氧化还原酶的实验方法
禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定
禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定摘要：本文以羊草的叶片和根为材料, 用0. 2 mo l /L pH 6. 2的磷酸缓冲液( 含1 mmo l/L EDTA-2Na，5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶（GSH一PX）的提取介质，偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂, 二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB ) 与GSH显色反应3min, 在412 nm测定酶管和非酶管的OD值, 以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性关键词：盐碱胁迫；羊草；GSH-PX；酶活性Analyzing Soluble Sugar Content and Biomass of Sweet Sorghumunder Saline-alkali StressAbstract:Soil salinization is a global issue. Experiments prove that growing state of sweet sorghum shows growth inhibition，lower production and physiological disorders under soil salinity In this study,sweet sorghum as our material，was sowed in neutral soil and saline soil, respectively，exploring characteristics of salinity stress for the sweet sorghum and the change of soluble sugar and biomass. According to the particularity of different soils，we observed the relationship between different varieties and salt-alkali stress at different growth stages.Profound understanding of physiological mechanism of sweet sorghum response to salt-alkali stress for screening sweet sorghum germplasm,identifying salinity tolerance and cultivating the new sweet sorghum species is significance.Keywords: Salt stress; sweet sorghum; Glutathione peroxidase; enzyme actirityⅠ1前言植物是一个需氧代谢的有机体。
氧化还原酶
1
主要内容
1 多酚氧化酶 2 葡萄糖氧化酶 3 过氧化物酶 4 脂肪氧合酶 5 超氧化物歧化酶
2
1 多酚氧化酶
多酚氧化酶广泛存在于各种植物中，是一种含铜的 酶；
其简称PPO，能作用于羟基处在邻位的二酚和三酚 类化合物，生成相应的醌，它也能作用于单酚，将 其转变为邻-二酚；
是引起食品酶促褐变的主要酶类。
27
多酚氧化酶在可可加工中的作用
多酚氧化酶主要在可可发酵结束和前期干燥过 程中起作用。
多酚氧化酶在果酒加工中的作用
使红葡萄酒颜色得到改良，也可产生其他理想 的风味。
多酚氧化酶在果酱、果汁加工中的作用
28
2 葡萄糖氧化酶 （Glucose oxidase，GOX）
葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase， GOX)的系统 名称（β -D-葡萄糖：氧 氧化还原酶： EC1.1.3.4） ,最先于1928年在黑曲霉和灰绿青 霉中发现。
2O H
R
维生素 C
有机溶剂
R= H-, M e -, M 2Ce-O (C2-),H 2-H, H OO2C-,HHO(2C )2-H , PhCON2-HCH
10
2.作用底物
水果、蔬菜中底物为：
一元酚类
邻二酚类（对位二酚也可）
（间位二酚不作底物）
如：
水果中的儿茶酚 OH
OH 土豆中的酪氨酸
40
2）食品的除氧保鲜
