适配体的筛选技术

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粘附素核酸适配体及其筛选方法和应用的制作技术

粘附素核酸适配体及其筛选方法和应用的制作技术

本技术公开了一种黏附素适配体及筛选该黏附素适配体的方法,本技术以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,扩增得到其黏附素基因,将得到的基因与表达载体连接获得筛选靶标,再将筛选靶标与随机单链ssDNA文库孵育,SELEX筛选,PCR扩增文库,然后经多轮筛选得到黏附素核酸适配体。

本技术还公开了该黏附素适配体在制备幽门螺杆菌的检测试剂盒以及制备幽门螺杆菌免疫药物中的应用。

本技术的黏附素核酸适配体具有较高的亲和力与特异性,分子量小、渗透性强,相对现有技术能够更直观的反应机体感染Hp的状况。

技术要求1.一种黏附素核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体的核苷酸序列含有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列;或含有以下任意一种核苷酸序列:与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列同源性在60%以上、与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列进行杂交的序列、SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列转录的RNA序列。

2.根据权利要求1所述的黏附素核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体的核苷酸序列被甲基化、巯基化、磷酸化、氨基化或同位素化。

3.根据权利要求1或2所述的黏附素核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体的核苷酸序列上连接有荧光物质、治疗性物质、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶标记。

4.一种权利要求1所述的核酸适配体的的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到幽门螺杆菌黏附素(Hpa A)基因;(2)将得到的基因与表达载体Pet28a质粒经酶切后连接,连接产物转入大肠杆菌E.coli BL21菌株并诱导表达,裂解细菌,纯化,获得的重组粘附素Hpa A即为筛选靶标;(3)将步骤(2)得到的黏附素Hpa A与ssDNA文库进行孵育,收集与筛选靶标结合的ssDNA;(4)将得到的ssDNA进行PCR扩增,得到dsDNA;(5)得到的dsDNA与pUC19质粒经酶切后连接,并转入大肠杆菌E.coli DH5α菌株;(6)选取阳性克隆测序,并验证阳性克隆扩增得到的ssDNA与Hpa A的结合力,得到核酸适配体。

基于ce的蛋白质靶核酸适配体筛选策略

基于ce的蛋白质靶核酸适配体筛选策略

基于ce的蛋白质靶核酸适配体筛选策略
1 需要ce蛋白质靶核酸适配体筛选策略
CE(Capillary Electrophoresis)多经典应用于化学、物理和生物分析,其核心功能是以分析精度、速度以及质量为标准进行膜电泳振荡仪结果定量分析。

ce 分析是一种灵敏的分析技术,也是近年来一种许多生物分析大项目的常用技术,尤其是蛋白质靶核酸适配体筛选策略。

2 筛选过程
CE筛选蛋白质靶核酸适配体筛选策略,主要有两步:预处理步骤和CE分析步骤。

第一步,预处理步骤。

通过结合多种生物化学分离和分析技术(比如直接对比法、流式细胞显微镜),对目标进行筛选。

筛选结果将会影响ce分析的准确性。

第二步,ce分析步骤。

ce 对蛋白质靶核酸适配体的分离及定性分析,采用游离时间测定和半定量测定,了解蛋白质与靶核酸适配体之间的联合程度及靶核酸适配体种类。

3 结果及优势
使用ce技术筛选出目标蛋白质靶核酸适配体,具有更快的检测速度、更高的精度更大的灵敏度、更高的检测稳定性等优势。

ce 对联合
的程度及靶核酸适配体种类的分离更加准确,可以选出最优的目标蛋白质靶核酸适配体,从而获得精准测试结果。

4 结论
CE筛选蛋白质靶核酸适配体筛选策略具备诸多优势,通过结合多种生物化学分离和分析技术以及ce分析技术,可以选出最优的蛋白质靶核酸适配体。

本文阐述了 CE筛选蛋白质靶核酸适配体筛选策略的过程和优势,并得出结论,最终得出最优的分析结果,为将来的研究提供科学的依据。

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用引言•对核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选和细胞内应用的研究具有重要意义。

