α-淀粉酶发酵条件的优化
《发酵工程实验》
《发酵⼯程实验》实验⼀淀粉酶⽣产菌的筛选⼀、实验⽬的学习淀粉酶产⽣菌的筛选⽅法。
⼆、实验原理淀粉酶在酿造、纺织、⾷品加⼯、医药等领域有⼴泛⽤途。
淀粉酶是⼀类淀粉⽔解酶的统称，它能将淀粉⽔解成糊精等⼩分⼦物质并进⼀步⽔解成麦芽糖或葡萄糖，淀粉被⽔解后，遇碘不再变蓝⾊，因此可根据淀粉培养基上透明圈的⼤⼩来判断所选菌株的淀粉酶活⼒。
三、实验⽤品1．样品淀粉含量丰富的⼟样。
2．培养基⾁汤培养基：⽜⾁膏3g，蛋⽩胨10g，NaCl 5g，加⽔⾄1000ml，pH7.0。
121℃灭菌20min。
初筛平板培养基：⽜⾁膏3g，蛋⽩胨10g，NaCl 5g，可溶性淀粉2g，琼脂18g，加⽔⾄1000ml，pH7.4。
121℃灭菌20min。
Lugol碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏⽔300ml。
先将碘化钾溶解在少量⽔中，再将碘溶解于碘化钾溶液中，待碘全溶后，加⾜⽔即可。
3．器材⾼压蒸汽灭菌锅，超净⼯作台，电⼦天平，电炉，恒温振荡器，恒温培养箱；烧杯，量筒，三⾓瓶，培养⽫，移液管，洗⽿球，试管，试管架，接种针，涂布棒。
四、实验⽅法1．培养基制备：配制⾁汤培养基45ml，分装于250ml三⾓瓶中，纱布封⼝，灭菌。
配制初筛平板培养基350ml，分装于500ml三⾓瓶中，封⼝膜封⼝，灭菌。
2．倒平板：将融化的初筛平板培养基冷却⾄50～60℃，以⽆菌操作法倒⾄已灭菌的培养⽫中，⾄盖满底部。
冷却凝固待⽤。
3．样品预处理：取5g⼟样接⼊45ml⾁汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成⼟壤悬液，此时的稀释度为10-1。
另取4⽀试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每⽀试管内加⼊9mL⽆菌⽔。
⽤⽆菌移液管从三⾓瓶中吸取1mL⼟壤悬液，加⼊到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加⼊到10-3试管中，依此类推直⾄10-5试管。
4．平板涂布分离：分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于30℃培养24～48h。
米曲霉固态发酵产淀粉酶条件优化的研究
米曲霉固态发酵产淀粉酶条件优化的研究
米曲霉是一种能够产生淀粉酶的真菌，其发酵产物可以应用于食品、
饲料、医药等领域。
本文旨在探讨米曲霉固态发酵产淀粉酶的条件优
化研究。
一、研究背景
淀粉酶是一种能够水解淀粉为糖的酶类，其应用广泛。
目前，淀粉酶
的生产主要依赖于微生物发酵。
而米曲霉是一种能够产生淀粉酶的真菌，其发酵产物可以应用于食品、饲料、医药等领域。
因此，研究米
曲霉固态发酵产淀粉酶的条件优化，对于淀粉酶的生产具有重要意义。
二、研究方法
本研究采用响应面法对米曲霉固态发酵产淀粉酶的条件进行优化。
首先，通过单因素实验确定了影响淀粉酶产量的主要因素，包括发酵时间、发酵温度、发酵pH值、发酵基质含水率和发酵基质中淀粉的浓度。
然后，采用Box-Behnken设计构建了响应面模型，对这些因素
进行优化。
三、研究结果
经过优化，得到了最佳的淀粉酶产量条件，包括发酵时间为72小时、发酵温度为30℃、发酵pH值为6.5、发酵基质含水率为60%、发酵
基质中淀粉的浓度为5%。
在这些条件下，淀粉酶的产量为1200 U/g。
四、研究意义
本研究通过响应面法对米曲霉固态发酵产淀粉酶的条件进行了优化，
得到了最佳的淀粉酶产量条件。
这对于淀粉酶的生产具有重要意义，
可以提高淀粉酶的产量和质量，降低生产成本，促进淀粉酶的应用。
总之，米曲霉固态发酵产淀粉酶条件优化的研究对于淀粉酶的生产具
有重要意义。
本研究通过响应面法对淀粉酶产量的影响因素进行了优化，得到了最佳的淀粉酶产量条件，为淀粉酶的生产提供了重要的理
论和实践基础。
α-淀粉酶的生产工艺流程
