药物分析课件抗生素(1)
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抗生素类药物的分析
试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以0.1mol/L枸橼酸溶液-0.2mol/L磷酸氢二 钠溶液-丙酮（60:40:1.5）为展开剂，展开，取出于 105℃加热5分钟后,立即喷以于展开剂配成的0.1%茚三
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
药品检测基本知识 ppt课件
由国家药典委员会编纂，国家食品与药品监督管理局批准
并颁布实施. 中国药典始自1930年出版的《中华药典》。1949年建国
后，已编订了《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》） 1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005 年版共 八个版次。现行使用的是中国药典（2005年版），缩 写为Ch.P（2005）。
ppt课件
15
鉴 别—可选用的方法
化学法
色谱 分析法
鉴别法
理化常 数测定
生物 检定法
光谱 分析法
化学法>UV > IR > TLC > HPLC > GC > 生物法
ppt课件
16
Hale Waihona Puke 别鉴别法选取原则a.专属性，灵敏性，便于推广 b.尽可能选用药典方法 c.化学法与仪器法相结合
ppt课件
17
检查
称取“2g”，系指称取量可为1.5～2.5g；
称取“2.0g”系指称取量可为1.95～2.05g；
称取“2.00g”，系指称取量可为1.995～
2.005g。
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27
温度
温度以摄氏度（℃）表示：
水浴温度 98~100℃
热水
70~80℃
微温或温水 40~50℃
室温
10~30℃
冷水
2~10℃
ppt课件
36
第二章 药物分析基本知识
《中华人民共和国药品管理法》第六条规定： 药品监督管理部门设置或者确定的药品检验机构，承担依法实施药品审批 和药品质量监督检查所需的药品检验工作。”
ppt课件
37
第一节 药品检验工作的一般程序
药物分析(人卫版)第1章
3. 附录:
检查和含量测定的一般要求 一般检查和检定 所用仪器 微生物试验 生物试验和含量测定 共六类
化学试验和含量测定 物理试验和测定以及一般信息
每一类中有包含数项，各不相等。
（二）英国药典（British
Pharmacopoeia BP )
BP(2000)
本版分为 一卷：有凡例、正文；正文品种多为原料药
例如某杂质限量“≤0.0002%”, 测得结果为 “0.00025%” 得
则判为不符合规定;再如某含量限度为“≥98.0%”,测 结果为“97.96%”, 按上述规则舍入后得98.0%, 则符
(3) 药典论坛: 有药典预览; 对药典修订的建议; 术语; 临时修 订通告; 法定参考标准等栏目.
(4) 增补本: 凡例新增项目, 是指定期出版的药品质量标准原
二卷：有凡例、正文、附录；正文品种为药物制剂
血液制品、免疫制品、放射性药物制剂和糖
类药物；欧洲药典品种；附有红外参考光谱； 增补内容和索引。
一部分：说明本版与欧洲药典品种 三部分：为欧洲药典凡例，内容较第二部分丰富。
1. 凡例 二部分：适用于BP正文和附录，共有31条，与Ch.P类同。 2. 正文 收载品种为2663个，1361个来源与欧洲药典（第3版），
精确度；包装、标签
中文药名：照《中国药品通用名称》命 名 名称及编排 英文药名：采用国际非专利药品命名原 则(INN) 有机药物化学名：采用《有机化学命名 原则》
检验方法和限度
检验方法: 采用其他方法时，应与药典方法作比较试
验，在仲裁时，应以药典方法为准。
限度：原料药含量(%)，一般按重量计；如规定上限
2. 内容举例
通用检测方法有：一般鉴别方法；分光光度法
药物分析课件第一章药典
一是扩大了对成熟新技术方法的收载。
如附录中新增离子色谱法、核磁共振波谱法、拉曼 光谱法指导原则等。
