果蝇综合大实验

果蝇综合大实验（反交组）综合实验内容果蝇分离定律的实果蝇自由组合的实验分析果蝇的伴性遗传实验分析实验第一部分果蝇综合大实验实验设计一、实验目的1、理解和验证分离定律；2、了解两对不连锁基因的杂交方法，验证自由组合定律；3、正确认识伴性遗传的正、反交的差别，验证伴性遗传规律；4、理解连锁和交换的原理，学习实验结果的数据处理和重组值的计算方法，绘制遗传学图。

二、实验原理(1)分离定律一对等位基因在杂合子中，各自保持其独立性，在配子型城市，彼此分开，随即进入不同的配子，在一般情况下：F1杂合子的配子分离比为：1：1；F2表型分离比是3：1；F2基因型分离比为1：2：1。

P 黑檀体（e e）×灰体（++）↓F1 灰体（+e）↓F2 灰体（++）:灰体（+e）:黑檀体(ee)1 2 1(2)自由组合定律支配两对（或两对以上）不同形状的等位基因，在杂合状态保持其独立性。

配子形成时，各等位基因彼此独立分离，不同对的基因自由组合。

在一般情况下，F1配子分离比是1：1: 1: 1;F2基因型分离比率(1:2:1)2, F2表型比率：９：３：３：１P 长翅黑檀体(++ee)×短翅灰体(++mm)↓F1 长翅灰体(+m +e)↓F2 长翅灰体:长翅黑檀体:短翅灰体:短翅黑檀体9 3 3 1(3)伴性遗传由性染色体所携带的基因在遗传时与性别相联系的遗传方式。

果蝇野生型红眼（X+）和突变型白眼（Xw）是一对相对性状，X+对Xw是显性。

将显性纯合的红眼雌蝇（X+X+）与白眼雄蝇（XwY）杂交，F1不论雌雄均表现为红眼。

F1雌雄个体互交，F2红眼与白眼的比例为3：1，但无白眼雌蝇。

白眼(X+X+)♀ 红眼(XwY) ♂↓红眼(X+ Xw)♀(X+Y)♂↓⊕红眼雌X+X + 红眼雌X+X w 红眼雄X+ Y 白眼雄XwY红眼：白眼=3 ：1雌性：雄性=1 ：1三、实验材料1、果蝇材料：陕师大生命科学学院遗传学实验室保存的6和26号品系：品系体色眼色翅型刚毛6 灰白w(1) 短m(1) 卷sn(1)26 黑檀体e(3) 红长直2、实验器具与药品用具：解剖镜、麻醉瓶、毛笔、培养瓶、白瓷板、死蝇瓶药品：乙醚四、实验步骤（技术路线）1）挑选至少4只6处女蝇，4只26雄蝇放入培养瓶（亲本杂交瓶），贴标签↓（7～8天）倒去亲本果蝇↓（3～5天）F1代果蝇出现↓（2～3天）移出5~6对雌雄蝇（无需处女蝇）放入新的培养瓶（F1瓶），贴标签↓（7～8天）倒去F1亲本↓（3～5天）F2代果蝇出现，观察统计↓数据归类，结果分析，卡方检测，结论，总结等2）反交组的具体分配反交组，26号8管、6号8管↓确认亲本蝇性状，有三龄幼虫时，倒去已有成蝇↓反交组（2管/4位—26号）收集26处女蝇和26♂各8只，分别放入新培养瓶；↓交换♂后，每4位同学做1管正交6(♀)×26 (♂) 或1管反交26(♀) ×6(♂)，每管4对亲本蝇，贴标签；↓每4人1管P1×P2（亲本瓶）↓待F1成蝇出现后，统计并观察性状，分别挑选4～5对F1 ♀♂转入新的培养管，贴标签；↓每2人1管（F1瓶）↓每两位同学统计一个杂交管中的F2，统计至200只左右，并分别写出实验报告(若F2数量太少，相同杂交组同学可合并统计数据)五、实验结果记录表格实验记录表格（自行设计）。

六、预期的实验结果及统计学分析方法（一）正交组6(♀）×26 (♂) ：1、分离定律（灰:黑檀体＝3:1）；2、自由组合定律（灰红:灰白:檀红:檀白＝3:3:1:1）;3、伴性遗传（红眼:白眼＝1:1；雌:雄＝1:1）；4、三点测验（预期有8种表型）（二）反交组26(♀) ×6(♂) ：1、分离定律（灰:黑檀体＝3:1）；2、自由组合定律（灰长:灰短:檀长:檀短＝9:3:3:1）3、伴性遗传（红眼:白眼＝3:1 ；雌:雄＝1:1 ）；4、为何不能验证三点测验？（F1 ♂为三显性个体，故F2 ♀均为显性表型）（三）卡方检测表（自行设计）。

