ana检测方法
ANA检测
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ACR --ANA检测
100年前，保罗·艾尔利希首次提出“自身免疫”概念 60年前，ANA检测方法的诞生，临床免疫学的里程碑 ANA检测方法逐年更新，敏感性和特异性得以提高 2009年，将间接免疫荧光法（IIF）作为ANA检测的金标准 2014年，IIF法就已经被称为“参考方法” 2015年，Wener教授建议用特异性方法配合检测（ELISA 法或印迹法）
高滴度的自身抗体或ANAS的存 在预示着自身免疫性疾病的风险。 99% 以上的 SLE 患者在其病程的 某一阶段会表现为 ANAs 阳性。 最近一些研究发现，ANAs 和其 他一些自身抗体于 SLE 出现典型 临床症状 10 年之前即可被检测 到。
青少年 关节炎 狼疮
硬皮病
Sjögren’s 综合征
自身免疫性疾病
“5D”疾病
自身免疫性疾病研究背景
1854-1915年, Paul Ehrlich 用(“horror auto-toxicus”) 描述 自身免疫性疾病
1940年, Waaler 描述了一种 因子(之后发现是类风湿因子)
1948年, Hargraves et al. 发现红斑狼疮细胞, 巨噬细胞吞噬 变性细胞
蝶状红斑
网状青斑
光敏感
盘状狼疮伴脱发
硬腭溃疡
系统性红斑狼（SLE，Lupus） 临床诊断标准
1982年，美国 风湿学会提出 的分类标准
1997年，ACR 标准进行修改
2012年，最新 的 SLE 诊断标 准由 SLICC 工 作组所提出
多年来，SLE 的诊断主要围绕着一系列的临床症状和实验室指标。
Tonuttia E，Bassetti D，Piazza A，Visentini D，Poletto M， Bassetto F，Caciagli P，Villalta D，Tozzoli R，Bizzaro N.
抗核抗体谱ANA意义
抗核抗体谱ANA意义抗核抗体（ANA，Anti-nuclear antibodies）是一类自身抗体，可以针对人体细胞核内的多种蛋白质和核酸进行特异性结合。
ANA可以通过间接免疫荧光或酶联免疫吸附测定等方法检测出来，是自身免疫性疾病的重要标志物之一、抗核抗体谱ANA是指对抗核抗体组分进行分析，检测不同种类的抗核抗体，从而了解疾病的类型和严重程度。
抗核抗体谱ANA的检测结果可以分为两类，一类是核型抗体（特异性抗体），另一类是非核型抗体（非特异性抗体）。
核型抗体主要是针对特定的核抗原结构如双链DNA（dsDNA）、单链DNA（ssDNA）、核心蛋白（Histones）等，其特异性非常高。
而非核型抗体则是指那些针对核抗原之外的细胞内抗原产生的抗体，如抗核糖核蛋白（nRNP）、抗Sm抗体等。
抗核抗体谱ANA的意义在于可以帮助医生进行自身免疫性疾病的诊断和鉴别。
自身免疫性疾病是由于机体免疫系统对自身正常组织产生异常的免疫反应而导致的一类疾病。
抗核抗体的阳性结果提醒医生在疾病诊断中要考虑自身免疫性疾病的可能性。
抗核抗体谱ANA的阳性结果是一种非特异性标志，意味着机体的免疫系统存在一定的异常激活或炎症反应。
诊断自身免疫性疾病需要结合临床症状、体征以及其他实验室检测结果来综合判断。
抗核抗体与一些特定的自身免疫性疾病之间存在一定的相关性，如系统性红斑狼疮（SLE）与dsDNA抗体的关联性较高，系统性硬化症（SSc）与抗Scl-70抗体的关联性较高等。
但也必须考虑到抗核抗体阳性结果也可以出现在非自身免疫性疾病及一些感染性疾病中。
抗核抗体谱ANA的检测结果还可以提供疾病的严重程度和辅助治疗方案制定的参考。
一般来说，抗核抗体阳性的滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性越高。
抗核抗体谱ANA检测还可以帮助评估治疗效果和疾病活动性的监测。
例如，SLE患者治疗效果良好时，抗核抗体滴度会明显下降，疾病活动性较低时，抗核抗体滴度也较低。
ANA
【试剂盒规格】 96T/盒 【标本要求】 1.标本应视为有潜在的传染性。建议根据 NCCLS 的 M29 号文件 来采集标本。 2.以无菌静脉穿刺取血， 经新鲜沉降和冷藏获得的血清为标本。 不 得使用抗凝剂和防腐剂。 避免使用溶血、 脂血和细菌污染的血清。 3.标本在室温保存不得超过 8 小时。在 2-8C 保存不得超过 48 小 时。如长久保存应置于-20C 或更低。避免标本反复冻融。 【试验前准备】 1.浓缩洗涤液(10X)用双蒸水稀释成 1X(至 1000ml)。 未用完的放回 2-8°C。 2.血清标本和试剂盒在使用前应恢复至室温(20-25C)。 3.阳性对照、 校正品、 阴性对照和病人的血清样品用样本稀释液按 1:21 倍数稀释(即 10l 阳性对照/校正品/阴性对照/病人血清样 品加入 200l 样品稀释液中)并充分混匀。 【操作步骤】 1.加样：分别取稀释过的阴性对照、阳性对照品、校正品和血清样 品 100l 加入到对应的反应孔中；取 100l 样本稀释液加入到对 应孔中作为试剂空白对照； 2.温育：温度：室温(20-25C) 时间：60-65 分钟
