实验7_种子生活力的快速测定讲解
测定种子生活力的方法
实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。
（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
实验七种子生活力的快速测定
子的百分数。但是，采用发芽实验测定种子的
生活力所需时间较长，有时在生产上或种子贸
易过程中，需要较快地知道种子的生活力，采
用萌发实验就无法满足这些要求。另外，处在
休眠状态下的种子虽然不能萌发，但仍然具有
生活力，显然，采用萌发实验是无法测定休眠
种子的生活力的。而采用以下的化学方法，可
2021以/4/24较快地测定种子的生活力。
种子冲洗l~2次，观察种胚被 染色的情况。凡种胚全部或 大部分被染成红色的即为具 有生活力的种子，种胚不被 染色的为死种子。如果种胚
（30℃~35℃）中保温
中非关键性部位（如子叶的
0.5~1h。另取100粒吸涨种 一部分）被染色，而胚根或
子，于沸水中煮5min后，
胚芽的尖端不染色，都属于
再加入0.5%TTC溶液染色。 不能正常发芽的种子。根据
贮藏。若已变为红色，则不 能继续使用。
2021/4/24
4
实验步骤
▪
浸种：将待测种子用温水 （30℃~35℃）浸泡2－6 h，
▪
使种子充分吸胀。
统计：染色结束后要立即进
行鉴定，因放置太久会褪色。 倒出TTC溶液，再用清水将
▪ 显色：随机取吸涨种子100 粒，小心剥去种皮或外壳， 务必不要伤害种胚。然后将 处理好的种子置于小白瓷碗 中，加入0.5% TTC溶液， 以浸没种子为度，于恒温箱
2
实验原理
▪ 有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸代谢途 径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的2，3， 5 - 三苯基氯化四唑（2，3，5 - triphenyl tetrazolium chloride 简称为TTC）还原为红色、不溶 性的甲月替，而且种子的生活力越强，代谢活动越
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
种子生活力的快速测定
4 方法步骤
4.1 浸种。将待测种子在 30～35 ℃温水中浸泡 ( 大麦、小 麦、籼谷 6 ～8h , 玉米 5h左右 , 梗谷 2h), 以增强种胚的呼 吸强度 , 使显色迅速。 4.2 显色。取吸胀的种子 50 粒 , 用刀片沿种胚中央纵切为两
半 , 其中一半放入培养皿中加适量红墨水溶液，处理10min
胚部不染色。而死的种胚细胞原生质膜丧生了选择用 的能力， 于是染料便能进入死细胞而使胚着色。故可
根据种胚是否染色来判断种子的生活力。
3 仪器设备、材料和试剂
• 3.1 仪器 培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切
种子用)1块；烧杯1个；棕色试剂瓶；解剖针1把；搪瓷
盘1个；PH试纸。 • 3.2 试剂 • 取市售红墨水稀释 20 倍（1份红墨水加 19 份自来 水 ） 作为染色剂。 • 3.3 材料：玉米
。倒去红墨水溶液, 用水冲洗多次 , 至冲洗液无色为止 。观 察结果 。
5 实验结果
染色种子数 红墨水处理 未染色种子数 生活力
6 生理学实验
（多媒体课件）
田国政
湖北民族学院生物科学与技术学院
湖北省生物实验教学示范中心
实验2-2 种子生活力的快速测定
实验类型：基础验证型 实验学时：2学时
1 实验目的
熟悉红墨水法测定种子活力的原理和
方法及其计算。
2 实验原理
凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质能力 ,
某些染料如红墨水中的酸性大红 G 不能进入细胞内 ,
实验七种子生活力的快速测定(精)
种子冲洗l~2次，观察种胚被 染色的情况。凡种胚全部或 大部分被染成红色的即为具 有生活力的种子，种胚不被 染色的为死种子。如果种胚
（30℃~35℃）中保温
中非关键性部位（如子叶的
0.5~1h。另取100粒吸涨种 一部分）被染色，而胚根或
子，于沸水中煮5min后，
胚芽的尖端不染色，都属于
再加入0.5%TTC溶液染色。 不能正常发芽的种子。根据
2
实验原理
有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸代谢途 径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的2，3， 5 - 三苯基氯化四唑（2，3，5 - triphenyl tetrazolium chloride 简称为TTC）还原为红色、不溶 性的甲月替，而且种子的生活力越强，代谢活动越
旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没 有呼吸作用，因而不会将TTC还原为红色。种胚生 活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被
染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的 深浅程度来判定种子的生活力。
2019/5/4
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实验材料和器材
• 实验材料
水稻种子
• 器材：恒温箱、小白瓷碗、
镊子、刀片、小烧杯
• 试剂： 0.5% TTC溶液：
称取0.5 g TTC放入小烧杯 中，先加少许乙醇溶解后， 再用蒸馏水稀释定容至100 mL。TTC溶液最好随用随 配，不宜久藏。溶液应遮光
实验七：种子生活力的快速测定
（一）实验目的及意义 （二）实验原理 （三）实验步骤 （四）实验报告
2019/5/4
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实验目的和意义
种子生活力（seed viability测定种子
生活力常采用萌发实验，即在适宜的条件下，
快速测定玉米种子生活力三法
进一步研究玉米种子生活力的影 响因素和作用机制，为农业生产
提供更加科学、准确的依据。
探索更加快速、简便的测定方法 ，提高方法的可操作性和实用性
。
结合现代生物技术，研究玉米种 子生活力与其他性状的关系，为 选种育种提供新的思路和方法。
THANK YOU
盐水漂浮法
