【实验】小麦种胚的组织培养
植物种胚培养实验报告
一、实验目的1. 了解植物种胚培养的基本原理和操作步骤；2. 掌握植物种胚诱导、培养和繁殖的方法；3. 观察植物种胚在培养过程中的生长变化，分析影响植物种胚生长的因素。
二、实验材料1. 供试植物：水稻、小麦、玉米等种子；2. 培养基：MS培养基、1/2MS培养基、1/10MS培养基；3. 实验仪器：超净工作台、培养箱、移液器、剪刀、镊子、酒精灯、无菌操作台等；4. 实验试剂：氯化钠、氯化钾、硝酸铵、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铁、蔗糖、琼脂、植物激素等。
三、实验原理植物种胚培养是一种利用植物组织培养技术，将种子萌发形成的幼嫩胚芽或胚根进行培养，使其在人工环境下生长、发育，最终形成完整植株的方法。
实验过程中，通过调整培养基成分、温度、光照等条件，可以影响植物种胚的生长和发育。
四、实验步骤1. 种子消毒：将供试种子用1%氯化钠溶液浸泡30分钟，然后用无菌水冲洗3次，再用70%酒精消毒30秒，最后用无菌水冲洗3次。
2. 种子萌发：将消毒后的种子接种于1/2MS培养基中，在25℃、光照强度为2000lx的条件下培养，观察种子萌发情况。
3. 胚芽诱导：待种子萌发后，将胚芽从种子中取出，接种于MS培养基中，在25℃、光照强度为2000lx的条件下培养，观察胚芽生长情况。
4. 胚根诱导：将胚芽在MS培养基中培养至适当高度后，切取胚芽尖端部分，接种于1/10MS培养基中，在25℃、光照强度为2000lx的条件下培养，观察胚根生长情况。
5. 植株繁殖：待胚根生长至适当长度后，将胚芽和胚根一起接种于MS培养基中，在25℃、光照强度为2000lx的条件下培养，观察植株繁殖情况。
6. 数据记录：定期观察植物种胚的生长情况，记录胚芽、胚根、植株的生长高度、生长速度等数据。
五、实验结果与分析1. 种子萌发情况：经过消毒、萌发培养，大部分供试种子均能成功萌发。
2. 胚芽诱导情况：在MS培养基中培养的胚芽，生长速度较快，胚芽高度达到1cm左右。
小麦川农16幼胚愈伤组织培育最适PPT浓度的筛选
目录1 材料与方法 (3)1.1 实验材料 (3)1.2 实验器材 (3)1.3 实验设计 (3)1.4 实验步骤 (3)1.4.1取材 (3)1.4.2消毒 (3)1.4.3吸胀 (4)1.4.4培养 (4)1.5培养基与培养条件 (4)1.5.1培养基 (4)1.5.2培养条件 (4)1.6对实验结果进行方差分析处理 (4)2 结果与分析 (4)3 讨论 (6)3.1 相同PPT浓度下，川农16幼胚愈伤组织死亡率不同 (6)3.2 不同PPT浓度下，川农16幼胚愈伤组织死亡率不同 (6)3.3 材料不同，PPT筛选浓度不同 (6)4 结论 (6)致谢................................................................................................................................ 错误！未定义书签。
小麦川农16幼胚愈伤组织培育最适PPT浓度的筛选摘要：本试验以四川农业大学小麦研究所提供的川农16号小麦为材料，通过梯度筛选获得除草剂PPT抑制小麦幼胚愈伤组织生长并最终杀死幼胚的临界浓度，为抗除草剂转基因小麦研究中阳性转化植株的PPT筛选提供参考。
关键词：小麦；川农16；PPTAbstract:The material of this study is wheat cultivar Chuannong 16 .The purpose of this study is to obtain the threshold of the PPT concentration in suppressing the growth of young embryo callus of wheat cultivar Chuannong 16 which will benefit for further development of the herbicide-resistant transgenic wheat.Key words: wheat, Chuannong16, PPT世界粮食作物种类很多，其中小麦是世界上食用人数最多，产量最多，分布最广的粮食作物，被称为“世界性的粮食”，因此，利用基因工程进行小麦品质改良，培育高产、优质、抗逆新品种是一个普遍关注的问题。
小麦幼胚离体培养育种技术研究