α-淀粉酶的生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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a-淀粉酶的生产工艺
a-淀粉酶的生产工艺
淀粉酶是一类能够水解淀粉并将其转化为糖类的酶。
它广泛用于食品、饲料、纸浆、
发酵等行业中。
1. 酶菌的选育和培养
淀粉酶可由多种细菌、真菌和原生动物合成，其中最常用的是泌秀菌和枯草芽孢杆菌。
选用高产菌株和适合生产的菌株进行发酵，产生高效淀粉酶。
2. 发酵工艺
发酵工艺是淀粉酶生产的关键步骤。
其主要过程是菌种培养、接种、发酵、分离等。
泌秀菌的发酵条件为温度35℃-42℃，pH为6.0-7.0，培养液中含有可溶性淀粉、氮源、
矿物质以及适量的辅助物质，如表面活性剂等。
枯草芽孢杆菌的发酵条件为温度37℃-55℃，pH为6.5-7.5，培养液中含有可溶性淀粉、氮源和矿物质等。
3. 酶液的提取和纯化
对发酵液进行酶液的提取和纯化，可以采用离心、过滤、超滤、稳态层析等方法。
离
心可将大颗粒杂质和沉淀物去除。
过滤和超滤可去除小颗粒杂质和未溶解物质。
稳态层析
能够去除其他蛋白质等酶外蛋白。
为增强淀粉酶的稳定性，可以将其进行稳定化处理。
稳定化的方法包括添加保护剂、
离子交换、交联、酯化等。
保存时，应避免酶液暴露在空气中、光照下或高温中。
一般情
况下，淀粉酶的保存温度应低于0℃。
总之，淀粉酶的生产工艺涵盖了选育和培养酶菌、发酵、酶液的提取和纯化、稳定化
和保存等多个环节。
只有采取稳定的生产工艺和高效的酶菌，才能获得高质量的淀粉酶产品。
α-淀粉酶生产重要参数
α-淀粉酶发酵的生产工艺设计摘要：α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中，能水解淀粉产生糊精、麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一。
目前，α-淀粉酶已广泛应用于变性淀粉及淀粉糖、焙烤工业、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业。
对α-淀粉酶性质及其应用进行了相关综述。
关键词：α-淀粉酶；生产工艺设计；性质；应用Abstract：α-amylases are universally distributed throughout the animal，plant and microbial kingdoms．They can hydrolyse starch molecules to give diverse products including dextrins and progressively smaller polymers composed of glUcose units．α-amylases are one of the most popular and important form of industrial amylases．These enzymes are applied in baking industry，the processing of starch，ferm entation，brewing industry，textile and paper industries．The present review highlights the properties and applications ofα-Amylases．Key words：α-amylase；properties；applications1 绪论1.1α-淀粉酶性质简述1.1.1α-淀粉酶简述α-淀粉酶广泛存在于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物中[1]。
米黄色、灰褐色粉末。
枯草杆菌摇瓶发酵生产α-淀粉酶
试剂及溶液
试剂：
碘、碘化钾、 α-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬 酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公 司）。
