银杏叶提取物中脱除银杏酚酸的工艺研究

银杏是我们 国家古老珍 稀树种之一 ， 具 有“ 活化石 ” 之美 誉， 对银杏 叶的研究始 于上世纪 ６ ０年代 ， 银杏 叶提取 物 中的 黄酮醇苷和萜类 内酯分别具有改善微循环 、 抗氧化 、 保护血管 以及改善记忆功能 、 增强抵抗 力等药理作用 ， 各 国药物研究者 对此兴 趣极大 ， 目前 已经上市 的制剂 主要 有片剂 、 滴丸 、 注射 液， 但是 由于其提取物中含有银杏酚酸类物质 ， 此类物质具有 强致敏性和细胞毒性… ， 也 是导致银杏 叶制剂 发展 中受到制约 的主要因素 。而在 欧盟地 区， 银杏 叶提取物 中银杏酚酸的限量 为 ５ ￣ ｇ ／ ｇ ， 特 别是 德 国， 德 国是 世界上最早 对银杏酚 酸的 限量 做 出规定的国家之一。中国的银杏叶制剂起步较晚 ， 为了与国 际接轨 ， ２ ０ １ ０版《 中国药 典》 规定 银杏酚酸的限量 为 ｌ Ｏ ｉ ｘ ｇ ＠２ ￣ 。 本 文就脱 酸工艺做 出探索 ，主要 目的是找到一个能保证银 杏 酚 酸 的 限量 在 ５ ￣ ｇ ／ ｇ以下 的 生 产 工 艺 ，至 于生 产 成 本 方 面 ， 未 有 过 多研 究 。
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北方药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ４期
银 杏叶提 取物 中脱除银杏酚酸 的工艺研 究
朱 斌 刘 芬 严兆华 （ 南昌 大学 南昌 ３ ３ ０ ０ ３ １ ）
摘要 ： 目的 ： 探 索一条脱除银 杏酚酸的工艺， 使银 杏酚酸的含量能够控制在 ５ Ｐ Ｐ Ｍ 以下 。 方 法： 乙醇提取后大孔吸附树脂纯化 ， 最 后 用有机溶 剂萃取 。结果 ： 银杏叶八 月采摘 ， 银杏叶粉碎 ， 过 １ ０目筛， 用６ 倍量 ７ ０ ％乙醇加 热回流 ２次 ， 每 次大约 ２小时， 收集 滤液 ， 过Ｄ Ａ ２ ０ １ 或者 Ｈ Ｐ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０树 脂 ， 柱 温控 制 在 室 温条 件 下 ， 流速选择 ２ Ｂ Ｖ ／ ｈ ， 收 集不超过 ３ ． ５倍 上 柱 量 的 溶 液 ， 经 乙酸 乙酯 萃取 ， 银杏酚酸的含 量分别为 ２ ． ５ ５ Ｐ Ｐ Ｍ， １ ． ４ ８ Ｐ Ｐ Ｍ。结论 ： 银杏酚酸的含量能够控制在 ５ Ｐ Ｐ Ｍ 以下 ， 符合 实验设计要 求。由于银 杏
叶 来 源 和 采摘 时 间 不 同 ， 导 致 银 杏 叶提 取 物 质 量 波 动 较 大 ， 此方法虽然可以控制酚酸含量 ， 但 同 时也 降低 了萜 内酯 和银 杏 内酯
的含量 ， 因此 ， 控 制 银 杏 叶 的 来源 成 为银 杏 叶 生产 厂 家的 重要 任 务 。 关键 词 ： 银 杏 叶 提 取 物 银 杏 酚 酸 脱 除 工 艺 １ ６ ７ ２ — ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ４） ０ ４ — ０ ０ ６ ２ — ０ ２
