雄激素受体与核受体辅助抑制因子的关系
激素信号转导的分子机理
激素信号转导的分子机理激素是一类化学物质，它们能够在体内引起生物某些特定功能的变化，进而调节正常生理活动。
激素信号转导是指激素分子在细胞内与其相应的受体结合，触发一系列的生物化学反应、从而实现细胞的功能调控的过程。
激素信号转导机制广泛存在于生物的生命过程中，尤其在调节人体内分泌的作用中起着重要的作用。
激素信号转导的分子机理涉及多个生物大分子，包括激素分子、受体分子、蛋白激酶分子等等。
下面，我们从分子层面来分析激素信号转导机制的分子机理。
一、激素分子的结构和功能激素分子是指那些能够在体内诱导反应的化学性质较高、分子量较小的化合物，其结构多样，而不同的激素分子会和不同的激素受体结合，从而启动不同的生理反应。
举例来说，肾上腺素是一种儿茶酚胺类激素分子，其分子结构中含有羟基及两个芳环，能与α或β肾上腺素受体结合，起到心血管、血压等多种生理功能的调节作用。
而雌激素则是一种类固醇激素分子，其分子结构中含有苯环和甾体结构，能够与细胞核内的雌激素受体结合，调节人体内的生殖、发育等过程。
二、受体的结构和功能受体是指识别特定激素分子的细胞膜蛋白或细胞核内的蛋白质。
不同激素的受体结构和分布位置不同，但其基本结构都由跨膜蛋白、内核相连的蛋白和细胞外及细胞内相连的区域组成。
以胰岛素受体为例，其结构由α和β两个亚基组成，其中α亚基有内核区域，而β亚基跨越细胞膜，有细胞外、跨膜及细胞内三个区域。
胰岛素分子在进入细胞后，与胰岛素受体上的胰岛素结合位点发生结合，激活受体上的酪氨酸激酶领域，然后酪氨酸激酶领域会自磷酸化，进而激活下游信号通路进行反应和转导。
三、酶的作用和分类酶是一类能够催化生物化学反应的蛋白质，是激素信号转导中的一个重要部分。
激素信号转导的传递过程中，酶的作用是将受体硫化蛋白酶等信号传递蛋白质（激酶）的磷酸化位点磷酸化。
常见的酶有蛋白激酶、酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶等。
蛋白激酶是一类能够磷酸化目标蛋白的酶，作用广泛且复杂。
2024版前列腺癌的内分泌治疗ppt课件
其他并发症
晚期前列腺癌患者常伴有骨质疏松， 内分泌治疗可能加重这一状况，需 补充钙剂和维生素D，必要时使用
双膦酸盐类药物
骨质疏松和骨折
内分泌治疗可能导致性功能减退， 影响患者生活质量，可给予相应的 心理支持和药物治疗
性功能减退
如潮热、乳房胀痛、肝功能损害等， 需根据具体情况采取相应的处理措 施
CHAPTER 04
晚期或转移性前列腺癌内分泌治疗 策略
晚期或转移性前列腺癌特点分析
晚期或转移性前列腺癌通常已经失去了手术根治的机会
前列腺癌细胞对雄激素的依赖性较强，内分泌治疗可通过降低体内雄激素水平来抑 制肿瘤生长
晚期前列腺癌患者常伴有骨转移，导致骨痛、病理性骨折等并发症，严重影响生活 质量
一线内分泌治疗方案选择及适应证
促黄体生成素释 放激素类似物
这类药物可以模拟促黄体生 成素释放激素的作用，抑制 垂体分泌促性腺激素，从而 降低睾丸产生雄激素的能力。 常用的药物有戈舍瑞林、亮 丙瑞林等。
雌激素类药物
雌激素可以抑制垂体分泌促 性腺激素，进而降低睾丸产 生雄激素的能力。但长期使 用雌激素会增加心血管疾病 和血栓形成的风险，因此已 较少用于前列腺癌的内分泌 治疗。
主要目的是缩小肿瘤体积，降低手术难度和并发症风险。适应 证包括局部进展期前列腺癌、高危前列腺癌等。常用药物包括 促黄体生成素释放激素类似物（LHRH-A）和抗雄激素药物。
根治性手术后辅助内分泌治疗
主要目的是减少或延缓术后复发和转移。适应证包括术后病理 切缘阳性、精囊侵犯、高危因素等。常用方案包括单一抗雄激 素治疗、LHRH-A联合抗雄激素治疗等。
去势治疗
包括手术去势（双侧睾丸切除术）和 药物去势（黄体生成素释放激素类似 物，如戈舍瑞林等），适用于所有晚 期或转移性前列腺癌患者
去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究
