鸡血藤总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究
鸡油菌中总黄酮含量的测定及抗氧化活性研究
鸡油菌中总黄酮含量的测定及抗氧化活性研究郭豫梅【摘要】The present paper uses the tradition to soak the formulation, take the ethyl alcohol as the resolver, the resolver volume fraction is 85%, extraction time 20 h, the liquid-solid compares 1∶20, extraction temperature 70℃. The cantharelloid total flavanone opposite neighbours trihydroxy benzene produces from the oxidation the ultra oxygen anion, the Fenton response produces the hydroxyl free radical and the nitrite have the obvious inhibitory action, and presents certain quantity effect relations, increases unceasingly along with total flavanone density's increase to various ions' percentage clearance. When the total flavanone density is 0.204 1 g/L, to the ultra oxygen anion's percentage clearance is 44.2%, the hydroxyl free radical's percentage clearance is 11.4%, the nitrite percentage clearance is 50%.%采用传统浸提法，以乙醇为溶剂，溶剂体积分数为85%、提取时间20 h、固液比1∶20、提取温度70℃。
鸡血藤总黄酮乙酸乙酯部位对大肠杆菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7免疫细胞氧化应激的调节作用
鸡血藤总黄酮乙酸乙酯部位对大肠杆菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7免疫细胞氧化应激的调节作用陈海兰;蒙西南;赵尉丹;付远妨;韦雅妮;胡庭俊【摘要】通过观察鸡血藤总黄酮乙酸乙酯部位(FEA)预处理和后处理对大肠杆菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞所致氧化应激的影响,探讨其抗应激活性.试验将细胞分为空白对照组、LPS刺激组、LPS+阳性药物组(维生素C)、LPS+不同浓度FEA组(25、50、100、200 μg/mL).试验1的细胞先用药物预处理12 h,再用LPS 进行刺激;试验2则先用LPS刺激2 h后,再用药物进行处理.分别采用Griess法和荧光探针法检测NO分泌和活性氧(ROS)水平.结果发现,FEA预处理和后处理均能显著抑制LPS刺激引起的NO和ROS水平的升高(P<0.05),且后处理效果更明显.因此,FEA具有良好的抗氧化应激活性,且作为治疗药物比作为预防药物效果更佳.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2017(045)008【总页数】4页(P154-156,162)【关键词】鸡血藤总黄酮;乙酸乙酯部位;脂多糖;氧化应激;免疫细胞【作者】陈海兰;蒙西南;赵尉丹;付远妨;韦雅妮;胡庭俊【作者单位】广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005【正文语种】中文【中图分类】R285.5近年来，我国规模化养殖迅猛发展，在给畜牧养殖业带来革命性变化的同时，畜禽应激综合征的问题也开始显现。
饲养管理、环境变化、饲料营养、免疫治疗和运输等均会使动物产生应激，引起氧化损伤[1]。
大量研究表明，氧化应激可导致动物采食量下降、生长发育和抗病力降低、死亡率增高，并显著降低畜产品品质[1]。
鸡血藤清热解滋补肾阴
鸡血藤清热解滋补肾阴鸡血藤是一种名贵的中草药，在中医学中有着重要的地位。
它具有清热解毒、滋补肾阴的功效，被广泛应用于中医保健和治疗方面。