溶液配制： 原碘液：称取11.0 g碘和22.0 g碘化钾，用少量水 使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。 稀碘液：吸取原碘液2.00 mL，加20.0 g碘化钾用 水溶解并定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。
酶的比活力
酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条 件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的 酶活力单位数。 酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。 比活力：每mg蛋白质中有多少个酶单位。 酶比活力＝酶活力（单位）/ mg （蛋白或RNA） 可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。 对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力 愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增 高。
4、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至 液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。
5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培 养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/250ml 瓶），做好标记。
实验步骤
发酵结束后：检查是否染菌 固液分离：方法自定； 发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否 污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶 活力。
α-淀粉酶制剂的理化要求
α-淀粉酶制剂的卫生要求
三、实验内容
微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生 产中多用液体深层发酵法制备酶。 大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏 的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。 扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一 定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进 行恒温培养。 摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的 一种模拟实验。（摇瓶发酵生产α-淀粉酶）
生物工程综合实验“真菌α-淀粉酶固态发酵生产”的教学改革与实践
2021年6期第23卷(总第130期)No.6,2021General No.130,Vol.23淮南师范学院学报JOURNAL OF HUAINAN NORMAL UNIVERSITY生物工程综合实验“真菌a-淀粉酶固态发酵生产”的教学改革与实践颜守保，施翠娥,仝倩倩(淮南师范学院生物工程学院，安徽淮南232038)［摘要］生物工程专业综合实验教学能够提升学生综合实验技能，以及培养学生解决问题的能力和创新意识。
淮南师范学院生物工程综合实验以“真菌a-淀粉酶固态发酵生产”为研究对象，实验安排学生开展真菌a-淀粉酶产生菌株筛选、菌种分子生物学鉴定、菌株紫外线诱变选育、30L固态发酵罐实罐灭菌、固态发酵生产真菌a-淀粉酶、板框压滤结构分离浸提酶液、陶瓷膜浓缩酶液、喷雾干燥制备固体酶制剂、蛋白质凝胶层析纯化真菌a-淀粉酶蛋白、SDS-PAGE测定酶蛋白分子量大小等9个模块实验。