去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究程金科;左勇【摘要】SUMO, an ubiquitin-like protein, can covalently conjugate proteins and plays a role in the regulation of target protein functions and localizations. Similar to ubiquitin, SUMO modification is a dynamic process catalyzed by El, E2? and E3 and reversed by Sentrin/SUMO-specific proteases ( SENPs) . To date, 6 SENP members have been defined in human cells, each of which has different cell localization and target specificity. However, the physiologic functions of SENPs are not fully understood. By analysis of SENPs knock-out mice, we find that SENP1 regulates hypoxia-HIFla signaling or androgen receptor ( AR) signaling through positive feedback loop, and plays an important role in HIFlot or AR-involved physiologic and pathologic processes. We also find that SENP2 is essential for suppression of polycomb group protein-mediated gene silencing during heart development. These results reveal the critical roles of SENPs in the regulation of targets-involved signaling,%小泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰是一种新发现的类泛素蛋白质修饰形式.SUMO修饰由活化酶E1、接合酶E2和连接酶E3等三个酶相继作用来完成.同时它又是一个动态的、可逆的过程,其去SUMO修饰的过程则是由SUMO特异性蛋白酶(SENP)家族来介导.在蛋白质SUMO修饰的动态过程中,SENP介导的去SUMO过程是决定其靶蛋白质SUMO修饰水平的一个主要因素,同时也是SUMOylation被调节的一个主要环节.SENP家族包括SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7等成员,每个成员具有不同的细胞内定位和底物特异性.虽然对其生化特性进行了大量研究,但SENP在参与的细胞生命活动过程中的作用并未十分了解.我们通过分析SENP1和SENP2基因敲除小鼠的表型,发现了SENP1通过正反馈机制调控缺氧-HIF1α和雄激素受体所介导的信号通路,从而在HIF1α与AR所参与的生理病理过程中发挥了重要作用.同时,我们发现SENP2通过调控PeG的活性,参与心脏的发育过程.这些结果表明SENP在调控其靶蛋白所参与的信号通路中发挥了重要作用.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)009【总页数】5页(P1117-1121)【关键词】小泛素样修饰蛋白;蛋白质修饰;SUMO特异性蛋白酶【作者】程金科;左勇【作者单位】上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025;上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025【正文语种】中文【中图分类】Q55小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier protein，SUMO)是一种类泛素蛋白，它通过与底物蛋白共价连接来调节靶蛋白的定位和与其他生物大分子的相互作用等活性。