本文将重点介绍鸡血藤的药理作用、适应症和用法用量。
鸡血藤的药理作用主要体现在清热解毒和滋补肾阴方面。
首先，它具有明显的清热解毒作用。
当身体内热毒积累过多时，会出现口干舌燥、咽喉肿痛、身体热症等症状。
鸡血藤可以通过清热解毒来缓解这些症状，使身体内的热毒得到消散。
此外，鸡血藤还具有滋补肾阴的作用。
在中医学中，肾阴虚是一种常见的身体状况，而鸡血藤可以通过滋补肾阴来改善这种情况。
肾阴虚症状包括口干、腰酸、夜尿增多等，常见于老年人和长期患有慢性疾病的人群。
鸡血藤可以通过滋补肾阴来改善这些症状，调整身体的阴阳平衡。
鸡血藤的适应症非常广泛。
首先，对于患有火热引起的咽喉肿痛、口腔溃疡等症状的人群来说，鸡血藤可以起到良好的治疗效果。
其次，对于肾阴虚引起的症状，如腰酸、尿频等，鸡血藤也可以起到一定的缓解作用。
此外，还有一些与内热和肾阴虚有关的疾病，如痤疮、更年期综合征等，也可以使用鸡血藤进行治疗。
关于鸡血藤的用法用量，一般来说可以通过口服药物和外用药物两种方式。
对于内服，一般建议每次服用10-15克的鸡血藤，可以煎汤或者冲服。
对于外用，可以将鸡血藤研成粉末后，加入搽剂或者药膏中外用。
不过，具体的用法用量还是需要根据个人的实际情况和医生的建议来确定。
总之，鸡血藤是一种具有清热解毒和滋补肾阴功效的中草药。
它的药理作用主要体现在清热解毒和滋补肾阴方面，适应症包括各种内热和肾阴虚引起的症状。
在使用时，要严格按照医生的建议和用法用量来进行使用，以确保药物的安全和疗效。
（字数：515字）。
鸡血藤防治动脉硬化相关药理作用
鸡血藤防治动脉硬化相关药理作用摘要：鸡血藤常用于预防和治疗冠心病、脑梗死、肢体动脉硬化闭塞症等疾病，具有调节血脂、抗炎症反应、抗氧化应激、抗动脉硬化、抗肿瘤作用和抗病毒作用等众多药理作用。
本次研究收集近年来有关鸡血藤药理作用的文献进行分析归纳，根据鸡血藤药理作用在临床治疗中存在的问题，旨在进一步开发和利用鸡血藤。
关键词：鸡血藤；动脉硬化；药理作用鸡血藤又名活血藤，是传统的一味活血化瘀的中药。
鸡血藤是豆科植物密豆花的干燥藤茎，因其收割时藤汁色如同鸡血而得名。
具有活血补血，调经止痛，舒筋活络的功效，活性成分复杂多样，主要以黄酮类化合物为主[1]。
常被用于治疗女性月经不调、痛经，风湿，麻木瘫痪等疾病。
现代医学上常将鸡血藤用于预防和治疗冠心病、脑梗死、肢体动脉硬化闭塞症等疾病，为进一步开发和利用鸡血藤，本次研究收集近年来有关鸡血藤药理作用的文献，进行分析和归纳，具体报道如下。
1.药理作用研究1.1抗血小板聚集研究动脉硬化是动脉的非炎症性病变，主要包括动脉粥状硬化、小动脉硬化等多种类型。
“血栓形成学说”认为血小板促进平滑肌细胞增生，而平滑肌细胞是导致动脉粥样硬化的关键。
所以，寻找抗血小板聚集的有效药物能预防和治疗动脉粥样硬化。
相关研究通过研究鸡血藤提取物对大鼠离体主动脉舒张和抗血小板聚集的影响，发现鸡血藤提取物能有效防止血小板聚集，防止动脉硬化，促进血液循环。
尹小明等人在他人研究的基础上进一步筛选出鸡血藤抗血小板聚集的有效成分，即鸡血藤总黄酮，并与非黄酮成分、阿司匹林对比，发现鸡血藤总黄酮能有效降低血小板聚集作用，且无副作用，更为安全。
1.2调节血脂研究经研究发现，动脉粥样硬化最重要的原因是血脂异常，因此，寻找调节血脂异常的有效方法是预防和治疗动脉粥样硬化的有效措施。
目前临床治疗动脉粥样硬化通常采用药物治疗，而药物治疗容易出现诸多并发症，如肝功能受损等。
当前学术界主要从中医角度寻找能够高效调节血脂异常的药物，在高效治疗的同时降低并发症的发生率[2]。
广西产野生与栽培鸡血藤的总黄酮含量研究
广西产野生与栽培鸡血藤的总黄酮含量研究李斌;李霄;宁小青;张志;田辉【摘要】[目的]研究广西产野生和栽培鸡血藤干燥藤茎的总黄酮含量差异.[方法]用50％乙醇超声提取广西产野生和栽培鸡血藤药材的总黄酮,采用紫外-可见分光光度法对总黄酮进行含量测定.[结果]广西产野生鸡血藤总黄酮含量较高,人工栽培的鸡血藤药材的总黄酮含量较低.[结论]本实验结果可为鸡血藤的研究及其人工栽培提供参考依据.【期刊名称】《广西中医药大学学报》【年(卷),期】2012(015)002【总页数】3页(P53-55)【关键词】鸡血藤;总黄酮;紫外-可见分光光度法【作者】李斌;李霄;宁小青;张志;田辉【作者单位】广西中医药大学,广西南宁530001;广西精通派尼生物药业有限公司,广西南宁530022;广西中医药大学,广西南宁530001;广西中医药大学,广西南宁530001;广西中医药大学,广西南宁530001【正文语种】中文【中图分类】R284.1鸡血藤系豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎，是广西的道地中药材。