小麦幼胚离体培养育种技术研究摘要：小麦种植是通过基因工程改良小麦品种的重要基础和保障，为了促进小麦基因工程和基因功能研究，有必要建立小麦种子转化体系。
小麦胚种被认为是最有效的种植方法。
目前，中国的小麦胚胎文化组织正在收集关于什么品种、胚胎、年龄、环境和外源激素的信息，并正在研究如何将这些信息传播到中国其他地区。
预处理、接种等关键词：幼胚离体;培养育种引言小麦是世界上最常见的作物，经过一次旅行，它是中国在中国最大的种植园之一。
鉴于社会经济制度的发展和生活水平的提高，必须找到加强社会经济制度、促进多样性和提高生产力的方法。
近年来，生物技术已被证明是通过提供可接受的转化率和遗传受体来提高小麦质量的重要手段。
20世纪70年代，中国开始种植小麦。
小麦蹄不仅组织损伤高，强度高，而且重量轻，结构简单，污染程度低。
自上世纪90年代以来，人们越来越重视在没有经验的森林地区种植小麦。
专家们与白莓的培养密切相关，并就近年来培育的胚胎撰写了一份书面报告。
1 影响小麦幼胚培养的因素利用小麦作为植物材料来组织和逐步再生植被是普通植被的结果。
虽然很少进行研究，但铍的营养成分比测试更重要，因为下面的结果适用于不同类型的营养素，如peetree、Miller n6(包括C17和p2mg)。
营养是最重要的媒介。
第一批小麦种子来自营养不良的环境。
他们将这两种营养物质与多发性硬化症患者的身体进行比较，以增加植被，减少氮，增加糖，用钙破坏白质。
无论在培养基中加入KCl或渔业和糖作为糖，细胞结构都在收缩。
蒸腾作用使小胚胎更容易渗入液体或胚胎细胞，这意味着它需要相应的营养渗透性。
2 不同基因型对幼胚离体培养的反应列出了用于筛选高分化高品质遗传材料的不同类型的基因。
虽然基因类型不同于其他类型，但正确的取样和正确的工作，回收率可达100%;虽然总轨迹系数相当不同的基因类型,只有15个测试材料的全部种子喷发,然而,其他四个没有和11完全分解材料之间的差异也非常大,从53.1%,在953年李,例如,Luwen85-14,最低仅为2.8%。
小麦成熟胚组织培养及遗传转化研究进展_陶丽莉
麦类作物学报 2008,28(4):713-718Journal of Triticeae Crops小麦成熟胚组织培养及遗传转化研究进展陶丽莉1,殷桂香2,1,叶兴国1(1.中国农业科学院作物科学研究所/农业部作物遗传育种重点实验室/国家基因资源与遗传改良重大科学工程,北京100081;2.长江大学农学院,湖北荆州434025) 摘 要:小麦成熟胚转化体系的建立对促进小麦基因工程研究和功能基因组研究具有重要意义。
小麦成熟胚具有取材方便、不受季节限制等优点,已成功应用于小麦组织培养及遗传转化研究,可望取代幼胚成为小麦遗传转化的方便受体。
本文就目前小麦成熟胚组织培养及遗传转化研究进行了综述,目的是为进一步建立和完善小麦成熟胚再生体系和转化体系提供参考。
目前国内外采用较多的小麦成熟胚培养方式主要有完整成熟胚培养、胚乳支撑成熟胚培养、成熟胚刮碎培养和成熟胚切割培养等。
对培养基中激素种类、浓度配比的优化也进行了较多研究,并取得了一定结果。
利用基因枪轰击法和农杆菌介导法转化小麦成熟胚均成功获得了转基因植株,证明小麦成熟胚及其愈伤组织作为受体进行遗传转化研究具有可行性。
关键词:小麦;成熟胚;组织培养;遗传转化 中图分类号:S512.1;S336 文献标识码:A 文章编号:100921041(2008)0420713207Progress Outline of Wheat Tissue Culture and G enetic T ransformationby Using Wheat Mature Embryos As ExplantsTAO Li2li1,YIN G ui2xiang2,1,YE Xing2guo1(1.National Key Facilities for Crop Gene Resources and Genetic Improvement,Key Laboratory for Crop Genetics and Breedingof Agricultural Ministry,Crop Sciences Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing100081,China;2.Agronomy College of Yangtze University,Jingzhou,Hubei434025,China)Abstract:Wheat mat ure embryo has been regarded as a high potential