ｏ ｓｕ ｙｔ ｅｅｆｃ ｓｏ ｒ ｎ ｌ ｓ ｅｌ ｎ ｉ ｖｔ ｔ — ｎ ｒ
西藏绵羊颗粒细胞的体外培养
第3卷第5期 高原农业 V ol.3 No.5 2019年10月 Journal of Plateau Agriculture Oct. 2019 收稿日期：2019-04-18作者简介：田孟芳(1991)，女，汉族，云南永胜人，在读研究生，主要从事动物营养与繁殖调控等研究。
通讯作者：赵彦玲(1972)，女，汉族，河南卫辉人，副教授，硕士生导师，硕士。
研究方向：家畜繁殖学的教学与科研。
基金项目：西藏自治区班戈县畜牧业综合发展关键技术研究（603318014）。
西藏绵羊颗粒细胞的体外培养田孟芳 卢晓丽 程志鹏 任子利 孙磊 赵彦玲* （西藏农牧学院 动物科学学院，西藏林芝860000）摘要 对绵羊颗粒细胞进行体外培养、冷冻复苏。
采集西藏绵羊卵巢，用注射器抽吸卵泡中的卵泡液，经低速离心分离沉淀得到卵泡内的颗粒细胞，用于体外培养。
结果显示：原代培养时，颗粒细胞形成单层需要6～7 d ，形状多为梭形或不规则三角形，呈放射状；传代颗粒细胞生长速度较快，接种后第二天细胞就开始贴壁，第6d 左右长满平皿底，形成颗粒细胞单层，多呈流线型。
当传至第3代培养后，即可获得纯化的颗粒细胞；冻存的细胞经复苏后仍保持其正常的结构和功能。
细胞生长曲线呈“S ”形，符合贴壁细胞的生长特征。
可见，所建立的西藏绵羊颗粒细胞分离方法和保存方法可行有效，这能为西藏绵羊的体细胞克隆提供供体细胞，也能为建立西藏绵羊遗传资源体细胞库等研究奠定基础。
关键词 西藏绵羊；颗粒细胞；体外培养；生长曲线中图分类号：S8857.2+2 文献标识码：A 文章编号：2096-4781（2019）05-0510-05 DOI: 10.19707/ki.jpa.2019.05.007In Vitro Culture of Granulosa Cells from Tibetan SheepTian Mengfang, Lu Xiaoli, Cheng Zhipeng, Ren Zili, Sun Lei, Zhao Yanling*(Animal Science College, Tibet Agriculture & Animal Husbandry University, Nyingchi Tibet, 860000, China )Abstract: Sheep granulosa cells were cultured in vitro and resuscitated by freezing. The ovaries of Tibetan sheep were collected, and the follicular fluid in the follicle was aspirated with a syringe, and the granulosa cells in the follicle were obtained by low-speed centrifugation for in vitro culture. The results showed that it took 6～7 days for granulosa cells to form monolayer in primary culture. The granulosa cells in the passage grew faster, and the cells began to stick to the wall on the second day after inoculation. On the around 6d, the bottom of the dish was covered, forming a single layer of granulosa cells, which were mostly streamlined. The purified granulosa cells were obtained after culture in the third generation. After resuscitation, the frozen cells maintained their normal structure and function. The curve of cell growth was "S" shape, which accorded with the growth characteristics of adherent cells. In brief, it was feasible and effective that the methods established for isolation and preservation of Tibetan sheep granulosa cells, which would provide necessary donor cells for somatic cell cloning of Tibetan sheep and lay a foundation for the establishment of somatic cell bank of Tibetan sheep genetic resources.Key words: Tibetan sheep, granular cell, in vitro culture, growth curve 西藏自治区是当前我国最大的5个牧区之一，畜牧业对于西藏人民来说是一个必不可少的生存之道，也是百姓世代经营的传统产业。