该综合实验以连贯性的研究任务驱动学生开展探究性学习，实验以学生为主体，采用连续运行的方式安排教学任务,保证模块实验的整体性和连贯性。
采用“考勤+课堂实验操作+平时实验报告+实践操作考试”的方式进行考核，强化学生对综合实验操作技能的掌握。
实践证明，本综合实验的开设显著增强了学生对专业理论知识和实验技能的掌握程度，强化了学生解决实际问题能力，取得了较好的教学改革成效。
［关键词］生物工程综合实验;教学改革；真菌a-淀粉酶；固态发酵［中图分类号］G642.423［文献标识码］A［文章编号］1009-9530(2021)06-0133-06生物技术产业已经成为我国产业结构调整的战略重点和新的经济增长点,是我国经济高质量发展的重要引擎叫工业生物技术已经成为世界各国的强国策略和保障国家能源安全、环境管理和经济可持续发展的战略选择,其研究日益受到世界各国的重视⑵。
随着国家促进中部地区崛起的产业政策落实和安徽省生物产业的迅速发展,生物工程产业已成为安徽省经济发展的支柱产业之O淮南师范学院作为应用型地方本科院校，致力于为安徽省地方经济社会发展培养创新能力强、专业素质高的应用型本科人才。
黄精糖化和发酵工艺优化
黄精糖化和发酵工艺优化
黄精是传统中药材之一，具有多种药理活性成分，如黄精皂苷、黄精苷、黄精素等。
在黄精的加工过程中，糖化和发酵是重要的工艺步骤，能够提高其药效和品质。
黄精糖化主要是利用酶类将糖分解为较小的分子，提高黄精活性成分的释放率和生物利用率。
常用的糖化酶包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶等。
糖化条件包括温度、pH值、糖化酶浓度、糖化时间等，需要进行优化以提高糖化效果。
黄精发酵则是通过微生物代谢，将黄精中的成分转化为更活性的物质。
常用的发酵微生物包括乳酸菌、酵母菌、细菌等。
发酵条件包括温度、pH值、微生物种类和数量、发酵时间等，需要进行优化以提高发酵效果。
黄精糖化和发酵工艺的优化，能够提高黄精的药效和品质，增加其市场竞争力。
因此，需要开展更深入的研究，探究最佳的糖化和发酵条件，为黄精的加工提供技术支持。
- 1 -。
淀粉酶在食品中的应用
淀粉酶在食品中的应用刘宝琴摘要:酶,是一种蛋白质,它是由生物活性细胞所产生的,它具有高效率的催化的作用,并且其专一性很强,并且性质温和,没有毒害、无味吧,不会对食品产生幂良的影响,从而[1]大量的应用到食品的焙烤加工中。
淀粉酶在生活中的应用很广泛。
淀粉糖的生产,甜味剂的生产都离不开淀粉酶。
本文主要介绍各种淀粉酶在食品工业中的应用。
关键词: α-淀粉酶食品工业β-淀粉酶一.定义及分类淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。
是目前发酵工业上应用最广泛的一类酶。
淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖，水解α-1,4-糖苷键的酶。
根据酶水解产物异构类型的不同可分为α-淀粉酶(EC3(2(1(1()与β-淀粉酶(EC3(2(1(2()。
α-淀粉酶广泛分布于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物。
微生物的酶几乎都是分泌性的。
此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子，也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。
淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α,1，4-链。
因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主，此外，还有少量麦芽三糖及麦芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精，在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。
