高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解
高效液相色谱仪的使用注意事项
高效液相色谱仪的使用注意事项
1.使用前须确定操作者是否具有色谱仪操作资格，如未具有资格，应在专业人士的指导下使用。
2.首次使用前，应检查仪器性能是否正常，适当调整参数，以达到最佳操作状态。
3.使用过程中，应注意仪器的安全，避免过热、过压及调节参数超出正常范围，避免仪器受损。
4.样品质控，应定期使用标准品或有关物质进行质控，确保测试精度。
5.操作时应熟练掌握仪器操作流程，以防误操作。
6.应及时更换仪器液体及耗材，以确保实验准确。
7.使用后，应将仪器关闭，安全放置，勿放在水源附近或潮湿环境中。
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高效液相色谱仪的几个使用问题 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的几个使用问题液相色谱解决方案1. 色谱柱中的流动相见排干吗？不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
相比之下，另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
2. 使用PEEK （polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK 材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi （但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。
使用PEEK接头时则无需挂念接头耐溶剂性能，由于接头几乎或很少与溶剂直接接触。
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
高效液相色谱仪使用注意事项
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
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短灯的使用寿命）
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五、手动进样阀使用注意事项
➢ 3、进样量的多少要根据定量管的环体积决定，当试 样量较少时，进样体积由注射器的进样体积决定， 但最大体积要小于环体积的1/2。当试样量较多时， 进样体积由定量管的体积决定，为保证试样完全把 定量管的流动相置换干净，需注射5～6倍环体积的 试样。
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➢ 4、选择使用适宜的流动相，在要求的pH范围和柱温 下使用，以避免固定相被破坏。
➢ 5、样品量不应过载，进样前应对样品进行必要的净 化，以免对色谱柱造成损伤。可在进样器和色谱柱之 间连接保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。 保护柱可以应该经常更换。
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三、色谱柱使用注意事项
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意 事
免光线直射及冷、热源对仪器产生直接影响。
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二、流动相使用注意事项
高
效
液 相
➢ 1、必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要
色
先经0.45μm滤膜过滤。过滤后的流动相必须经过充
谱 仪
分脱气，以除去其中溶解的气体。
的
➢ 2、流动相不应含有任何腐蚀性物质。
➢ 6、每次工作完后，最好用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留 在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置 换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱 体积的20倍左右，即常规分析需要50mL～75mL。
当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用 无盐流动 相冲洗至少1小时，再逐步过渡到纯甲醇或乙腈。
高效液相色谱仪使用注意事项
主讲：李国秀
高效液相色谱仪使用中的注意事项
高效液相色谱仪使用中的注意事项在现代仪器分析中，作为色谱分析的重要分支，高效液相色谱已得到日益广泛的应用。
它与气相色谱相比较其基本原理是相同的，因结构和工作方式等特点而具有使用上的特殊性，它是以液体为流动相，不受样品的挥发性和热稳定性的限制，对样品的适应性广，适用于在生物学和医药上有重要意义的大分子、不稳定的天然产物及高分子量化合物、离子型物质的分析。
高效液相色谱仪从结构上大致可分为输液泵、进样器、色谱柱及柱温箱、检测器等单元。
储液器中存储的除气载液经过滤后由高压泵输送到色谱柱入口，梯度洗脱时为单（双泵）送液，样品由进样器注入载液系统，送到色谱柱进行分离，分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录或数据处理设备。
以下按流动相的流路顺序以等度系统为例分别对各单元加以说明。
一、流动相液相色谱所用流动相根据分析目的可分为单一或混合流动相，固定相一定时，流动相的种类、配比都严重影响分离效果，最好使用重蒸馏水或HPLC级的有机试剂。
依据其所流过单元的特殊性，在使用前必须对其进行过滤和脱气处理。
过滤的目的是除去其中微米级的机械杂质，以避免系统污染、磨损和堵塞。
脱气则是除去溶解或因混合而产生的气泡，以免引起流量和压力的稳定性及检测器的噪声，最终导致分析数据的重现性变差。
应避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂，流动相对试样有适宜的溶解度，本身粘度要小，与所用检测器相匹配。
韦氏滤瓶是目前过滤流动相的最常用工具，常用滤膜有0.22微米和0.45微米，又分为有机系和水系两种，过滤不同的试剂应使用相应的过滤膜。
在处理混合流动相时，应先过滤后混合，还要注意操作过程中的防尘。
脱气的方法有多种，综合效果和成本而言，在等度分析中常用超声波清洗器完成一般脱气,脱气后的流动相在使用前应注意密封和温度的平衡。
