清除自由基研究方法汇总
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
银杏叶醇提取物清除氧自由基的研究
图分类号 ： ６ Ｉ ０ ４
文献标识码 ： Ａ
３ ２ 文章编号 ：６ ２ ３ ９ （ｏ ８１１ ｂ 一００１ —０ Ｉ ７－ ７ １２ｏ ） （ ）
打 印 ４ ｎ ｍｉ 。 银 杏树 为银 杏科 银 杏 属植 物 ， 我 国的 ２银杏叶抗氧 化成分的提取 是 对 照管以 １ ｇ ０ Ｍ ＨＣ 代替 邻苯 三 ０ Ｌｌ ｍ １ 特 产植 物 。银 杏 叶提 取 物（ Ｂ ） 的有 效成 Ｇ Ｅ中 银 杏 叶 用 水 快 速 冲 洗 ， ５ ℃干 燥 箱 在 ０ 分 及 其 生理 作 用 受 到 广泛 的 关 注 。 黄 酮 类 中恒 温 干燥 ３ ｈ 粉碎 （ ． ｃ ～１ ｍ） 置 于 酚 。 ６ ， ０ ５ｍ ｃ ， 化 合物 和萜 内酯 是 银 杏 叶 中两 类 最 重要 的 棕 色 瓶 中 保 存 备 用 ， ２ ｇ上 述 制备 的 样 取 ０ Ｎ｛ｉＮ ： ｔｇ 塑 用叶 重 ６ 的石 油醚 在 ６ ℃水浴 中 回流 倍 Ｏ 生理 活性 物 质。一 般认 为 ， Ｅ的抗氧 化作 品 ， ＧＢ 浸提 ３ ｍｉ 过 滤 ， ０ ｎ， 取滤渣 ， 再用 ９ ％ 乙醇在 ５ 用 主要 是 由于 ＧＢ Ｅ中 含有 银 杏黄 酮 苷 。 抑 制 邻 苯 三 酚 自氧 化 的 百 分数 ＝ 活 性 氧 自由基 Ｏ 和 ・ ＯＨ 可 以 引发生 ７ ℃ 回流 浸 提 ４次 ， 次 ｌ （ ５ 每 ｈ 乙醇 用量 前 ３ 最 ， 物 膜 多 不 饱 和 脂 肪 酸 发 生 质 过 氧 ｆ ｔ反 次 为叶 重 的 ５倍 ， 后 １次 为叶 重 的 ４倍 ） 邻 苯互酚 臼氧化速 率 圳 。 ％ 应， 损伤 膜 结 构 及功 能 ， 自由 基还 可 以 损伤 合并 四次 所 得滤 液 ， 后 在 ＲＥ ４ 型 旋 转 然 － ７ ． ０ 糖 、蛋 白 质及 核 酸 等 生 物 大 分 子 ， 致功 蒸发 器 浓缩 至 约 ４ ｒＬ冰 箱 贮存 过 夜 ， 冻 ３ ３银杏叶提取 物清除 ・ Ｈ作用 导 Ｏ ａ 冰 取 ２ ｍＭ ｅ Ｏ． ７Ｈ ， ００ ｍＬ， ．Ｕ／ ＦＳ － Ｏ ．４ ０６ 能 和 代 谢 紊乱 。 近 年 来 ， 着 自 由基 生 物 后的粗提 液在 ４ 随 ℃、５ ０ ｒ ｍ 离心 ２ ｍｉ 取 ００ｐ ０ ｎ， ．３ ３ｒ ａ ．ｍＬ，ｍＭ ５ 学 和 自由基 医学 的 发 展 ， 为活 性 氧 自由 上 清 ， 在 ４ 认 再 ０℃下 保 存 ２ 离 心 （ 件 同 ｍＬＸ０００ ｍＬ，０ Ｍ 脱氧核糖 ０ ２ ｈ， 条 ０ ｍＬ １ ６ Ｏ， ０１ ＰＨ 基 的 上述 毒 性 反 应 与 炎症 、 自身 免 疫 病 、 上 ） 取 上 清 ， 入 ６ ｍＬ、０． Ｍ 、ＰＨ７． ＥＤＴＡ ０． ４ ， ７． ｍＭ Ｈ， ０． ｍ Ｌ， ， 加 ０ ５ ８ ． 、０。５ ＢＳ ．８ ｌ ＭＰ １ ４ ｍＬ，ｍＭ 次黄嘌呤 Ｏ ２ ． 肿瘤 、心 肌 及 脑缺 血 、衰 老 和肺 气 肿 等 疾 Ｐ Ｓ 搅 拌 均匀后 ， Ｂ ， 再离 心 ， 上清 液在 ３ ℃条 ７ ４ ５ ｍＬ， 体积 ２ 总 ｍＬ， 然后 ３ ℃温育 ｌ ｍｉ 取 ５ ５ ｎ， 放 ０℃冰 箱 使其 结 冰 ， ２ 病 的 成 困直 接 相关 。故研 究 ＧＢＥ对 Ｏ 和 件 下 挥 发 乙醇 ， 入 ４ 最 后 冷冻 干 燥 成千 粉 ， 即得 银 杏 叶提 取 物 。 ｌ ｍＬ反应液加入 １ Ｔ ％ ＢＡ及冰 醋酸各 ｌ ｍＬ， ＯＨ 的 清除 作用 具 有 实 际 应 用价 值 。 