火龙果Actin及UBQ内参基因片段的克隆及序列分析
火龙果HuABAR的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位
火龙果HuABAR的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位汤纬玮;王庆竹;李慧平;文晓鹏【期刊名称】《华中师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(037)005【摘要】在前期利用SSH筛选到抗旱相关基因HuABAR的Unigene序列的基础上,进行了HuABAR的全长cDNA克隆、生物信息学分析及亚细胞定位.结果表明:HuABAR基因cDNA全长为1239 bp,5′-UTR为264 bp,3′-UTR为414 bp,完整开放阅读框(ORF)共561 bp,编码187个氨基酸;生物信息学分析显示,HuA-BAR 基因编码蛋白具有典型的SRPBCC结构域,并与PYR1/PYLs(pyrabactin resistance 1/PYR1 like)家族具有较高的相似性;HuABAR在干旱、高温(42℃)和低温(4℃)等逆境胁迫下显著上调表达,并在干旱胁迫5 d、高温3 d时表达量最高,低温处理5 d内,表达量持续上升;通过PEG介导法瞬时转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析,发现该基因定位于细胞质,与已报道的其他PYR1/PYLs家族基因一致.因此,HuABAR基因可能在火龙果干旱胁迫应答中发挥重要作用.【总页数】7页(P18-24)【作者】汤纬玮;王庆竹;李慧平;文晓鹏【作者单位】贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院/山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室,贵阳 550025;贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院/山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室,贵阳 550025;贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院/山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室,贵阳 550025;贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院/山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室,贵阳 550025【正文语种】中文【中图分类】S667.903.2【相关文献】1.版纳微型猪近交系CPN10克隆、亚细胞定位、组织表达和生物信息学分析 [J], 宋雪;秦彩艳;霍金龙;王配;李罗刚;张霞;王淑燕;王雪飞2.大豆GmAAP基因的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位 [J], 王俊皓; 谢五洋; 徐华祥; 袁学顺; 周莹; 崔喜艳3.人HSPA8基因生物信息学分析及亚细胞定位 [J], 吴小敏; 赵佳福; 倪锴; 朱晓峰; 许厚强4.甘蔗新基因ShUGT2的生物信息学分析及亚细胞定位 [J], 李延博;王俊刚;赵婷婷;张树珍;熊国如5.小麦TaZFP33基因克隆、生物信息学分析、亚细胞定位与表达分析 [J], 巫群;李永亮;邹肖肖;孙傲龙;林晓霞;周苹;郭新红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙眼胚性愈伤组织肌动蛋白基因(actin)片段的克隆与序列分析
