实验一 普通果蝇形态与生活史观察

实验一 普通果的形态、生活史观察 实验日期：2014年3月12日19:00---22:25 温度：19℃ 压强：82.76Kpa

班级：12生物技术 姓名：熊东 学号：20120322210 一、目的 1．了解果蝇生活史中各个不同阶段的形态特点；区别雌雄果蝇以及几种常见突变类型的主要性状特征；掌握实验果蝇的饲养、管理及实验处理方法和技术。 2．掌握果蝇的基本特征及鉴别雌、雄果蝇的方法，熟悉常见突变型；了解果蝇生活周期特征及各阶段的形态变化。 3．掌握实验果蝇的杂交技术，并学会记录交配结果和掌握统计处理方法。 4．掌握果蝇的麻醉方法，熟悉使用体视显微镜观察果蝇的形态特征。 二、原理

果蝇（fruit fly）是双翅目昆虫，属果蝇属，广泛存在于温带及热带地区，主食为腐烂水果中的酵母菌约有2500个种。通常用作遗传学实验材料的是黑腹果蝇。用果蝇作为实验材料有许多优点： 1. 饲养容易。在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。 2. 生长迅速。十二天左右就可完成一个世代，每个受精的雌蝇可产卵400～500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。 3. 染色体数少。只有4对。 4. 唾腺染色体制作容易。横纹清晰，是细胞学观察的好材料。 5. 突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察。 6.果蝇的生活史：果蝇是完全变态昆虫，它的生活史包括卵、幼虫、蛹及成虫四个发育时期。 7.果蝇的生活周期长短与温度有密切关系。一般来说，30℃以上温度能使果蝇不育或死亡，低温能使生活周期延长，生活力下降，一般在20-25℃下培养最为合适。在适宜的温度下，大约经过10-15天即可繁殖一代。 8.果蝇染色体组成 果蝇为二倍体2n＝8。核内有丝分裂：不涉及细胞分裂和核分裂的染色体分裂方式。体联会：一些特殊的体细胞中（如果蝇唾腺细胞）的染色体经多次复制却不分开，依旧紧密地排列在一起就象减数分裂中的联会现象一样。染色体组：来自二倍体生物的正常配子的所有染色体。连锁群：来自配子中的每条染色体及其携带的基因。雌雄基因平衡理论：对果蝇而言，X染色体上有决定雌性的基因，常染色体上有决定雄性的基因存在，其比值决定果蝇的雌或雄，Y染色体只与育性有关，而与性别无关。 9.果蝇的性别决定 果蝇的性别决定为XY型，Y染色体在性别决定上不起作用，只与育性有关。含有Y染色体，可产生正常的配子，不含Y染色体，则配子不育。性别决定与性比值（性指数）有关。 X/A=1 则为雌性；X/A=0.5 则为雄性。 X/A＞1，为超雌；X/A＜0.5，则为超雄；0.5＜X/A＜1则为中间性。 雌雄基因平衡理论：果蝇X染色体上有很多雌性基因，常染色体上有很多雄性基因，Y染色体上很少或没有与性别决定有关的基因，因此性别决定于基因的平衡。 10.果蝇的连锁群 X染色体上有141个基因；第2染色体上有228个基因；第3染色体上有156个基因；第4染色体上有12个基因。 11.果蝇的研究发展 自二十世纪初至二十世纪三十年代，果蝇作为遗传学实验材料就被广泛的应用。不仅验证了孟德尔的分离规律、自由组合规律，还发现了性连锁遗传。特别是1910年果蝇白眼突变体的发现，通过设计的伴性遗传实验，证明了控制白眼性状的基因是座落于X染色体上，在1916年摩尔根的学生Bridges设计的X染色体不分开实验，无可辩驳地证明了基因是在X染色体上，从而建立了摩尔根的基因的染色体学说，即基因在染色体上并呈直线排列。

性连锁遗传的发现，推进了常染色体遗传的研究，从而建立了连锁和互换规律，使基因定位和连锁群的建立得到空前的发展，使得经典遗传学得到完整的说明和证实。

Muller用X射线诱变果蝇，得到了大量的染色体数量变异、结构变异和基因突变，研究者们设计了大量的、有说服力的，非常严密的实验，不仅能把突变体检出，还找到了控制某性状的遗传物质在染色体上的对应位置，以至后来的发育遗传学，分子遗传学等的研究也是以果蝇为实验材料，推动了现代遗传学的发展。

由此可知，经典遗传学的建立，除了孟氏的豌豆实验外，果蝇实验也是决定性的基础实验。不仅验证了三大规律，还给人以实验方法、实验设计等方面的启迪和思考。对学生的学习是很有利的。

三、试剂、设备、材料 试剂：玉米粉，琼脂，白糖，丙酸，香蕉、酵母粉，果蝇培养基，乙醚等。

设备：高压灭菌锅，电子天平，微波炉，培养管，搪瓷缸，纱布、药棉，记号笔，胶圈、棉线，双目解剖镜、放大镜、小镊子、麻醉瓶、白瓷板、新毛笔等。

材料：黑腹果蝇。 四、步骤 (1)、玉米饲料培养基的配制方法如下: 1、取应加水量的一半，加入琼脂1.5g煮沸搅拌融化； 2、加入白糖13.5g； 3、取另一半水将玉米粉调成糊状，加入到琼脂水中搅拌煮成糊状； 4、加入0.5ml丙酸搅拌； 5、分装入培养瓶，大约2cm高，塞上棉塞； 6、高压灭菌，15磅/cm2，20分种，冷却后加入酵母及灭菌的栖息

