20 病毒感染的检查方法与防治原则
病毒感染检查方法和防治原则
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性
病毒感染的检查方法与防治原则
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重
第25章-病毒感染的检查方法
第25章病毒感染的检查方法与防治原则第一节病毒的诊断随着对病毒感染从生物学及分子生物学水平的研究进展，病毒的诊断技术已由传统方法扩展至新的快速诊断技术。
病毒感染的快速诊断有利于对病毒感染者的治疗；例如对有些病毒（如疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒）感染已有较特异的抗病毒药物治疗。
早期诊断及早期治疗对控制病毒感染十分重要。
此外，从群体感染角度分析，确诊病毒感染的病原在监测病毒的流行病学（如新型流感病毒、肺出血型汉坦病毒的发现等）方面也有重要的现实意义。
标本的采集与送检用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集病人急性期标本。
根据不同病毒感染采取不同部位的标本（如鼻咽分泌物、脑脊液、粪便或血液）。
由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。
如欲检测抗体，早期单份血清可用于检测IgM抗体，而欲检测早期与恢复期的抗体效价的变化，则需采集早期与恢复期双份血清。
血清抗体检测标本应保存于－20℃。
病毒的分离、培养与鉴定目前最常用的方法是细胞培养。
在注明欲检测的病毒后，病毒分离培养的实验室将选择适当的原代培养细胞（敏感性高）及传代细胞系（便于在实验室保存）作病毒分离培养。
接种标本后，细胞可出现病变或也可并不出现病变而需用血细胞吸附等方法检测是否有病毒增殖，并进一步还需用特殊的抗体鉴定病毒的种类，例如用特异荧光抗体染色或抗体中和试验等。
当无病毒增殖时，可能标本中病毒含量较低，未被检出，则需要盲目传代3次后方可明确标本中是否存在病毒。
这一分离与鉴定病毒的全过程有时可长达2～3个月，而且仅在有设备、实验条件及合格工作人员的实验室方可进行。
虽然这种方法所需时间长、步骤多，但在确定病原上是“黄金标准”，即其准确性高而无误。
如我国台湾省确定由肠道病毒71型引起多数患儿发生脑膜炎并致死的研究报道，就是由分离培养及鉴定病毒所确诊。
如欲提高病毒感染细胞培养的敏感性，可将病毒接种于内有盖玻片的细胞培养瓶，经低温离心后，以增加病毒与细胞接触的机率。
24第二十四章 病毒的感染与检查方法
显性感染
显性感染是病毒侵入机体后，引起明显的临床症 状，即病毒性传染病。
1.急性感染
一般潜伏期短，发病急，病程数日至数周 2.持续性感染 持续性感染指病毒在宿主细胞内持续数月至数十年、 甚至终身。可出现也可不出现症状，但长期携带病 毒，成为重要的传染源。
持续性病毒感染可分为三种：
（1）慢性感染：病毒感染机体后，病毒长期存在 体内，机体表现有临床症状，病程持续时间较长。 如艾滋病、慢性乙型肝炎、传染性软疣等。
抗病毒治疗
目前常用无环鸟苷、阿糖腺苷、金刚烷胺等
谢谢观赏
普通显微镜检查 电子显微镜检查
免疫标记技术
病毒核酸的检测
五、病毒感染的防治原则
人工自动免疫 1.灭活疫苗
流行性乙型脑炎疫苗、狂犬病疫苗和流感疫苗。
2.减毒活疫苗
脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫 苗、甲肝疫苗。
3.基因工程疫苗 乙型肝炎重组疫苗
人工被动免疫
人血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白、转移因子
鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感。根据病毒种类不同，可 将标本接种于鸡胚的羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊或绒 毛尿囊膜上。
细胞培养
细胞培养最常用于培养病毒，根据细胞的来源， 染色体特性及传代次数又可分为下列类型：原代和 次代细胞培养，二倍体细胞株和传代细胞系。
病毒在细胞内增殖可引起细胞形态学改变，称为 细胞病变效应（ CPE）。常见的 CPE 有细胞圆缩、 空泡、聚集、拉丝、脱落、融合形成多核巨细胞、 形成包涵体等。
指病毒进入机体后在细胞内增殖，导致宿
主细胞溶解、死亡的作用。
2.细胞膜改变 有些病毒感染宿主细胞后并不使细胞发生溶解、死 亡，而是引起宿主细胞膜的改变： ①细胞融合 ②细胞膜上出现新抗原
第十五章 病毒感染的检查方法与防治原则
第十五章 病毒感染的检查 方法与防治原则
吉林医药学院 鞠晓红
重点难点