另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精(又称α-糊精)。
一般分解限度以葡萄糖为准是35-50%，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70%分解限度的(最终游离出葡萄糖);β-淀粉酶广泛分布与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α,1，4-葡聚糖链。
黑曲霉发酵生产α-淀粉酶微生物实验报告
黑曲霉发酵生产α-淀粉酶前言：α-淀粉酶能随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，所得产物的还原性末端葡萄糖单位碳原子为α构型，同时该酶能使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶。
耐酸性α-淀粉酶是在酸性条件下水解淀粉的酶类，其最适pH在4.0左右。
自从日本研究者YasujiMinoda等人用黑曲霉生产耐酸性α-淀粉酶以来，各国都对耐酸性α-淀粉酶进行了研究。
通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶的实验过程，熟悉发酵罐的构造和使用方法。
初步了解发酵生产的原理和常规发酵参数的检测方法。
整个实验按照“菌种的培养空消实消接种发酵放罐”的发酵过程进行。
在整个发酵的过程中，每隔6h取一次发酵液样品检测其pH值、酶活、残糖量及生物量四个生理指标。
最后将所测数据进行整理、分析，可以得出整个发酵过程各物质的生成和消耗的变化规律以及如何调整培养条件来提高发酵生产的效率，对大工业生产具有重要的指导意义。
正文：一、实验目的1．了解发酵罐的几大系统组成，即空气系统、蒸汽系统、补料系统、进出料系统、温度系统、在线控制系统。
2．掌握发酵罐空消的具体方法及步骤3．掌握发酵罐进料及实消的具体方法及步骤4．掌握发酵罐各系统的控制操作方法二、实验原理1.蒸汽系统：蒸汽发生器：主要用于灭菌，分为自动加水和手动加水两种方式。
2.温度系统：(1) 夹套升温：蒸汽通入夹套。
(2) 夹套降温：冷水通入夹套，下进水，上出水。
(3) 发酵过程自动控温系统3.空气系统：空气除菌设备：空压机贮气罐油水分离器空气流量计空气过滤器发酵罐4.补料系统：补加培养基、消泡剂、酸碱等。
5.在线控制系统6.进出料系统：进料口（接种口）、出料口（取样口）7.管道：包括水流通管道和气流通管道水流通：冷却用水：水经过进水管道发酵罐夹套出水口保温用水：关闭进出水管道阀门（水注满后）进入夹套气流通：蒸汽发生器蒸汽管道空气过滤器/发酵罐进入罐内空气：空压机贮气罐油水分离器空气流量计空气过滤器发酵罐三、方法与注意事项㈠原则1.通蒸汽前先关闭所有阀门2．粗过滤器不空消也不实消，要定期处理，所以必须关闭通向粗过滤器的阀门。
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选择 ４ ｍ ０ Ｌ的装 液量 作 为最适 装液 量 。
图 ３ 不 同 无机氮 源 对产 Ｑ一 粉酶 的 影响 淀
２ ２ ｏ一 淀粉 酶 发 酵培 养条 件优 化 ． 【
２． ． １不 同发酵初始 ｐ ２ Ｈ值对发酵产酶的影响 通过以上实验 ，得出最佳 的培养基成分 ，在基础上通过
２１ ． ２不同有机氮源对发酵产酶 的影响 ．
在 以面粉 为唯一 的碳 源 的条件下 ， 择 玉米浆 、 白胨 、 选 蛋
酵母膏 、尿素 、牛肉膏代替黄豆饼粉作为有机氮源 ，其余条
件 不 变 。测定 酶活结 果 由图 ２ 看 出 ，牛 肉膏作 为 有机 氮源 可
３ ）发 酵初 始 培 养 基 （ｇ ｅＬ）：Ｎ Ｎ ３ ，Ｋ Ｈ Ｏ ， ａ Ｏ ４ ２ Ｐ ４ ３ Ｍｇ Ｏ ｌ Ｆ Ｓ ４ Ｈ ０ ００ ， 米粉 Ｓ ４ ， ｅＯ ． ２ ７ ． 玉 １
