血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
Hb的醋酸纤维薄膜电泳与血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
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3.电泳
1）膜条准备：
2）点样：取出平衡好的膜条，用滤纸吸去多余的 液体，然后平铺,（毛面朝上），用小玻片沾取 适量Hb液，按印于点样线上，点样处离膜条边缘 1.5cm左右。
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正常成人Hb种类：
HbA HbA2 HbF
组成 α2β2 α2δ2 α2γ2
百分含量 pI
95~98% 6.95
2~3% 7.38
<1%
>6.95
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二、实验原理(Experimental Principles)
在pH8.6的环境中，Hb是一种带负电荷的 蛋白质（Hb的pI 〈 8.6），在电场中向正极泳 动。电泳时，由于各种Hb等电点不同，所带电 荷量不同；分子量大小、形状不同，导致各自 的泳动速度不同，因而被分离。这种分离可初
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四、操作步骤 （Operating Procedure）
1．预染血清： 取Eppendof 管一支，加入血清
0.2ml及苏丹黑B染料液0.02ml，混匀后 置于37°C水浴中预染30分钟，2000rpm 离心5分钟，取上清液备用。
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2. 制备琼脂糖胶板：
将0.45%的琼脂糖凝胶，经高温溶 化后，将胶模水平放置，插入上样梳。 待琼脂糖凝胶液冷却至65℃左右时， 小心倒入胶模中，使胶液缓慢、均匀 展开，厚约0.5cm，室温下静置30 min， 待凝固完全后，轻轻拔出上样梳，在 胶板上即形成相互隔开的样品槽。
实验四
血红蛋白醋酸纤维薄膜碱性电泳
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清中脂蛋白的分析。
其原理是利用琼脂糖凝胶电泳的分离特性，将血清中的脂蛋白按照分子大小进行分离，从而获得脂蛋白的电泳图谱。
琼脂糖凝胶是由琼脂糖溶液制备而成的凝胶。
琼脂糖分子之间通过氢键结合，在溶液中形成网状结构，能够阻碍大分子的迁移，使分子在凝胶中按照分子大小逐渐分离。
根据琼脂糖凝胶的浓度和凝胶体积，可以调整分离脂蛋白的范围和分辨率。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：1. 样品制备：将要分析的血清样品进行离心，将清除过量脂蛋白颗粒。
取适量样品于离心管中，加入适量凝胶缓冲液，混匀。
2. 制备凝胶：根据所需的凝胶浓度，称取相应质量的琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，并加热至溶解。
待溶液温度降至室温后，加入凝胶稳定剂并混匀。
3. 填充凝胶孔：将凝胶溶液倒入电泳池，待凝胶凝固后，用专用的样品载体或者微量移液器将样品填充到凝胶孔中。
注意不要将样品液面超过凝胶表面。
4. 电泳分离：将电泳池连接电源，设定合适的电泳条件，如电压和电流。
在电泳过程中，离子在电场作用下沿着琼脂糖凝胶的移动方向迁移，分离出不同迁移速度的脂蛋白组分。
5. 染色和观察：电泳结束后，取出凝胶，进行染色和观察。
目前常用的染色方法有银染、共伴染色和乳化状胶体金染色等。
在染色后，可以使用分子影像仪或者专用的凝胶分析系统进行图像捕捉和分析。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳可以用于分析血清中各种脂蛋白的分布和比例，如低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）等。
通过分析脂蛋白的电泳图谱，可以得到脂蛋白的相对含量和分子大小的分布情况，进一步了解脂质代谢的状态以及与某些疾病的关联。
总之，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清脂蛋白的分离和分析。
通过其原理和操作步骤的了解，我们可以更好地利用该技术进行实验和数据解读，为脂质相关疾病的研究提供有力的支持。
血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳【目的】1. 掌握血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理2. 掌握电泳对血浆脂蛋白分类方法、类型3. 了解血浆脂蛋白的性质、特点【原理】1.琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。
琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。
琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。
琼脂糖是直链多糖，它由D-半乳糖和3，6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成。
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。
电泳时因凝胶含水量大（98%～99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。
而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响少，是一种较好的电泳材料，分离效果好。
血清中脂类物质是与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。
各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。
琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。
将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。