中药品种中采用了液相色谱/质谱联用、DNA分子 鉴定、薄层-生物自显影技术等方法，以提高分析灵 敏度和专属性，解决常规分析方法无法解决的问题。
三、现代分析技术广泛应用
新增药品微生物检验替代方法验证指导原则、微生 物限度检查法应用指导原则、药品微生物实验室规 范指导原则等，以缩小附录在微生物方面与国外药 典的差距。
（三）附录
制剂通则；
1. 主要内容 通用检测方法；
指导原则
2. 内容举例：双氯芬酸钠
（三） 附录（Appendix） 附录部分记载了 制剂通则、生物制品通则、一般杂质检查方法、 一般鉴别试验、有关物理常数测定法、试剂配 制法以及色谱法、光谱法等内容。
（四） 索引（Index） 中文索引（汉语拼音索 引）和英文名称索引
•规定的这些数值不论是百分数还是绝对数字，其 最后一位数字都是有效位。
•原料药的含量未规定上限时系指不超过101.0%。
•例：对乙酰氨基酚 98.0～102.0％
马来酸氯苯那敏 不得少于98.5％
标准品和对照品
标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测 定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门 指定的单位制备、标定、供应。 标准品：是指用于生物鉴定、抗生素或生化药品中含
我国现行药品质量标准
1） 中华人民共和国药典，简称中国药典 级别最高 标准最低
2） 中华人民共和国国家食品与药品监督管 理局药品标准，简称局标（部颁标准）
药典* 中国药典的沿革
建国以来，先后出版了九版药典，1953、1963、 1977、1985、1990、1995、2000、2005和 2010年版药典，现行使用的是中国药典（2010 年版）。其英文名称是 Chinese Pharmacopiea， 缩写为Ch.P（2010）。
如附录中新增离子色谱法、核磁共振波谱法、拉曼 光谱法指导原则等。
中药品种中采用了液相色谱/质谱联用、DNA分子 鉴定、薄层-生物自显影技术等方法，以提高分析灵 敏度和专属性，解决常规分析方法无法解决的问题。
三、现代分析技术广泛应用
新增药品微生物检验替代方法验证指导原则、微生 物限度检查法应用指导原则、药品微生物实验室规 范指导原则等，以缩小附录在微生物方面与国外药 典的差距。
（三）附录
制剂通则；
1. 主要内容 通用检测方法；
指导原则
2. 内容举例：双氯芬酸钠
（三） 附录（Appendix） 附录部分记载了 制剂通则、生物制品通则、一般杂质检查方法、 一般鉴别试验、有关物理常数测定法、试剂配 制法以及色谱法、光谱法等内容。
（四） 索引（Index） 中文索引（汉语拼音索 引）和英文名称索引
•规定的这些数值不论是百分数还是绝对数字，其 最后一位数字都是有效位。
•原料药的含量未规定上限时系指不超过101.0%。
•例：对乙酰氨基酚 98.0～102.0％
马来酸氯苯那敏 不得少于98.5％
标准品和对照品
标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测 定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门 指定的单位制备、标定、供应。 标准品：是指用于生物鉴定、抗生素或生化药品中含
我国现行药品质量标准
1） 中华人民共和国药典，简称中国药典 级别最高 标准最低
2） 中华人民共和国国家食品与药品监督管 理局药品标准，简称局标（部颁标准）
药典* 中国药典的沿革
建国以来，先后出版了九版药典，1953、1963、 1977、1985、1990、1995、2000、2005和 2010年版药典，现行使用的是中国药典（2010 年版）。其英文名称是 Chinese Pharmacopiea， 缩写为Ch.P（2010）。
药物分析
专属鉴别试验两种类型。
• 不完全代表对药品化学结构的确证。 • 对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进
行确认。
（10）检查
• 是对药物的安全性、有效性、均一性和纯度四个方面的 状态所进行的试验分析。
• 包括：反映药物安全性和有效性的试验方法与限度、反
映药物制备工艺的均一性和纯度的要求等内容。
（一部）药材和饮片、植物油脂 和提取物、成方制剂和 单味制剂等 2598种