•本文将全面、详细、完整地探讨任务主题,并介绍相关研究进展和应用前景。

核糖核酸适配体的筛选1.适配体的定义和作用•核酸适配体是一类能与特定靶分子结合的核酸分子。

•适配体能通过序列和结构的互补性与靶分子发生特异性结合,可用于分子识别、药物传递等应用领域。

2.适配体的筛选方法•SELEX技术是目前最常用的适配体筛选方法。

•SELEX技术包括基于转录翻译的SELEX、层析SELEX等多种筛选方法。

3.筛选策略和条件•筛选策略包括初始大量核酸库的构建、共轭修饰、反选等步骤。

•核酸库的筛选条件对于适配体筛选的效果至关重要。

4.筛选结果分析与验证•高通量测序技术可用于分析和鉴定筛选获得的适配体序列。

•筛选结果还需要通过一系列实验验证,如亲和度测定、特异性验证等。

小分子荧光探针的筛选1.荧光探针的定义和作用•小分子荧光探针是一类能够发出荧光信号的化合物。

•荧光探针可以用于生物分子的可视化、分析和研究。

2.荧光探针的筛选方法•荧光探针的筛选方法包括合成化学筛选、高通量筛选等。

•合成化学筛选是一种通过改变荧光探针的结构进行筛选的方法。

3.筛选策略和条件•荧光探针的筛选策略包括结构优化、荧光特性调控等。

•在筛选过程中,光学性质、稳定性和毒性等因素也需要考虑。

4.筛选结果分析与验证•荧光探针的结果需要通过荧光光谱、细胞实验等手段进行分析和验证。

•有效的荧光探针应具有高荧光强度、低背景信号和良好的细胞内渗透性。

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的细胞内应用1.适配体和探针的细胞内传递•适配体和探针需要选择合适的传递方式进入细胞内,如利用转染剂、纳米粒子等。

•传递方式的选择应根据适配体和探针的性质和细胞类型进行优化。

2.适配体和探针的细胞成像•适配体和探针可用于细胞成像,揭示生物过程和分子相互作用等。

•高分辨率显微镜和成像技术的发展为适配体和探针的细胞成像提供了有力工具。

脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别及应用初探的中期报告

脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别及应用初探的中期报告

脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别及应用初探的中期报告中期报告一、引言脂肪细胞是人体内重要的能量储存组织,其代谢异常与肥胖、糖尿病等疾病密切相关。

因此,对脂肪细胞的研究对于实现健康生活具有重要意义。

本报告旨在介绍脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别及应用初探的中期研究进展。

二、脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别1. 核酸适配体的基本原理核酸适配体是由寡聚核苷酸(Oligonucleotide)序列构成的人工分子,可与特定的目标分子发生高度选择性的结合。

其筛选原理在生物检测、治疗以及荧光标记等领域具有广泛应用。

2. 脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选通过体外筛选实验,我们成功地获得了针对脂肪细胞的特异性核酸适配体。

在这一过程中,我们首先将随机序列库与脂肪细胞进行反复接触,然后通过进一步筛选,获得具有高亲和力的脂肪细胞特异性核酸适配体。

三、脂肪细胞特异性核酸适配体的分子识别1. 核酸适配体与脂肪细胞的结合机制通过核酸适配体的特定序列,可与脂肪细胞表面特异的蛋白质结合。

这种结合机制具有高度的选择性,能够准确地识别和结合脂肪细胞。

2. 核酸适配体的脂肪细胞识别效果验证通过细胞免疫荧光染色、流式细胞术等实验方法,我们验证了脂肪细胞特异性核酸适配体的识别效果。

结果表明,核酸适配体能够高度特异性地结合脂肪细胞,并产生明显的荧光信号。

四、脂肪细胞特异性核酸适配体的应用初探1. 药物传递系统将药物通过连接在核酸适配体上的适配体对特定脂肪细胞进行选择性运载,能够减少对其他细胞的不必要影响,提高治疗效果。

2. 脂肪细胞生物学研究通过核酸适配体的脂肪细胞特异性结合,可以进一步研究脂肪细胞的生理和病理过程,为肥胖、糖尿病等相关疾病的治疗提供新的思路。

五、结论通过脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选分子识别及应用初探,我们实现了对脂肪细胞的准确识别,并初步探索了其在药物传递系统和脂肪细胞生物学研究方面的应用潜力。