该方法操作简便，但结果 受环境温度和种子质量影 响较大，准确性相对较低 。
剥胚染色法
该方法能够较为准确地测 定玉米种子的生活力，但 操作较为繁琐，需要较高 的实验技能。
适用范围比较
碘化钾染色法
适用于所有类型的玉米种子， 特别是对于已经经过处理的玉 米种子，该方法也能够得到较
为准确的结果。
染色法是根据种子胚部是否被染色来判断种子是否具有生 活力。具有生活力的种子胚部在染色液中会被染色，而没 有生活力的种子则不会被染色。
染色法通常使用的染色液为红色染料，如品红、甲基品红 等，因为这些染料能够与活细胞中的蛋白质结合，使其染 色。
染色法操作步骤
1. 将玉米种子放入染色液中浸泡3060分钟，使种子充分染色。
4. 加水浸泡
将称好的样品加入一定量的蒸馏水中 ，浸泡一定时间，一般以24小时为 宜。
5. 测定电导率
将浸泡后的样品用镊子取出，用滤纸 吸干表面水分，放入电导仪中测定其 电导率。
6. 数据记录
记录每个样品的电导率和对应的测量 值。
7. 数据处理
根据测定的电导率值，利用标准曲线 或公式计算出玉米种子的生活力。
电导率测定法是一种快速、简便、可靠的玉米种子生活力快速测定方法。
电导率测定法操作步骤
01
02
03
1. 仪器准备
准备好电导仪、烧杯、称 量纸、镊子等仪器和试剂 。
实验7 种子生活力的快速测定讲解
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表
方法
供试粒数
பைடு நூலகம்
有生活力 种子粒数
无生活力 种子粒数
有生活力种子 占供试粒数的%
TTC
30
红墨水
30
BTB
30
注意事项
? 沿种胚中央准确切开，同粒 TTC/红墨水法各一半 ? TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色
瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 ? 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 ? 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 ? 溶胶倒至培养皿 1/3处； ? 取完好小麦种子，将种胚向下插入 BTB琼脂胶。
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
活种子 死种子
材料、设备及试剂
思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同 ?
氯化三苯基四氮唑
三苯甲腙
活种子 死种子
BTB溴麝香草酚蓝法
1. 活细胞呼吸释放 CO2， CO2溶于水成H2CO3解 离，使种胚周围环境酸度增加，用 BTB来反映 酸度的改变；
2. BTB变色范围为 pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱 性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH7.1）。
3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
BTB法
1. 煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培 养皿（ 1/3皿）；
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶 (不软 不硬 )；
种子生活力的测定PPT课件
种子生活力测定的必要性：
• 1、休眠种子必须进行生活力测定： • 2、快速预测种子发芽能力
1
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一、实验目的 1.了解四唑染色及红墨水染色测定种子生活力的原理和方法。 2.掌握判别种子有无生活力的鉴定标准。
谢谢您的观看！
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四、实验过程
1 .小麦、玉米种子四唑染色测定 ⑴ 浸种：软化种子，活化有关酶 ⑵ 样品准备
小麦： 200n×(2-4) 沿胚纵切 20n 玉米： 200n×(2-4) 沿胚纵切 50n×2 ⑶ 染色 浸入0.1%四唑溶液中，35℃ 0.5-1h
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⑷ 观察鉴定 小麦：观察切片、胚和盾片 鉴定 ①胚的主要构造染成正常鲜红色 ②盾片上下任一端1/3不染色 ③胚根大部分不染色，但不定根原基体 盾片中央有不染色组织，表明受到热损伤 玉米：观察切面 鉴定 ①胚的主要构造染成正常鲜红色 ②胚根 1/3不染色 ③盾片上下1/3不染色 盾片中央有不染色组织，表明受到热损伤
二、材料和用具 1. 种子材料：小麦、玉米、大豆 2. 试剂：0.1%四唑溶液、5%红墨水 3. 用具：镊子、刀片、吸水纸、烧杯、放大镜
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三、实验原理 1 .四唑染色测定原理 四唑盐类的无色溶液是一种可被种子组织吸收的指示剂，参与活细胞的还原过程 DPNH2+TTC→DPN+TTCH+HCL （辅酶ⅠH2) （四唑）（辅酶Ⅰ）（甲 月替）（氯化氢） 2 .红墨水染色测定原理 种子活细胞的细胞膜均能选择性地吸收外界有用物质，而死亡的细胞则丧失了这一 能力。有生活力的种子，胚部细胞不让染料进入，因而不容易被染色；而丧失生活力 的种子，胚部细胞丧失了选择透过性，染料可以自由的进入到细胞内，使胚部染色。
种子生活力测定方法
种子生活力测定方法
种子生活力是指种子在适宜条件下发芽和生长的能力，是种子质量的重要指标
之一。
种子生活力的好坏直接影响着作物的产量和品质。
因此，科学准确地测试种子的生活力是农业生产中非常重要的工作。
种子生活力的测定方法有很多种，其中常用的包括种子萌发率测定法、种子发
芽指数测定法、种子活力指数测定法等。
首先，种子萌发率测定法是通过将一定数量的种子放置在适宜的温湿度条件下
观察其发芽情况来测定种子的生活力。
这种方法简单易行，能够快速地获得种子的生活力信息，因此在实际生产中得到了广泛应用。
其次，种子发芽指数测定法是通过统计一定数量的种子在一定时间内发芽的数
量来测定种子的生活力。
这种方法能够更加客观地反映种子的生活力情况，但需要较长时间来进行实验，因此在实际生产中使用较少。