食品腐败 微生物
氧化变质
除氧
含油脂食品发生氧化，如花生、奶粉、 饼干、冰淇淋、油炸食品等。
果蔬产品褐变，如马铃薯、苹果、梨、 果酱等。
肉类氧化。
41
除氧方法
将需要保鲜的食品放到密闭容器中，同 时将葡萄糖氧化酶和葡萄糖一起放入。
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）检测是一种用于测定谷胱甘肽还原酶活性的实验方法。
谷胱甘肽还原酶是一种关键的抗氧化酶，参与谷胱甘肽（glutathione，GSH）的再生过程，从而保护细胞免受氧化损伤。
以下是一种简化的谷胱甘肽还原酶检测说明：
1.实验原理：谷胱甘肽还原酶检测主要依赖于酶促
反应的光度测定。
在此反应中，谷胱甘肽还原酶将氧化型谷胱甘肽（glutathione disulfide，GSSG）还原为还原型谷胱甘肽（GSH），同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADP+）。
反应过程中，NADPH的消耗可以通过其吸光度的变化来监测。
2.实验试剂：主要试剂包括缓冲液、还原型谷胱甘
肽、氧化型谷胱甘肽、NADPH、谷胱甘肽还原酶标准品等。
3.实验步骤：
a.样品处理：收集需要测定谷胱甘肽还原酶活
性的样品（如血清、组织或细胞提取物等），
并进行适当的处理和稀释。
b.反应体系建立：在96孔板中，分别加入缓冲
液、样品、GSSG和NADPH，然后添加谷胱
甘肽还原酶标准品。
c.光度测定：在340nm波长下，定时测定各孔
的吸光度变化，记录吸光度值。
d.计算结果：根据吸光度变化值，计算样品中
谷胱甘肽还原酶的活性。
4.注意事项：
a.在操作过程中，请遵循实验室安全规程，佩
戴必要的防护装备。
b.实验过程中，请保持试剂的纯净和稳定。
c.光度测定时，请确保仪器的准确性和稳定性。
硝酸还原酶测定方法
硝酸还原酶测定方法
硝酸还原酶是一种广泛存在于细菌、真菌、植物和动物等生物体中的酶类，具有催化硝酸还原生成亚硝酸的作用。
亚硝酸可进一步催化生成氮气或氨，参与到氮循环中。
硝酸还原酶测定方法是用来量化硝酸还原酶的活性，以便研究和评价生物体中氮代谢的过程和生态系统中的氮循环。
直接测定法是通过测定硝酸还原酶催化硝酸还原生成亚硝酸的速率来评价其活性。
其中较常用的方法是通过测定硝酸盐浓度的变化来间接测定亚硝酸的含量，进而计算硝酸还原酶的活性。
具体方法如下：
1.取一定量的细胞提取液或组织，加入含有硝酸钠的反应溶液。
2.在一定的时间内，将反应溶液分别加入苯磺酰胺和二甲基苯胺的混合液中，生成偶氮染料，并在550nm波长下测定其吸光度。
3.利用已知浓度的硝酸盐标准曲线，计算出样品中硝酸盐的浓度。
4.根据硝酸还原酶反应硝酸盐生成亚硝酸的速率，计算出硝酸还原酶的活性。
间接测定法是通过测定硝酸还原酶催化还原剂（如戊二醛、甲醇、NADH等）的还原速率来评价其活性。
具体方法如下：
1.取一定量的细胞提取液或组织，加入含有硝酸钠和还原剂的反应溶液。
2.在一定的时间内，测定反应溶液中还原剂的消耗量或其产生的氧化产物（如NAD+）的生成量。
3.根据还原剂的消耗量或产生的氧化产物的生成量，计算硝酸还原酶的活性。
此外，还有一些特殊的测定方法，如溶液散射法、电化学法等，可以根据实验需要进行选择。
总结起来，硝酸还原酶测定方法是通过不同的分析手段测量硝酸还原酶的活性，从而研究和评价氮代谢的过程和生态系统中的氮循环。
不同的测定方法适用于不同的实验需求，科研人员可以根据具体情况选择合适的方法进行研究。
亚甲基蓝氧化还原反应方程式
亚甲基蓝氧化还原反应方程式介绍亚甲基蓝氧化还原反应是一种常见的化学反应，在很多实验室以及工业生产过程中都得到了广泛应用。
本文将详细介绍亚甲基蓝氧化还原反应的方程式以及其相关特性和应用。
亚甲基蓝氧化还原反应简介亚甲基蓝氧化还原反应是一种氧化还原反应，它以亚甲基蓝为反应的底物。
亚甲基蓝是一种有机染料，具有浓缩的深蓝色。
在该反应中，亚甲基蓝可以被氧化为次甲基蓝或还原为无色化合物。
反应方程式亚甲基蓝氧化还原反应的方程式可以表示为：亚甲基蓝 + 双氧水→ 次甲基蓝 + 水该反应的化学方程式可以进一步简化为：C16H18N3SCl + H2O2 → C16H17N3S + H2O + HCl这个反应方程式描述了亚甲基蓝与双氧水之间的氧化还原反应，通过该反应可以将亚甲基蓝转化为次甲基蓝。
亚甲基蓝氧化还原反应机理亚甲基蓝氧化还原反应的机理主要涉及亚甲基蓝分子的氧化和还原过程。
具体反应机理如下：1.氧化过程：亚甲基蓝分子中的某个氢原子被双氧水中的氧原子氧化，生成次甲基蓝分子和水。
C16H18N3SCl + H2O2 → C16H17N3S + H2O2.还原过程：反应产物中的次甲基蓝分子中的某个氧原子被亚甲基蓝分子中的氢原子还原，生成亚甲基蓝分子和氯化氢。