O D 值 阴 性 ≤0.250
O D 值 校 正 ≥0.300
OD值 阴性 OD值 校正 ≤0.9
OБайду номын сангаас 值阳性 OD 值 校正 ≥1.25
O D 值 阳 性 ≥0.500
注：如不符合上述要求，认为本次试验无效应重复试验。
OD值标本 OD值校正 CF
(CF 值标于盒内附的不干胶标签上) 标本参考值 ≤0.90 0.91-1.09 ≥1.10
4.加入酶联物： 每孔中加入酶联物 100l。 5.温育：温度：室温(20-25C) 时间：30-35 分钟。 6.洗板：重复步骤 3 的操作进行洗板。 7.加入显色液(TMB)：每孔中加入 TMB 100l。 8.温育：温度：室温(20-25C) 时间：30-35 分钟。 9.加入终止液：每孔加入终止液 50l 以终止反应。 10.读数：在加入终止液 30 分钟内，将微孔板置于 450nm 波长下 读取每个孔的光密度值，以空白试剂作对照。 【结果判定】 1.质量控制 校正品、阳性对照、阴性对照的 OD 值应符合以下要求： 项目 阴性对照 校正品 阳性对照 2.结果计算 标本参考值= 参考值判断： 结果 阴性标本 可疑标本 阳性标本 【参考值】 正常人群 ANA 抗体呈阴性(标本参考值≤0.90)，每个实验室 应根据当地的实际情况建立自己的正常值参考范围。 【注意事项】 1.酶标板应平衡到室温后从铝箔袋中取出， 剩余的板条立即放回铝 箔袋中并封好(保留铝箔袋)。 2.试剂和样本的交叉污染会导致错误的结果。 3.避免不同批次的试剂混合使用。 【贮存】 试剂盒应在 2-8°C 下保存。 OD 值范围
抗核抗体(ANA)检测与临床应用
临床发病特点
发病率: 40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000 (美国)
患者寿命:4年/50%(1950); 15/80%(当前); 20岁诊断/35岁死亡几率1:6
SLE—各器官的表现
神经系统受累（30%） 皮肤（蝴蝶状皮疹, 盘状狼疮; 74%）)
浆膜炎（胸膜炎, 心包炎； 77%）) 狼疮肾炎 (51%）
HEp-2细胞/猴肝
HEp-2细胞
猴肝
SS-A抗原
RNA + SS-A (60 kDa) + Ro-52
RNA + SS-A (60 kDa)
hY-RNA
hY-RNA
Boire et al., 1995: - Ro-52抗体不与SS-A 抗原结合 - 纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52
SS-A(Ro-60), Ro-52, SS-B
ANA检测的临床意义
• ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊 断、病情判断和疗效观察的指标 • 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 • 在非结缔组织病中也可出现阳性；正常人中（特别是老年人）也可出 现阳性，但滴度低
目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。
抗Ro-52抗体
风湿性疾病中的阳性率
疾病 干燥综合症 系统性硬化症 肌炎 SLE MCTD RA n 88 81 26 210 21 165 抗Ro-52抗体阳性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5%
抗Ro-52抗体 在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性
Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009
抗核抗体检测的临床应用
三、ANA检测方法
ANA特异性自身抗体可采用多种免疫学方法检测，不同的检测方法具有 不同的临床应用优缺点。
ELISA具有高敏感性、定量及易自动化的优点，但需对每个自身抗体进 行逐项检测。
线性免疫印迹法(line immunoassay, LIA)具有高敏感性、易操作、易自动 化及一次实验操作可同时检测多种自身抗体的优点，但其检测结果为半 定量，某些自身抗体的特异性偏低。
二、ANA检测的临床应用范围
