紫外分光光度法操作规程
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程1开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源，打开桌面上软件UVProbe2.21,单击，出现如下对话框（UV-2550PC Series-Rev.A(FD 00)）：仪器进入初始化状态。
1.2初始化大约需要5min，进行一系列的机械和光路的检查和初置，当所有项目初始化完毕后，单击OK。
1.3初始化完成后，需预热15min，即可往下操作。
2基线校正2.1选择中的（photometric光度），打开光度模块。
2.2单击光度计键条中的（baseline基线），启动基线校正操作。
2.3当基线参数对话框（baseline Parameters）弹出时：在开始波长和结束波长中分别输入实验所需的波长范围内进行基线校正,点击OK。
例如，在Start中输入700，在 End中输入300，点击OK，从700nm开始扫描。
2.4待扫描结束后，点击输出窗口Instrument History（仪器履历）标签。
查看列出的基线校正信息。
注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，读数变化≤3nm可接受。
当完成基线校正后，可进行以下操作。
3光度测定3.1首先选择测定方式，在主菜单的所示的各键中，选择（photometric 光度）。
3.2 参数的设置（以硝酸盐为例说明）：点击菜单栏中的键，出现图（photometric Method Wizard-[Wavelengths]：在wavelength(波长类型)中可供选择point（单点）和range（范围）,point表示测定单点波长； range表示测定波长范围。
例如选择Point,在Wavelength(nm)（波长）中输入538，则Column Name出现WL538.0，点击add（添加）加入，点下一步，出现图（photometric Method Wizard-[Calibration]）：在Type（Multi Point,Single Point，K-Factor，Raw date）中选择MultiPoint，在Formula（Fixed wavelength，Ratio，Different）中选择Fixed Wavelength,WL1选择上一步添加过的波长，例如WL538.0为上面添加过的。
04水质 总氮的测定 碱性过硫酸钾消解分光光度法
水质总氮检测标准操作规程碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法一、目的规范水中总氮的碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法标准操作规程。
二、适用范围1、适用于地表水、地下水、工业废水和生活污水中总氮的测定。
2、当样品量为10ml时，本方法的检出限为0.05mg∕L，测定范围为0.20-7.00mg∕L。
三、责任者实验室检验人员及负责人。
四、正文1、术语和定义总氮：指在规定的条件下，能测定的样品中溶解态氮及悬浮物中氮的总和，包括亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、无机铵盐、溶解态氨及大部分有机含氮化合物中的氮。
2、方法原理在120～124℃下，碱性过硫酸钾溶液使样品中含氮化合物的氮转化为硝酸盐，采用紫外分光光度法于波长220nm和275nm处，分别测定吸光度A220和A275，按公式（1）计算校正吸光度A，总氮（以N 计）含量与校正吸光度 A 成正比。
A＝A220－2 A275 （1）3、仪器分析天平、紫外分光光度计、高压蒸汽灭菌器、25ml具塞磨口玻璃比色管、10mm石英比色皿、实验室常用玻璃仪器等。
4、试剂4.1、浓盐酸：ρ=1.19g/ml。
4.2、浓硫酸：ρ=1.84g/ml。
4.3、盐酸溶液：（1+9）。
将100ml浓盐酸沿烧杯壁慢慢加入到900ml蒸馏水中，搅拌均匀，冷却备用。
4.4、硫酸溶液：（1+35）。
将10ml浓硫酸沿烧杯壁慢慢加入到350ml蒸馏水中，搅拌均匀，冷却备用。
4.5、氢氧化钠溶液：ρ=200g/L称取20.0g氢氧化钠溶于少量水中，稀释至100ml。
注：氢氧化钠含氮量应小于0.0005%。
4.6、氢氧化钠溶液：ρ=20g/L量取ρ=200g/L氢氧化钠溶液10.0ml，用水稀释至100ml。
4.7、碱性过硫酸钾溶液称取40.0g过硫酸钾溶于600ml水中（可置于50℃水浴中加热至全部溶解）；另称取15.0g氢氧化钠溶于300ml水中。
待氢氧化钠溶液冷却至室温后，混合两种溶液定容至1000ml，存放于聚乙烯瓶中，可保存一周。
紫外分光光度法
1.目的：建立紫外分光光度法的标准操作规程。
2.范围：QC 化验室。
3.责任：QC 化验员。
4.内容：4.1简述：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400mm ）或可见光区（400-850mm ）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190-900nm ，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯-比尔（Lamber-Beer ）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度 法ECL TA ==1log定量分析的依据，其数学表达式为：式中 A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数；C为溶液浓度；L为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1％（g/ml），光赂长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E1cm1%表示。
如溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mo1／L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