１ ． 曲霉 最初 发酵 培养 条件 ． ２米 ２ 在 ２ ０ Ｌ三 角瓶 液体培 养 ，装液 量 为 ４ ｍ ，接 种量 为 ５ｍ ０Ｌ ４ Ｌ，在 ２５ｐ ｍ ３ｒｍ、２ ℃的条件 下 培养 ７ｈ ８ ２。
目 前本实验室的米曲霉是采用诱变融合得到，其发酵的 初始培养基的配方 ，所产淀粉酶的量还不是很高，通过培养 基的优化可以提高酶的产量 ，同ｆ可以采用更为低廉的天然 ｌ 寸
１ ｒ ０５
｝
２ ０ ０
翮
弦ｌ
五米浆
蛋 白胨
酵母膏
尿 索
黄豆饼 粉 牛 肉膏
有机氮源
１ ００
图 ２ 不 同有机氮 源 对产 Ｑ一 粉酶 的 影响 淀
２１ ． ３不 同无 机 氮 源对 发酵 产酶 的影 响 ． 在 以 面 粉 和 黄 豆 饼 粉 的 最 佳 浓 度 的 条 件 下 ，选 择 Ｎ Ｎ ３ Ｎ ４ Ｏ 、Ｋ Ｏ 、 ４ ｌ （ Ｈ ） Ｓ ４ 为附 加无 ａ Ｏ 、 Ｈ Ｎ ３ Ｎ ３ ＮＨ Ｃ 、 Ｎ ４ ２Ｏ 作
最 适 温度 为 ３ ．℃ 。 ３５
３ 结论
通 过 以上 优化 ， 发酵 前后 培养 基与 培养 条３７
４ ０５
４ ４
温度 ／ ℃
图 ７ 温度 对产 Ｑ 淀粉 酶 的影 响 一
表 １ 培 养 基优 化前 后 ａ一 粉酶 产量 对 比 淀
酶 活， ・ ’ Ｕ ｍＬ
１６ ８ ３ ５６
经 过 培 养 基 与 培 养 条 件 优 化 ，得 出 最 佳 培 养 基 配 方
（ Ｌ）：面 粉 ４ ，黄 豆 饼粉 ２ ，Ｎａ ４ ５ ０ ＮＯ３ ，Ｋ２ Ｏ４ ， ＨＰ ３
由图 １ 见 ，面粉 、大米粉 、淀 粉 、荞麦 作为碳 源 时 ，都有 可 利 于 米 曲霉产 酶 ，而高粱 粉 、玉 米淀粉 、蔗糖 、葡 萄糖对 产
米 曲霉 （ｓｅ ｉｕ ｏｙａ）Ｓ １３ 实验 室保 藏 。 Ａｐ ｒ ｌ ｓ ｒｚｅＦ Ｏ ， ｇ ｌ １本
１１２ 培养 基 ．．
１ ２ 实验 方法 ．
有利于米曲霉产酶 ，而玉米浆 、蛋 白胨 、酵母膏 、尿素作为 有机氮源时，对产酶 的促进作用较低。从工业生产的角度，
牛 肉膏 的成本 太高 ，产酶 促进 作用 只较 黄 豆饼 粉作 为有机 氮
４ ，黄 豆饼粉 １ 。 ０ ６
１． ．１酶活测定方法 ２
源的高一些 ，因此选择黄豆饼粉作为有机氮源。
农 产 品或工 、农 业生 产废 弃 品来 替代 价格 较 为 昂贵 的药 品 、
２ 结 果 与分析
２１ 一 ． ａ 淀粉酶发酵培养基优化
２１ ． １不 同碳 源对 发 酵产酶 的影 响 ． 单 独选 择 面粉 、大米 粉 、糊精 、淀粉 、荞麦 、高粱粉 、 玉 米 淀粉 、蔗糖 、葡萄糖 作为 碳源 ，替 代基 础发 酵培 养基 中
Ｏ
装 液 量进 行发 酵对 比。测 定酶 活 如图 ６所 示 ，装 液虽 的变 化 对 于 发酵 的结 果 影 响不是很 大 。 只有在 ４ ｍＬ和 ５ ｍＬ装 液 ０ ５
澎
硝酸钠 硝 酸铵 硝酸 钾
无机 氮源
量情 况下 对 产酶 的促 进作 用较 大 一些 ，出于经 济 角度 考虑 ，
改 变 发酵 液 的 ｐ 值 进行 发酵 。测 定 酶活 由图 ４可 以得 到 ， Ｈ
８ ０
当ｐ Ｈ值为 ７ ，也就是发酵液为中性的情况下 ，其酶活最高，
而 偏 酸性 或 者偏 碱性 都埘 酶 活有 一定 的抑 制 作用 ， 随酸 度（ 碱
４ ０ ４ ５
度 ） 的加强 ，抑制越明显。因此发酵过程选择 ｐ Ｈ值为 ７的
ｃ 【 ．淀粉 酶 （【 ，４Ｄ 葡萄 糖． 萄 糖苷 水解 酶 ） 遍分 ０１ － ． ． 葡 普 布在 动 物 、植物 和 微生 物 中 ，是 一种 重 要 的淀 粉水 解 ｌＩ。 酶
Ｙ ｏ改良法【． ｏ ２ 反应体系为 ５ ． 】 ｍＬ Ｏ５ ％淀粉＋ ． ０ ｍＬ酶 ， ５
在 ｐ ．、４ ＂ 反应 ５ ｎ后 ，加 Ｏ１ ｌ ｓ ５ Ｈ６０ ０Ｃ下 ｍｉ ．ｍｏ／ Ｈ２Ｏ４ｍＬ终 止 Ｌ 反 应 ，取 Ｏ５ ．ｍＬ 反应液 ＋ ｍＬ ０４ ５ ．ｍｍｏ／ ２ ｌ １ ＫＩ溶液 显色 ， Ｌ －
酶的促进作用较低。其中面粉对产酶的促进作用最大，因此
选 择 面粉 作为最 佳 唯一碳 源 。