最后，种子活力指数测定法是通过将种子在一定温湿度条件下培养一段时间后，测定其发芽率和发芽势来综合评价种子的生活力。
这种方法能够较为全面地评价种子的生活力，但操作复杂，需要较长时间来完成实验。
综上所述，种子生活力的测定方法各有优缺点，农业生产中应根据实际情况选
择合适的方法进行测试。
只有通过科学准确地测定种子的生活力，才能保证种子的质量，提高作物产量，为农业生产做出更大的贡献。
实验 植物种子生活力快速测定 (1)
实验十一植物种子生活力快速测定一、实验目的掌握植物种子生活力检测的基本原理及快速鉴定植物种子生活力的方法。
二、实验原理种子活力是决定种子在发芽和出苗期间的活性强度和种子特性的综合表现（指田间条件下的出苗能力及与此有关的其他特征和指标），种子生活力是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力（通常指一批种子中具有生命力种子数占种子总数的百分率）。
种子贮藏过程中必须维持种子是有活力的，因此定期进行生活力和活力的检测是非常重要的。
测定种子生活力方法常用发芽率测定法，该法是指在最适宜的条件下，在规定天数内发芽的种子占供试种子的百分数。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
但是常规方法（直接发芽）测定种子发芽率所需的时间较长，对于处于深休眠状态的种子，几乎难于应用。
特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定种子发芽率，所以有必要根据种子的生理特性建立起一套快速测定种子生活力的方法。
红墨水染色法凡是生活的活细胞的原生质膜都具有选择吸收能力，它对某些染料不让透过，因此用这类染料(如红墨水、酸性靛蓝等)不能使种胚染色。
而死种子的胚细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，于是染料进入死细胞，将胚完全染色。
因此，可根据种胚或子叶对染料的着色情况判断种子的发芽率。
三、实验材料小麦种子、大麦种子、籼稻种子、玉米种子、粳稻种子、蚕豆种子、大豆种子。
四、设备与试剂恒温箱，培养皿，烧杯，镊子，刀片，紫外荧光灯，滤纸（无荧光），琼脂，沸水。
5％红墨水：市售红墨水5 mL加95 mL自来水。
五、实验步骤1．红墨水染色法将待测种子在30～35℃温水中浸种（小麦、大麦、籼稻种子6～8h；玉米种子5 h 左右；粳稻种子2 h），以增加种胚的呼吸速率，使显色迅速；取吸胀的种子200 粒，沿种子胚的中心线纵切为二半，将其中的一半置于红墨水培养皿中5～10 min；用红墨水染色后，倒去废液，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止，并检查种子死活。
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思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同?
实验步骤
BTB法
1. 煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培 养皿（1/3皿）；
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软 不硬)；
3. 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。
TTC/红墨水染色法
1. 2. 3. 4. 5. 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（3035℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。
3.
TTC还原反应如下：
氯化三苯基四氮
BTB溴麝香草酚蓝法
1. 活细胞呼吸释放CO2， CO2溶于水成H2CO3解 离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映 酸度的改变； 2. BTB变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱 性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
实验6 植物种子生活力的快速测定
种子生活力：指种子能够萌发的潜在能力或种胚 具有的生命力。
实验目的
1. 了解种子生活力快速测定的方法
2. 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理
实验原理
TTC法
1. 2. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化-还原反 应，而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶 （NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯甲腙 （TTF），胚便染成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
活种子
死种子
材料、设备及试剂
（一）材料：小麦种子 （二）仪器设备：1. 小烧杯；2. 刀片；3. 镊子；4. 温箱 （三）试剂： 1. 0.12％-0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后， 呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应现用现配）。 2. 0.02％-0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G） 3. BTB溶胶
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表 方法 TTC 红墨水 有生活力 无生活力 供试粒数 种子粒数 种子粒数 30 30 有生活力种子 占供试粒数的%
BTB
30
注意事项
沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色 瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 溶胶倒至培养皿1/3处； 取完好小麦种子，将种胚向下插入BTB琼脂胶。