4.2仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氚灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。
紫外可见分光光度计和COD测定仪操作规程caoyidan(修订)
1紫外可见分光光度计（北京普析通用）1.1工作原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
根据Lambert-Beer 定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比；如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。
这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
1.2 操作方法1.2.1将仪器放在一个稳定、水平的平面上。
1.2.2接通电源，打开电源开关，预热30分钟。
1.2.3 按“上下键”选择“功能扩展”，再按“ENTER”进入定量测量界面，选择“系数法”，进入后，输入“2”，再按“ENTER”，进入测量界面。
1.2.4按“GOTOλ”设定所需波长，然后按“ENTRUN”。
再按“SET”，进入后分别输入测量系数K、测量系数B、浓度单位，设定完毕后。
按“ENTRUN”，返回测量界面。
1.2.5空白置零：即放入空白比色溶液，关闭比色池盖，2～3秒后，按“ZERO”置零。
并记下吸光度Abs为0.000时的浓度值，记为x。
1.2.6 将待测液置于比色池中，关闭比色池盖，2～3秒后，按“START/STOP”进入读数界面，再按一次对待测液进行读数，读得值为x i。
紫外_可见分光光度计操作规程完整
紫外-可见分光光度计操作规程(TU1810)1．目的：制订本标准的目的是为规检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。
2．适用围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。
3．职责：QC检验员对本标准的实施负责。
4．程序：4.1简述紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。
其常用表达式为，式中为系数：A=ε·ι·C式中A为吸光度；ε为吸收系数；C为溶液浓度；ι为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表示。
如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
4.2 仪器紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。
根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
4.2.1 仪器测量条件选择1.测量波长的选择通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收原则，以获得最高的分析灵敏度。
而且在λmax附近，吸光度随波长的变化一般较小，波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小，可得到较好的测定精密度。
但在测量高浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以保证校正曲线有足够的线性围。
如果λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选用灵敏度低一些的波长进行测量，以减少比耳定律的偏差。
紫外分光光度法测定维生素B6
紫外分光光度法测定维生素B6维生素B6（pyridoxine），又称抗皮肤炎素，是维生素B族中重要的一种营养物质。
它在许多生物化学反应中充当辅酶的角色。
维生素B6是一种水溶性维生素，需要通过食物摄入。
为了检测维生素B6的含量，我们可以采用紫外分光光度法。
紫外分光光度法是分析化学中常用的一种定量分析方法，能够快速准确地测定目标物质的浓度。
下面我们将介绍如何使用紫外分光光度法测定维生素B6的含量。
实验步骤：1.准备样品：将维生素B6的标准品溶解于甲醇中，制备一系列不同浓度的标液。
将不同加入的量的标液分别加入超纯水中制备不同浓度的样品。
2.进样检测：将制备好的样品取5ml，加入装有石英比色皿中并置于紫外分光光度计上，选择270nm处进行分析。
3.测量：开始测量前，需要在此λ波长下对水进行基线校正。
将样品装入石英比色皿中，置于光束中，确定所选取光路下的透过率，而透过率的单位要符合光度计的操作规程。
测量记录后，读取相应的吸收光谱值，进行光谱绘制和数据处理。
4.计算：根据样品的吸收峰值大小及标准曲线，计算出样品中维生素B6的浓度。
标准曲线的制作：1.取50mg维生素B6的标准品，溶解于100ml甲醇中。
2.将标准品溶液分别取出1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，并加入足量的甲醇，制备出不同浓度的标准品液体。
当然，在实验操作中，我们还需要注意以下几点：1.在实验过程中，要确保石英比色皿、移液管和搅拌棒等器材清洁干燥，以保证实验的准确度。
2.样品要与标准品的状态一致，如若样品需要稀释还需确保稀释的比例。
3.光度计只测量样品与标准品以外溶液的吸光度，需保证移取样品精确，环境干燥。
综上所述，通过紫外分光光度法，我们可以准确地测定维生素B6的含量，为人们摄入足够的该营养物质提供了可靠依据。
分光光度计操作规程
一、仪器设备721、723可见分光光度计、752紫外可见分光光度计、比色液及标准溶液、滤纸等。
二、原理光谱仪器是一种简单易用的分光光度法测定通用仪器，不同型号的机器测定的波长范围不同，可以根据自己的需要选择要使用的仪器。
不同型号的光谱仪器的构造有很大的差别，但是其基本原理是相同的。