孕激素受体
孕激素受体综述孕激索在女性生殖系统中起着重要的作用,这些生理作用主要是通过与孕激索受体结合表达的。
孕激索受体(progesterone receptor , PR)是核受体超家族成员之一。
主要有两种亚型PRA和PRB。
孕激素受体在介导与调节卵巢、子宫和乳腺的功能及生殖活动中起着关键的作用。
一、孕激素受体的结构和功能。
1. PR的结构孕激素受体(PR)按照氨基酸序列从N- -末端到C- -末端可分为A、B、C. D、E、F6个区域(图1)。
当有激囊等配体存在时，与E区的激索或配体结合部位(ligand bindingdomain,LBD)结合，这个区是结构最大功能最复杂的区域;当无配体存在时, D区即铰链区,可结合热体克蛋白(heat shock protein 90 . HSP90) .从而阻止了各受体之间形成二聚体。
C区是受体与DNA结合的区域(DNA binding domain , DBD) ,能与基因调控区的特定DNA序列结合。
A/ B区为高度可变区,是受体与抗体结合的部位。
F区则起调节转录激活的作用。
2. PR的亚型与功能PR的亚型与功能PR主要包括2种亚型PRA和PRB。
在多数情况下, PRB转录活性较强，而PRA则对PRB的转录活性有抑制作用,同时PRA可使孕激素拮抗剂产生抗雌激索样作用，而PRB则无此作用。
PRA和PRB的不同功能是由其结构的差别引起的:特异性反式激活作用决定簇AF1、AF2、AF3和ID可介导孕激素受体的调节,如上图AF1. AF3和ID位于A/B区, AF2位于E区;AF1、AF2和AF3均可单独激活转录.并对启动子和特异细胞起增效作用:AF1和AF2是PRA和PRB所共有的.而AF3是PRB特有的,位于PRB的上游区;ID是两者共有的, 却只在PRA.上起作用,能抑制AF1、AF2、ER ,但不能抑制AF3的功能,另外ID有利于PRB与辅助因子(SMRT)结合,而PRA不能有效地募集辅助激动子,故PRB活化转录作用强于PRA;PRA不仅活化转录作用弱,而且还可抑制PRB的功能,并可通过非PR结合的磷酸化途径抑制雌激素受体,雄激素受体,糖、盐皮质激索受体介导的转录作用。
生理学内分泌ppt课件
域、激活结构域
❖ 激素-核受体 激素结合结构域受体分子构象发生 改 变 解 除 了 某 种 蛋 白 质 对 DNA结合结构域的掩
盖 作 用 受 体 与 DNA结合 调控转录过程
生成新的mRNA 诱导蛋白质合成
引起相
应的生理效应
❖
基 因 表 达 学 说
三.激素作用的一般特征:
❖ (一)相对特异性: ❖ (二) :信息传递作用 ❖ (三) 高效能生物放大作用（高效性）: ❖ (四) 激素间的相互作用:
❖ 侏儒症 ( dwarfsm ) : 幼年时期GH 缺乏. 则生长发育停滞, 身材 小(智力正常)
❖ 巨人症(giantism) :幼年时期GH过多 ❖ 肢端肥大症(acromegaly):成年后GH过多 ❖ 作用机理: ❖ GH→肝分泌生长介素（胰岛素样生长因子）→蛋白质合成加速
→骨、软骨、肌肉等组织生长↑（对脑组织的生长发育无影响）
（vasoppressin，VP）
❖ 作用: ❖ （1）增加肾远曲小管和集合管对水的通透
性，使水的重吸收增加，尿量减少。 ❖ （2）收缩血管，但正常时其作用较弱。
2. 产素（oxytocin，OXT）
❖ 1）.OXT的作用：OXT具有刺激乳腺和子宫的双重作用，以刺 ❖ 激乳腺的作用为主。OXT是通过IP3 /DG第二信使模式发挥作 ❖ 用的。 ❖ (1)对乳腺的作用：使乳腺泡和导管肌上皮收缩，乳汁排出。 ❖ OXT还可维持乳腺继续泌乳，不致萎缩。 ❖ (2)对子宫的作用：对妊娠子宫有强烈收缩作用;对非孕子宫 ❖ 的收缩作用较小,但利于精子的运行。 ❖ 2）.OXT的分泌调节： ❖ (1)吸吮乳头引起的N-体液反射(射乳反射)： ❖ (2)分娩时产道压迫引起的N-体液反射：