绵羔羊卵母细胞体外发育能力的研究
绵羔羊卵母细胞体外发育能力的研究绵羊是我国重要的经济性家畜之一，其肉、毛产业在国民经济中占据重要地位。
然而，对于绵羊的繁殖技术仍存在一些问题，限制了其产业的进一步发展。
近年来，随着生物技术的不断发展，体外受精技术成为人们关注的研究领域之一。
体外受精技术可以通过体外培养卵子和精子，实现绵羊的繁殖，为提高绵羊产犊率和改良绵羊品质提供了新的途径。
绵羊的卵母细胞发育是实现体外受精的关键过程之一。
卵母细胞的体外发育需要克服许多挑战，包括合适的培养基、培养环境和培养时间等因素。
为了研究绵羊卵母细胞体外发育能力，许多科研机构投入了大量的人力和物力。
首先，研究人员需要获取绵羊卵巢组织，并分离出卵泡。
这个过程需要操作者具备一定的解剖技术和知识，以避免损伤和污染样本。
卵泡分离后，科研人员还需要用特定培养基培养卵母细胞。
传统的培养基往往会因为缺乏足够的营养物质和因子而使得卵母细胞无法正常发育。
为了解决这个问题，研究人员通过改良培养基的配方，添加适当的细胞因子和补充物，优化了绵羊卵母细胞的培养条件。
其次，培养卵母细胞时，科研人员需要注意培养环境的控制。
温度、湿度和氧气浓度等因素都会对卵母细胞的发育起到重要的影响。
为了确保培养环境的稳定，科研人员使用了高科技设备，例如培养箱和培养箱控制器，通过调节温度和湿度来模拟体内的环境。
此外，研究人员还通过控制培养环境中的氧气浓度，模拟不同的绵羊生育阶段，进一步促进卵母细胞的发育。
最后，科研人员需要确定合适的培养时间，以确保卵母细胞能够充分发育。
过长或过短的培养时间都会影响卵母细胞的发育，从而影响体外受精的效果。
为了确定最佳的培养时间，研究人员通过观察卵母细胞的形态变化和核发育程度来判断卵母细胞的发育状态。
综上所述，绵羊卵母细胞体外发育能力的研究是一项具有挑战性的工作，需要科研人员克服许多困难。
通过优化培养基的配方、控制培养环境和确定合适的培养时间等手段，绵羊卵母细胞的体外发育能力得到了一定的提高。
绵羊卵巢运输、保存温度及时间对其卵母细胞孤雌发育能力的影响
绵羊卵巢运输、保存温度及时间对其卵母细胞孤雌发育能力的影响乔利敏;郭彤;乔富强;姚华;张京和;雷莉辉;关伟军;侯引绪【摘要】为研究绵羊卵巢不同运输温度、保存温度及时间对其卵母细胞孤雌发育能力的影响,将采集卵巢随机分别置于(10～15),(20～25),(30～35)℃3种不同温度生理盐水中运输到实验室培养,然后优选较好运输温度将采回卵巢随机分为3个试验组,分别保存在4,(14～18),(25～30)℃生理盐水中,保存15～17h后进行成熟培养并孤雌激活.结果表明:(1)在不同运输温度的卵母细胞中,温度为20～25℃时卵母细胞能够进行最好的发育,其成熟率和囊胚率分别为67.44％,35.93％；(2)将绵羊卵巢在14～18℃保存15～17h,对卵母细胞的成熟率(61.81％)、孤雌激活后囊胚的发育率(29.03％)均无显著影响,而将卵巢保存在4℃或25～30℃却显著降低了卵母细胞的成熟率(41.90％,18.40％)与卵裂率(9.09％,13.04％),没有发育到囊胚.从而得出,绵羊卵巢卵母细胞体外培养的长距离运输适宜温度为20～25℃.卵巢在14～18℃保存过夜,不影响卵母细胞的发育能力.%he effect of transport and storage temperature and time on parthenogenetically development ability of sheep oocyte was investigated. Ovary were collected and randomly placed in physiological saline at 10 - 15℃ , 20 -25℃ and 30 -35℃ and transported to the laboratory to culture. They were divided into three groups randomly in optimal transport temperature, respectively kept in 4℃ , 14 - 18℃ and 25 - 30℃ physiological saline, then oocytes were matured and parthenogenetic activated after 15 -17 h. The results showed that the optimal transport temperature of ovaries was 20 -25℃ , t he highest mature rates was 67. 44% and blastocysts rates was 35. 