（二部）化学药品、抗生素、生
化药品及放射性药品等
2603种
（三部）生物制品137种 （四部）通则 317个
以及药用辅料
270种
•
我国药典已经出版了十版：1953、1963、1977、1985、 1990、1995、2000、2005、2010、2015年版
一、药品标准制定的基础
二、药品标准术语 三、药品标准制定的原则 四、药品质量研究的内容 五、药品稳定性试验原则和内容 六、药品标准的制定与起草说明 七、药品质量标准制定工作的长期性
一、药品标准制定的基础
如何保障临床使用的安全、有效与合理？
• 需对：药物的结构、理化性质、杂质与纯度及其内在的 稳定性特性进行系统的研究和分析； • 需对：影响药品质量的生产工艺过程、贮藏运输条件等 进行全面的研究和考察； • 需要：充分了解药物的生物学特性（药理、毒理和药代 动力学）； • 从而：制定出有关药品的质量、安全性和有效性的合理 指标与限度。
• “精密量取”：量取体积的准确度应符合国家标准中对该
体积移液管的精度要求； • “量取”：可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具。
• 取用量为“约”若干：取用量不得超过规定量的±10%。
恒重
药物分析^.^
4、稳定性
四环素类抗生素对各种氧化剂（包括空气中氧在 内）、酸、碱都是不稳定的。干燥的四环素类游离 碱和他们的盐类避光条件下保存均较稳定，但其水 溶液随PH的不同会发生差向异构化、降解等反应， 尤其是碱性水溶液特别容易氧化，颜色很快变深， 形成色素。 (1)差向异构化性质：四环素类抗生素在弱酸性 (Ph2.0~6.0)溶液中会发生差向异构化。这个反应 是由于A环上手性碳原子C4构型的改变，发生差向 异构化，形成差向四环素类，而失去抗菌能力。
二、化学结构与性质
(一)、化学结构： 1、四环素类抗生素，可以看作四并苯或萘并萘 的衍生物，基本结构如下：
1、母核：本类药物为 四并苯或萘并萘的衍生 物 ，有A、B、C、D四 个环 ，两个含酮基和烯 醇烃基的共轭体系 2、取代基：酚羟基、 烯醇基、酮基、二甲氨 基、酰胺基
常用四环素类抗生素
四、特殊杂质检查
（一）有关物质 四环素类抗生素中的有关物质主要是指在生产和贮存过程 中易形成的异构杂质、降解杂质（ETC、ATC、EATC）等。 Ch.P(2005)、USP(29)和BP（2005）均采用HPLC法控制 四环素类抗生素中的有关物质。
(二)杂质吸收度
四环类抗生素多为黄色结晶性粉末；而异构体、降解产物 颜色较深，此类杂质的存在均可使四环素类抗生素的外观 色泽变深。因此中国药典和BP（2000）均规定了一定溶剂、 一定浓度、一定波长下杂质吸收度的限量。
Page 21
二、高分子杂质的基本结构与特点
（一）杂质的基本结构 1.青霉素族 青霉素族抗生素中的高分子杂质有多肽 类杂质和聚合物类杂质两大类： （1）青霉噻唑多肽：是由青霉素的ß-内酰胺环和多 肽上的伯胺基缩合而成，主要在发酵工艺中形成。 （2）青霉素聚合物：青霉素的聚合反应有两种方式： 一是母核参与反应，二是侧链参与反应。 青霉素聚合物反应速度 在固体情况下与样品的水分 有关；在溶液情况下与溶液的酸碱度密切相关。碱 性条件更易形成聚合物，水分、时间、温度对聚合 物的形成有促进作用。
药物分析第十三章抗生素类药物的分析-3
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
二、鉴别试验 （三）茚三酮反应
• 氨基糖苷结构，具有特征的羟基胺和α-氨基酸的性质，易 与茚三酮试液反应，生成特征的蓝紫色产物
• 中国药典（2010年版）对硫酸小诺霉素、硫酸庆大霉素、 硫酸核糖霉素的鉴别即采用茚三酮 原理 药典方法
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
二、鉴别试验 （六）硫酸盐鉴别反应
• 氨基糖苷类抗生素多与硫酸成盐 • 可通过对硫酸根的鉴定来鉴别此类药品。 • 如中国药典（2010年版）对硫酸小诺霉素、硫酸卡那霉素、
硫酸巴龙霉素、硫酸庆大霉素等的鉴别
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
二、鉴别试验 （七）色谱法