再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。
2. 血清脂蛋白分类正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极到阳极依次为β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最浅)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原点处应无乳糜微粒。
有时前β-脂蛋白也显示不出来。
按照电泳分类法从前往后依次为：（+）α-脂蛋白，前β-脂蛋白，β-脂蛋白和乳糜颗粒（-）3.血清脂蛋白电泳的实质是对血清中的蛋白质进行琼脂糖电泳，并不仅仅是对脂蛋白进行的电泳，但由于苏丹黑染料只对染疏水性的脂类物质，脂蛋白中含有大量脂类，因此电泳的结果显示的只是脂蛋白染色带。
脂蛋白在血清中含量及其脂类物质的组成量不同，染色结果带的宽窄、颜色深浅均不同。
【操作方法一】1、血清制备空腹抽取正常人的血，迅速移至离心管中，室温放置1h左右，3000r/min离心10分钟，取血清。
实验七 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
实验七血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳一、实验目的1、进一步掌握电泳的基本原理及凝胶电泳的原理。
2、熟悉琼脂糖凝胶电泳的特点和操作要点。
3、掌握正常人血浆脂蛋白的分类。
二、实验原理琼脂糖凝胶是由D-半乳糖和3,6脱水L-半乳糖的残基通过氢键交替排列组成的直链多糖。
电泳时，因为凝胶中含水量大（98%-99%），固体支持物的影响较少，故电泳速度快、区带整齐。
而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很小，是一种良好的电泳材料，分离效果较好。
血清中脂类物质均与载脂蛋白结合成水溶性脂蛋白形式存在，各种脂蛋白所含载脂蛋白的种类及数量不同，因而不同脂蛋白颗粒大小相差很大。
因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分开。
将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红）进行预染。
再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行分离，通电后，可以看到脂蛋白被分成三条区带，从负极到正极依次为β脂蛋白（最深）、前β脂蛋白（最浅）及α脂蛋白（比前β脂蛋白略深），在原点处应无乳糜微粒。
此法应用于高脂蛋白血症的分型。
三、器材和试剂1、器材：电泳仪、电泳槽、离心机、水浴锅、染色盘、微量注射器、滤纸、镊子剪刀、2cm*8cm玻璃片2、试剂⑴巴比妥缓冲液（PH8.6）：称取巴比妥钠15.4g、巴比妥2.76g及EDTA0.29g,加水溶解后，再加蒸馏水定容至1000ml（PH为8.6，离子强度0.075），作为电极缓冲液。
⑵苏丹黑染色液：将苏丹黑0.5g溶于无水乙醇5ml中至饱和。
⑶凝胶缓冲液：称取三羟甲基甲烷（Tris）1.212g，EDTA0.29g及Nacl5.85g,用蒸馏水溶解后，稀释至1000ml。
调PH至8.6.⑷琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.50g溶于50ml凝胶缓冲液中，再加水50ml，在水浴中加热至沸，待琼脂糖完全溶解后，立即停止加热。
⑸新鲜血清（无溶血现象）四、操作步骤1、预染血清血清0.2ml加苏丹黑染色液0.02ml与试管中，在混合后置于37℃水浴染色30分，然后离心（2000r/min）约5分。
血清蛋白(serumprotein)琼脂糖凝胶电泳
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weixin"]}};with(document)0[(getElementsBy
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ateElement('script清血清 0.2mL 中加苏丹黑染色液 0.2mL，混合置 37℃水浴中染色 30 分钟，离心约 5 分钟。以除去悬浮于血清中染料沉渣。
2、制备琼脂糖凝胶板将已配制好的 0.5%琼 脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶 溶液浇注在载玻片上，约 3mL。静置半小时后凝 固。
3、点样将剪好的滤纸条对折，以折边在距 凝胶一端 2cm 处切一点样口。将毛细管插入预染 好的血清中，待吸入部分血清后，取毛细管使其
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【注意事项】
1、电泳样品应为新鲜的空腹血清。
2、加热溶化琼脂时，须防止水份蒸发过多。 琼脂糖凝胶最好随用随制，以免凝胶表面干燥， 影响分离效果。
实验六：血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳
实验六：血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定血清脂蛋白的方法。
血清脂蛋白是由蛋白质和脂质组成的颗粒物质，其中包括低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒等。
琼脂糖凝胶电泳可以根据脂蛋白的电泳迁移率和染色性质将脂蛋白分离出不同的带，从而达到分离和鉴定的目的。
实验仪器和试剂：1.琼脂糖凝胶电泳仪2.琼脂糖凝胶板（gel plate）3.20%甘油4.3%琼脂糖5.样品（血清）6.样品缓冲液：Tris-HCl pH 8.97.标准品实验步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：取100ml 3%琼脂糖加入十倍浓度的Tris-HCl pH 8.9缓冲液中，搅拌均匀后加入20%甘油，将混合液倒入冷却好的凝胶板中，把已冷却的仪器旋转至仪器倾斜角度20度左右，使混合液均匀地分布在凝胶板的倾斜表面上。
等待凝固即可使用。
2.标记标准品：将标准品加入混合样品缓冲液，在84摄氏度下进行10分钟的煮沸，再进行冷却。
将手套清洗干净并干燥，然后将标准品注入样品单元格中，约10分钟后转动仪器延长电泳时间（通常电泳时间为1个小时左右），直到标准品移动到合适的位置、大小和颜色为止。