C16H17N3S + H2O2 → C16H18N3SCl + HCl通过这两个反应步骤，亚甲基蓝和次甲基蓝之间发生了氧化和还原反应，实现了亚甲基蓝的转化。
特性和应用亚甲基蓝氧化还原反应具有以下特性和应用：特性1.氧化还原反应：亚甲基蓝分子经过氧化和还原过程，发生电子转移，改变了分子的电荷状态。
2.颜色变化：亚甲基蓝是一种有机染料，其氧化和还原过程会导致分子结构的变化，进而引起颜色的变化，从深蓝色到无色或浅蓝色。
3.催化剂：在亚甲基蓝氧化还原反应中，双氧水起到氧化剂的作用，促进了亚甲基蓝的氧化。
双氧水在反应中不参与实质性的反应，属于催化剂。
应用1.分析化学：亚甲基蓝氧化还原反应可以用于分析化学中的定性和定量分析。
(整理)过氧化氢酶与过氧化物酶
过氧化氢酶与过氧化物酶朱忠勇(南京军区福州总医院, 福州350025)过氧化氢酶和过氧化物酶, 是两种广泛存在于动植物体内、含血红素(铁卟啉) 辅基的氧化还原酶。
由于它们作用的底物都有过氧化氢, 所以在一些医学检验杂志或教科书上, 往往将它们混淆, 甚至对其作用机理作不恰当的解释。
1过氧化氢酶过氧化氢酶(Hydrogen Peroxidase) 又称触酶(Catalase) , 其系统名称(Systemat ic name) 是:H2O 2: H2O 2氧化还原酶(H2O 2÷H2O 2 O xido redu2catase) , 国际酶学委员会的编号为EC 11111116, 其催化反应式如下:H2O 2+ H2O 2触酶2H2O + O 2在这个反应中, 底物只有一种——过氧化氢。
实际上是一分子的H2O 2作为氢(电子) 的供体, 被氧化成O 2; 而另一分子H2O 2被还原为H2O。
2过氧化物酶过氧化物酶(Peroxidase) 也有人简称过氧化酶,其系统名称是: 供体: 过氧化氢氧化还原酶(Dono r:H2 O 2O xido reductase) , 编号为EC 11111117。
其催化反应式为:供体+ H2O 2过氧化物酶氧化的供体+ H2O或更简明地表达为RH2+ H2O 2过氧化物酶R + 2H2O(供体) (氧化的供体)在这个反应中, 底物有两个; 一个是H2O 2, 另一个为一种氢(电子) 的供体(Dono r)。
在医学检验中, 多用胺类(如联苯胺, 二氨基联苯胺, 联邻甲苯胺等)作为供体(也可以用酚) , 因为这些物质脱氢后往往会呈现颜色。
由上述两种反应可以清楚地看出, 两种酶的区别是十分明显的。
触酶只有一种底物, 生成的是水和氧气。
而过氧化物酶则要两种底物, 其反应的实质是: 酶催化供体脱氢(氧化) , 同时催化脱下的氢使H2O 2还原为H2O。
在这个反应中, 如果只有H2O 2, 没有供体, 反应不能进行。
植物酶活指标
植物酶活指标植物酶活性指的是植物体内酶的催化活性程度，也称为酶活力。
植物体内酶活性与植物生长发育、代谢、环境适应能力等密切相关。
因此，研究植物酶活性指标具有重要的科学意义和应用价值。
一、植物酶活指标的类型1、氧化还原酶：包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）等。
2、酯酶：包括脂肪酶（LIP）和酯酶（EST）等。
3、氨基酸、蛋白质和多糖酶：包括谷氨酸脱氢酶（GDH）、丝氨酸脱酸酶（SDH）、多酚氧化酶（PPO）、多酚酶（POD）、木质素过氧化物酶（LPO）和纤维素酶等。
二、植物酶活指标的意义1、判断环境胁迫：有研究表明，氧气自由基及其产生的活性氧分子是植物生长发育、代谢过程中的一个重要因素。
而氧化还原酶在植物体内具有极高的活性，能够迅速清除氧气自由基及其产生的活性氧分子。
因此，通过测定植物体内氧化还原酶活性，可以判断环境胁迫程度及其对植物的影响。
2、评估生长发育状态：氨基酸、蛋白质和多糖酶等酶在植物体内能够催化孢子、芽、花、果实等生长发育过程中的代谢反应。
因此，可以通过测定这些酶活性的变化，来评估植物的生长发育状态。
3、诊断植物病害：植物病害的发生与否及其严重程度，常常会影响植物体内某些酶的活性，如过氧化物酶和谷氨酸脱氢酶等。
因此，通过测定植物体内的酶活性，可以较为准确地诊断植物病害。
三、植物酶活指标的测定方法1、样品的预处理：将植物材料（如叶片、根、果实等）取出后，立即将其冷冻或干燥，以避免其酶活性受到破坏。
2、酶活测定方法：根据不同酶的特点和催化反应特性，选择相应的酶活测定方法。
如氧化还原酶可以采用光谱方法或电化学法进行测定，酯酶可以采用碳酸酯法、碱式溶液法或带有色团的底物法进行测定，而氨基酸、蛋白质和多糖酶可以采用比色法、光度法或重量法进行测定。
四、植物酶活指标的应用1、农业生产领域：在农业生产中，常常需要对作物的生长发育状态和抗逆能力进行评估，而植物酶活指标的变化能够反映出相应的信息，因此可以用于指导作物的种植和环境调控。
