人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略
H7N9样本采集与送检解析
市定点收治医院
广州医学院第一附属医院、广州市第八人民医院、广州市 妇女儿童医疗中心（负责越秀区、荔湾区、天河区、海珠
区、白云区、黄埔区 ）
萝岗区 番禺区 南沙区 花都区 广州开发区医院 番禺区中心医院 南沙中心医院 花都区人民医院
增城市
从化市
增城市人民医院
采样日期；
6. 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。 24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 ℃或以下
4、采集方法
⑴咽拭子和鼻拭子
最好发病72小时内，晨起后。
方法
咽拭子: 用沾生理盐水的棉签适度用力擦拭咽侧壁 (扁桃体)及咽后壁部位，将拭子放入含采样液的采样管， 将尾部弃去，拧紧盖子。
从化市中心医院
采样排查
• 采样对象：
–不明原因肺炎病例（请注意诊断标准）
–急性发热肺炎病例（目前请重点关注有禽鸟接触史的病
例）
–不能用其他病原解释的重症肺炎病例和死亡病例！ –ILI病例进展迅速，且具有禽类接触史的病例
标本种类
• 病原检测是目前采用的常规检测方法
– PCR方法测核酸，病毒分离、抗原检测；
– 呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、呼吸道灌洗液、呼吸道提取物、肺组 织。 – 目前我市仅能开展H7N9病毒核酸检测，尚无法开展病毒分离。
• 关于采血的问题
– 流感的血清学监测只能做回顾性调查用，临床排查不接受血液标本。
– 禽流感、SARS、新型冠状病毒的回顾性诊断可采集急性期、恢复期 的双份血清，用于检测抗体水平变化！若考虑上述疾病可留双份血，
院空气净化管理规范》的规定，加强诊疗环境的通风，必
要时进行空气消毒。
人感染h7n9禽流感疫情防控工作疫情报告制度
人感染h7n9禽流感疫情防控工作疫情报告制度篇一：人感染H7N9禽流感防控应急预案人感染H7N9禽流感防控预案为切实加强我镇杨柳辖区人感染H7N9禽流感防治工作的领导，有效应对辖区可能出现的人感染H7N9禽流感疫情，强化对疫情防控和病例救治工作的技术指导，提高科学防治水平，保障公众健康，维护社会稳定，积极预防、有效控制人感染H7N9禽流感在我乡的发生和流行，保障人民群众身体健康和生命安全，根据省、市、县文件精神，结合我院实际情况制定以下人感染H7N9禽流感防控应急预案：一、组织领导成立“人感染H7N9禽流感防控领导小组”，组长由陈华院长担任，副组长由防保科王淮北担任，组员由各职能科室负责人及相关人员、村卫生室人员组成。
主要职责：负责对辖区“人感染H7N9禽流感”工作的组织、实施、管理、指导监督并协调院内外工作，及时向县卫生局、县疾控汇报我院防治“人感染H7N9禽流感”情况，以确保防治工作的顺利进行。
共三个组：疫情防控领导小组、医疗救治组和防控知识宣传组。
疫情防控领导组职责为：负责制定和完善疫情防控预案和工作制度，组织开展卫生院疫情一般工作，落实对卫生人员防控工作的技术指导，在县卫生局及疾控中心的指导下组织对重大疫情的处置。
医疗救治组职责为：负责医疗机构对人感染H7N9禽流感疑似病例的初步医疗救治工作。
落实国家卫生和计划生育委员会印发的《人感染H7N9禽流感诊疗方案》，按照“四集中”的原则，指导卫生院开展疑似病例才初步医疗救治工作。
做好辖区内有关病例的会诊和医疗救治指导工作；落实人感染H7N9禽流感医院感染控制技术指南，防止医院内疫情传播；组织开展人感染H7N9禽流感诊疗方案、医院感染控制等技术培训，提高医疗机构医疗救治、医院感染预防与控制能力和水平。
防控知识宣传组职责为：按照科学、客观、适度的原则，组织防控工作知识宣传，保障疫情处置工作开展和社会安定。
普及人感染H7N9禽流感预防知识，消除社会公众的恐慌心理和焦躁情绪。
人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测
人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测前言近年来，禽流感病毒给全球带来了极大的灾难。
由于不断变异和传播，禽流感病毒已经不再是仅仅威胁禽畜的疾病，它已经开始攻击人类。
在一些严重的病例中，患者出现肺炎等肺部感染，造成严重的影响和伤害。