93%. Whenthe sheep ovaries were kept in 14 - 18℃ for 15 - 17 h, it was found that the corresponding maturation rate(61. 81% ) and blastocysts rates ( 29. 03 % ) of oocytes had no significant difference ( P > 0. 05 ) . the oocytes mature rates ( 41. 90 % , 18.40% ) and the rates of cleavage (9.09% , 13.04% ) were significantly lower and did not grow to blastocysts when they were kept in 4℃ or 25 - 30℃ . It can be concluded that the optimal tr ansport temperature of the sheep o-varies was 20 -25℃ , and oocytes of the sheep ovary in vitro had a good growth at 14 - 18℃ overnight.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2012(024)004【总页数】4页(P563-566)【关键词】绵羊卵巢;运输温度;保存温度;卵母细胞;发育能力【作者】乔利敏;郭彤;乔富强;姚华;张京和;雷莉辉;关伟军;侯引绪【作者单位】北京农业职业学院畜牧兽医系,北京102442;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京102442;北京农学院科技产业集团,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京102442;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京102442;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京102442【正文语种】中文【中图分类】S858.26体外受精与核移植试验使用的卵母细胞大都来自屠宰场的卵巢。
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山西农业科学 ２ １ ，ｏ ２ ：６ — ６ ０ ２ ４ （ ）１ １ １ ３
ｄ ｉＯ３ ６ ６ｉ ｎ１０ － ４ １ ０ ２０ ． ｏ： ． ９ ．ｓ． ２ ２ ８ ． １ ． ２ ｌ ９ ｓ ０ ２ ２０
ＪｕｎｌｆＳ ａｘ ｇｉｕ ｕａ Ｓｉ ｃｓ ｏｒａ ｈ ｎｉ ｒ ｌ ｒ ｃ ｎ ｅ ｏ Ａ ｃ ｔｌ ｅ
绵 羊卵泡颗粒 细胞体外培 养条 件的优化
黄 洋 ， 孙晋艳 ， 李鹏 飞 ， 靳 辉 ， 吕丽华
（ 山西农业大学 动物科技学院 ， 山西 太谷 ０ ０ ０ ） ３ ８ １
摘
要 ： 了探讨绵羊 卵巢 卵泡颗粒细胞体外培养 时 Ｆ Ｈ（ｎｉｏｅ ） 为 Ｓ Ｉｖｔ ｇｎ 与胰岛素 的最佳质量浓度 ， ｒ 试验在无
研究绵 羊 卵泡 发生 过程 以及 调控 机理 ， 于 对 使用 各 种 繁殖 新 技 术 最 大 限度 地 利用 绵 羊 卵 巢
杀的绵羊腹中取出卵巢放人 ４℃的含青 、 链霉素 的 Ｄ Ｂ 缓冲液中， ｈ ＰＳ ｌ 内带回实验室。
１ ． 主 要 试 剂 ２
卵母细胞就显得非常重要。在研究过程中， 经常
主要试剂为 ： Ｅ ｔ两性霉素 、 Ｍ Ｍ Ｏ、 非必需氨
基 酸 、Ｓ Ｉｖｔ ｇｎ 、 激 素 、 硒 酸 钠 、 铁 Ｆ Ｈ（ｎｉｏｅ ）雄 ｒ 亚 转
血清条件下 培养绵羊 卵泡 颗粒 细胞 ， 并向其中加入不 同质量浓度 的 Ｆ Ｈ与胰 岛素 ， Ｓ 体外培养 ７ｄ后测定细 胞数 目以及培养液内雌二醇浓度。 结果表明， 当培养液 内 Ｆ Ｈ质量浓度为 ２ 咖 Ｌ 胰 岛素质量浓度为 １０ Ｓ ５ｎ 、 ０ ｎ ／Ｌ时 ， ｓ ｍ 颗粒细胞的数 目最多 ； Ｆ Ｈ质量浓度为 １ ｇ 、 当 Ｓ ／ 胰岛素质量浓度为 １ ｇ ｎ ｍＬ ０ｎ／ ｍＬ时 ， 培养液 内雌激 素质量浓度最高。 关键词 ： Ｈ； 胰岛素 ； 绵羊 ； 卵泡颗粒细胞
中 图分 类 号 ：８６ ￥２ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２ ２ ８ （０ ２ ０ － １ １０ １０ — ４ １２ １ ）２ ０６ － ３ －
Ｏｐ ｉ ｚ ｆ ｎｏ ｌ ｒ ｎ ｉ ｏ ｒＳ ｅ ｐＦ ｌｃ ｌｒＧｒ ｎ ｏａＣｅ ｓ ｔ ｍｉａ ｏ ｆ ｉ Ｃｕｔ ｅＣｏ ｄｔ ｎｆ ｈ ｅ ｏｌ ｕａ ａ ｕ ｓ ｌ ｕ ｉ ｏ ｉ ｌ ｌ
使用卵泡颗粒细胞体外培养的方法来探讨各种
内外因子对卵泡颗粒细胞生长 、 分化 以及激素分 泌的作用 。完善绵羊卵泡颗粒细胞体外培养条 件， 将会对各项研究产生积极的作用。 本试验在无血清培养体系（ 避免 了血清中许 多未知因素的干扰 ， 使得试验结果更加准确 ） 中， 用 Ｍ Ｍ仅培养液作为基础培养液 ，通过添加各 Ｅ