ｃ ｎ ｅｖ ｔ ｅｒ ｇｏ ｎ ｅ ｄ Ｓｉ ｈ ｄｔ ｅｔ ｒｇ ｎ ， ９ ｐ ３ｅ ｄ ｓｑ ｅ ｃ ｆｔｅ ａ ｔ ｅ ｅＷａ ｂ ｏ ｓｒ ａ ｖ ｉｎａ ｄ ３ ｎ ． ｔｃ ｅ ｉ ｅ ｔ ｈ ｗｏｆ ｍｅ ｔ ８ ５ｂ ＂ｎ ｅ ｕ ｎ ｅｏ ｃｉ ｇ ｎ ｇ ｏ － ａ ｓ ｈ ｎ ｔｉｅ ． ｙｈ ｍｏｏ ｏ ｓｃ ｍｐ ｒｎ ｔ ｓ ｐａ ｔ’ａ ｉ ｅ ｅ ， ｔｓ ａｅ ｕ ｌｏｉｅｉｅ ｔｙ ｍｏｅｔａ ０ ａｎ ｄ Ｂ ｏ ｌｇ ｕ ｏ ａｉｇｗｉ ｍｏｔ ｌｎｓ ｃｔ ｇ ｎ ｓ ｉ ｈ ｒｄ ｎ ｃｅｔ ｄ ｎｉ ｒ ｎ ８ ％ ｈ ｎ ｄ ｔ ｈ ｎ ｍｉｏａ ｉ ｄ ｎ ｔ ｒ ｈ ｎ ９ ０ ｗｈｃ ｕ ｇ ｓｓ ｈ ｔ ｇ ｎ ａ ｔ ｇ ｎ ｓ ｉｈｙｃ ｎ ｅｖ ｔ ｅ ａ ｄ ａ ｄ ａ ｎ ｃｄ ｉｅ ｔｙ ｍｏｅｔａ ０／， ｉｈ ｓ ｇ ｅ ｔ ｔａ ｅｌｎ ａ ｃｉ ｅ ｅｉ ｈｓ ｌ ｏ ｓｒａ ｖ ｎ ｉ ｏ ｈ ｔ ｏ ｎ ｉ Ｃ ｅｕｅ ｓｔ ｅｉ ｔｒ ａ ｏ ｔｏ ｒｇ ｎ ｘ ｒｓｉｎ ａ ａｙｉ ｏ ｇ ｎｓ ｍａ ｃｅ ｒｏ ｅ ｅ ｉ． ｎ ａ ｂ ｓ ｄ ａ ｎｅ ｌｃ ｎｒｌ ｏ ｅ ｅｅ ｐｅ ｓｏ ｌｓｓｉ ｌｎ ａ ｏ ｔ ｍｂｙ ｇ ｎ ｓｓ ｈ ｎ ｆ ｎ ｎ ｉ
龙眼胚性愈伤组织肌动蛋 白基 因【ｃ ｎ 片段 的 ａｔ ） ｉ 克 隆 与序 列分 析
邵 巍， 赖钟雄 ， 陈义挺 ， 英卿 ， 玉玲 蔡 林
（ 福建农林大学园艺植物生物工程研究所 ， 福建福州 ３ ００ ） ５０ ２
摘 要： 采用 同源克 隆方法从 龙眼胚 性愈 伤组 织分 离肌 动蛋 白基 因 （ ｔ ）通 过保 守 区和 ３Ｒ Ｃ ｎｉ。 ｃｎ ’Ａ Ｅ扩增 ． 分别获得 ３ ７ ｐ和 ８ ７ ｐ的特 异 片段， ４ ｂ ３ ｂ 经过序 列拼接得 到 ８ ５ ｐ的龙 眼 ａｔ ９ ｂ ｃｉ 因 ３ 端序 列。 多种植 ｎ基 ’ 与
龙脑樟Actin基因的克隆与序列分析
摘要:利用同源克隆的方法设计特异性引物,从龙脑樟中获得一个333bp 的基因片段,编码110个氨基酸。
该片段的蛋白分子量为12.37ku ,理论等电点为5.03,平均疏水性(GRAVY )为-0.312,α螺旋、β片层和无规则卷曲的比例分别为40.04%、10.09%和45.87%。
同源比对和进化树分析结果都表明,龙脑樟Actin 基因与香樟、山鸡椒的Actin 基因具有较高的同源性。
龙脑樟Actin 基因片段的克隆,为深入研究该基因的表达调控及龙脑樟遗传与进化关系提供理论基础。
关键词:龙脑樟;Actin 基因;克隆;序列分析中图分类号:Q943.2文献标志码:A 文章编号:1673-4343(2019)04-0013-04Cloning and Sequence Analysis of the Actin Gene from the Cirmamonun camphoraZHANG Jun-cheng 1,2,XU Xiao-ying 1,ZOU Hang-zhuo 1,2,YANG Lin 1(1.Engineering Research Center of Medicinal plant Exploration and Utilization in Colleges and Universities of FujianProvince,Sanming 365004,China;2.Forestry College,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350001,China)Abstract:A 333bp gene fragment encoding 110amino acids was obtained from Cirmamonun camphora by homol-ogous cloning.The molecular weight was 12.37ku,the theoretical pI was 5.03,and the grand average of hydropathicity (GRAVY)was -0.312.Moreover,the ratios of αhelices,extended strand and random coil were 40.04%,10.09%and 45.87%,respectively.The results of homology comparison and phylogenetic tree analysis showed that the Actin gene of Cir ⁃mamonun camphora had high homology with Cirmamonun camphora and Capsicum capsicum.Cloning the Actin gene from Cirmamonun camphora was the basis for further study of the gene expression and evolutionary relationship.Key words:Cirmamonun camphora ;Actin gene;clone;sequence analysis 龙脑樟Actin 基因的克隆与序列分析张君诚1,2,许晓颖1,邹函卓1,2,杨琳1(1.天然药物开发利用福建省高校工程研究中心,福建三明3650042.福建农林大学林学院,福建福州350001)收稿日期:2019-03-25基金项目:福建省高校工程研究中心开放课题(ZD1602)作者简介:张君诚,男,福建建瓯人,教授,博士。