因此，本篇文档将着重介绍人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测的相关细节，以帮助各位更好地了解和应对此疾病。
人感染HN禽流感病毒的病原学特点病毒来源禽流感病毒主要感染家禽及野生候鸟，人类是意外宿主，感染来源通常是人与禽类的接触。
传播途径人感染禽流感病毒的主要途径是直接或间接接触禽类呼吸道分泌物，如血液、唾液、粪便、呼吸道分泌物等。
此外，受污染的水、食物、环境等也是禽流感病毒传播的途径之一。
需要注意的是，人际传播也是一种常见的传播途径，特别是在人流集中的环境中，如公共交通工具、医院等。
病症表现人感染HN禽流感病毒的症状主要有发热、咳嗽、喉咙疼痛、肌肉酸痛、头痛、疲乏等症状。
严重的病例中还会出现胸部感染，引起肺炎等。
防护措施避免接触禽类及其分泌物是预防禽流感病毒的重要措施。
同时，个人卫生也非常必要，如勤洗手、使用口罩、避免人流集中环境等。
标本采集在疫情防控中，标本采集是必不可少的一项工作。
根据卫生部门的要求，下面介绍人感染HN禽流感病毒标本的采集方法：呼吸道标本呼吸道标本采集一般使用鼻咽拭子和气管吸引液两种方法。
鼻咽拭子采样应避免过度刺激，拭子插入鼻咽部最深处后轻轻拭擦，随后放到采样管中。
气管吸引液的采集需要呼吸科专业医生进行操作，采样时需要保证套管内部处于消毒状态，吸管插入气管后缓慢吸出分泌物放在采样管中。
血清标本血清标本采集需要降低污染风险，采用无菌操作，使用无菌或消毒药水消毒采样部位，采集后离心分离血清并装在采样管中。
粪便标本粪便标本采集前需要进行放松肛门，清洗肛门后，悬垂的直肠能将粪便顺利排出。
注意，在采集过程中避免与尿液混合，同时应避免放置时间过长。
人感染H7N9禽流感防控方案
人感染H7N9禽流感防控方案为做到早发现、早报告、早诊断、早隔离、早治疗人感染H7N9禽流感病例，控制疫情的传播、蔓延，保障人民群众身体健康和生命安全，特制定本方案。
一、目的(一)早期发现人感染H7N9禽流感病例。
(二)规范病例发现、报告、流行病学调查、实验室检测、密切接触者管理等疫情处置工作。
(三)指导各地开展人感染H7N9禽流感疫情防控工作。
二、适用范围此方案适用于现阶段人感染H7N9禽流感病例的防控。
目前对该疾病的感染、感染发病的危险因素、传播途径、潜伏期、传染期、临床特点以及该病毒人际传播能力尚不清楚。
本方案将根据对该疾病科学认识的深入和疫情形势变化适时更新。
三、病例的发现、报告(一)病例定义。
1.监测病例。
同时具备以下4项条件的病例：(1)发热(腋下体温≥38℃);(2)具有肺炎的影像学特征;(3)发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少;(4)不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
2.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例定义参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案(20XX年第1版)》(卫发明电〔20XX〕5号)。
(二)发现与报告。
各级各类医疗机构发现符合监测定义的病例后，须于24小时内进行网络直报。
报告疾病类别选择“其他传染病”，并在备注栏中注明“人感染 H7N9禽流感监测病例”。
尚不具备网络直报条件的医疗机构，应当于24小时内以最快的通讯方式(电话、传真等)向当地县级疾病预防控制机构报告，并寄出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构在接到报告后立即进行网络直报。
各级各类医疗机构发现人感染H7N9禽流感疑似病例、确诊病例后，应当于2小时内进行网络直报。
报告疾病类别选择“其他传染病”，并在备注栏中注明“人感染H7N9禽流感疑似病例或者确诊病例”。
尚不具备网络直报条件的医疗机构，应当于2小时内以最快的通讯方式(电话、传真等)向当地县级疾病预防控制机构报告，并寄出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构在接到报告后立即进行网络直报。
人感染H7N9禽流感病毒标本采集-北仑区人民医院