细胞内受体的三个结构
细胞内受体的三个结构
细胞内受体是一类位于细胞内的蛋白质结构，它们能够与细胞外的化合物（如激素、神经递质等）结合，并通过一系列的信号转导路径影响细胞的生理和代谢活动。
目前已经发现了多种不同类型的细胞内受体，其中最重要的包括以下三个结构：
1. 核受体：核受体主要位于细胞核内，其结构包括一个DNA结合域和一个活化域。
当激素与核受体结合时，活化域会启动一系列的基因转录和翻译，从而影响细胞的基因表达和蛋白质合成。
常见的核受体包括雌激素受体、雄激素受体、甲状腺激素受体等。
2. 酪氨酸激酶受体：酪氨酸激酶受体位于细胞膜上，其结构包括一个外部的配体识别域和一个内部的酪氨酸激酶活性区。
当配体与受体结合时，激活酪氨酸激酶，进而触发一系列的下游信号转导通路，包括PI3K/Akt、MAPK等。
典型的酪氨酸激酶受体包括肝细胞生长因子受体、表皮生长因子受体等。
3. G蛋白偶联受体：G蛋白偶联受体也位于细胞膜上，其结构包括一个外部的配体识别域和一个内部的G蛋白结合区。
当配体与受体结合时，激活G蛋白，从而启动下游的二级信使系统，包括cAMP、IP3、Ca2+等。
常见的G蛋白偶联受体包括β肾上腺素受体、胆碱能受体等。
- 1 -。
组蛋白乙酰化的研究进展_童汪霞
肿瘤基础与临床 2008年 12月第 21 卷第 6期
是非常 重要 的。用 荧光 素酶 测定, 精氨 酸 替代 L ys378, 就减少了 GAL 4-Sm ad3c的转 录活性。这 些结果 均表明, p300 /CBP 乙 酰 化 Sm ad3 可 能 调 节 其 转 录 活性 [ 3] 。 1. 3 A CTR ACTR 是由 L ou ie等 [ 4] 发现的一个具有 HAT 活性的核受体共激活子。它有多 个与核受体相 互作用 的功 能 域, 并 能 独立 的 分 别与 p300 /CBP 和 PCAF 相互作用, 增强核受体的转录激活功能。ACTR 既可乙酰化游离组蛋白 H 2B、H 3和 H 4, 也可乙酰化核 小体中的 H 3和 H 4。它与上述的 HAT 无同源性, 是一 种新的 HAT。 1. 4 Rtt109-Vps75复合物 Rtt109是基本的 HAT, 主 要在芽酵母中负责 H 3-K 56的乙酰化。组蛋白 H 3上 的赖氨酸 56( H 3-K56) 的乙酰化发生 在 DNA 合成期 ( S期 ), 而在细胞周期的 G2 /M 期则消失。 R tt109 和 Vps75形成一种复合 物, 来乙酰 化 H 3 /H 4 /H 2A /H 2B 核心组蛋白中的 H 3, 而对核小体上的 H 3却无效。重 组体和天然的 Rtt109-Vps75复合物均显示对于核小体 H 3并无可 检出活 性, 故 可推 测在 细胞 周期 的 G2 /M 期, R tt109-Vps75复合物并不能乙酰化核小体 H 3, 而 H 3-K56的乙酰化过程只是部分由其介导。实验证明, Rtt109-Vps75复合物当 H 3 积聚在核小体时显示无法 检测出活性, 在有 活性的基因中能检测到 H 3-K56 的 乙酰化, 故 H 3-K 56乙酰化定位于活性基因上, 可能反 应了 S期这种 H 3的修饰形态沉积于染色质上。换句 话说, 这种修饰也可能包括在转录过程中, 用新合成的 乙酰化 H 3在赖氨酸 56上替换受损的组蛋白 [ 5] 。
苯丙酸诺龙的生物学效应？苯丙酸诺龙为为17β-羟基雌甾-4-烯-3-酮-3-苯丙酸酯
苯丙酸诺龙的生物学效应？苯丙酸诺龙为为17β-羟基雌甾-4-烯-3-酮-3-苯丙酸酯苯丙酸诺龙的生物学效应？苯丙酸诺龙为为17β-羟基雌甾-4-烯-3-酮-3-苯丙酸酯，是一种蛋白同化激素类药物，既能增加从氨基酸合成蛋白质，又能抑制氨基酸分解生成尿素，并有有使钙磷蓄积的作用。
能促进机体组织形成过程，逆转分解代谢或组织消耗过程，纠正负氮平衡的功能。
其蛋白同化作用为丙酸睾酮的12倍，而雄性化作用仅为丙酸睾酮的1/2。
其通过与雄激素受体结合，使受体活化变构，解离与受体结合在一起的辅助抑制因子，募集多集多种辅助激活因子，与其他基础转录因子及聚合酶等共同组成活化转录复合物，与重塑染色体上相应的雄激素反应元件结合，通过启动子与增强子启动靶基因的活化转录翻译，从而发挥其生物学效应。