标准品的分子量从低分子量到高分子量分别为白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。
3.样品电泳：将样品加入混合样品缓冲液，并煮沸10分钟以去除有机物，然后冷却。
将样品注入样品单元格中，待样品在电泳板上电泳1小时。
电泳结束后，先将凝胶板在120ml的异丙醇/冰醋酸/石油醚混合物中浸泡5-10秒钟，然后在以色列碘溶液中染色。
结果分析：在琼脂糖凝胶板上可以看到不同的带，这些带是由血清脂蛋白的不同组分组成的。
根据标准品的移动位置和样品的移动位置，可以将样品中的脂蛋白分为不同的带。
每个带代表一个不同的脂蛋白类别，通常来说，可以将带分为以下5类：白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。
Hb的醋酸纤维薄膜电泳与血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
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正常成人Hb种类：
HbA HbA2 HbF
组成 α2β2 α2δ2 α2γ2
百分含量 pI
95~98% 6.95
2~3% 7.38
<1%
>6.95
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二、实验原理(Experimental Principles)
在pH8.6的环境中，Hb是一种带负电荷的 蛋白质（Hb的pI 〈 8.6），在电场中向正极泳 动。电泳时，由于各种Hb等电点不同，所带电 荷量不同；分子量大小、形状不同，导致各自 的泳动速度不同，因而被分离。这种分离可初
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精选ppt
3）电泳：在电泳槽内加入缓冲液，膜条点样面 向下，上样一端靠近负极，盖严电泳室。通 电预电泳5-10min。调节电压为100V，电泳 30～40分钟。
4）染色：电泳完毕后关闭电源。将膜条取下， 放在丽春红染色液中染色10分钟。
5） 漂洗：取出染色膜条，放入漂洗液中漂洗 至凝胶背景无色为止。
四、操作步骤（Operating Procedure）
1.取血：
用2%碘酊棉球消毒受试者手指，再用 75%酒精棉球脱碘，采血针穿刺，取血约 50ul放入事先已加入0.9%NaCl 1ml 的 1.5ml离心管中。如出血不畅，可对手指稍 加挤压。
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2.制备Hb液：
1）洗涤红细胞：将上述离心管，颠倒混 匀5-6次，4000rpm，离心3分钟。弃上 清，再加1ml 0.9%NaCl悬浮红细胞， 相同条件重复离心一次。
步鉴定不同的Hb。
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醋酸纤维素薄膜是由纤维素的羧基 进行乙酰化后而制成的，浸湿后有巨 大的张力和柔韧性，几乎对所有生物 活性物质均能通过电泳得到分离。
21 生物化学实验--琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白
琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白【目的】1. 掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。
2. 熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。
【原理】电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。
根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。
由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定 pH 值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。
血清脂蛋白经苏丹黑 B 预染后，以琼脂糖为载体，在 pH 8.6 巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带（图 3-9 ）。
正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为α- 脂蛋白带、前β- 脂蛋白带及β- 脂蛋白带。
点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前β- 脂蛋白也显示不出来。
区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。
另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。
或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。
图 3-9 预染血清脂蛋白电泳图谱【器材】1 ．电泳仪2 ．恒温水浴箱3 ．离心机4 ．微量加样器5 ．烫槽器6 ．载玻片7 ．扫描仪8 ．分光光度计9 ．小号试管10 ．吸管11 ．纱布12 ．烘箱【试剂】1 ．电泳缓冲液（ pH8.6 ，离子强度 0.075 的巴比妥缓冲液）称取巴比妥钠 15.458g ，巴比妥 2.768g ，乙二胺四乙酸（ EDTA ） 0.29g ，加适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
2 ．凝胶缓冲液（ pH8.6 三羟甲基氨基甲烷缓冲液）称取三羟甲基氨基甲烷 1.212g ， EDTA 0.29g ， NaCl 5.85g ，用适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
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血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
原理：
将血清脂蛋白用脂类染料（如苏丹黑或油红0等）进行预染.再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离. 通电后, 脂蛋白向正极移动,并分离为几个区带.