１ 斜 面 培养基 （ Ｌ） 蔗 糖 ３ ， ＮＯ ２ Ｋ Ｈ Ｏ １ ） ： ０ Ｎａ ３ ， ２ Ｐ ４ ，
Ｍｇ Ｏ４ ．５ ＫＣ ．， 皮 ０８ 琼 脂 １２ Ｆ Ｓ ．Ｈ２ ０Ｏ 。 Ｓ ０ ， １ ５麸 ０ ０ ．， ．， ｅ Ｏ４ ０ ．１ ７ ２） 种子培 养 基 （ ／） Ｎａ Ｋ２ Ｏ４ ３ Ｍｇ Ｏ４ ， ｇＬ ： ＮＯ３ ４， ＨＰ ， Ｓ ｌ Ｆ Ｓ ＂Ｈ ０ Ｏ０ ，玉米 粉 ４ ，黄 豆 饼粉 １ 。 ｅ Ｏ４７ ２ ．１ Ｏ ６
碳 源
图 １ 不 同碳 源 对产 ａ一 淀粉 酶 的 影响
图４ ｐ Ｈ对产 Ｑ一 粉酶 的影 响 淀
２ ． 不 同 接种 量对 发 酵产 酶 的影 响 ．２ ２
在 最 佳发 酵配 方 的基 础上 ，通 过对 １ ｍＬ、３ ｍＬ、４ ｍＬ、５
ｍＬ、７ 、 １ ｍＬ 的 接种量 进行 发 酵对 比。测定 酶 活如 图 ５ ｍＬ Ｏ
原 始 条件
相 同点
优 化 条件
以黄 豆饼 粉作 为 有机 氮源 ，以 Ｎａ Ｏ３ Ｎ 为尤 机氮 源 ，发 酵 ｐ Ｈ为 ７ 种 量为 ４ ，接 ｍＬ，装液 量 为 ４ ｍＬ ０ ，恒 温摇 床 的
转速 都 为 ２５ｐ ３ ｒｍ，碳源 ：氮源 浓度 为 ２０ ：８
不 同点
一 溢专
机 氮 源 。 由图 ３表 明 ，Ｎａ ＮＯ ＫＮＯ 对 酶 活 的促 进作 用较 和
乏 ９ ｝ ５
忙
避
＊
９ ０
８ ｝
８０
７ ５
大 ，而 ＮＨＮ ４ Ｏ、ＮＨ Ｃ 、 （ ４ ２Ｏ 的促 进 作用 较小 。因 ４Ｉ ＮＨ ） Ｓ ４ 此 选 择 Ｎａ Ｏ 作 为 最佳 的无 机 氮源 。 Ｎ
６ ０ｍ 下测光密度。１ 活力单位定义为 ５ ｉ水解 ｌ ｇ ２ｎ 个 ａ ｒｎ ｍ 淀粉 的
酶量 。
酶活 的计算 方法 ：
产周期 、提高产品得率和原料的利用率 ，提高产品质量和节
约粮 食 资源 ，都有 着 极其 重要 的作 用 。
酶活＝（ 对照组一 实验组 ） 照组× 尉 淀粉浓度× 酶液稀释倍数
它以随机作用方式切断淀粉 、糖原 、寡聚或多聚糖分子内的
ａ１ 葡 萄糖苷 键 ，产 生麦 芽糖 、低 聚糖 和 葡萄糖 等 ，是工 ． ，４ 业 生 产 中应用 最 为广 泛的 酶制 剂之 一 ，主要 应用 于 发酵 、纺 织 、饲 料 、医药等 多 种领 域 ｌ 。应 用 于各 种 工业 中对缩 短生
材料，以降低成本。本实验采用单 因素法确定米曲霉最适的
碳源 、 源 、无机 盐 、 Ｈ值 、温度 、接 种量 、装 液 量等 ， 氮 ｐ 从 而得 出最 优 的培养 基 配方 和发 酵 条件 。
１ 材料 与方 法
１ １ 实验 材 料 ．
１１１菌种 ．．
的玉米粉 ， 其余培养基成分和发酵条件不变。 测定酶活结果 ，
条件 进行 发 酵 。
装液 量／ Ｉ ｍ．
图 ６ 装 液量 对米 曲霉产 ｎ一 淀粉 酶 的影 响
２ ４
２１ 第 １ ０ １年 ２期 （ 第 ６ 总 ０期 ）
万方数据
研 究论 文 ２ ． 不 同温 度对 发 酵产 酶 的影 响 ．４ ２
以发酵 的 最佳 配方 配制 培养 基 ，分别 在 ２ ．℃ 、２ ℃ 、 ４５ ８
ｌ
３
４
５
接种 量／Ｌ ｍ
图 ５ 接 种 量对产 ａ一 淀粉酶 的影 响
ｌＯ ０ ８ ０
２ ． 同装液 量对 发 酵产 酶 的影 响 ． ３不 ２
通 过 埘 ２ ｍＬ ５ ５ 、３ ｍＬ、４ ｍＬ、４ ｍＬ ５ ０ ５ 、５ ｍＬ、７ ｍＬ的 ０
赛ｅ ｏ
罩 ４ ０
２ Ｏ
ＨＡＩ ＸＩ Ｋ ￣ Ｆ Ａ Ｅ Ｏ
３ ℃ 、 ３ ℃ 、 ７ 、４．℃ 、 ４ ０ ３． ５ ３ ℃ ０５ ４ ℃下 进 行发 酵 。其 结果 由图 ７可得 ，温 度 升高 ，其 产酶 能 力也 随之提 高 ，当到达 ３ ． ３５ ℃ 时 产酶 能 力最 高 ，继续 升 高温度 ，产酶 能力 降低 ，最后 当温 度 到达 ４ ￣ ，产 酶能 力 为 ０ ４ Ｃ时 。因此米 曲霉 的产 ０淀粉 酶 的 【 ．
以玉 米粉 为碳 源 碳源 浓度 为 ５ ｇＬ ｏｃ ，氮 源浓 度为 ２ ／ ＯｇＬ 发酵 温度 为 ２ ℃ ８