红肉火龙果果糖激酶基因HpFRK1克隆、表达与酶学活性分析
红肉火龙果果糖激酶基因HpFRK1克隆、表达与酶学活性分析第一篇范文红肉火龙果作为一种热带水果，不仅营养价值高，而且具有独特的药用价值。
红肉火龙果果糖激酶基因HpFRK1的克隆、表达与酶学活性分析，为我们揭示了其独特的生物学特性。
1. 克隆2. 表达为了研究HpFRK1基因在红肉火龙果中的表达情况，我们采用了RT-qPCR技术。
结果表明，HpFRK1在红肉火龙果的各个组织中均有表达，其中以果实中的表达量最高。
这一结果提示我们，HpFRK1可能在红肉火龙果的果实发育过程中发挥重要作用。
3. 酶学活性分析4. 功能推测结合红肉火龙果的生长习性和果实发育过程，我们可以推测HpFRK1在果实糖分代谢中发挥重要作用。
果糖激酶是糖代谢途径的关键酶，通过调控果糖激酶活性，植物可以实现对果实糖分的精确调控。
因此，HpFRK1可能在红肉火龙果果实糖分的积累和调控中具有关键作用。
5. 结论第二篇范文红肉火龙果的甜蜜秘密：HpFRK1基因的神秘之旅在我们享受这美味可口的红肉火龙果时，你是否想过，它那独特的甜味背后，隐藏着怎样的生物学秘密？今天，我们就来揭秘红肉火龙果果糖激酶基因HpFRK1的克隆、表达与酶学活性分析，一探究竟。
1. 基因克隆：从红肉火龙果中揭开HpFRK1的神秘面纱首先，我们需要了解HpFRK1基因。
它是红肉火龙果中的一种关键基因，与果实的糖分代谢密切相关。
科研人员通过复杂的实验技术，从红肉火龙果中成功克隆出HpFRK1基因。
这一过程，就像是侦探从案件中找到关键线索，为我们揭示了红肉火龙果糖分代谢的神秘面纱。
2. 基因表达：HpFRK1在红肉火龙果中的秘密行动了解到HpFRK1基因后，我们不禁要问，它在红肉火龙果中是如何表达的？通过先进的RT-qPCR技术，科研人员发现，HpFRK1在红肉火龙果的各个组织中均有表达，尤其是在果实中表达量最高。
这意味着，HpFRK1可能在红肉火龙果的果实发育过程中发挥重要作用。
箭筈豌豆两个肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析
箭筈豌豆两个肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析张磊;刘志鹏;张吉宇;张妙青;王彦荣【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)009【摘要】通过同源克隆获得了箭菩豌豆两个不同的Actin基因片段,为研究该箭菩豌豆其它基因的表达状况提供了内标参照.根据近缘物种Actin基因序列设计一对引物,通过RT-PCR技术分别从叶片和果实材料中克隆获得了两条不同的Actin基因片段.生物信息学分析表明,叶片中克隆的片段长度604 bp,编码201个氨基酸;果实中克隆的片段长度677 bp,编码225个氨基酸.两条序列与其它物种Actin基因的碱基序列相似度高于80%,氨基酸序列相似度高于93%.将来自叶片和果实的两条序列分别命名为VsACT7和VsACT11,并在GenBank注册,登录号分别为HM004434和GU946218.【总页数】6页(P70-75)【作者】张磊;刘志鹏;张吉宇;张妙青;王彦荣【作者单位】兰州大学草地农业科技学院,兰州,730000;兰州大学草地农业科技学院,兰州,730000;兰州大学草地农业科技学院,兰州,730000;兰州大学草地农业科技学院,兰州,730000;兰州大学草地农业科技学院,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】S6【相关文献】1.‘甘肃红豆草’肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 [J], 陈春艳;马晖玲;董文科2.水葫芦肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 [J], 蒋丽花;傅明辉;彭进平3.