这一研究为进一步研究脂肪细胞的功能和相关疾病的治疗提供了重要的理论和实践基础。

适配体筛选方法研究进展

适配体筛选方法研究进展

适配体筛选方法研究进展王巍 贾凌云*(大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系,大连116023)摘 要 利用指数富集配体进化技术(SELEX )可获得与目标靶具有特异性结合能力的适配体(寡核苷酸)。

经过近20年的研究,适配体被证实可在科研及临床应用中部分取代抗体,是有很大发展前景的技术领域。

适配体技术发展的关键在于对目标靶具有高选择性吸附能力的适配体的筛选和获得。

十几年来,以提高筛选效率和效果为目标的适配体筛选技术不断改进,产生了如消减筛选、复合靶筛选、基因组筛选、毛细管筛选等新方法,推动了这一技术的发展。

本文对现有适配体筛选方法进行了系统的评述。

关键词 适配体,指数富集配体进化技术,筛选方法,评述2008-09-08收稿;2008-10-26接受本文系国家自然科学基金(N o .20435020)资助项目*E-m ai:l l y j 81@dlut 1 引 言适配体的概念在1990年由Tuer k 等[1]首次提出,是指利用指数富集的配体进化技术(syste m atic evo l u tion o f li g ands by exponentia l enr i c hm en,t SELEX )从特定的寡核苷酸库中筛选出对目标靶有特异性相互作用的寡核苷酸(DNA 或RNA )。

与传统的抗体相比,适配体具有以下特点和优势:(1)对目标靶分子具有与抗体相当甚至更高的亲和性;(2)可以大量、快速的在体外合成,制备方法更为简单快捷;(3)可以针对不同种类的目标靶进行筛选,包括生物毒性的分子以及只具有半抗原性的分子,拓宽了其应用范围;(4)稳定性优于抗体,利于储存。

基于适配体的上述优良特性,其在疾病检测、药物研发、临床治疗、分析化学、蛋白质组学以及基因表达调控机理研究等多个领域都有着良好的应用前景。

目前,限制适配体技术应用的瓶颈问题仍是适配体的有效筛选技术。

希望通过本篇对现存适配体筛选方法的分析与评述,为进一步解决适配体筛选技术中存在的不足提供参考。

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用

核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选及细胞内应用核糖核酸适配体和小分子荧光探针是生物学研究中常用的工具,它们可以用于检测和监测生物分子的活动和表达。