重点 • 病毒培养标本采集与处理原则 • 病毒分离培养方法 • 病毒在培养细胞中的增殖指标 • 病毒感染特异性预防方法 难点 • 病毒鉴定技术 • 病毒感染的诊断方法
第一节 病毒感染的检查方法来自录一、标本的采集与处理 二、病毒的分离培养与鉴定 三、病毒感染的诊断
二、病毒感染的治疗
1.抗病毒化学制剂 • 核苷类药物：碘苷、阿昔洛韦、阿糖腺苷等 • 非核苷类反转录酶抑制剂 • 蛋白酶抑制剂 • 其他：金刚烷胺、磷甲酸钠等 2.干扰素及诱生剂 3.其他 • 中草药、新抗生素、治疗性疫苗、治疗性抗体等
一、标本的采集与处理
原则基本与细菌相似，但应注意： 1.污染标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采集双份血清（早期和恢复期）
二、病毒的分离培养与鉴定
（一）病毒的分离培养
1.动物接种 2.鸡胚培养 3.细胞培养
1.动物接种 • 目前较少应用 • 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、鸡等 • 接种途径：皮内、皮下、肌肉、腹腔、静脉等 • 应用：无敏感细胞培养的病毒
（2）病毒在培养细胞中生长的表现 • 细胞代谢改变：pH值改变 • 细胞病变效应（CPE）：细胞聚集、融合、坏死、脱 落溶解或形成包涵体等 • 红细胞吸附：与加入的脊椎动物红细胞结合 • 干扰作用：抑制其后加入病毒的增殖，阻抑后者特有 的CPE
（二）病毒的鉴定
• 形态学鉴定：电子显微镜 • 血清学鉴定：用已知抗体鉴定病毒种、型和亚型。常
2.鸡胚培养 一般选用9～14d孵化鸡胚 • 卵黄囊接种：乙脑病毒 • 羊膜腔接种：流感病毒初次分离 • 尿囊腔接种：流感病毒传代培养 • 绒毛尿囊膜接种：疱疹病毒 • 脑内接种：狂犬病病毒
《医学微生物学》第二十五章和第二十六章复习题及答案
《医学微生物学》第二十五章和第二十六章复习题及答案第二十五章病毒感染的检查方法与防治原则一、单项选择题1.进行病毒病原学检查的标本递送要求是：A.孵箱保存B.室温保存C.加入防腐剂D.冷藏速送E.加入含抗生素和蛋白质的运输培养基中冷藏速送2.细胞病变效应不包括：A.细胞圆缩.脱落B.细胞融合C.形成包涵体D.干扰现象E.胞裂解3.可用于制备病毒灭活疫苗的的理化因素是：A.紫外线B.甲醇C.甲醛D.乙醇E.乙醛4.IFN-γ的产生细胞主要是：A.活化的T细胞B.活化的B细胞C.白细胞D.成纤维细胞E.巨噬细胞5.防病毒感染最有效的方法是A.使用抗生素B.使用抗病毒化学疗剂C.使用中草药D.使用疫苗E.使用抗菌药物6.下列关于减毒活疫苗缺点的叙述，错误的是：A.偶尔可能恢复为毒力株而致病B.进入人体偶尔引起并发症C.对人体免疫系统刺激过强而引起免疫麻痹D.可能活化其他的潜伏病毒E.偶尔可能引起持续感染7.病毒的致病因素是：A.内毒素B.外毒素C.侵袭力D.表面结构E.以上均不对8.下述药物对治疗病毒感染无效的是：A.干扰素B.抗生素C.聚肌苷酸D.黄连.黄苓E.三氮唑核苷9.灭活疫苗的缺点不包括：A.需多次注射B.免疫维持时间短C.疫苗成本高D.诱导细胞免疫反应差E.可发生干扰现象降低免疫效果10.人工被动免疫最常用的制剂是：A.转移因子B.干扰素C.免疫核糖核酸D.免疫球蛋白E.白蛋白11.机体在抗病毒感染中起主要作用的是：A.干扰素B.中性粒细胞C.致敏T细胞D.中和抗体E.抗毒素二、多项选择题1.病毒在细胞内增殖的指标有：A.CPEB.干扰现象C.红细胞吸附D.细胞培养液浑浊E.免疫荧光法可检测到病毒抗原2.细胞病变包括：A.变圆B.坏死C.溶解D.脱落E.融合3.送检标本分离病毒应做到：A.冷藏.速送B.加入石碳酸防治污染C.60℃加热灭菌D.置50%甘油盐水保存运送E.加入青霉素.链霉素抗菌4.能抑制病毒核酸合成的药物是：A.金刚烷胺B.阿糖腺苷C.阿糖胞苷D.无环鸟苷E.三氮唑核苷5.临床上常取粪便标本作为检测材料的病毒是：A.甲型肝炎病毒B.狂犬病病毒C.脊髓灰质炎病毒D.乙型肝炎病毒E.EB病毒6.干扰素抗病毒作用的特点包括：A.有种属特异性B.间接作用C.发挥效应早D.广谱抗病毒作用E.低毒性三、名词解释1.CPE2.减毒活疫苗3.亚单位疫苗4.IFN四、简答题1.比较减毒活疫苗和灭活疫苗的异同？2.目前可用疫苗预防的病毒性疾病有哪些？3.其抗原性不同，人类IFN分为几种？各自有何特点？答案一、单项选择题1.E2.D3.C4.A5.D6.C7.E8.B9.E 10.D 11.C二、多项选择题1.ABCE2.ABCDE3.ABD4.BCDE5.AC6.ABCDE三、名词解释1. CPE（细胞病变效应）：在体外实验中，通过细胞培养和接种杀细胞性病毒经过一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆.坏死，从瓶壁脱落等现象，称细胞病变效应。