explant s for plant regeneration and genetic t ransformation because of some distinguish advantages such as easy collection all t he year round,consistent p hysiological stat us and econo mic experiment p rocess.In t he last ten years a great success has been achieved on t he tissue cult ure and t ransformation of wheat by using mat ure embryos worldwide.To get good regeneration system,t he mat ure embryo s are tested to be cult ured by several ways including whole embryo cult ure,endosperm2supported embryo cult ure,t hin embryo fragment s cult ure,and cutting embryo cult ure t reat ment s.The effect s of concent rations and combinations of va2 rious growt h regulators on callus induction and plant regeneration have also been st udied,and some a2 vailable result s obtained.U sing t he mat ure embryo s as target tissues,transgenic plant s have been re2 ported mediated wit h Agrobacterium technique and biolistic particle approach,proving t he bright pos2 sibility of t he explant s employed in wheat t ransformatio n.We summarized here t he progress of wheat mat ure embryo cult ure and t ransformation to p rovide reference for t he optimization of t he bot h sys2 tems.Efficient systems of t he wheat mat ure embryo cult ure and t ransformation will remarkably p ro2 mote wheat genetic engineering improvement and f unctional genomics st udy.K ey w ords:Wheat;Mat ure embryo s;Tissue cult ure;Transformation3收稿日期:2008202205 修回日期:2008205220基金项目:国家“863”项目(2007AA10Z129)。
小麦组织培养的研究进展
小麦组织培养的研究进展摘要：小麦组织培养体系的建立与完善是应用植物基因工程改良小麦品质的重要基础和保证。
在小麦组织培养中，几乎各种器官、组织均曾被用作外植体进行离体培养，比如小麦根、幼叶、种子、顶端分生组织、花药、原生质体、幼穗、成熟胚以及幼胚等。
其中重点的对小麦幼胚和成熟胚等外植体通过不同组培体系最终获得再生植株的研究进展进行了综述，以期为小麦组织发生学、胚胎学、细胞工程及遗传操作等方面提供参考。
关键词：小麦；外植体；组织培养；研究进展小麦是世界上分布范围和栽培面积最广，在中国种植面积仅次于水稻，是中国人民的主要粮食作物之一（奚亚军等，2002）。
随着社会经济的发展及生活水平的提高，对其抗但在生产过程中，不断受到生物、非生物等因素的胁迫，严重影响其产量及品质。
实践证明，利用植物基因工程（覃建兵等，2001）改良小麦品质是一行之有效的途径。
虽然转化方法较多且日趋成熟，但限制其发展的一个重要因素是小麦的植株再生频率低，而且建立稳定的小麦再生体系也比较困难。
所以，在小麦组织培养过程中，建立高频率的植株再生体系是小麦转化成功的重要基础和保证。
