高效液相色谱使用详细操作步骤

高效液相色谱使用操作步骤

一、泵操作面板

PUMP:运行键

START:梯度运行键 PURGE:快冲键

RESET ：复位键 HOLD ：程序暂停键STOP ：泵停止键

TIME 0 RSVR ABC

ENTER （设置溶剂） TIME 0 PROG

ENTER （设置程序） TIME 0 % A

30

ENTER （设置比例）

TIME 0 B 30

ENTER

（设置比例） TIME 0 %3 C 40 ENTER （设置比例）

DEL

P ROG

1 ENTER （删除程序）

1.对于梯度泵设定举例如下：（人参皂昔得梯度）

TIME 0

%

A 81 ENTER TIME 15 % A 81 ENTER TIME 60 %

A 65 ENTER TIME

65 %

A 0

ENTER

TIME P ROG 0 TIME ：程序开启键

FLOW ：流速: 精品文档,超值卜•载

PROG ：程序

RSVR: ABC

DEL ：删除程序

PMAX:最大压

PMIN ：最小压力 ENTER:确定 TIME

FLOW

ENTER

（设置流

1 ENTER

TIME 80 % 0 ENTER

TIM E 81 % 81 ENT ER

TIME 100 % 8 1 ENTER

因为A+ B之与始终就就是100%,所以B相就不用设了O 7、对于对照品在这种条件下只要对照品得峰全部出完后按

下RESET键等2 0分钟即可进第二针进完针后按START

后再按下R E SET键等基线基走直才可进下一针。

二、检测器操作面板

RESET :复位键A/Z:调零键WL:调波长ENTER:

确定三、实验前得准备工作

1、实验前流动相提前配好过滤脱气。

2、置换流动相时把泵得滤头从原来得流动相中换到新得流

动相中滤头要轻拿轻放。

3、液路排气顺序:首先打开排气阀一按PURGE键进行排气

结束后一按STOP键停止一再拧紧排气阀一按PUMP

4、打开检测器首先观察右上角笊灯指示灯确认氣灯就就是

否点亮，按WL键调好实验波长后按A/Z键调零。

5、打开电脑打开在线工站选择对应得通道，输入实验信息、

方法、包括釆样控制，积分与仪器条件,积分面积外标法测绝

对含量归一法相对含量内标法测绝对含量;后点数据釆集，将电压调到一20〜2 0,时间调到0~30,点零点校正后再点查

瞧基线，大约1个小时左右基线基本稳定（就就就是基本成直线，因为检测器打开后需要一定得稳定时间，检测器基本稳定泵里面得流动相同时也就置换好了），就可以进样了。

6、进对照品:对照品配成溶液后要过滤再进样等对照品得峰

出来以后点停止釆集输入文件名后保存。（一般连进三针为准）7、进样品：样品配成溶液后要过滤再进样等样品得峰出来

以后点停止釆集输入文件名后保存。

8、进样阀搬阀顺序一搬到LOAD位置时进针一打完针后搬

到I NJECT位置进样要求打针匀速轻快搬阀轻快每次基本

一样,外标法进样量就就是定量管得四一五倍。

9、用以下公式算出样品含量:

C标/C样二S标/ S样

10、做校正曲线:打开离线——点打开一一打开对照品得谱图

点积分方法（选用面积外标法）一一点组分表——点全选

输入所需要对照品得峰名一一点釆用一一点校正

点标准含量一一输入含量（可以就就是对照品得浓度也可以就就是百分数）一一0K一一点加入标样一一再次打开刚才打开得对照品得谱图一一校正完毕一一点峰名瞧校正曲线

点输出——取名保存。

11、计算样品得含量:打开离线•打开样品得谱图•点预览

点加载一一加载刚才对照品得校正曲线谱图一一即可得出样品得含量四、液相色谱仪注意事项:

1、泵正常工作时，在流动相与流速不变得前提下柱压应该

就就是稳定得，当然在换流动相时压力变化就就是正常得，正常情

况下如果柱压升高基本上都就就是由色谱柱使用时间长引起得（只

有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能就就是

（1）接头处有漏液得地方，采取得方法就就是有滤纸检査，如有

漏液得地方用扳手拧紧即可。如果没有漏液则可能就就是（2 ）白色得管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去，釆取得方法

就就是排气泡排气时:先STOP停泵—打开排气阀一按PURGE（快冲）键一等气泡排完后先S

TOP停泵一拧紧排气阀，其先后步骤不要搞反了。

2、泵正常工作时最高压力最好不要超过20 0 KG,所以打开

泵以后可以将泵得最大压力调到200KG,这样如果压力超过上限则会自动报警停机，流速最好不用超过1ML/MIN,如果使用时压力超过200KG,建议将流速调低点以降低压力（在色谱柱正常得情况下），如果就就是因为色谱柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱（因为色谱属于耗材长时间使用就需要更换，更换得主要依据色谱柱出峰不正常或者柱压力过高）。

3、泵正常工作时平均每15天左右向注油孔加润滑油2〜3

滴。

4、流动相里面如果有盐或酸类，做完实验后要先用9 5 %二次蒸馅水与5%甲醇洗色谱柱40分钟左右，然后用纯甲醇洗3

0分钟左右才可以关机。第二天如果继续做实验流动相里面

仍旧有盐或酸类，最好先用95%二次蒸憎水与5%甲醇过度

20分钟,再用流动相。如果流动相里面只有甲醇，水，乙騰。做