其性温，味苦、甘，具有补血、活血、通络之功效［1］。
广泛用于妇科、风湿痹痛等类型的中成药生产和配方用药，药材需求量大，目前野生资源稀缺，近年来广西正在进行鸡血藤的栽培研究。
吕惠珍等［2］研究了广西各地和越南产的鸡血藤药材浸出物、总灰分、酸不溶性灰分含量，指出鸡血藤人工栽培切实可行。
黄酮类是鸡血藤的主要有效成分之一［3］，笔者采用紫外-可见分光光度法（UVVis）对广西不同地区野生和人工栽培鸡血藤进行总黄酮含量的测定，为鸡血藤的人工栽培及质量控制研究提供参考依据。
1 材料与仪器1.1 仪器与试药 8453紫外-可见分光光度计（美国Agilent公司生产），B35005-MT超声清洗仪（上海必能信公司生产）；BP211D电子分析天平（德国赛多利斯公司生产）；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110405，供含量测定用）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、甲醇、无水乙醇均为分析纯。
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法总黄酮是一类在植物中广泛存在的生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性。
总黄酮的提取方法主要分为常规提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超临界流体提取法等。
下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。
1. 常规提取法：常规提取法是最常用的总黄酮提取方法之一。
该方法的原理是将植物样品与某种适合的溶剂进行浸提，溶剂中的总黄酮溶解出来，然后通过过滤和浓缩得到黄酮提取物。
操作步骤：(1) 将研磨后的植物样品与适量的溶剂加入烧瓶中，一般常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
(2) 将烧瓶放入提取装置中，加热浸提，提取时间一般为1-3小时，提取温度根据溶解度可在25-60之间选择。
(3) 提取结束后，使用滤纸、膜过滤或离心等方式分离固液，将液相收集到锥形瓶中。
(4) 将液相进行浓缩，可采用旋转蒸发、真空浓缩或减压浓缩等方法。
(5) 最后得到的黄酮提取物可在低温下保存或进行进一步的分离和纯化。
2. 超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是在常规提取法的基础上结合超声波技术进行提取。
超声波的作用可以通过物理振荡和微压力变化，促使溶剂渗透进入植物细胞中，增加提取效率。
操作步骤：(1) 将样品与适量的溶剂放入超声波提取仪中，超声波输出频率一般在20-100 kHz之间。
(2) 开始超声波处理，提取时间一般较短，通常为10-30分钟。
(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。
3. 微波辅助提取法：微波辅助提取法是一种利用微波辐射能量加热样品，从而促进溶质的溶解和渗透的方法。
操作步骤：(1) 将植物样品与适量的溶剂放入微波辅助提取系统中。
(2) 设置合适的微波功率和时间，一般微波功率选取在200-1000 W之间，时间一般为5-20分钟。
(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。
4. 超临界流体提取法：超临界流体提取法是在超临界温度和压力条件下利用超临界流体作为溶剂进行提取的方法。
蒲公英总黄酮提取及对羟自由基清除作用
2009年37卷第3期广州化工蒲公英总黄酮提取及对羟自由基清除作用陆海峰，罗建华，蒙春越，张丽丹，冯玲，黄锁义(右江民族医学院化学教研室，广西百色533000)蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-M azz ．)，又名黄花地丁，为菊科多年生草本植物蒲公英其多种同属植物的带根全草，夏秋两季采收，入食则鲜用，入药鲜用，晒干应用均可。
蒲公英全国各地均有分布，生长于山坡草地，田头路边，是药食俱佳的天然绿色植物。
明李时珍言“苗可食、可啖”；“清王士雄言其嫩可为蔬，老则入药，洵为上品”。
蒲公英也是植物类良药，有“天然抗生素”之美称[1]．中医认为[1]：蒲公英性味苦、甘、寒，入肝、胃经，有清热解毒、消痈散结、利湿退黄、通淋止痛之功效，为中医传统清热解毒药物，历代医家将其用于治疗乳痈、疖肿等，疗效十分满意。