北仑区人民医院检验科人感染H7N9禽流感病毒标本采集、保存、运送实验活动要求根据浙江省卫生厅《关于做好人感染H7N9禽流感病毒实验活动生物安全管理工作的通知》未经培养的临床样本应当在已经市卫生局备案的生物安全二级实验室生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
在生物安全二级实验室开展实验活动时，个人防护应当佩戴眼罩、N95及以上水平的口罩等防护装备。
根据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一版）》规定，H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。
原始标本采集呼吸道病毒的诊断取决于高质量标本的采集，及其保存运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。
标本采集人员医疗机构的医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照相关要求做好个人防护。
采集前的准备防护用品：1.口罩(N-95 or N/P/R-100)2.手套3.帽子4.鞋套5.防护服6.防护目镜采集物品包参考下图：常用的采样液/病毒运输液(VTM）1.pH 7.4～7.6的Hanks液2.MEM/DMEM液在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2µg/ml）。
在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。
采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻及口咽型），铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄。
采集对象1.监测病例，同时具备以下4项条件的病例：（1）发热(腋下体温≥38℃)；（2）具有肺炎的影像学特征；（3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；（4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
2.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例，定义参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第1版）》标本种类上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液下呼吸道标本：气管吸取物、肺洗液、肺组织标本血清标本：发病7天内急性期血清和间隔2-4周的恢复期血清如病人死亡，可采集组织标本：肺组织、气管、支气管组织等注意事项：1.应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）。
人感染H7N9禽流感诊疗方案设计
人感染H7N9禽流感诊疗方案设计H7N9禽流感是由H7N9亚型的禽流感病毒引起的一种人畜共患的疾病。
病毒主要通过家禽传播给人类，感染后可引起严重的呼吸道疾病，并有一定的致死率。
为了应对H7N9禽流感疫情的爆发和传播，制定一套全面的诊疗方案对于疾病的预防和控制具有重要意义。
一、病毒检测为了快速准确地检测H7N9禽流感病毒，可以采用PCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）、血清学检测等方法。
在发现疑似病例时，应采集病人的呼吸道、血液样本以及患者接触过的家禽等动物的样本，通过实验室检测来确认是否感染H7N9禽流感病毒。
二、早期疾病监测和预防控制1.建立疾病监测系统，定期对禽类、家禽市场、农贸市场等进行病毒监测，及时发现病例。
2.加强禽类防控措施，提高家禽养殖场的卫生水平，加强消毒，防止病毒传播。
3.加强公众教育，提醒人们注意个人卫生，避免接触家禽等可能携带病毒的动物或物品。
三、病例诊断与治疗1.病例诊断-根据临床症状和实验室检测结果，进行病例诊断。
主要表现为发热、咳嗽、呼吸困难等呼吸道症状，以及肺炎的影像学改变等。
-与其他呼吸道疾病如肺炎球菌感染等进行鉴别，同时排查病人是否有禽类接触史。
2.治疗方案-进行隔离治疗，将患者隔离在单独的房间，限制病情轻微者的外出。