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
三、特殊杂质检查
（二）庆大霉素C组分的检查
• 庆大霉素C组分
• 【相关链接】庆大霉素C组分的测定
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
庆大霉素CR组2分 R1 HN R3
OH
O
O
OH NHCH3
CH3
O
NH2 O
CH3
返回
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
溶解性
• 硫酸盐在水中易溶 • 在乙醇、三氯甲烷等有机溶剂中几乎不溶
返回
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
糖苷键的稳定性
• 糖苷键易于水解 • 链霉素结构中具有双糖胺，氨基葡萄糖与链霉糖之间的苷键
结合强，不易水解；链霉胍与链霉双糖胺间的苷键结合较弱， 易于水解，故水解后生成一分子苷元和一分子双糖；水溶液 在pH5～7.5最稳定，过酸和过碱易水解失效； • 庆大霉素较稳定，pH2～12时，100℃加热30分钟亦未变化
二、鉴别试验 （三）茚三酮反应
• 氨基糖苷结构，具有特征的羟基胺和α-氨基酸的性质，易 与茚三酮试液反应，生成特征的蓝紫色产物
• 中国药典（2010年版）对硫酸小诺霉素、硫酸庆大霉素、 硫酸核糖霉素的鉴别即采用茚三酮 原理 药典方法
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
二、鉴别试验 （六）硫酸盐鉴别反应
• 氨基糖苷类抗生素多与硫酸成盐 • 可通过对硫酸根的鉴定来鉴别此类药品。 • 如中国药典（2010年版）对硫酸小诺霉素、硫酸卡那霉素、
硫酸巴龙霉素、硫酸庆大霉素等的鉴别
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
二、鉴别试验 （七）色谱法
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
三、特殊杂质检查
（二）庆大霉素C组分的检查
• 庆大霉素C组分
• 【相关链接】庆大霉素C组分的测定
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
庆大霉素CR组2分 R1 HN R3
OH
O
O
OH NHCH3
CH3
O
NH2 O
CH3
返回
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
溶解性
• 硫酸盐在水中易溶 • 在乙醇、三氯甲烷等有机溶剂中几乎不溶
返回
第十三章 抗生素类药物的分析
第三节 氨基糖苷类抗生素的分析
糖苷键的稳定性
• 糖苷键易于水解 • 链霉素结构中具有双糖胺，氨基葡萄糖与链霉糖之间的苷键
结合强，不易水解；链霉胍与链霉双糖胺间的苷键结合较弱， 易于水解，故水解后生成一分子苷元和一分子双糖；水溶液 在pH5～7.5最稳定，过酸和过碱易水解失效； • 庆大霉素较稳定，pH2～12时，100℃加热30分钟亦未变化
体内药物分析ppt课件
五、体内药物分析方法
第一节 常用体内样品的制备与贮藏
01
生物样品的采集与贮藏 体内药物分析常用的分析品种有血液、尿液、唾液，也可用乳汁、泪液、脑脊液、胆汁等。
02
（一）样品的采集
1．血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。
血细胞
血浆（plasma）
血小板
血清（serum）
为测定尿液中药物总量，要将缀合物水解：
（四）生物样品缀合物水解
（五）超滤Байду номын сангаас离法
Company Logo
1
是以多孔半透膜（超滤膜）作为分离介质的一种膜分离技术，选用不同的孔径的不对称膜，即可按照分子量大小进行分离
2
适合TDM血样分析
3
Therapeutic drug monitoring
（六）化学衍生法
第三节 体内药物分析方法的建立与评价
一、分析方法
根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，干扰成分大小，实验目的
灵敏度
专属性