ANA作为AID重要的生物学标志，常见于SLE、干燥综合征(Sjögren′s syndrome，SS)、系统性硬化症(systemic sclerosis，SSc)、混合性结缔组织 病(mixed connective tissue disease，MCTD)及多发性肌炎(polymyositis， PM)/皮肌炎(dermatomyositis，DM)等系统性(非器官特异性)AID患者。
IIF-ANA检测结果判读及报告人员应有培训、考核及定期进行结果判读比 对。
采用ELISA等其他检测方法的ANA检测结果应包括检测结果的定量数值 和单位、参考区间及必要的临床建议。
ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果报告应包括检测方法、定性 结果(若为定量检测方法应包含定量数值和单位)及参考区间，同时应包括 必要的临床建议。
自身抗体检测实验室的ANA结果报告形式基于ANA的最新定义，将HEp2细胞胞浆荧光模型及细胞有丝分裂期荧光模型纳入ANA阳性结果。其报 告格式范例见表1。
五、ANA检测结果报告
六、临床意义及解读
IIF-ANA检测结果报告应包括：检测方法、定性结果(阳性/阴性)、荧光模 型、滴度及必要的临床建议。对于混合荧光模型，荧光模型的报告优先 级顺序为细胞核荧光模型、细胞浆荧光模型、细胞有丝分裂期荧光模型。 相同优先级的荧光模型，建议按滴度高低顺序依次报告。
自身免疫病的研究进展：ANA检测技术
自身免疫病的研究进展：ANA检测技术在自身免疫病的研究进展中，ANA检测技术起到了举足轻重的作用。
自身免疫病是一类免疫系统错误地攻击身体的正常组织的疾病，如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎等。
ANA检测是自身免疫病诊断的重要手段之一，它可以帮助医生发现和确诊这些疾病，从而及时采取治疗措施。
ANA是抗核抗体的简称，是一种针对细胞核成分的自身免疫抗体。
ANA检测是通过检测血液中的ANA抗体来进行的。
ANA抗体的存在提示身体的免疫系统可能出现了问题，可能正在攻击自身的组织。
ANA检测不仅可以帮助医生诊断自身免疫病，还可以帮助医生判断病情的严重程度和治疗的效果。
在实际应用中，ANA检测技术已经取得了显著的进展。
ANA检测技术的灵敏度和特异性越来越高，可以帮助医生更准确地诊断自身免疫病。
ANA检测技术的发展也使得检测时间越来越短，患者不需要长时间等待结果。
ANA检测技术的应用范围也在不断扩大，不仅可以用于诊断自身免疫病，还可以用于评估疾病的进展和治疗的效果。
让我举一个例子来说明ANA检测技术在实际应用中的重要性。
假设有一个女性患者出现了疲劳、关节疼痛和皮肤红斑等症状，医生怀疑她可能患有系统性红斑狼疮(SLE)。
为了确诊，医生对她进行了ANA检测。
结果显示，她的ANA抗体呈阳性。
这个结果提示她的身体可能正在攻击自身的组织，支持了医生对SLE的诊断。
根据这个结果，医生可以及时为她制定治疗方案，帮助她控制病情，提高生活质量。
重点和难点解析：在上述内容中，有几个重点细节需要特别关注。
ANA检测技术的灵敏度和特异性是诊断自身免疫病的关键。
ANA检测技术的发展对疾病的早期发现和治疗具有重要意义。
ANA检测技术的实际应用案例也凸显了其重要性。
下面我将对这些重点细节进行详细补充和说明。
ANA检测技术的灵敏度和特异性是诊断自身免疫病的关键。
灵敏度指的是检测技术能够准确识别出ANA抗体的能力，而特异性指的是检测技术能够排除其他非自身免疫疾病的ANA抗体。
ANA药液分析规范
ANA药液分析规范抗核抗体 (antinuclearantibodies，ANA)作为自身免疫病(autoimmune diseases，AID)重要的生物学标志，是临床应用中最广泛、最基础的一组自身抗体。
1957年Holborow等建立间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)检测ANA，对ANA检测的临床应用具有里程碑意义。
临床上ANA常见于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)等系统性(非器官特异性)AID患者，也可见于器官特异性AID患者，如自身免疫性肝病等。
除此之外，ANA还可出现于慢性感染性疾病、肿瘤及健康人群中。
检测ANA对AID的诊断、鉴别诊断、分型及疾病活动性监测等具有重要的临床意义。
ANA的定义由于细胞核是ANA靶抗原所在的最重要的结构部位，传统意义上的ANA指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。
随着ANA检测技术的改进，尤其是培养细胞抗原基质(如HEp-2细胞)的广泛应用，对ANA的认识已不仅局限于抗细胞核成分的自身抗体。