学术术语来源---苯丙酸诺龙对烫伤模型大鼠雄激素受体介导靶基因转录调控的影响文章亮点：实验特点在于以热水制成20%体表面积深Ⅱ度烫伤大鼠模型后，后肢肌肉注射苯丙酸诺龙，证实在不同组织不同生理病理条件下苯丙酸诺龙对类固醇受体辅助活化因子1、c-myc、胰岛素样生长因子1基因表达的作用是不同的。
关键词：实验动物；组织构建实验模型；苯丙酸诺龙；烫伤；类固醇受体辅助活化因子1；c-myc；胰岛素样生长因子1主题词：苯丙酸诺龙；肝；性腺；受体，类固醇摘要背景：中重度烧创伤一直是临床全身治疗的难点，与创面局部处理并重，极大影响治疗预后。
同化激素在烧伤动物模型与临床患者的使用治疗中取得安全良好效果。
同化激素的应用虽受运动兴奋剂管理的限制，但其雄激素受体与核受体辅助调节因子仍是近年来基因调控机制研究的热门新兴领域。
目的：探索苯丙酸诺龙对烫伤大鼠体内雄激素受体介导靶基因转录调控的影响。
方法：将36只大鼠随机分为苯丙酸诺龙组、模型组与对照组。
苯丙酸诺龙组和模型组大鼠以热水制成20%体表面积深Ⅱ度烫伤大鼠模型后2 d，分别后肢肌肉注射苯丙酸诺龙和生理盐水，隔日1次，连续21 d。
内分泌系统教材教学课件
03 下丘脑-垂体-靶腺轴调节
下丘脑-垂体结构功能联系
下丘脑通过分泌多种激素调节垂体的功能，如促甲状腺激素释放激素 （TRH）刺激垂体分泌促甲状腺激素（TSH）。
垂体分泌的激素可作用于下丘脑，形成反馈调节机制，如TSH可负反馈 调节TRH的分泌。
下丘脑与垂体之间存在丰富的血管联系，确保激素的快速传递和调节。
激素是由内分泌腺或内分泌细胞分泌 的高效生物活性物质，通过血液运输 到靶器官或靶细胞，调节其生理活动 。
激素分类
根据化学性质，激素可分为胺类、肽 与蛋白质类、脂类三大类。
激素作用机制及受体介导
激素作用机制
激素通过与靶细胞上的特异性受体结合，触发细胞内的信号转导途径，从而调节 靶细胞的生理功能。
受体介导
01
降糖药物使用注意
避免低血糖反应，定期监测血糖水平，调整药物剂量。
02
甲状腺激素类药物使用注意
过量使用可能导致甲状腺功能亢进症状，需定期监测甲状腺功能。
03
肾上腺皮质激素类药物使用注意
长期大量使用可能导致库欣综合征、感染等副作用，需严格掌握用药指
征和剂量。
07 预防保健措施及生活调整 建议
合理膳食结构对内分泌健康影响
06 治疗原则与药物选择策略
针对不同类型内分泌疾病治疗原则
糖尿病
控制血糖水平，预防并发症。治疗原则包括饮食控制、运动疗法、 口服降糖药物和胰岛素治疗。
甲状腺疾病
甲状腺功能亢进症需抑制甲状腺激素合成和释放，甲状腺功能减退 症则需补充甲状腺激素。
肾上腺疾病
根据疾病类型，采取手术、药物或放射治疗，调节肾上腺激素水平。
甲状腺
位于颈部前方，分泌甲状腺激素和 三碘甲状腺原氨酸，调节机体的代 谢和生长发育。
雄激素受体与去势抵抗性前列腺癌关系的研究进展
AR 基因扩增可能是 CRPC 最常见的基因改变，这一 变化在超过 50% 的 CRPC 病例中可观察到 ， [4-5] 而在未经 治 疗 的 前 列 腺 癌 标 本 中 则 罕 见 ， [6-7] 提 示 AR 的 扩 增 是 对 ADT 的反应。AR 的过表达亦常见于 CRPC 阶段的肿瘤上 皮细胞，而原发肿瘤和转移灶中 AR 信号丢失更常见 。 [8-9] 去势治疗虽然抑制了雄激素生成，但雄激素并不能完全消 失，机体尚存在低水平的雄激素，AR 扩增使机体对这些低 水平激素敏感，AR 的过表达则帮助形成 CRPC[10]。AR 基
最常见的 AR 基因突变是第一代 AR 拮抗剂氟他胺诱导 的 T877A 突变。在氨基端的 877 位点的突变使苏氨酸被丙氨 酸替代，从而改变了配体的特异性。在 ADT 时携带该突变的 前列腺癌细胞较不存在该突变的细胞处于生存优势地位 。 [22] Marcelli 等 [16] 曾检测该突变，在 99 例仅接受前列腺癌切 除术治疗的患者中均未发现，而 38 例经雄激素治疗的转移 性前列腺癌患者中检测到 8 例。第一代 AR 拮抗剂治疗后产 生的突变还包括 W742C 和 H875Y，但降低配体特异性的具 体方式有所不同 。 [23-25]