红砂肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 [J], 赵书艺;白天惠;包爱科;王沛;管萍萍4.白羊草肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 [J], 李春艳;方志红;董宽虎5.塔乌库姆冰草肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 [J], 李莉;贾纳提;张金林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
木豆Actin基因片段的克隆及序列分析
木豆Actin基因片段的克隆及序列分析
乔光;文晓鹏
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2010(038)008
【摘要】根据大豆Actin基因的保守序列设计一对引物Primer 1和Primer 2,以木豆叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PMD-18T载体.阳性克隆经PCR检测后测序,序列分析结果表明,该片段长302 bp,编码100个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的其他植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在89%以上,其中与大豆的同源性达94%;与氨基酸序列的同源性均在90%以上.
【总页数】3页(P5-7)
【作者】乔光;文晓鹏
【作者单位】贵州大学,贵州省农业生物工程重点实验室,贵州,贵阳,550025;贵州大学,林学院,贵州,贵阳,550025;贵州大学,贵州省农业生物工程重点实验室,贵州,贵阳,550025
【正文语种】中文
【中图分类】S529
【相关文献】
1.马缨杜鹃Actin基因片段的克隆及序列分析 [J], 孙威;林建;申欢;李欲轲;马玲;乙引
2.日本蛇根草Actin基因片段的克隆及其序列分析 [J], 孙威;徐僡;林建;马玲;申欢;李欲轲;乙引
3.山楂Actin基因片段克隆及序列分析 [J], 马聚泽;吕换男;王海静;李晓颍;刘建珍;张立彬;武军凯
4.苹果Actin基因片段克隆及序列分析 [J], 秦子禹; 张向昆; 王娜; 项殿芳
5.甘肃特产药材红芪actin基因片段的克隆及序列分析 [J], 何军刚;强正泽;马冬妮;冯晓莉;李成义
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真菌内参基因
真菌内参基因
真菌内参基因是指在真菌中常用的内参基因，用于在qRT-PCR技术中稳定不同样本间的表达水平，从而准确比较基因的表达差异。
常用的真菌内参基因包括肌动蛋白（actin）、泛素（ubiquitin，UBQ）、18S核糖体RNA（18S rRNA）、微管蛋白（tubulin beta，TUB）和翻译延长因子（translation elongation factor，TEF）等。
这些内参基因可在真菌中稳定表达，不受实验条件和操作差异的影响，因此常被用作参照，帮助校正样本间的误差，提高实验的准确性和可靠性。
然而，内参基因的表达水平可能会受到不同真菌种类、生长条件、环境因素等多种因素的影响。
因此，在选择内参基因时，需要考虑实验的具体条件和样本特点，并进行验证和评价，确保其适用性和稳定性。
总之，真菌内参基因是qRT-PCR技术中重要的组成部分，通过选用合适的内参基因，可以帮助校正实验误差，提高实验的准确性和可靠性。
了解和掌握真菌内参基因的相关知识，对于进行准确的基因表达分析和比较具有重要意义。
基于转录组测序的火龙果果肉不同发育时期淀粉和蔗糖代谢途径相关基因差异表达分析
Cluster-12747.16617 等 5 个参与淀粉和蔗糖代谢合成途径的关键酶基因，qPCR 检测表达水平与转录组测序结果一致。
关键词：火龙果；果肉；转录组测序；淀粉；蔗糖
中图分类号：S667.9
文献标识码：A
Differential Expression Analysis of Genes Related to Starch and Sucrose Metabolism Pathway in Different Developmental Stages of Dragon Fruit Pulp Based on Transcriptome