混 匀后沸水浴 ３ ｒｉ 冷却 ， 入 １ｍ 光径 的 ０ ｎ， ａ 倒 ｃ 比色杯 ， 以空 白管（ Ｈ７ ４ ． ５ Ｐ ． 、０ ｔ Ｍ Ｐ ８ 调 Ｂ ） １材料 、仪器 、方法 ３银杏叶提取物清除氧 自由基作用 用 ２ 型分 光光 度计 在 ５ ２ ｍ 下测其 吸 ３ｎ １ 材料 １ ３． １银 杏 叶提 取物 抗 以 卵黄脂 蛋 白为 底物 零 ， ７ ｌ 光 度 Ａ。此 为对 照管 ， 品管在 加 入脱 氧 核 （ 样 银 杏 叶（ 自四 Ｊ｝ 采 Ｉ 大学 校 园 ） 新 鲜鸡 蛋 的 脂 质 过 氧 化 作 用 ， （ 自华 隆 商场 ） 购 。 ｍ／ Ｂ 溶液（ 每 取 ｌ： ５稀 释 的 卵黄 悬液 （ 黄用 等 体 糖后才加一定体积的 ３ ｇ ｍＬ的 Ｇ Ｅ ２ 卵 １ ２试 剂及配制 ， 其后 加 Ｅ Ｔ 以 Ｄ Ａ， 积的ｐ Ｈ７．５ ．Ｍ 的 Ｐ Ｓ配成 ， ４ 、０ １ Ｂ 用磁 力搅 个体 积梯度做三根 平衡管 ） ９ ％乙醇 （ ５ ＡＲ， 州 化学试 剂二 厂 ） ｆ 、芦 拌 器搅拌 １ｒｉ ） ．ｍＬ，ｍｇ ｍＬ的 ＧＢ 通过 减少 Ｐ Ｓ的量使 总 体 Ｂ ０ ｎ０２ ａ ｌ ／ Ｅ溶 后步 骤 同对 照管 ， 丁 、３ ％乙醇 、５ ０ ％Ｎａ ０ （ ）、ｌ ＮＯ 、ｌ ％ＡＩ ＮＯ Ｍ 液 （ ｍＬ） 。 ０～１ ０） 每 个 体 积 梯 度 做 三根 平衡 积 依 旧 为 ２ Ｏ Ｌ（ Ｎａ ＯＨ、０． ５ 的磷 酸 、钠缓 冲 液（ ０Ｍ ＰＵＳ 、 管 ） ２ ｍＭＦｅ Ｏ ７Ｈ ， ） ０Ｈ 的 清除 率 ，５ Ｓ ・ Ｏ溶 液 ０．ｍＬ， ２ 用
dpph自由基清除原理
dpph自由基清除原理DPPH自由基清除原理。
DPPH自由基清除原理是指利用二苯基肼基自由基（DPPH）与抗氧化物质发生反应的机制，从而达到清除自由基的目的。
DPPH自由基清除原理在抗氧化研究中具有重要意义，下面将详细介绍其原理及应用。
首先，DPPH自由基是一种常用的抗氧化剂自由基模型，其化学结构为C18H12N5O6，呈深紫色。
DPPH自由基具有未成对电子，因此具有很强的氧化性，可以与其他物质发生反应。
当DPPH自由基与抗氧化物质发生反应时，会发生电子转移反应，DPPH自由基的紫色会逐渐消失，同时抗氧化物质会发生氧化还原反应，从而清除自由基。
其次，DPPH自由基清除原理的应用十分广泛。
在食品工业中，可以利用DPPH自由基清除原理对食品中的抗氧化物质进行测定，评价食品的抗氧化性能。
在药物研发领域，DPPH自由基清除原理也被用于筛选具有抗氧化活性的化合物，为新药研发提供重要参考。
此外，DPPH自由基清除原理还被应用于化妆品、保健品等领域，对产品的抗氧化性能进行评价和改进。
最后，DPPH自由基清除原理的研究有助于人们更深入地了解抗氧化物质的作用机制，为抗氧化剂的开发和应用提供理论依据。
通过研究DPPH自由基清除原理，人们可以更好地评价食品、药物、化妆品等产品的抗氧化性能，为人们的健康和生活质量提供保障。
综上所述，DPPH自由基清除原理是一种重要的抗氧化研究方法，其原理简单清晰，应用广泛，对于抗氧化物质的研究和产品评价具有重要意义。
随着人们对抗氧化研究的深入，相信DPPH自由基清除原理将会在更多领域得到应用，并为人们的健康和生活带来更多的益处。
一种用中草药对超氧自由基的清除方法
一种用中草药对超氧自由基的清除方法中草药在中医药领域中被广泛应用，并且有着许多药用价值。
其中，一种重要的作用是清除超氧自由基，该自由基是人体内的一种有害物质，与多种疾病的发生和发展有密切关系。
以下将介绍一种用中草药对超氧自由基清除的方法，供您参考。
我们首先介绍的是黄芪。
黄芪是一种常见的中草药，具有抗氧化和免疫调节的特性。
研究表明，黄芪中的活性成分可以显著清除超氧自由基，减少其对细胞和组织的损害。