去 势 抵 抗 性 前 列 腺 癌 (CRPC) 是 雄 激 素 剥 夺 治 疗 (ADT) 后晚期前列腺癌终极阶段。雄激素受体 (AR) 是前 列腺癌发生发展的重要因素，即使在 CRPC 阶段，AR 途 径信号的激活仍然起着重要作用，其可能的机制有受体基因 的扩增或过表达、基因突变、结构性受体改变及剪接变异体 等。本文对 CRPC 期 AR 的主要改变综述如下。
1 AR 概述
AR 是核受体超家族的一员，属于类固醇受体，是一种 配体依赖型的反式转录调节蛋白，是雄激素作用的中介物 质。人类的 AR 基因全长 90 kb，位于 Xq 11-12，开放读 码框为 2 757 bp，分子质量约 110 kD，共编码 919 个氨基 酸。AR 包含 N 端域 (N-terminal domain, NTD ), DNA 结合域 C（DNA-binding domain, DBD），铰链区以及 配体结合域 (ligand-binding domain, LBD) 等 4 个结构 域，转录活性包含于 NTD[1]。AR 基因包含 8 个外显子和 7 个内含子。当细胞中没有雄激素存在时，AR 表现为与热休 克蛋白 90 相结合的状态，存在于细胞质。雄激素进入细胞 使得 AR 的 LBD 结构域结合睾酮和双氢睾酮，与热休克蛋 白 90 解离，形成同源二聚体，铰链区的核定位信号（nuclear localization signal，NLS）由于构象发生改变而暴露，介 导 AR 进入细胞核。DNA 受体位点与同源二聚体结合，在 RNA 聚合酶Ⅱ、转录因子、AR 共调节因子等的作用下形 成转录复合物，对靶基因的转录起到调节的作用 [2]。此位 点被称为雄激素反应元件 (ARE) 或雄激素受体互补核糖核 酸，同时前列腺上皮细胞中，AR 通过调节 NKX3.1、FOX 家 族 转 录 因 子、IGFIR、UBE2C、UGT2B15、KLK3、 TMPRSS2、FKBPS 等基因的表达，控制正常前列腺及前 列腺癌生长和进展时细胞的生长、分化功能 [3]。
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© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net①雄激素受体与核受体辅助抑制因子的关系
廖国庆3,汤恢焕,吕新生
(中南大学湘雅医院外科,长沙410008)
[摘要] 目的:探讨雄激素受体(AR)与核受体辅助抑制因子(SMRT)是否能相互作用及其作用部位。方法:重组构建AR,SMRT基因或其基因片段的质粒,体外转录,合成35S标记融合蛋白,采用转染试验及哺乳动物细胞双杂
交实验(transienttransfection,mammaliantwo2hybridtest),GST沉淀试验(GSTpull2downassay),间接免疫荧光观察(indirectimmunofluorescencestaining)
的方法,观察AR与SMRT的关系。结果:AR具有内在的转录抑制活性,可与
SMRT直接作用,其作用部位:在AR分子上位于配体结合区(LBD),而DNA结合区能增强这种作用;在SMRT分子上则位于羧基端核受体作用区(IDs),在这个区域的LXXXIXXXI/L功能基团突变后将会影响AR与SMRT的结合。结论:AR通过其LBD区与SMRT分子中的ID2相互作用。[关键词] 受体; 雄激素; SMRT; 相互作用[中图分类号] Q781 [文献标识码] A [文章编号] 167227347(2004)0220157206
AndrogenreceptorandSMRTLIAOGuo2qing3,TANGHui2huan,LU・・Xin2sheng(DepartmentofSurgery,XiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410008,China)