实验过程中应注意的几个问题实验结果的可靠性保证：时间；认真；尽量减少人为误差（处女蝇的挑选、亲本杂交后或F1接种后的时间）。

刚开始放入杂交亲本或F1接种后，每天要观察果蝇的生活情况，若有死亡要及时补充。

每次观察统计时均要麻醉，或杂交开始放入亲本或放入F1时也要麻醉。

放入时将杂交管平放，待果蝇苏醒后再竖立。

对于F2代的统计要及时（严格8h内，最多12h）挑出孵化出的F2代成蝇，统计后丢弃；每只F2代要统计各种性状（眼色、体色、刚毛、翅型、雌雄）。

性梳、刚毛等结构一定要用解剖镜观察。

翅型、体色、刚毛、雌雄等性状在刚刚孵化出时不易辨认，可再放回管中1－2h之后再观察。

每次统计必须要有记录。

若出现例外要及时报告值班教师，并要进行记录、分析。

不要存在心理暗示。

统计过的果蝇入死蝇瓶。

杂交结束后，每个实验均要做卡方检验，以验证是否符合相关定律。

实验第二部分果蝇综合大实验实验过程及观察记录第一周：1）选取每组实验所要用的各种果蝇表型（黑檀体红眼长翅直刚毛为母本和灰体白眼短翅卷刚毛为父本）分别培养使其产卵。

每天按7：00——8：00，13：00——14：00，21：00——22：00三份额时间段观察收集果蝇。

注：处女蝇的鉴别与挑选和收集。

每组至少挑选5-10只处女蝇。

新羽化的雌身体细长，幼嫩的几乎透明，一般在8-10h没有交配能力，或经过7-10天的隔离饲养没有与任何雄蝇交配过的蝇都属于处女蝇。

2）杂交接种的步骤：Ⅰ接种：把选出的雌雄果蝇，根据杂交实验要求搭配起来，装入一个培养瓶内，每瓶放5—6对，贴上标签，写明杂交组合的亲本、杂交日期、实验者姓名。

Ⅱ培养：第二天检查培养瓶，亲蝇若有死亡应及时补充，将培养瓶放在25℃恒温培养箱中培养。

注意随时检查培养基是否发霉，如有污染应立即更换新的培养基。

第二周：对果蝇生活史进行细心观察。

①淘汰亲本果蝇：第一周接种的亲蝇，经7-8天培养后，再过3-4天，F1代将孵出，为避免亲子蝇混淆，应将亲本果蝇移到死蝇瓶中。

即当瓶壁上出现黑色蛹时，在实验室移去亲本，之后继续将培养瓶存放在恒温箱内保存。

第三周：观察记录F1表型：再经3~5天（即接种杂交亲本后的约11~12天），F1成虫开始羽化，在实验室中取出F1成蝇，观察记录其表型和数①F1兄妹交（自交）：取一新培养瓶，放10~15对F1果蝇。

③进行F1自交。

贴好标签，写明F1的基因型、杂交日期、实验者姓名。

第四周：7~8天后，移去F1兄妹交（自交）的个体。

第五周：①再过2天左右即接种F1果蝇10左右天后，F2开始羽化。

仔细观察F2的各种表型，并详细记录。

②前两天时，我们组每天去三次，即新羽化的果蝇F2代无自交，后续时间紧张，我们每天去一次，所以我们从11.2.——12.3号这段时间内观察记录F2。

共收集229只果蝇。

②观察记录结果见原始数据表。

数据的收集过程本次实验自10月21日起至12月3日至，历时42天，共收集子二代229只。

10月21日—27日：收集6号♂，26号♀，每隔8h收集一次。

10月27日：亲本合管，6号♂，26号♀杂交，每管5只♂，5只♀，分两管。

11月3日：倒掉亲本，继续培养。

11月6日：F1代成蝇开始出现，将收集到的F1代分四管培养，两人负责一管。

11月14日：停止收集F1代，此时四个小管中都有3—5对F1代♀、♂果蝇。

11月21日：开始收集F2代，并按性状开始计数。

12月3日：F2代收集结束。

原始数据统计表观察日期性别体色眼色翅型刚毛♀♂灰黑檀红白长短残直卷11.20 3只+ + + + + + + + + ++ + + + +2 13 0 3 0 3 0 0 3 011.21 + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + +10只 5 5 8 2 6 4 9 1 0 8 211.22号+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + + 9只 5 4 7 2 8 1 8 0 1 7 211.23号+ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + +6只 3 3 6 0 4 2 4 2 0 4 211.24号+ + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + +16只9 7 13 3 14 2 11 4 1 14 211.25号+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +15只12 3 11 4 13 2 15 0 0 15 011.26号+ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + +52只32 20 33 19 36 16 23 29 0 41 1111.27号+ + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + +14只7 7 13 1 7 7 9 4 1 12 211.28号+ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + +28只13 15 20 8 17 11 7 21 0 15 1311.29号+ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + +12只 4 8 11 1 9 3 11 1 0 10 211.30号+ + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + ++ + + + + + + + ++ + + + + + + + ++ + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + +31只19 22 20 11 25 6 21 7 3 14 712.1号+ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + +12只8 4 12 0 8 4 9 3 0 10 212.2号+ + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + + + + + + + + + + + +9只 2 7 7 2 4 5 9 0 0 5 412133111 12.3号+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + ++ + + + +12只 6 6 9 3 6 6 7 5 0 8 4 总计127 102 172 57 160 69 146 77 6 176 53229只实验第三部分果蝇综合大实验之数据处理及分析（反交组）经过观察F2的各种性状，统计数据，记录结果，现进行数据处理及分析。