黄芪可通过提高细胞内抗氧化酶活性和抑制自由基的产生，发挥其清除超氧自由基的作用。
因此，黄芪可以作为一种有效的中草药用于清除超氧自由基。
另外，石斛也是一种可以用于清除超氧自由基的中草药。
石斛含有丰富的多糖类和黄酮类化合物，具有很强的抗氧化能力。
研究发现，石斛中的活性成分能够增加细胞内抗氧化酶的活性，清除超氧自由基并减轻氧化损伤。
石斛还可以促进细胞的修复和再生，增强机体的抗自由基能力。
此外，川贝母也是一种被广泛用于清除超氧自由基的中草药。
川贝母富含多种活性成分，如川贝母苷、川贝甾醇等。
研究表明，川贝母中的这些成分具有显著的抗氧化活性，可以清除超氧自由基并保护细胞免受其损伤。
此外，川贝母还能够减少氧化应激引起的细胞死亡，保护细胞的正常功能。
综上所述，黄芪、石斛和川贝母是三种常见的中草药，均具有优秀的清除超氧自由基的能力。
它们可以通过增加细胞内抗氧化酶活性、抑制自由基的产生和减少氧化损伤等机制发挥作用。
将这些中草药纳入日常饮食或适当药用，有助于维护人体的健康和延缓衰老的过程。
但需注意，使用中草药时应咨询专业医生或中医师的建议，并遵循正确的使用剂量和方法，以确保安全和有效性。
如何清除体内自由基
如何清除体内自由基消除体内自由基，应该要了解自由基的来源，从外界到身体内部的代谢一起中和性的描叙不要单方面的讲叙体内各种酶与自由基之间的关系人体内的自由基有两个来源：其一是来自环境，如环境污染、食品污染、过度的紫外线照射和各种辐射、杀虫剂、室内外废气、吸烟、二手烟、酗酒、工作压力、生活不规律等等，都会直接导致人体内产生过多的自由基（活性氧）；食品添加剂、食用脂肪和熏炸烤肉、某些抗癌药物、安眠药、抗生素、有机物腐烂物、塑料用品制造过程、油漆干燥挥发、石棉粉尘、空气污染、化学致癌物、大气中的臭氧等也都能诱发人体内产生自由基。
其二是来自体内，人体内组织细胞的新陈代谢也会产生自由基，这是人体代谢过程的正常产物，十分活跃又极不稳定，它们会附着于健康细胞之上，再慢慢瓦解健康细胞，而被破坏的细胞则又再转而侵害更多健康的细胞，如此恶性循环从而导致人体的衰老和疾病的发生。
另外，组织器官损伤后的缺血一段时间后又突然恢复供血(即重灌流)，如心肌梗塞、脑血栓、外伤、外科手术后，自由基会大量生成。
正常人体有一套清除自由基的系统，但这个系统的力量会因人的年龄增长及体质改变而减弱，致使自由基的负面效应大大增强，引起多种疾病发病率的提高。
活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过程。
因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。
听说过抗氧化剂吗？它对人体的健康可是有着密切的关系。
既然自由基不仅存在于人体内，也来自于人体外，那么，降低自由基危害的途径也有两条：一是，利用内源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二是发掘外源性抗氧化剂——自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。
大量研究已经证实，人体内本身就具有清除多余自由基的能力，这主要是靠内源性自由基清除系统，它包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等一些酶和维生素C、维生素E、还原型谷胱甘肽、β-胡萝卜素和硒等一些抗氧化剂。
酶类物质可以使体内的活性氧自由基变为活性较低的物质，从而削弱它们对肌体的攻击力。
羟自由基清除
羟自由基清除
羟自由基（·OH）是一种高活性的氧自由基，具有极强的氧化性，可以与许多生物分子发生反应，对细胞造成损伤，与衰老、癌症、心脑血管疾病等多种疾病的发生密切相关。