第十二章葡萄糖氧化酶ppt课件
葡萄糖氧化酶催化反应分子机制：
OH
H
HO HO
HHO
OH
H OH H
EFAD
OH
H HO
HO
HHO
H OH
O+
δ -D-葡萄糖酸内酯
EFADH2 O2
H2O
EFAD
+
H 2O 2
H HO
HO
OH
OH
HH
二、葡萄糖氧化酶催化的反应
葡萄糖氧化酶的催化反应，按条件不 同有如下三种形式：
在没有过氧化氢酶存在下，每克分子葡 萄糖氧化酶氧化时消耗1mol氧。
C6H12O6 + O2 → C6H12O7 + H2O2
在有过氧化氢酶存在下，每克分子葡萄糖氧 化酶氧化时消耗0.5mol氧。 C6H12O6 + 1/2O2 → C6H12O7
H
COOH
H
OH OH
D-葡 萄 糖 酸
四、性质
高纯度葡萄糖氧化酶为淡黄色粉末。 易溶于水，完全不溶于乙醚、氯仿、丁
醇、吡啶、甘油、乙二醇等有机溶剂。 50％丙酮、66％的甲醇能使其沉淀。
1. 葡萄糖氧化酶的催化特异性
它对β-D-吡喃葡萄糖表现出高度的专一性。 羟基处在β-位时酶的活力比处在α-位时高约160倍。
果汁在深加工过程中若发生氧化 作用，其中的一些不饱和成分如不 饱合脂肪酸和烯二醇类物质将会分 解，使果汁品质低下。尤其是Vc等 维生素类的物质的氧化会使营养大 量流失。
果汁保鲜剂葡萄糖氧化酶是一种天 然食品添加剂，无毒、无副作用。 添加量：葡萄糖1g/L，葡萄糖氧化 酶20mg/L。
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氧化还原酶的实验方法1（1）方法与原理在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶促一元酚、二元酚或三元酚氧化成醌。
以邻苯二酚氧化成相应的二醌为例，CH(OH)+1/2O?CHO+HO 64226422(2) 试剂配制1%邻苯三酚溶液，乙醚，0.5N盐酸，重铬酸钾标准溶液（0.75gKCrO溶于1L0.5N HCl），227pH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液标准曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用0.5N盐酸稀释成各种不同浓度。
定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。
以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
（3）操作步骤取1g鲜土（过2mm筛），置于50ml三角瓶中，然后注入10ml1%邻苯三酚溶液，摇荡后放在30。
C恒温箱中培养2h。
(为了减少误差，建议以下操作在冰盘上进行)取出后加4mlpH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，用力振荡数次，萃取30min。
最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。
比色时用波长为430nm的滤光片，为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色液槽一次。
为了消除土壤中原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正没食子酚的纯度，需设无基质的土壤和无土壤的基质作对照。
在无基质的土壤对照中，用水代替基质进行培养。
（4）活性表示紫色没食子素的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。
多酚氧化酶活性，以2h后1g土壤中紫色没食子素的毫克数表示。
2.（1）方法与原理在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶促一元酚、二元酚或三元酚氧化成醌。
以邻苯二酚氧化成相应的二醌为例，CH(OH)+1/2O?CHO+HO 64226422(2) 试剂配制1%邻苯三酚溶液，乙醚，0.5N盐酸，重铬酸钾标准溶液（0.75gKCrO溶于1L0.5N HCl），227pH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液0.5%过氧化氢标准曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用0.5N盐酸稀释成各种不同浓度。
定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。