试剂与器材：
1、巴比缓冲液（pH8.6, 离子强度0.075）：为电极缓冲液
巴比妥钠15.4g,巴比妥2.76g,EDTA酸0.292g,加水溶解后加水至1000ml
2、三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.6）为凝胶缓冲液
三甲基氨基甲烷1.212g,EDTA酸0.29g,NaCI 15.85g 加水溶解后加水至1000ml
3、琼脂糖凝胶
琼脂糖0.45g,三痉甲基氨基甲烷缓冲液50ml,水50ml
加热至沸, 待琼脂糖溶解后立即停止加热.
4、挖槽工具制作
切口刀：刀口长15mm勺刀片，中央夹一有机玻璃或木片，用螺丝固定，使两刀片相距1.5mm挖槽小匙：用直径1.5mm的铜丝约6cm长，一端锤成扁平，用砂纸磨光.
5、电泳槽和电泳仪：同血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的仪器.
操作：
1、预染血清：血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中,混合后置37C水浴染色30分钟, 然后离心（2000 转/分,约5分钟）.
2、制备琼脂糖凝胶板：将已配制的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化, 用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片, 每片 2.5ml, 静置约半小时后凝固（天热时需延长, 可放冰箱数分钟加速凝固）.
3、点加血清：已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出, 然后用铜丝小匙将长方小条凝胶取出. 以小片滤纸吸干小槽中水分, 用血色素吸管吸取经过预染的血清约15卩l,注入凝胶板上的小槽内.
4、电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中, 样品应在阴极一端.两块三层纱布于巴比妥缓冲液中浸润, 然后轻轻紧密贴在凝胶板两端,纱布的另一端浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液（注意：此电极缓冲液不能用三羟甲烷缓冲液代替）. 接通电源,电压为120~130V,每片电流为3~4mA约经电泳15至55分钟,即可见分离之色带.
结果及临床意义
1、正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从负极到正极依次为B -脂蛋白（最深）、前B -脂蛋白（最浅）、a -脂蛋白（比前B -脂蛋白略深些）,在原点处应无乳糜微粒.
2、如果前B -脂蛋白比a -脂蛋白深,结合血清甘油三酯明显升高和胆固醇正常或略咼,可以定为W型咼脂蛋白血症.
3、如果B -脂蛋白区带比正常血清明显深染者，同时结合血清总胆固醇明显增高、甘油三酯正常者为Ua型;若结合血清总胆固醇增高而甘油三酯略高的前B略溶者为Ub型.
4、结果B -和前B -两区带分离不开连在一起称“宽B区带”，结合血清甘油三酯和胆固醇均有所增高，可定为川型•
5、如果原点出现乳糜微粒，B,前B均正常或减低，结合血清甘油三酯明显升高，可定为I型.
注意事项
1、电泳样品要求为新鲜的空腹血清.
2、每一块凝胶上可平行挖两条小槽, 因而可加两个样品.
3、如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片,在琼脂糖胶凝固前固定于适当位子上,当凝固后取出有机玻璃片,凝胶板上留下小槽可直接加样,不需挖槽.
4、如果需要保留电泳样本,可将电泳后之凝胶板（连同玻片）放于清水中浸泡脱盐2小时,然后放烘箱（80 C左右）烘干即可.。