１试 剂 及 仪 器
苷和萜 内酯 的吸 附量及解析率 的影 响。称取经处理 的上述 四 种树脂 各 １ ０ ｇ ， 装 填树脂柱 中 ， 取 实验备用 的银 杏叶提取 液上 柱， 使树脂 充分吸附 ， 为防止树脂过 载 ， 收集药 液的集液瓶 ｌ ０ 分钟更换一次 ， 各取 ２滴溶液 ， 采用盐酸——镁粉实验 检测流 出液 ， 如溶液变为樱红色 ， 则树脂 已经饱和 ， 停止上样 ， 计算各 树脂 的上样 总体 积 ，折合 银杏叶干重 ，然后用 ７ ０ ％乙醇解吸 附， 收集乙醇洗脱 液 ， 减压蒸馏 回收乙醇 ， 得银 杏提取物 的浸 膏， 干燥 ， 称重 ， 计算解析率 。结果见表 ｌ 。
表 １吸附量和解析率对 大孔树脂 影响的结果考查表
吸附量： 洗脱液 中总黄酮苷量／ 吸附量 中总黄酮苷量 银杏叶采摘于江西九江 ， ８月份 叶面黄中带绿 ， 晒干备用 ， 综 合上 表的数 据分析 ， Ｄ Ａ ２ ０ １和 Ｈ Ｐ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０在吸 附量 和 采摘 月份与１ 二 业 中所用的银杏叶采摘时间相 当， 经验证 ， 总黄 ９ １ ８和 Ｄ１ ０ １大孔吸附 酮 醇苷 含量大于 ０ ． ５ ％， 符合实验要求 。大孑 Ｌ 吸附树脂 ： 南开大 解析率两方面的性能 比较接近 ，优于 Ｄ 在纯化提取物时性能较为突出 ， 适 合分 离 有 效 成 分 。 而 学 附属工厂 生产 ； 乙醇 （ 分析纯 ） ： 天津市 大茂化学试 剂厂 ； 氢 树 脂 ， 有的企业会多选择 多种树脂备用 。 氧 化钠 （ 分析纯 ） ： 汕 头市 西 陇 化 丁 厂 有 限 公 司 ， 批号 ： ０ ７ １ ０ ２ ７ ； 在实际生产中 ， ． ４ 取 样 时 间 的考 查 ： 取 样 时 间分 别 为 初 始 上 柱 、 １ 倍 上柱量 、 ２ 盐 酸（ 分析纯 ） ： 汕头市 西陇化工 厂有 限公司 ， 批号 ： ０ ７ １ １ ０ ０ ２ ； ２ ３倍上柱量 、 ４ 倍 上柱量 、 ５ 倍 上柱量 ，经过得 出结 乙酸 乙酯 （ 分析 纯 ） ： 天津 光复科技 ； 电子天平 ： 上海精 密仪器 倍上柱 量 、 虽然树脂柱饱 和时可达到近 ２ ． ５倍 的 干 重 ， 但 在 实 际 生 产 厂； 旋 转蒸发仪 ： 上海 予腾 ； 恒温水浴 箱 ： 上海启前 ； 高 效液相 论 ， 中 ，在 ４倍 上柱 量 时所 取 的样 品 虽 然 总 黄 酮 苷 的 含量 可 达 要 色谱仪（ Ｎ ２ ０ ０ ０丁作站 ） ： 上海康普 。 求， 但是银 杏酚酸的含量 已经超 出 １ ０ Ｐ Ｐ Ｍ的限量。因此 ， 在除 ２实验 方 法 ２ ． １实验 因素 ： 参考前 人研究结 果［ ３ － ５ ｌ ， 银杏 叶提取 的最 佳实验 酸操作 中， 不能超过 ３ ． ５ 倍 上柱量。 ． ５流速在除酸工艺 中的考查 ： 因测算银杏酚 酸时需要的样品 条件 ， 将银杏叶粉碎 ， 过 １ ０目筛 ， 用 ６ 倍量 ７ ０ ％乙醇加热 回流 ２ 不 少 于 １ ０ ｇ ，所 以 换 容 量 ５ ０ ０ ｇ的 树 脂 柱 。 