根据溶液中各种成分对透过光的吸光度不同，在一定范围内，吸光值（或者透过率）与溶质的浓度成正比（玻尔定律）。
通过准确浓度的标准品对应其吸光值（透过率）作图，我们就可以得到一条标准曲线。
测定未知浓度的待测样品的吸光值（透过率），与标准曲线相比较就可以得到其浓度。
四、适用范围可广泛用于医学卫生、临床检测、生物化学、石油化工、环保检测、质量控制等方面作定量、定性分析。
具体到我们实验室，可以对多糖、蛋白、核酸等物质进行定性、定量测量。
同时UV－3150PC紫外可见近红外分光光度计还可以测量近红外区的固体、液体样品的吸收光谱，RF-5301PC荧光分光光度计可以测定荧光物质的发光强度光谱，同时他们自带的软件可以方便的进行数据处理与分析。
五、分光光度计操作规程我们以UV－3150PC紫外可见近红外分光光度计为例讲述光谱仪器的性能和操作方法。
1、插上电源，打开光度计前面的电源开关。
2、双击计算机桌面UVProbe图标，打开UVProbe软件，点击UVProbe中“Conn ect”图标联机，出现自检画面。
3、如自检完全部绿灯亮，则点击“OK”进入系统。
若出现红灯亮，可关掉光度计重新连接，若仍未通过自检，应立即报告仪器负责老师。
4、完全通过并进入系统，出现UVProbe菜单栏和工具栏。
UVProbe有四大主要模块，包括光谱扫描模块、光度测量模块、时间扫描模块和报告生成器。
每种模式都可以直接点击后面的方法设定按钮设置方法。
5、点下光谱扫描图标，出现光谱扫描界面。
6、点击方法按钮，出现方法设置对话框。
在此可以设置扫描波长范围，仪器的最大范围为3200～190nm。
紫外分光光度计的使用注意事项 光度计如何操作
紫外分光光度计的使用注意事项光度计如何操作对紫外分光光度计要进行定期的清洁，保障使用环境的卫生，并注意防尘。
使用环境中的浮尘埃及腐蚀性气体都会影响到紫外分光光度计机械系统的快捷性、降低各个限对紫外分光光度计要进行定期的清洁，保障使用环境的卫生，并注意防尘。
使用环境中的浮尘埃及腐蚀性气体都会影响到紫外分光光度计机械系统的快捷性、降低各个限位开关、按键、光电偶合器的牢靠性及灵敏性，也会引起某些部件的铝膜锈蚀。
紫外分光光度计使用注意事项1.温度和湿度是影响仪器性能的紧要因素：他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的干净度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。
维护保养时应定期加以校正。
使用紫外分光光度计应具备四季恒湿的仪器室，配置恒温设备，特别是地处南方地区的试验室。
2.环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的快捷性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的牢靠性，也是造成必需学部件铝膜锈蚀的原因之一：因此，使用紫外分光光度计必需定期清洁，保障环境和仪器室内卫生条件，防尘。
3.紫外分光光度计仪器使用确定周期后，内部会积累确定量的尘埃，zui好由维护和修理工程师或在工程师引导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作：同时，将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑。
后，恢复原状，再进行一些必要的检测、调校与记录。
分析仪器工要懂得仪器的日常维护和对紧要技术指标的简易测试方法，本身常常对仪器进行维护和测试，以保证仪器工作在较佳状态。
紫外分光光度计认真操作流程及校准方法1.光度测量在模式选择屏幕中选择选项，将显示参数配置屏幕；用GOTOWL键设定测量波长；按F2键设定进样掌控；按START/STOP 键时，测量开始，显示测量屏幕；如需做空白校正，应在测量前先设置空白样品，然后，按AUTO—ZERO键，将测量值置为OABS（100%）；2.校正开机预热10分钟足矣；放入黑块和标样（没有的本身配），关闭盖子；校0；把灯光对着黑块，把透光度调0；把灯光对标样，将吸光度调到100%；3.参比溶液介绍参比溶液又称空白溶液。
紫外可见分光光度计的基本操作
紫外可见分光光度法分类
目视比色法
光电比色法
紫外分光光度法
分光光度法
紫外可见分光光度法
可见分光光度法
比色分析法：利用比较待测溶液本身的颜色或加入试剂后呈现的颜色深浅来 测定溶液中待测物质的浓度的方法
按检测器不同分为目视比色法和光电比色法。 以人的眼睛来检测颜色深浅的方法称目视比色法； 以光电转换器为检测器来区别颜色深浅的方法称光电比色法； 根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同而对物质进行定性和定量分析的 方法称为分光光度法。
透射比正确度的检验
WK2Cr2O7 0.006000 % 的溶液的透射比
波长 /nm
235
257
313
350
温度 /℃
25
18.2
13.7
51.3
22.9
以0.001mol.L-1HClO4为参比，以1cm的石英比色皿做吸收 池，分别在235、257、313、350波长处测定相应溶液的透 射比。
单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向 棱镜单色器 ➢ 利用不同波长的光在棱镜内折射 率不同将复合光色散为单色光。
光栅单色器 ➢ 一系列等宽、等距离的平行狭缝 ➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面凹面光栅）
朗伯定律
光的吸收程度与光程长的关系？
比尔定律
光的吸收程度与浓度的关系？
光吸收定律（定量分析）
光吸收定律 ：
A lg 0 lg 1 Kbc
tr
几个概念：
入射光通量、透射光通量、透射比、吸光度、比例常数
成立的条件： ➢ 一是必须使用单色光 ➢ 二是吸收发生在均匀的介质 ➢ 三是吸收过程中，吸收物质互相不发生作用
紫外可见分光光度法
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理 论基础。
A lg 1 lg I0 ECL TI
式中，A为吸光度，T为透光率，I0、I分别为入射光