以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
（3）操作步骤。
C恒温箱中培养2h。
(为了减少误差，建议以下操作在冰盘上进取1g鲜土（过2mm筛），置于50ml三角瓶中，然后注入10ml1%邻苯三酚溶液和2ml 0.5%行)取出后加4mlpH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，用力振荡数次，萃取30min。
过氧化氢，摇荡后放在30最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。
比色时用波长为430nm的滤光片，为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色液槽一次。
为了消除土壤中原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正没食子酚的纯度，需设无基质的土壤和无土壤的基质作对照。
在无基质的土壤对照中，用水代替基质进行培养。
（4）活性表示紫色没食子素的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。
多酚氧化酶活性，以2h后1g土壤中紫色没食子素的毫克数表示。
3（1）方法与原理过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据过氧化氢的消耗量或氧气的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的HO的量。
22（2）操作步骤称取2g鲜土于100mL的三角瓶中,然后吸取40mL蒸馏水注入上述三角瓶中，再加入5mL0.3%过氧化氢溶液。
将三角瓶置于振荡机上，振荡20分钟。
温度控制在20?+2?。
振荡结束后，立即加入5mL3N的HSO于三角瓶中，使之钝化，即使未分解的HO稳定，用慢2422速滤纸过滤。
过滤结束后吸取25mL滤液于100mL三角瓶中，用0.1N的KMnO滴定，滴至溶4液微红（30s不褪色），即达终点，记录消耗高锰酸钾的毫升数(V)。
1对照试验（无基质对照）：不加土样，其他同上，消耗的高锰酸钾毫升为V 2 计算：M=( V- V)T/g， T为校正值。
21高锰酸钾的浓度用草酸钠滴定。
称取0.67g在105?烘至恒重的草酸钠，蒸馏水定容到100ml（0.05mol/L）, 取5ml上述溶液加5ml 3N的硫酸溶液，在75?水浴中，用高锰酸钾标定，根据消耗的高锰酸钾毫升数，求得高锰酸钾的浓度。
高锰酸钾溶液的标定--与CO可以发生如下反应： 424+2+--5CO+2 nO+16H=2Mn+8HO+10CO 24422根据氧化还原反应原理可以判断，在酸性溶液中，MnO由上述化学反应方程式可知滴定终点是，5molNaCO恰好与2molKMnO完全反应，即： 2244C(KMnO)= 2m( NaCO)/5*134.00*V(KMnO) 42244因此，通过称量NaCO的质量，经滴定，根据公式即可算出KMnO的准确浓度。
22444.调整后的方法：（调整原因：容器不同，同时无漩涡混合仪等。
注意：土壤和基质要充分混合；密封和敞口的测定结果相差很大，注意密封）土壤脱氢酶活性测定:称取5g新鲜土样于100ml的具塞塑料瓶中,加入1.0%pH7.6 TTC-Tris缓冲溶液5mL,在37?下培养24h后加入50mL甲醇,振荡2～3min后过滤, 490nm下比色测定。
标准曲线制作：（1）用100mgTTC溶于100ml Tris-HCl缓冲液(标液)；（2）取0，1，2，4，6，8，10ml标液用Tris-HCl缓冲液定溶到50ml；（3）取以上系列溶液各1ml，加1ml 10%Na2S，到容量管中，放置40min，显色,再用甲醇定容到20ml;(4)在490nm下比色，在比色皿中稳定两分钟。
镧对红壤转化酶过氧化氢酶和脱氢酶活性的影响土壤脱氢酶活性测定[8]:称取2.5g新鲜土样于容量管中,加入1.0%TTC-Tris缓冲溶液（pH7.6）2.5mL, 漩涡混合仪振荡1min, 在37下培养24h后加入25mL甲醇,振荡2～3min后过滤,比色测定.根据标准曲线计算-1-1生成物TPF的浓度，以TPF（mg*kg*d）表示脱氢酶的活性。
[8] Chander K, Brookes P C. Is the dehydrogenase assay invalid as a method to estimate microbial activity incopper-contaminated soils? [J].Soil Biol.Biochem., 1991, 23:909-915.（1）方法与原理过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据过氧化氢的消耗量或氧气的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的HO的量。