为了清除体内的羟自由基，可以采取以下几种方法：
1. 抗氧化剂：摄入富含抗氧化剂的食物或补充抗氧化剂保健品，如维生素 C、维生素 E、类黄酮、谷胱甘肽等，可以清除体内的羟自由基。
2. 适度运动：适度的运动可以促进身体的新陈代谢，增强身体的抗氧化能力，从而减少羟自由基的产生。
3. 减少应激：应激可以导致体内产生大量的活性氧，包括羟自由基。
因此，减少应激可以减少羟自由基的产生。
4. 戒烟限酒：吸烟和饮酒可以导致体内产生大量的活性氧，增加羟自由基的产生。
因此，戒烟限酒可以减少羟自由基的产生。
5. 保持健康的生活方式：保持健康的生活方式，如规律作息、健康饮食、适度运动等，可以提高身体的抗氧化能力，减少羟自由基的产生。
总之，清除羟自由基需要采取综合的措施，包括饮食、运动、生活方式等方面。
同时，也需要注意避免一些可能导致羟自由基产生的因素，如应激、吸烟、饮酒等。
抗氧化活性研究方法
抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。
由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。
因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。
本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。
一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。
在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。
在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。
三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。
常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。
在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。
四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。
超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。
在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
清除氧自由基
1、超氧负离子黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、清除超氧自由基负离子O2-徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8).2、1.2.2NBT 光还原反应中主要试剂的配制1.2.2.1 测试缓冲液:0.026 mol/LMet- 磷酸钠缓冲液具体配制方法:首先配制0.1 mol/LpH7.8Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液a 称取Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
b 称取NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
c 量取91.5 mL a 液与8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。