本文重点对幼胚和成熟胚等小麦外植体的选择、处理方法、培养基的选择激素影响等方面作了扼要论述。
1 外植体来源的选择外植体的来源即材料的来源，是细胞培养成功的关键之一。
虽然植物体的所有细胞都含有相同的基因和具有全能性，但是由于细胞的分化结果在不同的组织、器官中基因的表达有所不同。
1.1幼胚小麦幼胚转化体系的建立对促进小麦基因工程研究和功能基因组研究具有重要的意义。
以幼胚为外植体进行小麦组织培养的方法被大多数学者认为是最有效的培养方式。
有研究对小麦未成熟胚离体培养得到的再生植株，认为未成熟胚培养诱导和筛选无性系变异，可作为小麦品质改良的一种手段（胡尚连等，1998）。
还有对3个品种(系)的研究，确立了小麦幼胚最佳取材时期的种子形态指标,为取材节省了大量时间，并大大减缓了接种压力（刘少翔等，2003）。
小麦组培实验报告
一、实验简介实验名称：小麦组培实验实验目的：通过小麦组培实验，了解小麦组织培养技术的基本原理和方法，掌握外植体消毒、诱导生根和愈伤组织诱导等操作步骤，为小麦遗传育种和基因工程研究提供技术支持。
实验时间：2023年X月X日至X月X日实验地点：XX农业大学植物组织培养实验室二、实验材料1. 小麦种子：选用优良品种XX小麦种子，新鲜、无病虫害。
2. 诱导培养基：MS培养基（添加植物激素：6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L）3. 生根培养基：1/2MS培养基（添加植物激素：NAA 0.5 mg/L）4. 愈伤组织诱导培养基：MS培养基（添加植物激素：6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.1mg/L）5. 外植体消毒剂：70%酒精、0.1%氯化汞6. 实验器具：超净工作台、解剖镜、无菌操作台、剪刀、镊子、移液枪、培养皿、培养瓶等三、实验方法1. 外植体消毒将小麦种子在70%酒精中浸泡30秒，取出后在0.1%氯化汞溶液中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 诱导生根将消毒后的外植体接种到诱导生根培养基中，每瓶接种3个外植体，置于培养室内培养。
3. 愈伤组织诱导将消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，每瓶接种3个外植体，置于培养室内培养。
4. 观察记录每隔一定时间观察外植体生长状况，记录外植体分化、生根和愈伤组织形成情况。
四、实验结果与分析1. 外植体消毒效果通过实验观察，消毒后的外植体生长状况良好，无污染现象，说明消毒效果较好。
2. 诱导生根在诱导生根培养基中，外植体在培养10天后开始分化出绿色芽苗，培养20天后芽苗长至1-2厘米，培养30天后芽苗长至3-5厘米。
同时，部分芽苗开始生根，生根数量随培养时间延长而增加。
3. 愈伤组织诱导在愈伤组织诱导培养基中，外植体在培养5天后开始形成愈伤组织，培养10天后愈伤组织面积增大，培养15天后愈伤组织呈乳白色、半透明状。
五、实验结论1. 小麦组织培养技术可以有效地诱导外植体分化、生根和愈伤组织形成。
小麦种胚的组织培养-北师大版选修3现代生物科技专题教案
小麦种胚的组织培养-北师大版选修3 现代生物科技专题教案一、实验目的通过小麦种胚的组织培养，掌握植物细胞的培养技术及其在现代农业生产中的应用。
二、实验原理小麦种子在发芽前经过充分的消毒处理，将种子置于富含细胞分裂因子的培养基中，可以使种子胚芽的不同部分细胞分裂并增殖，并形成新的组织。
组织培养的过程需要使用多种培养基和药物，通常培养基可分为基础培养基和生长因子组成的培养基。
在本实验中，我们将使用适合小麦种胚生长的组织培养基以及生长因子来培养小麦种胚。
三、实验材料和设备材料•小麦种子•1%有机物•70%乙醇•1%碘酒•组织培养基•生长因子设备•夹子•口罩•细胞培养器•培养皿、试管、离心管等实验器材四、实验步骤步骤1：消毒取小麦种子6g，用70%的乙醇处理5分钟。
用2%的NaClO溶液处理20分钟，在易耗处洗4次。
再用1%有机物处理10分钟，洗净后用100%的绝对乙醇处理30s。
步骤2：种子萌发将消毒后的种子取出至浸过运移试剂的孵化器中，在密闭条件下，温度控制在20℃，湿度为100%，孵化1d取出。
步骤3：胚芽培养基预处理将培养基加热至约50℃，使其液化。
将液体培养基分装到培养皿中，并在无菌条件下，用夹子固定。
步骤4：种胚的分离与培养将孵化后的小麦种子萌发后的胚芽取出，将其表皮剥除，将其放入培养皿中。