严格讲应使用在线脱气装置，有膜脱气和氦气脱气两种。
流动相应在使用前进行过滤和脱气处理。
试样也必须过滤，可用一次性针头式过滤器完成。
高效液相色谱仪使用注意事项及工作原理
高效液相色谱仪使用注意事项及工作原理高效液相色谱仪使用注意事项液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
2、色谱柱变干的问题：另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
3、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意以下问题：假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
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岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm 的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。
用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
c．含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
d．流动相要求使用0.45 µm滤膜过滤，除去微粒杂质。
e．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能常见故障的断定及解决方法诊状可能的原因及解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相pH值保持在3~7.5，检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱质钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱质钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度，降低流动相pH值，钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱仪使用操作规程液相色谱仪使用操作规程总流程：超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱——纯乙睛保存柱1．电源准备打开稳压器电源开关，须待电压指示至220V 后，才能开启其他有关设备。
2．HP1100 高效液相色谱仪的准备试剂：三氟乙酸乙腈(Fisher 公司产品色谱纯)超纯水(Millipore 超纯水)冰乙酸溶液配置：贮液瓶与流动相的准备A 液0.1%三氟乙酸（三氟乙酸1ml，超纯水999ml）室温保存B 液60%乙腈（乙腈600ml，超纯水400ml）室温保存样品液0.01%乙酸（冰乙酸0.01ml，超纯水100ml）室温保存泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是1%色谱纯甲醇室温保存注：贮液瓶应用超纯水清洗干净，备用。
流动相溶剂用洁净硼砂漏斗精滤除去微小颗粒。
操作者必须清楚并注明A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。
冲洗泵头：用注射管于软塑料管末端抽吸至有水流出，调节流速开关控制流速为20-30drop/min.。
①流动相管道排气如果管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。
操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。
）②开机③进入HP1100 操作系统a.双击WIN-95 操作界面中左下角Instrument 1 online 图标，进入HP1100 工作站软件操作界面。
单击工作站操作界面上方Run control 菜单，在下拉菜单中找到Sample Info 子菜单，单击。
在Sample Info 信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。
在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。
b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。
（1）流速通常为1ml/min。
检测波长通常为280，或者254nm。
（2）A 液设置为100%，运行15-30 分钟（目的是色谱柱的预平衡），观察基线走势，基线应为直线，通过单击“Balance”键可将基线调至零点。
待基线平稳后可进样。
（3）调整A 液为0，B 液为100%再运行60 分钟（此时乙腈实际浓度为60%）（4）在A 液冲洗同时进行进样环的冲洗：用500μl 的针样注射器，在load 状态，注入超纯水500μl。
（反复三次，若是20μl 进样环，则加入20μl 以上，多余的水可废液管流出。
通常同一样品上样30 次后应冲洗进样环，如果不同样品，最好，每次上样前均进行冲洗。
）（5）吸取一定量可直接进样的样品溶液（上样液最好用滤器滤过），将进样阀逆时针旋至Load 档，将进样针从进样孔处水平推入，按进样器活塞将样品溶液注射入进样环后，立即将进样阀顺时针方向旋至Inject 档，与此同时，数据开始自动收集。
（6）此时样品分析已经完成。
在HP1100 主操作界面的检测器图标，关闭检测器，然后关闭色谱仪主机检测器开关（目的是延长检测器寿命）。
将 B 通道调为0，A 通道调为100%，即A 液冲洗色谱柱约10-30min。
用A 液续冲洗色谱柱约10-30m（目的是冲出柱内残留的杂质）（7）A 通道换为C 通道（100%乙腈）续冲洗色柱约10-30min。
（目的主要为保护柱）④数据记录的终止与保存电脑将自动收集并保存数据，终止运行后，将自动弹出数据框，或者可通过DA TA ANAL YSIS菜单，调出资料。
3．图谱处理4．关机1）HP1100 的关闭在HP1100 的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。
然后，单击HP1100 的主操作界面右上方“X”，退出Instrument 1 online 程序，返回至WIN-95 操作界面。
单击左下角“Start”菜单，单击“Shut down”,等待关机，待出现“Restart”提示后，按电脑主机电源键，关闭电脑主机及显示器。