d 称取L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。
1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L)称取NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L)a.称取EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
电子自旋共振法（ESR）、高效液相色谱法、化学发光法、比色法、分光光度法自由基清除剂也称为抗氧化剂，可清除体内多余的自由基，减轻它们对机体的损伤。
目前常用超氧阴离子自由基体系（O2-·）、羟基自由基体系（·OH）、二苯代苦味酰基自由基体系（DPPH·）对某抗氧化剂的体外清除自由基能力进行了研究。
其中ESR法和气相色谱法、HPLC 法对自由基的检测灵敏度高，但对设备要求较高，操作复杂，无法在一般实验室普及。
而其中的分光光度法、化学发光法、荧光分析法等不需要昂贵的仪器，易于被一般实验室所采用，但测定过程中的干扰因素较多，容易对测定的准确性和灵敏度造成影响。
分光光度法最常用。
原理部分：1.DPPH·法测试机理DPPH·（二苯代苦味脐基自由基）的甲醇溶液呈深紫色，可见光区最大吸收峰为492nm。
当自由基清除剂加入到DPPH·溶液中时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度减少，而且颜色变浅的程度与配电子数成化学计量关系，因此，可通过吸光度减弱的程度来评价自由基被消除的情况。
2. 羟基自由基（·OH）1）邻二氮菲法[70]实验原理：邻二氮菲可与Fe2+形成络合物，此络合物在510nm 处有最大吸收峰，是一常用的氧化还原指示剂，其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的改变。
H2O2/ Fe2+体系可通过Fenton 反应产生羟自由基，邻二氮菲－Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲－Fe3+后，其510nm 最大吸收峰消失。
如果反应体系中同时存在羟自由基清除剂，则Fenton 反应产生的羟自由基将被此清除剂全部或部分清除，邻二氮菲－Fe2+络合物受到的破坏将会随之减少。
根据这一原理，可建立以A510变化反映自由基清除剂对羟自由基清除作用的比色测定法。
2）水杨酸法[71]实验原理：羟自由基易攻击芳环化合物产生羟基化合物，因此可用水杨酸捕集Fenton 反应体系中的·OH，生成的2,3－二羟基苯甲酸用乙醚萃取，用钨酸钠和亚硝酸钠显色，然后用分光光度计测定其在510nm 处的吸光值，此吸光值可反映体系中的羟自由基浓度。
3）甲基紫-Fe2+-H2O2反应体系测定原理：在Fenton反应的基础上加入甲基紫作显色剂，反应式如下：Fe2++H2O2→Fe3++OH-+·OH甲基紫在酸性溶液中呈现紫色[9],在578nm 处有强吸收。
反应产生的·OH 具有高的反应活性，容易进攻高电子云密度点，会与甲基紫中具有高电子云密度的-C=C-基团发生亲电加成反应，使甲基紫褪色。
通过测定甲基紫在578nm 处吸光度值的变化可间接测定出·OH 的生成量。
当有清除自由基的物质存在时，会阻断甲基紫与·OH 的反应，从而使得甲基紫的颜色有所加重，因此可利用抗氧化剂加入前后溶液吸光度值的变化来评价物质的抗氧化性强弱。
3.超氧阴离子自由基（O2-·）邻苯三酚法：超氧自由基难于用一般方法产生和检测,但是在弱碱性条件下,邻苯三酚能发生自氧化反应,生成O2-·和有色中间产物, 该中间产物在λ=320 nm处有一特征吸收峰。
在初始阶段, 中间产物的量与时间成线性关系。