- 给予抗病毒药物治疗，如奥司他韦（Oseltamivir），对病毒有明显的抑制作用。
-配合支持性治疗，包括对症处理，维持水电解质平衡，保持呼吸道通畅等。
-针对病情进展，如出现重度肺炎和呼吸衰竭等情况，可酌情给予呼吸机支持、吸氧治疗等。
四、公共卫生措施1.疫苗预防-开展疫苗研发和生产，建立禽流感疫苗库。
-高危人群如养殖人员、鸟市场从业者和医务人员等进行疫苗接种。
2.社区防控-加强社区卫生服务体系建设，提高社区卫生服务能力。
-组织对家禽市场及养殖场的定期检查，确保环境卫生。
-针对禽流感病例进行追踪和隔离，密切接触者进行观察和检测。
3.公众宣传和教育-加强公众宣传，提高公众对禽流感的认知和防范意识，提醒人们避免接触禽类、家禽及其粪便。
H7N9个人防护(流行病学调查和样品采集)
第3页，共26页。
•4.医务人员应当根据导致感染的风 险程度采取相应的防护措施。
•（1）接触患者的血液、体液、分泌 物、排泄物、呕吐物及污染物品时应 戴清洁手套，脱手套后洗手。
•（2）可能受到患者血液、体液、分
泌物等物质喷溅时，应戴外科口罩或 者医用防护口罩、护目镜、穿隔离衣。
第4页，共26页。
•（3）对疑似或确诊患者进行气管插管操作时，
应戴医用防护口罩、护目镜、穿隔离衣。
•（4）外科口罩、医用防护口罩、护目镜、隔离 衣等防护用品被患者血液、体液、分泌物等污染 时应当及时更换。 •（5）正确穿戴和脱摘防护用品，脱去手套或隔 离服后立即洗手或手消毒。 •（6）处理所有的锐器时应当防止被刺伤。 •（7）每个患者用后的医疗器械、器具应当按 照《医疗机构消毒技术规范》的要求进行清洁与 消毒。
• ①戴16层棉纱口罩（使用四小时后，消毒更换），穿 工作服，戴戴工作帽和乳胶手套。
• ②对疫点周围3公里范围内的家禽宰杀和无害化处理， 进行预防性消毒的人员还应戴防护眼镜、穿长筒胶鞋、 带橡胶手套 。
• ③每次实施防治处理后，应立即进行手清洗和消毒。
第7页，共26页。
2．二级防护
• 1）适用范围 • ①进入医院污染区的人员；采集疑似病例、确诊病例
第11页，共26页。
2．脱掉防护用品顺序 步骤1 摘下防护镜;
步骤2 脱掉防护服，将反面朝外，放入黄色塑料袋中。
步骤3 摘掉手套，将反面朝外，放入黄色塑料袋中。 步骤4 将手指反掏进帽子，将帽子轻轻在下，将反面
朝外，放入黄色塑料袋中。 步骤5 脱下鞋套，将反面朝外，放入黄色塑料袋中。
人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测共39页
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
人感染H7N9禽流感病毒病原 学特点及标本采集实验室检
测
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温
42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚
43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊
44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
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人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略
一、标本采集、转送和检测
（一）标本采集
为进行病例诊断，医疗机构应尽早采集病人的相关临床样本。
采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。
应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。
如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。
医疗机构采集的呼吸道标本每份不少于3ml。
血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml。
对人感染H7N9禽流感确诊病例可能暴露的禽类饲养或交易等场所，由疾控机构采集禽类粪便、笼具涂拭标本和环境污水等标本，技术要求参考《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案（2011年版）》。