22（2）操作步骤称取2g小麦秸秆于100mL的三角瓶中,然后加入40mL蒸馏水，6ml3%过氧化氢溶液。
将SO于三角瓶中，使24之钝化，即使未分解的HO稳定，用中速滤纸过滤。
过滤结束后吸取20ml滤液于100mL三22三角瓶置于振荡机上，振荡20分钟。
振荡结束后，立即加入5mL3N的H角瓶中，用0.1N的KMnO滴定，滴至溶液微红（30s不褪色），即达终点，记录消耗高锰酸4钾的毫升数(V)。
1对照试验（无基质对照）：不加小麦秸秆，其他同上，消耗的高锰酸钾毫升为V 计算：2M=( V- V)T/g，T为校正值。
21高锰酸钾的浓度用草酸钠滴定。
称取0.67g在105?烘至恒重的草酸钠，蒸馏水定容到100ml（0.05mol/L）, 取5ml上述溶液加5ml 3N的硫酸溶液，在75?水浴中，用高锰酸钾标定，根据消耗的高锰酸钾毫升数，求得高锰酸钾的浓度。
高锰酸钾溶液的标定根据氧化还原反应原理可以判断，在酸性溶液中，MnO--与CO可以发生如下反应： 424+2+--5CO+2 nO+16H=2Mn+8HO+10CO 24422由上述化学反应方程式可知滴定终点是，5molNaCO恰好与2molKMnO完全反应，即： 2244C(KMnO)= 2m( NaCO)/5*134.00*V(KMnO) 42244因此，通过称量NaCO的质量，经滴定，根据公式即可算出KMnO的准确浓度。
2244（1）方法与原理在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶促一元酚、二元酚或三元酚氧化成醌。
以邻苯二酚氧化成相应的二醌为例，CH(OH)+1/2O?CHO+HO 64226422(2) 试剂配制1%邻苯三酚溶液，乙醚，0.5N盐酸，重铬酸钾标准溶液（0.75gKCrO溶于1L0.5N HCl），227pH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液标准曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用0.5N盐酸稀释成各种不同浓度。
定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。
以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
（3）操作步骤取2g小麦秸秆，置于100ml三角瓶中，然后注入20ml1%邻苯三酚溶液，摇荡后放在30。
C恒温箱中培养2h。
(为了减少误差，建议以下操作在冰盘上进行)取出后加8mlpH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，萃取30min（用力振荡数分钟充分萃取）。
最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。
比色时用波长为430nm的滤光片，为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色液槽一次。
为了消除样品种原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正没食子酚的纯度，需设无基质的秸秆和无秸秆的基质作对照。
在无基质的秸秆对照中，用水代替基质进行培养。
（4）活性表示紫色没食子素的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。
多酚氧化酶活性，以2h后1g样品中紫色没食子素的毫克数表示。
（1）方法与原理选用无色的TTC作人为受体，脱氢酶能酶促TTC受氢后生成红色的三苯基甲替（TF），通过测定红色TF的生成量表示酶的活性。
（2）试剂配制pH7.6Tris-HCl缓冲液，0.1mol／L，0.5 TTC，0.1mol／L，甲苯标准曲线绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的TTC于50ml容量瓶中，定容（1mgTTC/ml）;分别向6只50ml容量瓶中依次注入1，2，3，4，5，6ml1mg/ml标准TTC溶液，用蒸馏水定容，是为工作液；去7支20ml容积带塞试管，依次加入2mlTris-HCl缓冲液，1ml0.5 TTC，1ml10%NaS新配溶液，摇匀，放置20min(对照管不加TTC)；反应完全2后，各管分别加入5ml甲苯，振摇，完全提取TF，稳定数分钟，取上层有机溶液在492nm处比色。