在本文中,我们将介绍核糖核酸适配体和小分子荧光探针的筛选方法以及它们在细胞内的应用。

一、核糖核酸适配体的筛选核糖核酸适配体是一种能够与特定分子结合的核酸分子。

它们可以通过体外筛选的方法来获得。

体外筛选的过程通常包括以下几个步骤:1. 随机序列库的构建:将随机序列插入到核酸分子中,构建一个包含大量随机序列的序列库。

2. 选择性结合:将目标分子与随机序列库混合,筛选出能够与目标分子结合的核酸分子。

3. 改进筛选:通过多次筛选和优化,得到具有更高亲和力和特异性的核糖核酸适配体。

二、小分子荧光探针的筛选小分子荧光探针是一种能够与生物分子结合并发出荧光信号的小分子化合物。

它们可以通过高通量筛选的方法来获得。

高通量筛选的过程通常包括以下几个步骤:1. 化合物库的构建:将大量小分子化合物构建成化合物库。

2. 筛选:将化合物库与目标分子混合,筛选出能够与目标分子结合并发出荧光信号的小分子荧光探针。

3. 优化筛选:通过多次筛选和优化,得到具有更高亲和力和特异性的小分子荧光探针。

三、核糖核酸适配体和小分子荧光探针在细胞内的应用核糖核酸适配体和小分子荧光探针在细胞内的应用可以用于检测和监测生物分子的活动和表达。

例如,核糖核酸适配体可以用于检测细胞内的蛋白质、RNA和DNA等分子的表达和活动。

小分子荧光探针可以用于监测细胞内的离子浓度、代谢产物和信号分子等。

在细胞内应用核糖核酸适配体和小分子荧光探针需要注意以下几点:1. 细胞渗透性:核糖核酸适配体和小分子荧光探针需要能够渗透到细胞内部才能发挥作用。

2. 特异性:核糖核酸适配体和小分子荧光探针需要具有特异性,能够与目标分子结合并发出荧光信号。

3. 毒性:核糖核酸适配体和小分子荧光探针需要具有低毒性,不会对细胞造成损伤。

总之,核糖核酸适配体和小分子荧光探针是生物学研究中常用的工具,它们可以用于检测和监测生物分子的活动和表达。

筛选核酸适配体的技术

筛选核酸适配体的技术

筛选核酸适配体的技术嘿,朋友们!今天咱就来聊聊筛选核酸适配体的技术。

这玩意儿可神奇啦,就像是在一个巨大的宝库中寻找那颗最闪亮的宝石。

你想想看,核酸适配体就像是一把专门为目标分子打造的钥匙,而且是超级精准的那种。

要找到这把钥匙可不容易,得有一套厉害的办法。

首先呢,有一种方法叫指数富集的配体系统进化技术,这名字听起来是不是很高大上?其实简单来说,就是让核酸分子们在那里竞争,看谁能和目标分子结合得最好。

就好像一场激烈的比赛,只有最强的才能胜出。

这过程可不简单,得经过一轮又一轮的筛选和进化,才能得到那最优秀的核酸适配体。

还有一种方法呢,是利用噬菌体展示技术。

这就好比是把核酸适配体放在一个大舞台上展示,让目标分子来挑选自己喜欢的。

那些被选中的核酸适配体就有机会留下来,继续发光发热。

筛选核酸适配体的过程就像是一场冒险,充满了未知和挑战。

有时候你可能觉得已经找到了那把钥匙,但再仔细一看,哎呀,好像还差那么一点点。

但别灰心呀,继续努力,说不定下一次就成功了呢!你说这技术是不是很神奇?它能在那么多的核酸分子中找到最合适的那一个,就像大海捞针一样,但又比那更难。

不过咱科学家们可不怕,他们有着无穷的智慧和耐心,一点一点地攻克难关。

你知道吗,这核酸适配体的用途可广泛了。

它可以用来检测疾病,就像一个小侦探,能快速准确地发现问题。

还可以用来治疗疾病呢,把那些坏家伙都给抓住。

咱想想看,如果没有这些先进的技术,那很多疾病的诊断和治疗该有多困难呀!所以说呀,筛选核酸适配体的技术真的是太重要了。

咱再回到这个技术本身,它就像是一个魔法盒子,打开之后里面充满了惊喜和可能。

每一次的实验,每一次的尝试,都有可能带来新的发现。

这就是科学的魅力呀,永远充满了未知和挑战,永远让人充满期待。

所以呀,朋友们,让我们一起为这些伟大的科学家们点赞,感谢他们为我们带来这么好的技术。

也让我们一起期待未来,看看这筛选核酸适配体的技术还能给我们带来哪些惊喜!这不就是科学的魅力所在吗?让我们一起拥抱它吧!。

小分子靶标的核酸适配体筛选的研究进展

小分子靶标的核酸适配体筛选的研究进展

小分子靶标的核酸适配体筛选的研究进展一、本文概述随着生物技术的飞速发展,小分子靶标的特异性识别与检测在疾病诊断、药物研发和生物传感器等领域展现出巨大的应用潜力。

作为一种新兴的识别分子,核酸适配体以其独特的优势,如高特异性、强亲和力、易于合成与修饰等,逐渐成为研究热点。

本文旨在综述近年来小分子靶标核酸适配体筛选的研究进展,包括筛选方法的创新、适配体在生物分析中的应用拓展以及面临的挑战和未来的发展趋势。

通过深入了解小分子靶标核酸适配体的筛选策略和应用现状,有助于推动相关技术的进一步发展,为生物医学和生物技术领域提供更多的创新工具和方法。

二、核酸适配体的筛选方法核酸适配体的筛选是基于体外进化技术的一种高通量筛选过程,其中最常用的是指数富集的配体系统进化(SELE)技术。

该方法的核心思想是从一个随机序列的核酸库中筛选出能特异性结合目标小分子的核酸序列。

SELE过程一般包括以下步骤:构建一个包含大量随机序列的核酸库,这些序列通常是单链DNA或RNA。

然后,将此库与目标小分子混合,通过分子间的相互作用,使得与目标分子结合力强的核酸序列得以保留。

接下来,通过一系列的洗脱和扩增步骤,去除非特异性结合的核酸,同时富集与目标分子结合力强的核酸序列。

这个过程会重复进行多轮,直到筛选出具有高亲和力和高特异性的核酸适配体。

随着技术的不断发展,SELE技术也在不断改进和完善。

例如,为了提高筛选效率,研究人员开发出了多种衍生技术,如基于微球的SELE、基于流式细胞的SELE等。

这些技术可以在更短的时间内筛选出更多的核酸适配体,从而加快适配体的研究和应用进程。

为了更准确地评估核酸适配体的性能,还需要进行一些体外和体内的验证实验。

这些实验可以验证适配体的亲和力、特异性、稳定性等性能,为后续的应用提供重要依据。

核酸适配体的筛选方法已经取得了显著的进展,但仍面临着一些挑战和机遇。

未来,随着技术的不断发展和完善,相信核酸适配体的研究和应用将会取得更大的突破。

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适配体的筛选技术——SELEX[摘要] 适配体泛指具有抗体功能的单股寡核苷酸(RNA或DNA),其可形成的特殊的立体结构如以辨识特定的蛋白质。

在一定环境下, 单链DNA 或RNA能与某些物质形成多种热力学稳定的三维空间结构而成为各种功能分子。