色谱法
+++
+++
HPLC GC
免疫法
++++
++
免疫交叉反应，重现性
生物学方法
+
+
特异性较差，需与色谱法平行使用
01
02
03
分析方法的设计依据
原始方法改进→创新
创立方法 方法的建立
血细胞
测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓
抗凝
自然
全血
血液
目的：药物剂量回收，药物清除，药物代谢和生物利用度
第一节 常用体内样品的制备与贮藏
01
生物样品的采集与贮藏 体内药物分析常用的分析品种有血液、尿液、唾液，也可用乳汁、泪液、脑脊液、胆汁等。
02
（一）样品的采集
1．血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。
血细胞
血浆（plasma）
血小板
血清（serum）
为测定尿液中药物总量，要将缀合物水解：
（四）生物样品缀合物水解
（五）超滤Байду номын сангаас离法
Company Logo
1
是以多孔半透膜（超滤膜）作为分离介质的一种膜分离技术，选用不同的孔径的不对称膜，即可按照分子量大小进行分离
2
适合TDM血样分析
3
Therapeutic drug monitoring
（六）化学衍生法
第三节 体内药物分析方法的建立与评价
一、分析方法
根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，干扰成分大小，实验目的
灵敏度
专属性
色谱法
+++
+++
HPLC GC
免疫法
++++
++
免疫交叉反应，重现性
生物学方法
+
+
特异性较差，需与色谱法平行使用
01
02
03
分析方法的设计依据
原始方法改进→创新
创立方法 方法的建立
血细胞
测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓
抗凝
自然
全血
血液
目的：药物剂量回收，药物清除，药物代谢和生物利用度
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焰色反应(钠、 钾盐)
分光光度法
• 红外吸收光谱法
*-内酰胺类抗生素共有特征峰 -内酰胺羰基伸缩振动：1750 ～1800 cm-1 仲酰胺氨基、羰基伸缩振动：3300 cm-1 ， 1525 cm-1 ，1680 cm-1 羧酸离子的伸缩振动：1600 cm-1，1410 cm-1
供试品的红外吸收光谱 标准对照品图谱
基本内容
化学结构与性质 鉴别试验
化学法、光谱法、色谱法
特殊杂质检查
聚合物、有关物质和异构体、吸收度
含量测定
碘量法；硝酸汞电位滴定法；可见-紫外分光 光度法；HPLC法
一、化学结构与性质
• （一）典型药物的结构
• 1. 青霉素族和头孢菌素族基本结构
青霉素族
头孢菌素族
RCO HN O
S CH3
6
A
5
1
B
2
CH3
7 N4
3 COOH
RCO HN O
S
7
6 12
AB
8 N5
3
4
CH2R1
COOH
侧链 母核（6-氨基青霉烷酸）
（6-aminopenicillanic acid，6-APA）
A： -内酰胺环
B：氢化噻唑环
侧链 母核（7-氨基头孢烷酸） （7-aminocephalosporanic acid，7-ACA）
(溶于过量盐酸、乙醚、醋酸戊酯、乙醇、氯仿) • 2.有机胺盐的特殊反应
• (1)重氮化-偶合反应
普鲁卡因青霉素
红色沉淀
• (2)与三硝基苯酚的反应
苄星青霉素 + 苦味酸 结晶 重结晶测熔点
（二苄基乙二胺 + 青霉素） （二苄基乙二胺苦味酸盐）
色谱法
• 1. 薄层色谱法
青霉素、头孢菌素
TLC 鉴别
A： -内酰胺环 B：氢化噻嗪环
2. 青霉素类和头孢菌素类理化性质
青霉素(2)旋光性 NhomakorabeaPenicilins
头孢菌素
Cephalosporins
O
R C HN
*
6
*
5
S
1
CH 3
O
2
CH3 R
C
HN
*
7
7A
B
4
3
A 8
N
*
O
O
COOH
(3) 如有共轭
(1) 强酸性
系统则有UV吸 （4） -内酰胺
收，否则没有 环的不稳定性
面积归一化法 限量法 自身对照外标法