热带作物学报 2021, 42(6): 15201530 Chinese Journal of Tropical Crops
基于转录组测序的火龙果果肉不同发育时期淀粉和蔗糖代谢 途径相关基因差异表达分析
杨运良，李建勋*，马革农
山西农业大学棉花研究所，山西运城 044000
摘 要：采用 Illumina Novaseq 6000 测序技术对火龙果果肉 3 个时期（幼果期、转色期、成熟期）的样品进行转录组
本研究以 3 个不同发育时期的红肉火龙果果 肉为研究对象，进行转录组测序研究，采用生物 信息学技术方法，对得到的 Unigene 进行分类和 功能注释，分析差异表达基因富集的代谢通路， 对参与火龙果果实发育过程中淀粉和蔗糖代谢过 程的差异表达的酶基因进行筛选及 qPCR 验证， 旨在探索火龙果果实发育过程中关于淀粉和蔗糖 代谢过程中酶的催化情况及酶基因的表达规律， 为进一步实现人为调控火龙果果实糖分积累、提 升果实品质提供理论依据。
测序，对获得的 Unigene 进行 7 大数据库注释，共有 3617 个 Unigene 成功注释在所有数据库中，进一步筛选与淀粉和
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火龙果Actin及UBQ内参基因片段的克隆及序列分析颜凤霞;文晓鹏;高国丽;陶金【摘要】为给火龙果的功能基因表达和调控研究提供内参基因,根据Actin基因和UBQ基因的保守区设计引物,采用RT-PCR方法克隆火龙果Actin基因和UBQ基因片段.结果表明:克隆的Actin基因和UBQ基因片段大小分别为302 bp、192 bp,分别编码100个氨基酸和63个氨基酸.Actin基因片段与其他植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在78％以上,与氨基酸序列的同源性达88％以上；UBQ基因片段与其他植物UBQ基因核苷酸序列的同源性均在88％以上,与氨基酸序列的同源性达95％以上.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2013(041)009【总页数】4页(P1-4)【关键词】火龙果;Actin基因;UBQ基因;克隆;序列分析【作者】颜凤霞;文晓鹏;高国丽;陶金【作者单位】贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;贵州大学林学院,贵州贵阳550025;贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】Q785植物基因表达是植物分子生物学的研究热点，其需要一个高度保守、表达稳定的基因作为内参。
Actin基因和UBQ基因在核苷酸与氨基酸水平上都具有高度的保守性和同源性，并在各种组织中表达相对恒定，因而，常被作为研究其他基因的表达模式及调控机制的分子内标，消除不同样品在RNA产量、质量以及反转录效率上可能存在的差别，从而实现对不同样品中RNA的定量和数据归一化[1-2]。
火龙果属于仙人掌科三角柱属热带、亚热带水果，是多年生经济林木果树，其外形独特，耐脊、抗旱、嗜钙，病虫害少，产量高，营养丰富，具有很高的经济价值[3]。
火龙果抗逆性强，蕴含着较多的抗逆基因资源，抗旱基因资源尤其丰富，深入研究这些基因的表达模式及调控机制对于解析其高抗逆能力的分子机理具有重要意义。
但是在GenBank数据库中未能搜索到有关火龙果Actin和UBQ基因序列。
火龙果的分子生物学研究基础较为薄弱，迄今为止，火龙果内参基因的研究未见报道。
该研究从火龙果中克隆了Actin和UBQ基因片段并分析其序列，以期为开展火龙果其他重要功能基因的表达模式和调控机制的研究奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料供试材料为紫红龙(Hylocereus undatus Zihonglong)组培苗。
采集培养60 d后的紫红龙生根组培苗茎段，液氮速冻后置-80℃的超低温冰箱保存。
1.2 方法1.2.1 总RNA的提取与cDNA的合成用Trizol(天根生化科技有限公司，DP405)试剂提取保存的火龙果茎段总RNA，对提取的总RNA 进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测。
按照Quant cDNA第一链合成试剂盒(天根生化科技有限公司，KR103)说明书操作进行cDNA第一链的合成。