在大多数情况下, 溶液中的单链DNA 或RNA 的空间构象是不确定的, 当有目标分子存在时, 在合适的环境下寡聚单链会发生适应性折叠, 形成发夹( hairpin) 、假结( pseudokno t ) 、凸环( bulg e) 、G-四分体( G-quar tet ) 等特殊结构, 通过氢键、疏水堆积作用、范德华力等与目标分子紧密结合。

这种结合不需要依靠通常的核糖磷酸骨架的亲和力, 而且靶物质既可以是蛋白质, 也可以是多肽及小分子物质。

这种寡核苷酸片段被称为适配体。

适配体的产生是借由一种指数富集配体的系统进化技术( systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)。

SELEX是20世纪90年代发展起来的一项组合化学技术。

利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸配体( ap tamer) , 其解离常数可以与单克隆抗体媲美。

经过十几年的发展, SELEX技术已经成为一种重要的研究手段和工具,被广泛应用到分子生物学、基因组学、临床医学等众多研究领域, 并且衍生出了混合靶SELEX、体内SELEX、基因组SELEX等各种子技术。

随着基因组学和蛋白质组学的深入开展, SELEX技术会有更广泛的应用前景。

[关键词]适配体;指数富集配体的系统进化; 配体;Aptamer screening technology - SELEX[Abstract] Aptamers function refers to a single-stranded antibody oligonucleotides (RNA or DNA), which can form three-dimensional structures such as special to identify specific proteins. In certain circumstances, asingle-stranded DNA or RNA can form a variety of substances with certain thermodynamically stable three-dimensional structure for a variety of functional molecules. In most cases, the solution of the single-stranded DNA or RNA conformational is uncertain, when the presence of target molecules in a suitable environment occurs adaptive single-stranded oligo folded forms a hairpin (hairpin) , fake knot (pseudokno t), convex ring (bulg e), G-tetrad (G-quar tet) and other special structure, through hydrogen bonding, hydrophobic stacking interactions, van der Waals and other closely integrated with the target molecule. This combination does not need to rely on the usual affinity ribose phosphate backbone and the target substance may be a protein, polypeptide can also be small molecules. This oligonucleotide is called aptamers. Aptamer is produced by means of ligands by exponential enrichment caused by a phylogenetic techniques (systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX). SELEX was in the 1990s developed a combinatorial chemistry techniques. This technology can be single-stranded nucleic acid sequence from a random library was screened with the target substance to a specific high affinity nucleic acid ligands (ap tamer), dissociation constant of the monoclonal antibody can be comparable. After ten years of development, SELEX technology has become an important research tool, and tools are widely applied to molecular biology, genomics, clinical research and many other fields, and derived from a mixed target SELEX, in vivo SELEX, genome SELEX various sub-technologies. Withgenomics and proteomics in depth, SELEX technology has wider applications. [key words]Aptamer,SELEX,ligand20世纪90年代初, 美国科罗拉多大学(University of Col2 orado)的Tuerk 和Gold 将翻译T4 DNA 聚合酶( gp43 ) 的mRNA 中一含有8个碱基的环状结构进行序列随机化(该区域为茎环结构, 含18 个碱基, 其中环的部分有8 个碱基,gp43本身可以结合该区域并对自身合成进行调节) , 得到一个含65 536种序列的核酸库, 经过几轮筛选从中得到了两种与gp43紧密结合的核酸配体: 一种为已知的野生型, 另一种变体与野生型相差4个碱基, 两者的解离常数接近(野生型Kd = 5 ×10 - 9 mol/L, 变异性Kd = 3. 2 ×10 - 7 mol/L ) 。