ANA 针对的靶抗原成分已由细胞核扩展到整个细胞成分，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞分裂周期蛋白等。
目前ANA定义是以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体总称。
ANA检测的临床应用范围ANA作为AID重要的生物学标志，常见于SLE、干燥综合征(Sjögren′s syndrome，SS)、系统性硬化症(systemic sclerosis，SSc)、混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease，MCTD)及多发性肌炎(polymyositis，PM)/皮肌炎(dermatomyositis，DM)等系统性(非器官特异性)AID患者。
同时，ANA可见于器官特异性AID患者，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲状腺炎等。
除此之外，ANA也可见于慢性感染性疾病、肿瘤及健康人群中。
临床免疫检验：抗核抗体检测
抗核抗体的检测方法
间接免疫荧光试验
ELISA
免疫印迹试验
间接免疫荧光试验
抗核抗体核型
均质型只能判断抗核抗体的有无，无法判断抗核抗体荧光图形
免疫印迹法
SDS-PAGE
分离
形成分子大小不同区带
电转移
PVDF膜或NC膜
加待检血清
抗ENA与相应抗原特异结合
抗人IgG·HRP
ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP
显色并判读结果
小
结
抗核抗体的检测
思考题
抗核抗体的检测可用于哪些疾病的诊断呢？
感谢观看
抗核抗体检测
系统性红斑狼疮
系统性红斑狼疮是一种累及多系统、多器官并有多种自身抗体出现的自身免疫性疾病 遗传、感染、环境、性激素、药物等综合因素所致的免疫紊乱导致了该病的发生
免疫复合物介导的血管炎是其基本病理改变。临床变现差异较大，患者可出现皮肤黏膜 关节肌肉、浆膜、肾脏、心脏、肺脏、消化系统、神经系统、血液系统等多脏器受累 除临床表现外，血液中自身抗体谱、免疫球蛋白、补体亦有助于该病的诊断
抗核抗体（ANA）
是以真核细胞的核成分为靶抗原的自 身抗体的总称；在某些因素作用下改 变细胞核某些成分性质，激发机体产
生许多抗不同核成分的抗体
临床意义
ANA主要是IgG 也有IgM、IgA、IgD和IgE
01
04
将检出ANA作为 AID存在的依据
ANA主要 存在于血清中
02
03
ANA无器官特异性和 种属特异性
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ana检测方法
ANA（抗核抗体）是一种自身免疫性疾病的重要指标，其检测方法对于诊断和治疗自身免疫性疾病具有重要意义。
目前常见的ANA检测方法包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、间接免疫吸附法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
首先，间接免疫荧光法是目前最常用的ANA检测方法之一。
它通过检测患者血清中是否存在抗核抗体，从而判断是否存在自身免疫性疾病。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床上常用的首选方法之一。
其次，酶联免疫吸附试验（ELISA）也是一种常用的ANA检测方法。
该方法通过将患者血清中的抗核抗体与特定的酶标记抗体结合，然后用底物显色测定酶的活性，从而判断抗体的存在与否。
ELISA方法操作简便，且可以同时进行多个样本的检测，因此在临床上也得到了广泛的应用。
另外，间接免疫吸附法也是一种常见的ANA检测方法。
该方法通过将患者血清中的抗核抗体与抗人球蛋白抗体结合，然后用酶标记的抗人球蛋白抗体检测抗体的存在与否。
该方法操作简单，结果准确可靠，适用于大规模的样本检测。
除了上述方法外，还有一些新型的ANA检测方法正在不断发展和完善，如流式细胞术、固相化学发光法等。
这些新方法在提高检测灵敏度、减少假阳性率等方面具有一定的优势，但仍需要进一步的临床验证和应用。
综上所述，目前常见的ANA检测方法包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、间接免疫吸附法等，它们各有优势和局限性。
在临床应用中，应根据具体情况选择合适的检测方法，以确保诊断的准确性和可靠性。
随着科学技术的不断进步，相信会有更多更准确的ANA检测方法出现，为自身免疫性疾病的诊断和治疗提供更好的帮助。