和透过光的强度；E为吸光系数，当c用物质的量浓 度表示，L用厘米表示，用ε代替E，称为摩尔吸光 系数，单位为（L·mol-1·cm-1）；当c用百分浓度 （g/100mL），L用厘米表示时，用E1cm1%表示E，称 为比吸光系数。它们的关系如下：
通过测定被测物质对不同波长的光的吸 收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光 度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范 围的吸收曲线。
在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长 λmax进行物质含量的测定。
得到一件东西需要智慧，放弃一样东西则需要勇气！ 三、偏离朗伯-比耳定律的因素 实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等，均可吸光质点的吸光特性变化大。 紫外-可见分光光度法的特点： 单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。 不是成功来的慢，而是放弃速度快。
2.1.2 按数字[1]键进入%T/ABS（透过率/吸
光度测定）子菜单，选中对应的数字键来
设定测定条件：①NUM WL(设定测试波长 的数目，最多可设定6个不同波长)；②WL Setting （ 设 定 测 试 波 长 具 体 数 值 ） ③ Data Mode(选择测定吸光度或透光率)，设定完 毕后点击[Enter]键确定，所有项目设定完 毕后按数字[0] 键确定，等待仪器调整至准 备状态。
其定量方法包括校准曲线法、标准对比法 和吸收系数法。
1 校准曲线法
方法：配制一系列不同含量的标准溶液，选 用适宜的参比，在相同的条件下，测定系列 标准溶液的吸光度，作A-c曲线，即标准曲 线，也可用最小二乘数处理，得线性回归方 程。
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生 产 部 [ ]份 计划供应室 [ ]份 质量部QA [ ]份
生 产 车 间 [ ]份 仓储管理室 [ ]份 质量部QC [ ]份 设 备 部 [ ]份 销售管理室 [ ]份 办 公 室 [ ]份 紫外分光光度法操作规程
1. 适用范围：适用于本厂品种紫外分光光度法检验。 2. 职责 QC检验员：严格按照操作规程进行检验。 QC主管：监督检查操作规程执行情况。 3. 内容 紫外分光光度法是通过被测物质在在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性分析和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查、含量测定。 3.1 紫外分光光度计的检定 3.1 波长准确度 3.1.1 波长准确度的允差范围 双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700处±4.8nm。 3.1.2 波长准确度检定方法 用氧化钬玻璃检定 将氧化钬玻璃放入样品光路,参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。 氧化钬玻璃在279.4,287.5,333.7,360.9,418.7,460.0,484.5,536.2及637.5nm波长 页数：2/5
处有尖锐的吸收峰,可供波长检定用。氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。 3.2 吸收度准确度 精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约600mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L）溶解并稀释至1000ml,用配对的1cm石英池,以硫酸液(0.005mol/l)为空白,在235,257,313,350nm分别测定吸收度,然后换算成%11cmE，测得值应符合下表中规定的允差范围（±1%）。国际药典规定的允差变为±1%。 波长（nm） 吸收强度 吸收系数（%11cmE） 允差范围 235 257 313 350 最小 最大 最小 最大 124.5 144.0 48.62 106.6 123.3-125.7 142.6-145.4 48.13-49.11 105.5-107.7 分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJG682-90《双光束紫外可见分光光度计检定规程》执行，并应符合有关项下的规定。日常常规测定主要是对以上两项时常检查。 3.3 样品测定操作方法 3.3.1 吸收系数测定（性状项下）按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长（参见5.8项）测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定范围。 3.3.2 鉴别及检查按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值呀最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。 3.3.3 含量测定 3.3.3.1 对照品比较法按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100±10）%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。 3.3.3.2 吸收系数法按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长±1nm处测定其吸收度，按各该p品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。 采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按“吸收系数测定法” 的规定进行。 页数：3/5