装 填 已经 处 理 好 的 ２次 ， 每次大约 ２小时。 收集滤液 ， 备用。 树脂选型 ， 其考查指标 Ａ ２ ０ １ 和 ＨＰ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０树脂 ， 取备用 的银杏 叶提取溶液 ， 调节流 是： 吸附量 、 解析率。确定树 脂后考查流速 、 柱温 的影响 。参 照 Ｄ 使用秒表和量筒。控制流速为 １ Ｂ Ｖ ／ ｈ （ １ 倍上柱量 每小 时） ， 《 中 国药典 》 ， Ｊ Ｉ ＿ ｝ ｊ Ｈ Ｐ ［ Ｃ法检验进 柱前 、 进柱 后 的黄酮苷 、 萜 内 速 ， ． ５ Ｂ Ｖ ／ ｈ ， ２ Ｂ Ｖ ／ ｈ ， ２ ． ５ Ｂ Ｖ ／ ｈ ， 取样总 量不超过 ３ ． ５倍 上 柱 量 ， 参 照 酯 的含 量 。 由于 进 柱 前 酸 的含 量 较 大 ， 不需要测定 ， 主 要 测 定 １ 中同药典》 测量酚酸含量 。结果见表 ２ 、 表３ 。 进 柱 后 银 杏 酚 酸 的 含 量 。样 品进 一 步 经有 机溶 剂 处 理 后 ， 最 后 《 表 ２ 流 速 在 除 酸 工 艺 中的 考 查 （ Ｄ Ａ２ ０ １ ） 测黄酮苷总量 、 萜 内酯 、 银 杏酚 酸 的含 量 ， 确 定 脱 酸 的工 艺 。 ２ ． ２实 验 步 骤 ： 参考相关 文献 ， 结 合 银 杏 酚 酸 显 酸性 的 特 点 ， 选 择实际生产工艺 中常用的强碱性 大孔吸附树脂 ： Ｄ ９ １ ８ 在纯 化 黄酮苷时效果较好 ， 张迪清 Ｉ 等筛选 国内树脂得 出 Ｄ Ａ ２ ０ １ 纯化 银 杏提 取物Ｔ 艺较好 ， 削顺昌｛ Ｉ 在用 Ｄ １ ０ １ 纯 化黄酮苷 时收到 较好 的效果 ，而国产 Ｈ Ｐ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０在 实际考察 的有 关银 杏叶提 取 物制药企业 中也有应用 。选择 的树脂需要进行前处理 ， 用蒸 馏 水将 树脂 柱清洗干净 ， 柱 子下端 的砂 滤板使 用时间较长 ， 不 综合 分析 ， Ｄ Ａ ２ ０ １ 树 脂在 流速控制 不大 于 ２ Ｂ Ｖ ／ ｈ时 即可 ． ３ ５ ｐ ． ｇ ／ ｇ ， Ｈ Ｐ Ｄ 一 ５ ０ ０ ０树脂在 流速控制 利 于流速的调节时 ， 可 以采取钻小孔 ， ｆ Ｅ ｝ ｊ 棉花填塞 。将 棉花浸 满足银 杏酚酸的含量为 ９ 湿， 顺水流从顶端达到底部。 不 大于 ２ Ｂ Ｖ ／ ｈ时 即可 满 足 银 杏 酚 酸 的 含 量 为 ９ ． ７ ５ ｐ ． ｇ ／ ｇ ， 不超过 ２ ＿ ３吸附量和解析 率对树脂 的影响 ： 考察 除酸工艺 时 ， 首先 限量 ， 也可以节约时间。 若控制流速在 １ ． ５ Ｂ Ｖ ／ ｈ以下时 ， 耗 费大 需要满 足的条件是其银杏叶制剂 中银杏黄酮苷 和萜 内酯 的含 量 的时间， 成本将会大量增加 。 ． ６有 机 溶 剂 的影 响 ， 取备用 的银杏提取 物的溶液 ， 过Ｄ Ａ ２ ０ １ 量 达到 同家药典 的标准 ，所 以必须首先考查 树脂对银杏黄酮 ２