Abstract: Objective Toexploretheinteractionbetweenandrogenreceptor(AR)andsilencingmediatorforretinoidandthyroidhormonereceptor(SMRT)andtheirinteractionsite.Methods WerecombinedandconstructedAR,SMRTgeneandgenefragments,invitrotranslated35SfusionproteinstoinvestigatetherelationshipbetweenARandSMRTusingtransienttransfection,mammaliantwo2hy2bridtest,GSTpull2downassay,andindirectimmunofluorescencestaining.Results ARpossessedanintrinsictranscriptionalrepressionactivityandARinteracteddirectlywithSMRT.Oneinteractivesur2faceonARwasmappedtotheligand2bindingdomain(LBD),andthepresenceofDNAbindingdomainenhancedthisinteraction.ThebindingsurfaceonSMRTwasmappedtothecarboxyl2terminalnuclearreceptorinteractingdomain(ID),andmutationoftheLXXXIXXXI/Lcorepressormotifwithinthisdo2maininterferredwiththeinteraction.Conclusion LBDdomainontheARcaninteractwithID2motifontheSMRT.Keywords: receptor; androgen; SMRT; interaction[JCentSouthUniv(MedSci),2004,29(2):0157206]
AR(androgenreceptor)是核受体的成员之一,它不但与男性成熟有关,而且在前列腺癌进展中有重要作用[1]。SMRT(silencingmediatorforretinoidandthyroidhormonereceptor)是核受体辅助抑制因子,目前大量研究结果表明,SMRT对许多核受体的活性,如ER,PR,等具有抑制作用,对平衡体内激素的消涨具有重要作用[2,3]。但AR与SMRT的关系如何,目前研究不多。本研究旨在探讨AR能否与SMRT作用及其作用部位。1 材料与方法1.1 质粒和试剂 ARcDNA,Gal4DBD与AR的融合基因片段(G42ARA/B,G42ARDE,G42AR)分别由Dr.Chang(Rochester大学医学中心,Rochester,NY)和
Dr.LirimShemshedini(Toledo大学,Toledo,Ohio)惠赠。
G4s2AR,G42AR是由本实验室构建,用全长人类ARcDNA插入到pCMX2GalXho1和Asp718位点之间,PCR扩增,由此构建1～500,1～660,501～660,501～919,和661～919AR各片段,并插入到pCMX2HA载体中,构建重组新的AR及AR片段质粒。人类SMRTe
[4]
751①收稿日期:2003211220 作者简介:廖国庆(19622),男,湖南衡东人,博士,副教授,主要从事肿瘤外科的基础和临床研究。3通讯作者,E2mail:liaoguoqing@medmail.com.cn
中南大学学报(医学版)JCentSouthUniv(MedSci)
2004,29(2
)© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net及GST2cSMRT,GST2SMRT2ID1和GST2SMRT2ID2基因是作者在美国麻州大学的实验室克隆并已报道[5]。用定向位点突变方法进行GST2SMRTID1和ID2点突变。用于点突变的寡核甘酸序列:ID1mt5′2GCA2CATCAGTGAGGCCGCCACACAGGACTACACC23′和5′2GGT2GTAGTCCTGTGGCGGCCTCACTGATGTGC23′;ID2mt5′CATGGGGCTGGAGGCCGCAGCTAGAAAGGCACTCATG23′和5′2CATGAGTGCCTTTCTAGCTGCGGCCTCCAGCCCCATG23′。雄激素激动剂DHT(dihydrotestosterone)和雄激素拮抗剂flutamide(F)购于Sigma公司。人肾293细胞购于ATCC公司。1.2 转染试验及哺乳动物细胞双杂交实验 转染前一天,人肾293细胞种植在122孔的培养皿中(10000细胞/孔)[10%CSFBS(Gibco)无酚红DMEM]。混合AR表达载体,内对照载体pCMX2βGal,luceferase报告基因,以及空载体pGEM(平衡),体积为30μl,并加入1倍体积的0.5molCaCl2和2倍体积的2×BBS[50mmolN,N2bis(22hydrox2yethyl)222amminoethanesulfomicacid(BES;Cal2biochem),280mmolNaCl,1.5mmolNa2HPO4,pH6.95]。室温下静置10min后;加入到培养细胞中;5%CO2培养箱培养12h,室温下磷酸缓冲液(PBS)洗2次,更换新的培养基,用或不用配体处理,继续培养24～48h后,进行luciferase和β2galactosidase测定[6]。luciferase活性用MLX微量滴定板加入100μl测试液(100mmolKPO4,5mmolATP,10mmolMgCl2)和100μlluciferase底物溶液(10mmolD2luciferin溶于100mmolKPO4,pH7.8)。luciferase的活性用β2galactosidase活性来校正。1.3 GST沉淀试验 5μgGST融合蛋白与5μl体外合成并用35S2标记的AR蛋白混合,振动,在4℃孵育过夜(孵育缓冲液20mmolHEPES,pH7.7,75mmolKCl,0.1mmolEDTA,2.5mmolMgCl2,0.05%NonidetP240,1mmoldithiothreitol,和1μg/ml小牛血清蛋白),然后用孵育液洗5遍,3000r/min离心收集沉淀珠子,再用SDS样本缓冲液洗出结合之蛋白,SDS2SPAG电泳,放射自显影,观察结果。1.4 间接免疫荧光观察 将Hela细胞种植于有coverslips122孔培养皿中,24h后进行转染,转染全长人类SMRT或带有HA2标记物的全长AR或AR片段。SMRT和AR用抗2SMRT的鼠抗单克隆抗体(Grp5,GeneTex)和抗2HA的兔抗多克隆抗体(Medical&BiologicalLab)孵育,然后与结合有Flu2orescein(绿色)或rhodamine(红色)荧光物的第2抗抗体孵育。细胞核用DAPI染色。免疫染色方法同文献[7]。简而言之,用PBS洗细胞2次,用methanol/accetone(1:1)在冰上固定1min,然后用1抗体和2抗体孵育,而细胞核用DAPI(4′,62diamidi2no222phenylindoledihydrochloridehydrate)(Sigma)染色,prolongantifade试剂盒(分子探针)封片,倒置荧光显微镜(Axiovert200,Zeiss)观察,其图象用CCD
照相机(Axiocam)和Axiovision软件(Zeiss)处理和记录。
2 结 果2.1 AR与SMRT的相互作用 G4及G4s融合蛋白分子构件示意图如图1A所示。G42AR融合蛋白调节Gal4依赖的MH1002tk2luciferase报告基因的能力如图1B所示,G4s2AR和G42AR显示有5.2和3.5倍的抑制作用,而G42ARA/B表现出强烈的活性;而G42ARDE和G42ARE也显示出2.5和4倍的抑制作用。根据AR可抑制Gal42DBD基础活性的能力,推测AR与核受体辅助抑制因子如SMRT和N2CoR
之间可能存在某种关系,本文结果发现G42AR融合蛋白能与VP2cSMRT融合蛋白相互作用。共转染G42AR和VP2cSMRT[含病毒VP16激活区域,融合SMRT2C端的核受体作用区(IDs)]后,与G42AR