3.3.3.3 进行光光度法采用计算分光光度未能的品种，应严格按各该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，昼使测定供试品和对照品的条件一致，若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。 3.4 注意事项 3.4.1 试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。 3.4.2 使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。 3.4.3 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的4/5为度，使用挥发笥溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦试干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同，使用后用溶剂及水冲洗干净，景干防尘保存，吸收池如污染不易洗耳恭听净时可用硫酸发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中发长时间浸泡，否则清洁液保的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。 3.4.4 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸收度，应符合下表规定。 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸收度的规定 波长范围（nm） 220-240 241-250 251-300 300以上 吸收度 ≤0.4 ≤0.2 ≤0.1 ≤0.05 每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的1批溶剂。 3.4.5 称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一向也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。 页数：4/5
3.4.6 供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收度以在0.3-0.7之间为宜,吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线性范围,配制合适的读数浓度。 3.4.7 选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素及钠的吸收度检查则需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。 3.4.8 测定时除另有规定者外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸收度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。 3.5 结果计算 3.5.1 对照品比较法可根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。 A样品：A对照=C样品：C对照 C样品=A样品×C对照/A对照 式中 A为吸收度值 C为测试液浓度（以mg/ml计）。 3.5.2 吸收系数法中国药典规定的吸收系数，系指%11cmE即在指定波长时，逃跑和长度为1cm，试样浓度换算为1%（g/ml）时的吸收度值，故应先求出被测样品的%11cmE值，再与规定的%11cmE值比较，可计算出供试样品的含量。
%11cmE
（样品）
=CLA
式中 A为供试品溶液测得的吸收度值； C为供试品溶液的百分浓度，即1000ml中所含溶质的克数（g/ml）； L为吸收池的光路长度（cm）。 页数：5/5
供试样品的含量%=100%11%11）cm（）cm（EE标准样品 式中 %11）cm（E样品为根据前式计算出的供试品的百分吸收系数
%11）cm（E标准为药典或药品标准中规定的百分吸收系数。
3.6 吸收系数测定法 本法主要用于新品种的吸收系数测定。 3.6.1测定方法取精制品精密称取一定量，使样品溶液配成吸收度读数在0.6-0.8之间，置1cm吸收池中，在规定波长处按5.8项的规定测出读数,然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍,使吸收度在0.3-0.4之间,再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份间相对误差应不超过±0.5%，否则应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸收度不改变的数据。再用4台不同型号的仪器复测。 吸收系数可根据比尔-朗伯定律求算，以下例说明： 已知某化合物的分子量为287，用乙醇配成浓度为0.0030%的溶液，在波长297nm处，用1cm石英池，测得吸收度为0.6139，求%11cmE值及克分子吸收系数ε值。
%12971nmcmE=A/CL=10030.06139.0=205
nm297=A/CL=16139.02870030.01001000 =5873 3.7 测定注意事项 3.7.1 样品应为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。 3.7.2 所用容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值。 3.7.3 测定所用溶剂，其吸收度应符合规定。吸收池应于临用时配对。 3.7.4 称取样品时，其称量准确度应按中国药典规定要求。 3.7.5 所用的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸收度要进行校正。要注明测定时的温度。 4. 编制依据 《中国药品检验标准操作规范》2005年版