将培养皿存放于细胞培养器中，密闭处理，温度控制在20℃，湿度为100%。
每过48h，更换新的培养基。
步骤5：观察胚芽的生长状况观察种胚在培养中的生长情况，记录并比较结果。
五、实验注意事项1.实验前要求实验者穿着实验服、口罩、手套等防护设备，保持实验区域无菌环境。
2.严格按照操作步骤进行实验，尽量避免操作中出现误操作或者疏漏导致实验失败。
3.组织培养液要尽量保持在无菌环境下，避免污染，避免培养基中出现杂菌或者细菌。
4.在实验过程中，要注意手套的更换，以及操作的环境卫生清洁，防止污染实验过程。
5.实验后要将实验器材做好清洗、消毒和处理，确保实验器材可重复使用。
小麦成熟胚组织培养体系优化及优良转化受体基因型的筛选
小麦成熟胚组织培养体系优化及优良转化受体基因型的筛选作者：陈俊男高润红邓志英田纪春来源：《山东农业科学》2010年第11期摘要：为建立适于优良品种遗传转化的高效组织培养体系，本研究以3种山东省推广小麦品种(济麦19、良星99、鲁麦14)和模式品种Bobwhite为材料，以成熟胚为外植体对其愈伤组织进行诱导和分化，探讨了2，4-D不同浓度下的3种诱导培养基(Ms、N6、MSB5)和4种激素配比的分化培养基对小麦成熟胚离体培养的影响。
结果表明，N6培养基的诱导效果最好，平均诱导率超过了80％，且当2，4-D的浓度为4mg／L时诱导效果最佳。
4种激素配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化，但分化率较低且处理之间差别较大，添加0.5mg/LIAA和2mg／L ZT的Ms培养基的平均分化率最高，为22.58％。
小麦基因型的差别主要影响其分化率的高低而对诱导率的影响不大，3个品种中用于转化的最佳品种为鲁麦14。
关键词：小麦成熟胚；愈伤组织；诱导；分化中图分类号：S512.1+10.353文献标识号：A文章编号：1001—4942(2010)11—O001—05小麦是世界上最主要的粮食作物之一，在谷物栽培中居首位，其中普通小麦种植最广，约占全世界小麦总面积的90％。
随着对小麦抗性、品质研究的深入以及常规育种的限制，应用生物技术对小麦进行品种改良越来越受人们重视，因此，必须建立起高效稳定的组织培养体系为小麦遗传转化奠定基础。
目前，以小麦幼胚、动穗、叶片、根、成熟胚等为外植体进行的遗传转化，都成功获得了再生植株。
其中幼胚是转化成功最多的外植体，许多研究认为幼胚的愈伤组织诱导率和植株再生率都较高，但幼胚易受季节、时间限制，短时间内难以重复试验，而小麦的成熟胚则能克服幼胚的不足，具有取材方便、周期短、不受季节和植株发育阶段限制等优点，因此用作转化受体最为方便实用，但成熟胚再生率非常低。
鉴于此，本试验以山东省广泛栽培的3个小麦品种为材料，对其成熟胚进行愈伤组织诱导和分化的研究，旨在探索不同主推小麦品种成熟胚诱导和分化的有效体系以及优良的转基因受体基因型，为利用转基因技术改良小麦提供依据。
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植物体细胞杂交过程
植物细胞A
去掉细胞壁
原生质体A
植物细胞B
去掉细胞壁
原生质体B
原生质体融合
杂合的原生质体
再生出细胞壁
杂种细胞
细胞分裂
愈伤组织
分化发育
杂种植株
植物体细胞杂交过程
原生质体制备（酶解法去细胞壁）
原生质体融合（人工诱导纤）维素酶、果胶酶等
杂种细胞的物筛理选和法培：养离（心形、成振愈伤动组、织电）刺激等 化学法：聚乙二醇等试剂
在生物的个体发育中，由于基因在特定时间和空间 下选择性地表达而形成不同器官，因此，要实现细胞的 全能性，首先必须使生物体的细胞处于离体状态。
当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处 于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件 的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。
植物组织培养的概念
优点： 不受气候、季节、地域的限制 保留优良性状 时间短，占地少
技术： 组织培养
原理： 细胞全能性
单倍体育种
方法： 花药离体培养
技术： 组织培养获得单倍体 秋水素处理单倍体的幼苗，使染色体加倍
优点： 明显缩短了育种年限 后代稳定遗传
突变体的利用
利用组织培养时，分裂状态的细胞易受培养条 件和外界压力（如射线，化学物质等）的影响 而产生突变的原理，诱导并筛选出对人类有用 的突变体。
微型繁殖