纸。刚配制完的培养基放凉后在瓶壁上会有许多水滴，这时如果把果蝇放进去，水滴可能将果蝇的翅膀粘住，为避免发生此事，可将配好的培养基放在温箱内2～3d，待水分蒸发后再使用，或用酒精棉将瓶壁上的水分擦掉。

（2）、果蝇的接种：选择5只雄果蝇和5只雌果蝇放入配制好的培养基中进行培养，一般放在20-25℃环境温度下培养最为合适。

（3）、果蝇生活史的观察记录：果蝇生活史分为卵 、一龄幼虫 、 二龄幼虫 、三龄幼虫 、蛹 和成虫6个时期。 果蝇生活史图片 ①．卵 成熟的雌蝇交尾后（2～3d）将卵产在培养基的表层。用解剖针的针尖在果蝇培养瓶内沿着培养基表面挑取一点培养基将其置于载玻片上，然后滴上1滴清水，用解剖针将培养基展开后放在显微镜低倍镜下仔细进行观察。果蝇的卵为椭圆形，长约0.5mm，腹面稍扁平，前端伸出的触丝可使卵附着在培养基表层而不陷入深层。 ②．幼虫 果蝇的受精卵经过一天的发育即可孵化为幼儿虫。幼虫在培养基内及瓶壁上都有，培养基内的幼虫一般要小一些。这是因为果蝇的幼虫从一龄幼虫开始经两次蜕皮，形成二龄和三龄幼虫，随着发育而不断长大，三龄幼虫往往爬到瓶壁上来化蛹，其长度可达4～5mm。幼虫一端稍尖为头部，黑点处为口器。幼虫在培养基内和瓶壁上蠕动爬行。 ③．蛹 幼虫经过4～5d的发育开始化蛹。一般附着在瓶壁上，颜色淡黄。随着发育的继续，蛹的颜色逐渐加深，最后为深褐色。在瓶壁上看到的几乎透明的蛹是已经羽化完而遗留的蛹的空壳。

④．成虫 刚羽化出的果蝇虫体较长，翅膀也没有完全展开，体表未完全几丁质化所以成半透明透乳白色。随着发育，身体颜色加深，体表完全几丁质化。羽化出的果蝇在8～12h后开始交配，成体果蝇在25℃条件下的寿命为37d。 （4）、果蝇的形态观察：待果蝇成虫后进行形态观察记录。 1、果蝇麻醉方法： 果蝇具有以下一些特性：一是具有趋光性，二是喜欢向上爬。掌握了这些特性，我们就能很方便地将果蝇转移到另外一个培养瓶中。 ①． 轻拍培养瓶，使果蝇落于培养瓶底部；右手两指取下培养瓶塞，将培养瓶与麻醉瓶紧密对接； ②．左手握紧两瓶接口处，倒转使培养瓶向上；右手轻拍培养瓶将果蝇震落到麻醉瓶中； 分开两瓶，将瓶盖各自盖好； ③．将麻醉瓶的果蝇轻拍到瓶底，迅速拔出塞子，滴上几滴乙醚，重新塞上麻醉瓶，平放在桌面上（不能将培养瓶竖立，以免果蝇落入培养基中不便取出）； ④．半分钟后，观察果蝇，不再爬动，并在瓶壁上站不稳，麻醉完成。注意不能麻醉过度，如果果蝇的翅膀与身体呈45o角翘起，表明麻醉过度，不能复苏而死亡。 补救措施：用一平皿，内贴一带乙醚的滤纸条，罩住果蝇进行麻醉补救； 2.在体视显微镜下观察果蝇形态特征。 将果蝇麻醉后，在解剖镜下仔细辨认各种突变类型。与野生型果蝇作对照，观察突变型果蝇的性状表现，如残翅、黑身、黄身、白眼等。经过一段时间的练习，可以直接区别各种不同性状。 果蝇成虫的形态结构 野生型：头部有一对复眼，三个单眼和一对触角；胸部有三对足，一对翅和一对平衡棒；腹部背面有黑色环纹，腹面有腹片，外生殖器在腹部末端，全身有许多体毛和刚毛。体色灰，翅膀呈圆卵型，静止时平放交叉重叠，长度约为腹部长度的两倍；眼睛颜色为砖红色，饱满圆形；头胸部以及复眼的周围具有平直，先端略弯的长型粗黑硬毛。性梳：果蝇只有雄体在第一对足的跗节基部有一黑色鬃毛结构，形似一小梳，称为性梳。而雌体没有性梳。性梳的有无是鉴别雌雄成蝇的可靠标志之一，只是需要放大后才易观察。

3.雌雄果蝇性别鉴别成虫雌雄的鉴别 用性梳的有无就可以很快将雌雄分开，在熟练操作几次后，就可以不必借助解剖镜也能很快区分雌雄。在观察性梳时可以用解剖镜观察，也可以用低倍显微镜观察。

雌雄果蝇图片 雄性♀ 雌性♂ 体 型 大 小 形态 腹部末端稍尖 腹部末端呈钝圆形 颜色 腹部末端色浅，腹部背面呈5条黑色条纹 腹部末端黑色，腹背3条条纹，最后一条极宽，并延伸到腹面，呈一明显黑斑 性梳 无 第一对足的跗节基部有性梳 腹部 6个腹片 4个腹片 性梳 没有性梳 第一对足的跗节基部有一黑色鬃毛结构，形似一小梳

五、结果与分析