当加入O2-·清除剂时, 它能迅速与O2-·反应, 从而阻止中间产物的积累, 致使溶液在λ=320 nm 处吸收减弱。
故可以通过测定A320 值来评价清除剂对O2-·的清除作用。
1. 黄儒强，李娘辉，黄科礼，郑陆威，林盛，林健华.(华南师范大学生命科学学院，广东广州510631) 山稔子黄酮类提取物抗自由基作用及体内抗氧化功能的研究[J].食品科学，2008,29（9）：588-590.1.3.2动物试验方法选用雄性昆明种小鼠，适应性饲养1周后，随机分为4组，每组10只，分别为正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。
低、中、高剂量组小鼠每天灌胃1次，每次0.5ml。
对试验小鼠重新进行分组，分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组。
各组均常规饲养，自然光照，自由饮水。
除对照组外，其他各组进行如下处理：每天给药1次，每次每只灌胃0.5ml。
1.3.3动物实验指标测定及统计分析连续试验3周，最后一次给药后，禁食2h，摘取各小鼠眼球取血，离心分离，吸取上层血清，用于SOD、GSH-Px、MDA 的测定。
以对照组为对照，对各试验组数据用SPSS11.0作单因素方差分析和均数间多重比较。
1.3.4 清除羟自由基[7]取6支10ml比色管，分别依次加入0.3ml7.5mmol/L硫酸亚铁铵溶液、0.3ml7.5mmol/L邻二氮菲溶液、1mlpH7.47Tris-HCl缓冲溶液，在2、3、4、5、6号比色管中各加入0.2ml7.5mmol/LH2O2，然后在3、4、5、6号比色管中分别加入0.3ml浓度分别为0.02、0.04、0.08、0.10mg/ml的山稔子黄酮类提取物，用重蒸水定容至刻度，在37℃的水浴中，反应1h，在450～550nm波长范围内扫描，得最大吸收波长，并在此波长下测光密度值，根据下式计算羟自由基的清除率：式中，OD样品、OD未损及OD损，分别为加入提取液的羟自由基体系、不加H2O2及加入H2O2的光密度值。
1.3.5 对超氧离子自由基(O2·)的抑制率取4支10ml的比色管，各加入2.0ml pH8.34 Tris-HCl缓冲溶液，依次分别加入1.0ml浓度分别为0.02、0.04、0.08、0.10mg/ml 的山稔子黄酮类提取物，最后都加入1.0ml 0.2mmol/L邻苯三酚，重蒸水定容至刻度。
在吸收波长322nm 处每隔30s记录一次光密度值,根据邻苯三酚自氧化速率计算抑制率：式中，ΔOD1/Δt 为邻苯三酚自氧化时反应速率，ΔOD2/Δt 为加入提取液后邻苯三酚自氧化反应速率。
2. 陈旭丹,于晓莹,郝晓萌,陆曦,王威.(天津师范大学化学与生命科学学院,天津300074)三种黄酮类化合物抗自由基的研究[J].食品研究与开发2007,128（6）：20-22.连苯三酚法和DPPH法对其清除活性自由基的能力进行研究。
1.2.2 连苯三酚法1.2.2.2 清除超氧自由基的测定步骤分别将金银花和葛根的提取液配制成百分浓度为20 %、30 %、40 %和10 %、20%、30%的待测液。
用10mmol/L HCl 溶液配制成1.5 mmol/L 的连苯三酚溶液; Tris- HCl 缓冲溶液为50 mmol/L, pH 值为8.2; 各样品浓度为1 mmol/L。
按表1 加样于具塞比色管中, 迅速摇均后每隔30 s,以10 mmol/L HCl 溶液为参比液,光程 1 cm,用紫外-可见分光光度计于320 nm处测定相应吸光度值, 至 3 min 止。
取3 次试验的平均值计算清除率。
清除率计算公式:S=[1-(Aj-Ai)/A0]×100 %S:清除率; Ai:待测液在320 nm的吸光值; Aj:待测液与连苯三酚混合物的吸光值; A0:连苯三酚在320 nm的吸光值。