1.2.2 引物设计根据GenBank中已报道的植物Actin和UBQ基因序列，运用Premier 5.0软件结合DNAman分析软件及BLAST程序，设计了2对扩增保守区的引物。
Actin基因的引物为P1，5′-TCTGCTGAGCGAGAAAT-3′和P2，5′-AGCCACCACTAAGAACAAT-3′，其目的片段为302 bp；UBQ基因的引物为P3，5′-TGAATCATCCGACACCAT-3′和P4，5′-TCCTCTTCTTAGCACCACC-3′，其目的片段为192 bp。
引物合成由上海生工生物技术公司完成。
1.2.3 RT-PCR 扩增 Actin基因和UBQ基因PCR扩增体系都采用50 μL反应体系：cDNA模板5 μL，2×Master Mix 25 μL，Primer1为2.5 μL，Primer2为2.5μL，水为15 μL。
Actin基因扩增条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s；55℃退火30 s；72℃延伸60 s，35个循环，最后72℃延伸10 min。
UBQ基因扩增条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s；59℃退火30 s；72℃延伸90 s，40个循环；最后72℃延伸10 min。
1.2.4 阳性克隆的筛选与鉴定用多功能DNA回收试剂盒对目的基因片段进行回收纯化，并将纯化后的RT-PCR产物与pMD-18T载体连接构建重组质粒，转化感受态大肠杆菌DH5a，经琼脂糖LB平板(含Amp+、IPTG 和X-gal)培养后，筛选重组子进行插入片段检测。
序列测定由上海生工生物技术公司完成。
1.2.5 序列的生物信息学分析应用NCBI(http: //)中的ORFfinder程序进行开放阅读框(ORF)分析并将其推导为相应的氨基酸序列。
通过BLAST工具进行核酸序列相似性检索，应用DNAman进行氨基酸序列的比对及同源性分析。
2 结果与分析2.1 总RNA的提取琼脂糖凝胶电泳图和核酸定量检测显示，RNA电泳图谱带型清晰(图1)，28S rRNA的亮度约为18S rRNA亮度的2倍，OD值均在1.8～2.00 mg/L。
由此可见，RNA样品的完整性较好，无明显降解，可以用于进行后续试验。
图 1 火龙果总RNA琼脂糖凝胶的检测Fig.1 Detection of agarose gel eletrophoresis of total RNA in pitaya2.2 Actin基因与UBQ基因的RT-PCR扩增以总RNA反转录所得到的第一链cDNA为模板，分别进行Actin基因和UBQ基因RT-PCR扩增。
扩增产物经凝胶电泳检测发现，分别在约300 bp和200 bp处有1条特异条带，该序列与预测的目的片段大小相符(图2)，推测可能分别是Actin基因片断和UBQ基因片段。
注：M，DNA marker；1，Actin基因；2，UBQ基因。
Note: M,DNA marker; 1,Actin gene; 2,UBQ gene.图 2 火龙果Actin基因及UBQ基因的扩增Fig.2 Amplification of genes Actin and UBQ from pitaya2.3 阳性克隆的鉴定将回收纯化的目的片段连接到pMD-18T克隆载体上，转化E.coli.DH5a。
随机挑取白斑，分别用引物P1、P2和P3、P4进行菌落PCR检测(反应体系中未加菌落为阴性对照)，得到的扩增片段大小分别约为200 bp和300 bp(图3)，与RT-PCR结果一致，表明这些克隆为阳性克隆，可以进行测序。
注：M，DNA marker；1、5，阴性对照；2、3、4，UBQ基因；6、7、8，Actin基因。
Note: M,DNA marker; 1,5, negative control; 2,3,4, UBQ gene; 6,7,8,Actin gene.图 3 菌落PCR琼脂糖凝胶的检测Fig.3 Agarose gel eletrophoresis of colony PCR2.4 序列分析由图4测序结果分析，得到长度分别为302 bp编码100个氨基酸的序列，192bp编码63个氨基酸的序列。
将这些片段进行Blast比对，结果显示，长度为302 bp的序列与其他植物的Actin基因核苷酸序列的同源性均在78%～84%，氨基酸序列的同源性达88%～95%，因此推断，所克隆到的片段为Actin基因片断。