病毒感染的检查方法与防治原则e
9
Viral Growth and Cell culture Viral Detection Viral Identification Interpretation of culture results
10
People Animals: cows, chickens, mice,rats, suckling mice Embryonated eggs Organ and tissue culture Organ culture Primary tissue culture Cell lines: diploid Tumor or （immortalized ）cell line
.
1
Blood, Urine, Stool, nasal washing, nasal swab , throat swab, saliva , sputum, rectal swab, vesicle fluid( scraping or swab), tissue ,brain biopsy, cerebrospinal fluid, et al.
Characteristic histological changes:inclusion
bodies in the nucleus or cytoplasm, margination of chromatin Syncytia: multinucleated giant cells caused by virus-induced cell-cell fusion
11
CPE Hemadsorption Interfere Metabolize of cell
第二十四章病毒感染的检查方法与防治原则
【单选题】（3分）1.不能用于病毒分离培养的方法是。
（A）A.人工合成培养基培养B.动物接种C.细胞培养D.鸡胚接种E.器官培养所属章：第二十四章【单选题】（3分）2.制备人类病毒疫苗最好选用。
（C）A.原代细胞培养B.传代细胞系培养C.二倍体细胞株培养D.动物接种E.鸡胚培养所属章：第二十四章解析：制备人类病毒疫苗最好的细胞是人胚二倍体细胞，因为它是正常人体细胞，不像传代细胞有致癌的潜能，同时二倍体细胞能在体外传50～100代，产量大，不像原代和次代细胞培养传代次数少，产量受限制。
【单选题】（3分）3.病毒血凝的机制是。
（B）A.红细胞表面抗原和相应的抗体结合B.红细胞表面糖蛋白受体与病毒表面血凝素结合C.红细胞表面的病毒抗原与相应的抗体结合D.病毒与红细胞表面的抗体结合E.红细胞吸附在宿主细胞上所属章：第二十四章解析：许多病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称为血凝现象。
这种现象能被相应抗体所抑制，称血凝抑制试验。
病毒血凝的机制是红细胞表面糖蛋白受体与病毒表面血凝素结合，引起红细胞的凝集。
【单选题】（3分）4.检测病毒抗体的三种方法是。
（A）A.中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验B.中和试验、补体结合试验、血凝试验C.酶联免疫吸附试验、PCR、血凝抑制试验D.中和试验、血凝试验、免疫电泳技术E.酶联免疫吸附试验、凝胶免疫扩散试验、PCR所属章：第二十四章【单选题】（3分）5.对于病毒感染性疾病来说，起主导作用的预防措施主要是。
（B）A.用干扰素B.疫苗接种C.用免疫血清D.隔离治疗带毒者E.使用核苷类药物所属章：第二十四章【单选题】（3分）6.目前已广泛应用于治疗病毒感染的药物或制剂是。
（A）A.核苷类药物B.反义寡核苷酸C.核酶D.治疗性疫苗E.抗生素所属章：第二十四章【单选题】（3分）7.能抑制病毒逆转录酶的活性的是。
（C）A.金刚烷胺B.无环鸟苷（ACV）C.AZTD.干扰素E.丙氧鸟苷所属章：第二十四章【单选题】（3分）8.使用减毒活疫苗预防病毒性疾病时，哪一项不属于潜在性的危险因素。
病毒基本性状、感染与免疫、诊断与防治【共58张PPT】
• 病毒体形态结构
• 对脂溶剂敏感性
二、病毒分组
• DNA病毒
• RNA病毒
• DNA 和RNA 逆转录病毒
• 嗜肝DNA病毒科（Hepadnasviridae） • 逆转录病毒科（ Retroviridae ）
三、亚病毒
1. 类病毒（Viroids）
• 很小 (250～400nt) ，杆状 RNA 分子，有二级结构
– 装配（assembly） – 成熟（maturation） – 释放（ release ）
1. 吸附和穿入
• 接触→结合→特异性吸附（病毒配体位点与细胞膜特异受体结合）
融合 --- 包膜病毒
• 穿入
胞饮 --- 无包膜病毒
HIV
2. 脱壳