1.2.3 DPPH 法1.2.3.1 原理DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl或1,1-二苯基苦基苯肼)分子结构图,见图。
在有机溶剂中是一种稳定的自由基, 其乙醇溶液(显深紫色)在517nm处有最大吸收峰,见图。
当与抗自由基活性物质作用时, 其孤对电子被配对, 因而吸收消失或减弱,通过测定吸收减弱的程度,可评价自由基清除剂的活性。
1.2.3.2 清除自由基的测定步骤分别将金银花、葛根和栗子叶的提取液配制成百分浓度为10 %、20 %、30 %、40 %、50 %的待测液。
DPPH用70 %的乙醇配制成6.5×10-5mol/L的溶液; 按表 2 加样于具塞比色管中, 摇匀反应30 min 后, 用紫外-可见分光光度计, 光程1cm, 70%乙醇溶液为参比液, 在517 nm处分别测定吸光度值A0、Ai、Aj。
按下列公式计算清除率:S ( %) =[1- ( Ai- Aj ) /A0]× 100 %S:清除率; Aj:待测液在517 nm的吸光值; Ai: 加入DPPH待测液后的吸光值;A0:DPPH在517nm的吸光值。
3.牛骨胶原多肽的制备及其清除自由基活性研究（华南理工大学硕士研究生论文）4.3.2 水解物清除超氧阴离子（O2-·）能力的测定本实验采用邻苯三酚自氧化法[89]测定样品清除超氧阴离子的活性。
取浓度为80g/L的水解样品溶液0.2mL，加入pH8.2，50mmol/L的Tris-HCl 缓冲液4.5mL，蒸馏水4mL，混匀，置于27℃保温10min，作为试剂A；取0.3mL 3mmol/L的邻苯三酚溶液，置于25℃下保温10min，作为试剂B；以试剂A与0.3mL 10mmol/L HCl溶液的混合液作为空白调零后，将试剂A与试剂B迅速混合，在320nm 处测定3min内吸光度的变化，回归求出吸光度变化斜率K1。
以蒸馏水代替水解样品溶液作为对照样品重复上述过程，得出吸光度变化的斜率为K0；计算清除超氧阴离子的能力：式中：K0——空白对照液的吸光度变化斜率K1——加入水解液后的吸光度变化斜率4.3.3 水解物清除羟基自由基（·OH）能力的测定采用水杨酸法测定水解物清除羟基自由基（·OH）能力[90]。
在反应体系中加入10mL 9mmol/L FeSO4溶液和10mL 9mmol/L的水杨酸-乙醇溶液，然后加入浓度为80g/L的水解样品溶液10mL，最后加入10mL 8.8mmol/LH2O2启动反应。
对照液中以10mL蒸馏水替换同体积的水解液，37℃条件下保温0.5h。
以蒸馏水为参比液，在510nm测定其吸光值。
计算清除羟基自由基的能力：式中：A0——空白对照液的吸光值Ax——加入水解液后的吸光值Ax0——水解液的本底吸光值4.3.4 水解物清除二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）能力的测定[91]二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）法是一种广泛用于筛选抗氧化剂的方法，用该法测定了水解物清除二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）的能力。
将2mL浓度为80g/L的水解液与2mL 0.1mmol/L的DPPH·-乙醇溶液混匀置于试管中,静置30min后，以无水乙醇作为参比测定其吸光度Ax；在对照液中，以2mL无水乙醇代替水解液，静置30min后，以无水乙醇作为参比测定其吸光值A0；取相同浓度的水解液2mL和2mL的无水乙醇混匀，以无水乙醇作为参比测定其本底吸光值Ax0。