（二）医疗机构标本检测和转送
1. 病例的临床标本采集后，有条件开展核酸检测的医疗机构要对呼吸道标本开展H7N9禽病毒核酸检测，没有条件开展核酸检测的医疗机构应立即利用快速抗原检测试剂
进行甲型流感病毒抗原检测，H7N9禽流感病毒核酸检测阳性的临床标本按照B类感染性物质进行包装运输，在低温条件下，48小时内送到当地流感监测网络实验室，由当地流感监测网络实验室上送到省级疾控中心网络实验室。
甲型快速抗原检测阳性的标本，按上述相同的包装要求24小时内送当地流感监测网络实验室开展核酸检测。
2、没有条件开展上述检测工作的医疗卫生机构发现符合病例定义的病例后，要立即采集相关标本，按照B类感染性物质进行包装运输，在低温条件下，24小时内送到当地流感监测网络实验室。
3、流感网络实验室的检测策略（流程图见附件）
流感网络实验室收检的呼吸道标本每份分为3管，每管应不少于1ml。
1管用于检测，另外2管用于复核和病毒分离。
标本储存应在-70℃或以下温度，避免反复冻融。
（1）对于甲型流感病毒抗原阳性的疑似病例，在24小时内进行H7、H5亚型的检测，如检测阴性，可继续进行甲型H1N1流感和季节性H3N2流感病毒等检测。
（2）对于有流行病学接触史的疑似病例，在24小时内进行甲、乙型流感通用引物、H7和H5亚型的检测。
如上述检测均阴性，不再进行流感病毒核酸检测。
若甲型流感病毒通用引物阳性，H7、H5亚型阴性，可继续进行甲型H1N1流感和季节性H3N2流感病毒等检测。
（3）在发生病例的地区开展强化监测时，对采集的ILI 和SARI 病例的呼吸道标本在48小时内进行甲、乙型流感病毒通用引物，以及H5、H7亚型的检测。
如上述检测均阴性，不再进行流感核酸检测。
若甲型通用引物阳性，H7、H5亚型阴性，按照2010年全国流感监测方案的要求开展病毒分离。
（4）若当地流感监测网络实验室检测结果为H7亚型禽流感病毒核酸阳性时，应当于48小时内将其中2管呼吸道相关原始标本送省级疾控中心网络实验室。
（5）省级疾控中心网络实验室在接到医疗机构和本省网络实验室送检的H7和H5亚型阳性的呼吸道标本时，具备相应生物安全条件的网络实验室在2周内完成病毒分离工作，并将分离的毒株按要求48小时内送国家流感中心。
未能开展病毒分离的省级疾控中心网络实验室将阳性病例的原始标本48小时内送国家流感中心开展病毒分离。
（6）各医疗机构采集的双份血清标本48小时内送当地流感监测网络实验室，由当地网络实验室48小时内将血清标本分别送省级疾控中心和国家流感中心开展相关抗体检测，进行病例诊断。
（7）对人感染H7N9禽流感确诊病例可能暴露的禽类饲养或交易等场所，采集禽类粪便、笼具涂拭标本和环境污水等标本2周内开展甲型流感通用引物、H5、H7和H9亚型
检测。
有条件开展病毒分离的实验室对阳性标本开展病毒分离工作，阳性分离株在2周内送国家流感中心。
没有条件开展病毒分离的实验室在2周内将阳性标本送国家流感中心。
具体技术要求可参考《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案（2011年版）》。
（8）对于甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株和阳性标本要求在48小时内送至国家流感中心。
（9）国家流感中心在接到阳性标本后2周内完成病毒分离工作。
（三）实验室生物安全基本要求
1、H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理和审批。
并建立H7N9禽流感病毒及样本保存管理制度，并采取可靠的安保措施。
2、未经培养的临床样本的分装、灭活和核酸提取应当在生物安全二级实验室生物安全柜内开展。
工作人员应着防护服，佩戴眼罩、N95及以上水平的口罩等个人防护装备。
3、H7N9禽流感病毒的分离培养须在生物安全三级实验室进行。
4、样本采集及实验活动过程中产生的医疗废物要分类收集，经压力蒸汽灭菌或其他可靠灭菌后，按医疗废物收集处置。
二、标本检测结果反馈和报告
开展实验室检测的各级流感监测网络实验室和国家流感中心要在检测工作完成后24小时内将标本信息和检测结果录入到“中国流感监测信息系统”或“传染病监测技术平台信息管理系统”（环境标本）中。
病例标本检测结果在24小时内由流感监测网络实验室所在疾控中心反馈到病例所在医院，由医院进行病例的报告。