--病毒在细胞内必须脱去衣壳，其核酸方可在宿主细胞中发挥指令作用 --多数病毒在穿入时已在细胞的溶酶体酶作用下脱壳并释放出病毒的基因组 --少数病毒的脱壳过程较复杂。这些病毒往往是在脱衣壳前，病毒的酶已在起转录 mRNA的作用
目录
• 病毒的基本性状
–第一部分 病毒形态、结构和基因组特点
–第二部分 病毒的增殖 –第三部分 病毒的分类
• 病毒感染与免疫
• 病毒感染的实验室诊断与防治原则
一、病毒的增殖特点
• 必须中活细胞中进行 • 敏感细胞
• 增殖方式为自我复制（self replication）
二、病毒的复制（Replication of viruses）
3. 核衣壳（Nucleocapsid）的对称形式
核衣壳：核心+衣壳
•螺旋对称型（Helical Symmetry）
•二十面体立体对称型（ Icosahedral Symmetry ）
医学微生物学[第七章病毒感染的检查方法和防治原则]山东大学期末考试知识点复习（五篇）
医学微生物学[第七章病毒感染的检查方法和防治原则]山东大学期末考试知识点复习（五篇）第一篇：医学微生物学[第七章病毒感染的检查方法和防治原则]山东大学期末考试知识点复习山东大学期末考试知识点复习第七章病毒感染的检查方法与防治原则学习纲要(一)病毒感染的检查方法1．标本的采集与送检(1)标本采集：尽可能采集带有病毒的标本。
可采集鼻咽部分泌物、痰液、粪便、皮肤渗出液、脑脊液、血液、尿液、唾液、宫颈及阴道分泌物、脱落细胞、活体组织等，采集标本应严格无菌操作。
(2)标本处理与送检：将标本置无菌器皿立即送检。
如带杂菌的标本应进行抗生素除菌处理；如不能立即送检的标本，应置人50％甘油缓冲盐水(含抗生素)中，低温下保存送检。
2．病毒的分离与鉴定(1)病毒的分离：①动物接种；②鸡胚培养；③组织培养法。
(2)病毒的数量及感染性测定：①蚀斑测定；②50％感染量或50％组织感染量。
(3)新分离病毒的鉴定。
3．病毒感染的快速诊断病毒感染的快速诊断可采用的方法有组织病理学方法、电镜诊断技术、检测病毒的抗原或病毒性抗体、检测病毒核酸。
(二)病毒感染的预防(1)人工自动免疫：接种各种病毒疫苗：①灭活疫苗，如狂犬疫苗、乙脑疫苗；②亚单位疫苗；③合成肽病毒疫苗；④基因工程疫苗；⑤DNA疫苗；⑥新型多价联合疫苗。
(2)人工被动免疫：注射抗病毒血清、丙种球蛋白、转移因子等。
(三)病毒感染的治疗山东大学期末考试知识点复习(1)药物治疗：包括核苷类药物(阿昔洛韦、三氮唑核苷等)；蛋白酶抑制剂；天然药物(板蓝根、大青叶、苍术、艾叶、冬虫夏草等)。
(2)基因治疗：反义核苷酸；核酶。
(3)免疫治疗：特异性抗体；非特异性免疫调节剂；治疗性疫苗等。
第二篇：医学微生物学[第九章衣原体、支原体、螺旋体、立克次体及放线菌]山东大学期末考试知识点复习山东大学期末考试知识点复习第九章衣原体、支原体、螺旋体、立克次体及放线菌学习纲要(一)衣原体是一类在真核细胞内寄生，有特殊发育周期，能通过滤菌器的原核细胞型微生物。
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五、病毒感染的快速诊断
数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸）
早期抗体检测（IgM）
光镜-----包涵体
电镜
免疫荧光 ELISA
病毒的快速诊断
Southern blot
杂交 PCR
分子生物学技术
Northern blot
第二节 病毒感染的防治原则
一、人工主动免疫常用生物制品
灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）
四、病毒感染的血清学诊断
应用：
①采取标本分离病毒为时已晚 ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分 离的病毒 ③为证实所分离的病毒的临床意义 ④进行血清流行病学调查等
1.中和试验（neutralizing test）
病毒＋中和抗体 病毒失去感染性
特点：特异性高，抗体维持时间长
应用：人群免疫情况的调查
临床诊断少用
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
呼吸道合胞病 毒感染细胞
麻疹病毒 感染细胞
②形成多核巨细胞或称融合细胞
(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)
③形成包涵体(inclusion body)
(2)红细胞吸附（hemadsorption）
病毒囊膜表面血凝素(HA) ＋ 红细胞表面HA受体
腮腺炎病毒感染细胞
(3)干扰现象（interference）
风疹病毒＋人胚肾细胞 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 病毒增殖，CPE(＋)