John Abelson曾猜测变体可能在生物进化的过程中出现过, 但由于经受不住选择压力的考验, 最终无法保留下来。

鉴于该技术是基于进化过程的机制变异、选择、复制, 因此被命名为“指数富集配体的系统进化”( systematic evolution of ligandsby exponential enrichment, SELEX) 。

1、SELEX技术的原理及步骤1.1基本原理利用分子生物学技术,构建人工合成的单链随机寡核苷酸文库,其随机寡核苷酸文库与靶分子相互作用,保留结合的寡核苷酸配基(aptamer),经反复扩增、筛选数个循环,即可使与该靶随机序列长度在20~100 个碱基左右。

将分子特异结合的寡核苷酸序列得到富集.SELEX过程中,首先是用组合化学合成DNA的方法合成随机序列的核酸库,库中的每一个成员是一个线形的寡聚物,库中分子多样性的程度取决于随机寡核苷酸的长度。

理论上讲,一个40个碱基的随机序列可有1.2 X 1024种核苷酸排列顺序(440=1.2 X 1024)。

实际上1μmol的固相DNA合成的随机组合核苷酸库的序列多样性仅限制于1014—1015种,能否找出与靶分子相互作用的稀有序列,很大程度上取决于组合库的多样性,在所有种类的组合随机序列库中寡核苷酸库的多样性最为丰富。

筛选过程中,首先在一定的温度下将寡核苷酸随机序列库与靶分子共同孵育于特定的缓冲液中,组合库中的极少数分子将与靶分子结合,然后用物理的方法将结合的分子与未结合的分子分离开来。

标准的方法是将蛋白靶分子固定于硝酸纤维素滤膜上,而其他小的靶分子则固定于固相载体的表面,因此,未与靶分子结合的序列很容易被冲洗掉,而与靶分子结合的序列将被分离出来并放大以获得一个序列库,再对这一序列库进行下一轮的筛选和放大。

每一轮选择的严格性决定了高亲和结合子的增强效率。

高亲和结合的增强进度可通过与靶分子的结合分析来确定。

经过数轮的筛选和放大后,一旦达到亲和饱和,所得到的增强库即被克隆和测序,以获得筛选库中每一个序列的信息。

单个序列的特异性将根据其与靶分子结合的能力做进一步的定性。

通常情况下,大多数序列(90%以上)与靶分子有很好的高选择性亲和力。

通过SELEX筛选出来的Aptamer是含有一段固定序列的全长序列,这个固定序列主要用于协助放大过程,在放大过程中起到引物的作用。

这种全长Aptamer一般由70--80个碱基构成,通过剪切可去除那些对结合靶分予无关紧要的片段,或折叠成最利于结合靶分子的结构。

剪切 Aptamer主要是用于确定最小的靶分子结合域,目前已得到数种少于40个核苷酸的功能性Aptamer。

在大多数情况下,Aptamer的固定片段主要用于放大,而对Aptamer的功能(即识别功能)无关紧要,因此可以去除该段的固定片段。

现已发现了一种无须固定引物序列的SELEX方法,从而筛选出较短的Aptamer。

SELEX技术之所以能够建立,是由于形成寡核苷酸的碱基之间的相互作用往往形成许多空间结构,如发卡(hairpin)、假结(pseudoknot)或凸环(bulge)等,这些结构非常容易与各类靶分子结合。

一个足够容量的寡核苷酸库包容了所有可能的立体结构,在与靶分子结合时,几乎不需要失去"墒"就能存在一个适配的结构,因此有可能从中筛到任何种类的靶分子的高亲和力配基。

1.2 步骤(1)通过人工合成, 建立dsDNA随机序列库, 库容量通常在1014 ~1015之间, 每条序列由两端的恒定区和中间的随机区组成, 随机区的序列长度一般在30~40 nt之间,恒定区为PCR扩增所必须。

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