概念：应用组织培养技术，快速繁殖植物（也 叫快速繁殖技术）
原理：植物细胞的全能性 优点：繁殖率高，可大批量生产
取材少 培养周期短 保持优良性状
作物脱毒
病毒在作物体内逐年积累，会导致作物产量降低， 品质变差 分生区附近（茎尖、根尖）的病毒极少，甚至没有 采用茎尖进行组织培养
人工种子
结构： 人工薄膜+胚状体（不定芽、顶芽、腋芽）
相关问题
（1）要想让两个来自不同植物的体细胞融合在一起， 遇到的第一个障碍是什么？ （2）有没有一种温和的去细胞壁的方法？ （3）为什么两个原生质体能发生融合，这与细胞膜 的什么特性有关？ （4）如果两个来源不同的原生质体发生融合形成了 杂种细胞，下一步该对此细胞做何种处理？ （5）如何将杂种细胞培育成杂种植株？
相关问题
自然界中有一种含有叶绿体的原生动物──眼虫，说 明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活， 请探讨：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？ 如果理论上可行，请设计出具体实验方案。
植物细胞工程的实际应用
繁殖植物的新途径 微型育种；作物脱毒；人工种子
育种新方法 单倍体育种；诱导突变体
细胞产物的工厂化生产
植物组织培养 植物体细胞杂交 植物细胞核移植
植物细胞工程的理论基础是：
植物细全能性是指生物体的细胞具有使 后代细胞形成完整个体的潜能。
原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所 特有的全套遗传物质及发育为完整个体 所必需的全部基因。
受精卵的全能性最高； 其次是生殖细胞（尤其是卵细胞）； 体细胞的全能性比生殖细胞低得多。
第3章 细胞工程 第1节 植物细胞工程
细胞工程的概念
细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学 的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的 操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质 或获得细胞产品的一门综合科学技术。
细胞工程
植物细胞工程 动物细胞工程
植物细胞工程的基本技术和理论基础
植物细胞工程常用的技术是
根或芽等器官
植物体
植物组织培养的条件： 适宜的养料和激素，适宜的 温度和无菌条件
相关问题:
1、在植物组培过程中，为什 么要进行一系列的消毒，灭菌， 并且要求无菌操作？ 2、为什么切取胡萝卜根的形 成层，其他部分也能培养成小 植株吗？
植物体细胞杂交的概念
将不同种植物的体细胞， 在一定条件下融合成杂种细胞， 并把杂种细胞培育成新的植物 体的技术。 （不同种生物之间 存在着生殖隔离，所以用传统 的有性杂交方法是不可能做到 这一点的）
植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下， 将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配 制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产 生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
植物组织培养的过程
离体的植物器官、组织或细胞
脱分化（又叫去分化）
愈伤组织（排列疏松而无规则，高度液泡化的呈无定形状态的
薄壁细胞）
再分化
杂种植株的再生与鉴定
相关问题
为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所 想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？ 主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之间是 相互调控、相互影响的，所以马铃薯—番茄杂交植株的 细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质 的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的 遗传物质一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地 下结马铃薯就是很自然的了。
细胞产物的工厂化生产
人参皂甘的生产
红豆杉与紫杉醇