CPE(-)—风疹病毒(+)
风疹病毒？ 埃可病毒
＋人胚肾细胞
埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+)
反义寡核苷酸 干扰RNA 核 酶 （ ribozyme ）
核苷类药物作用机制
HSV/VZV 无环鸟苷（NA）
病毒胸苷激酶
宿主细胞激酶
NA一磷酸
NA三磷酸 （缺乏糖环3’-OH基） 核酸链延伸被迫终止
病毒DNA聚合酶
第20章
病毒感染的检查方法 与防治原则
目的与要求
• 了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感 染的预防。
第一节
病毒感染的检查方法
病毒感染的检查
电镜直接观察 病毒颗粒 查病毒 检测内容 光镜检查包涵体
病毒抗原
病毒核酸
分离培养
病毒酶类：如逆转录酶
查特异性抗体
一、标本的采集与送检
原则基本与细菌相似，但应注意：
细胞培养瓶
单层细胞
（二）病毒的鉴定
1．病毒增殖鉴定
(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）
①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等
（多数病毒）；
②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病 毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、 麻疹病毒等）。
痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒
羊膜腔
流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒
1、鸡胚培养
优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂
2.动物接种
应用：尚无敏感细胞的病毒培养
动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒
1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检
3.血清学诊断采双份血清
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）
1.鸡胚培养
采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜
2. 病毒数量与感染性测定
1.蚀斑形成试验
（plaque formation test） 感染性病毒量
2.50％组织细胞感染量
（50％ tissue culture
infectious dose, TCID50）
2.病毒形态学鉴定
电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大
二、人工被动免疫常用生物制品
免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-α、β、γ 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 ——LAK细胞
三、病毒感染的治疗
核苷类药物
1.抗病毒化学制剂 非核苷类反转录酶抑制剂
蛋白酶抑制剂
2.干扰素和干扰素诱生剂 3.中草药 4.基因治疗剂 5.治疗性疫苗
3.病毒血清学鉴定
用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型
(1)血凝抑制试验--—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）
病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集
（血凝抑制试验）
(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定
三、病毒分子生物学鉴定
抗原变异病毒基因的鉴定
核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序
病毒的分离培养
3.细胞培养
单层细胞培养（monolayer cell culture）
分类
悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）
细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）
传代细胞系（continuous cell line）
病毒的细胞培养