长度为192 bp的序列与其他植物的UBQ基因核苷酸序列的同源性均在88%～91%，氨基酸序列的同源性达95%～100%，推断出所克隆到的片段为UBQ基因片断。
将克隆得到的Actin基因和UBQ基因分别命名为HuACT，HuUBQ。
将得到的火龙果Actin基因和UBQ基因的氨基酸序列片断分别和其他6种植物Actin基因和UBQ基因的氨基酸序列进行多重比较(图5)，HuACT的保守氨基酸多达88个，而非保守氨基酸仅有12个。
由所克隆的HuUBQ基因的氨基酸全为保守氨基酸，这表明该试验克隆的片段为Actin基因和UBQ基因的高度保守区域。
由图6可见，HuACT与盐节木(HsACT)的同源性最高达96%，苜蓿(MtACT)次之为95%，与番木瓜(CpACT)、拟南芥(CpACT)、枇杷(CpACT)的同源性也高达94%，而与水稻(OsACT)同源性最低为93%。
HuUBQ与大豆(GmUBQ)、苜蓿(MtACT)、拟南芥(AtACT)、葡萄(VvACT)、甘蓝(BoACT)，水稻(OsACT)的同源性都为100%。
图 4 火龙果片段的核苷酸序列及推测的氨基酸序列Fig.4 The nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of fragment from pitaya注： Actin基因的来源和GenBank登录号，HuACT(火龙果，尚未上传)；HsACT(盐节木，AFC98748)；CpACT(番木瓜，AAX07755)；OsACT(水稻，EAY79170)；MtACT(苜蓿，ACD31684)；AtACT(拟南芥，NP-196543)；EjACT(枇杷，AFP43695)。
Note: The origins of Actin gene and the accession numbers in Genbank:HuACT (Hylocereus undatus); HsACT (Halocnemum strobilaceum,AFC98748); CpACT (Carica papaya,AAX07755); OsACT (Oryza sativa,EAY79170); MtACT (Medicago sativa, ACD31684); AtACT (Arabidopsis thaliana, NP-196543), EjACT (Eriobotrya japonica, AFP43695).注： UBQ基因的来源和Gen Bank登录号，HuUBQ(火龙果，尚未上传)；AtUBQ(拟南芥，NP-191784)；OsUBQ (水稻，NP-001054720)；GmUBQ(大豆，NP-001238483)；MtUBQ(苜蓿，XP-003613203)；BoUBQ(苷蓝，AFX60090)；VvUBQ(葡萄，XP-002266750)。
Note: The origins of UBQ gene and the accession numbers in Genbank, HuACT (Hylocereus undatus);AtUBQ (Arabidopsis thaliana, NP-191784); OsUBQ (Oryza sativa, NP-001054720); GmUBQ (Glycine max, NP-001238483); MtUBQ (Medicago sativa, XP-003613203); BoUBQ (Brassicaoler acea var.acephala AFX60090); VvUBQ (vitis vinifera, XP-002266750).图 5 火龙果氨基酸序列片段与其他植物基因的氨基酸序列多重比较Fig.5 Multi-comparison in amino acid sequence of UBQ gene between pitaya and other plants图 6 HuACT(A)和HuUBQ(B)与其他植物Actin基因的氨基酸序列同源性分析Fig.6 Amino acid sequence homology analysis of HuACTand HuUBQ(B) with gene Actin of other plants3 结论与讨论看家基因(House-keeping genes)，是指维持细胞最低限度功能所不可少的基因，如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。