Ch.p2005：青霉素V钾、青霉素钠、青霉 素钾、头孢他啶、头孢拉啶、头孢曲松钠、 头孢呋辛钠、头孢哌酮钠、头孢唑林钠、 头孢噻肟钠等
2.有关物质和异构体
检查方法：
色谱法：通过与主成分(或标准杂质)峰面 积比较（HPLC法）或斑点颜色深浅（TLC 法）来控制杂质的量
结果判定：供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的 主斑点相同
• 2. 高效液相色谱法
在相同实验条件下，用高效液相色谱法分别测定供
试品和对照品的色谱图，其主峰的保留时间应一 致。
三、特殊杂质检查
1. 聚合物 2.有关物质和异构体 3. 吸光度 4.有机溶剂 5.结晶性
1. 聚合物
原理：分子排阻色谱 方法：主成分自身对照
紫外分光光度法
λmax和水解产物的λmax
呈色反应
1.羟肟酸铁反应
RCOHN O
S N
CH3
CH3 COOH
. H2NOH HCl
醇制KOH
S RCOHN
OC N H
NHOH
H+
CH 3
CH 3 COOH
RCOHN
OC N H
NH
Fe/3 O
S CH3 CH3 COOH
(红色)
FeNH4（SO4）2
二、鉴别试验
UV、IR、NMR 光谱法
色谱法 TLC 、HPLC
鉴别试验
沉淀反应
A. 在稀盐酸中生成白色沉淀 B. 重氮化-偶合反应或与三硝基苯酚 反应(结晶析出)
呈色 反应
1.羟肟酸铁反应
2.类似肽键反应 a.茚三酮反应 b.裴 林试剂反应
3.其它呈色反应 a.重氮苯磺酸 b.变 色酸-硫酸c.H2SO4HNO3 d.铜盐
三、常规分析项目
（一）性状
（二）鉴别试验
理化方法、生物学方法。
（三）检查
影响产品稳定性的指标 控制杂质的指标 与临床安全性密切相关的指标
（四）效价测定（抗生素有效成分含量）
微生物检定法、理化方法
效价测定方法
微生物检定法
理化方法
以抗生素对微生物的 抑制或杀伤程度为指 标来衡量抗生素效价
特点
S
*
1
6
2
B
5
3
N4
CH 2R'
COOH
(3) UV吸收
-内酰胺环的不稳定性
见P313青霉素降解反应（分解、分子重排）
强酸性
中强酸、弱酸
碱性或青霉素酶
完全水解
（pH=2）（pH=4） 分子 重排
D-青霉胺 青霉醛
二氧化碳
青霉酸 青霉烯酸 青霉噻唑酸
加热
脱羧青霉噻唑酸 D-青霉胺
青霉醛
金属离子(铅、铜、汞、银); 催化作用
灵敏度高；测定原理 与临床应用的要求一 致；适用范围广. 操作步骤繁多，测定 时间长,误差较大.
根据抗生素的分子结 构特点，利用其特有 的化学或物理化学性 质进行测定
特点
适用于提纯的、化学 结构已明确的抗生素。
操作简便、省时、方 法准确、一定专属性
§2 -内酰胺类抗生素
-内酰胺抗生素的发现
Fleming 发现 青霉素
氨基糖苷类
38（14）
10.9％ 1.93％
四环素类
18（ 6）
5.2％ 0.92％
大环内酯类
43 （11）
12.4％ 2.19％
其他
（>）169（ 61） 48.6％ 8.59％
总计
（>）348（124）
17.69％
§1 概述
一、概念
抗生素？ ？
抗菌药物？
抗微生物药物？
二、分类
• 按抗菌谱分 • 按化学结构分 • 按作用机制分 • 综合分类
呈色反应
2.类似肽键反应(-CONH-, -氨基酸结构）
a.茚三酮反应 b.裴林试剂反应
3.其它呈色反应
a.重氮苯磺酸(-C6H5-OH) b.变色酸-硫酸 c.H2SO4-HNO3 d.铜盐
沉淀反应
盐(无机盐、有机胺盐性质)
• 1.在稀盐酸中产生沉淀的反应
青霉素钾(钠)盐水溶液 稀盐酸2滴 白色沉淀
抗生素类药物的分析
§1 概述 §2 -内酰胺类抗生素 §3 氨基糖苷类抗生素 §4 四环素类抗生素 §5 大环类酯类抗生素
中国药典（2005年版二部）收载抗生素类药物
原料及制剂（原料） ％ ％(*/1967）
青霉素类
36（ 13） 10.3％ 1.83％
头孢菌素类
44（ 16）
12.6％ 2.24％
Alexander Fleming 发现接种青霉菌的培养物可产生抑 制金黄色葡萄球菌生长的物质，1929年，他在英国圣玛丽 医院宣读一篇论文，引入“青霉素”(Penicilin)名称并论述 该物质具有非常明确的抗菌活性。1941年临床证实青霉素 对多种细菌感染有效。
头孢菌素C是Abraham于1948年发现。