现代医学也已研究证实，蒲公英具有很高的药用价值[2]。
蒲公英对金黄色葡萄球菌耐药菌株、溶血性链球菌及肺类双球菌、脑膜炎球菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等均有一定的杀菌作用[2]。
长期临床试验也证明[2]：蒲公英是一味珍贵的中草药，具有消炎、凉血、利尿、利胆、轻泻、健胃、防癌等多种功能。
主治急性乳腺炎、腮腺炎、淋巴腺炎、瘰疠、疔毒疮肿、急性结膜炎、咽炎、感冒发烧急性扁桃体炎、风湿性关节炎、急性支气管炎、胃炎、肝炎、肺炎、胆囊炎、急慢性阑尾炎、泌尿系统感染、骨髓炎、阴道炎、盆腔炎、十二指肠溃疡、痤疮、粉刺、结石症以及多种癌症等数十种病症。
其验方广泛流传于民间，许多医书和报刊都有刊载。
蒲公英是传统的药用植物，其全草含有多种活性成分，如蒲公英甾醇、蒲公英苦素和黄酮类等，除了具有利胆保肝、抗菌消炎、利尿、抗癌及增强机体免疫等之外，其水提物能降低糖尿病的并发症，近来的研究表明蒲公英的药用价值与其所含黄酮类物质有着极大的关系，引起了人们的关注[3]。
黄酮类有效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并以此开发出多种药品和保健食品[4]。
药用植物资源调查-鸡血藤
鸡血藤摘要：鸡血藤，鸡血藤正品及混淆品，分布及栽培的区域，生境条件，资源开发利用现状（产品，企业）。
一、活性成分，功效及主治（一）.化学成分:从鸡血藤中发现的化合物结构类型主要有黄酮类、萜类、甾醇类、蒽醌类、内酯类、苷类及其他类型化合物,其中黄酮类化合物研究最多.（二）.性味：味苦，微甘，性温（三）.归经：肝，肾经（四）.功效：补血活血（五）.功能主治：鸡血藤是一味活血化瘀中药, 能补血、活血、通络;主治月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛。
它具有“去瘀血, 生新血”的功效, 被称之为“血分之圣药”。
同时它能促进造血功能、抗肿瘤、抗癌、病毒、免疫调节、对酪氨酸酶双向调节、抗炎、抗氧化、镇静催眠等药理作用。
二、正品及混淆品的考证记载最早、使用历史最悠久的凤庆鸡血藤,其基原为五加科植物生境异型南五味子。
《中国药典》收载的鸡血藤以豆科植物密花豆为基原,是20世纪60年代以来逐渐形成的主流品种。
鸡血藤各地习用品种和混杂品种甚多,药材质量难以控制。
建议将凤庆鸡血藤载入《中国药典》。
同时,制定专属性的质量标准,保证药材和中成药产品的质量。
（一）.正品：1.鸡血藤，鸡血藤为豆科植物密花豆的藤茎。
拉丁植物动物矿物名：Spatholobus suberectus Dunn[Butea suberecta （Dunn）Blatter] 本质藤本，老茎砍断时可见数圈偏心环，鸡血状汁液从环处渗出。
三出复叶互生；顶生小叶阔椭圆形，小托叶针状。
圆锥花序腋生，大型，花多而密，花序轴、花梗被黄色柔毛；花萼肉质筒状，两面具黄色柔毛；花冠白色，肉质，旗瓣近圆形，具爪；子房具白色硬毛。
荚果舌形，有黄色柔毛；种子1颗，生荚果先端。
花期6-7月，果期8-12月。
2.凤庆南五味子，为木兰科南五味子属下的一个种，拉丁名：Kadsura interior Kadsura heteroclita (Roxb.) Craib（异形南五味子）凤庆南五味子又称顺宁鸡血藤，常绿木质藤本，无毛，新枝暗绿色，基部宿存有数枚三角状芽鳞。
中药鸡血藤研究现状
中药鸡血藤研究现状标签：鸡血藤；本草品种；活血化瘀有史记载以来，传统中药鸡血藤就是一个来源繁杂的本草品种，现行《中华人民共和国药典》（2015年版）一部收录豆科密花豆属植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn 的干燥藤茎确定为鸡血藤正品。
目前临床上主要用于妇科、心脑血管、骨科等。
中药品种众多，用药广泛如补血调经片、新血宝胶囊等，妇科用药花红片、金鸡片，内科用药正天丸、三九壮骨关节丸、养血清脑颗粒，其他还有“鸡血藤浸膏片”、“鸡血藤糖液”、“活血通经丸”等。
本文对近年来中药鸡血藤的药学研究进行归纳分析，以促进其后续开发利用。
1 资源分布鸡血藤因采割时藤汁赤如鸡血而得名，是沿用千年的活血化瘀药之一，能“去癖血、生新血”，为“血分之圣药”。
陈道峰[1]对各省区市场上商品药材及鸡血藤原植物进行的调查表明，鸡血藤的基源植物主要分属豆科和五味子科6个属的13个种及2个变种；鸡血藤植物基源复杂，民间习用品种繁杂不一，方石林[2]认为，是由于各类相关本草古籍记载不详，当前各地药材名称混乱、习用品种标准不一，相关人员鉴别知识匮乏，质量意识淡薄。
2 化学成分目前从鸡血藤中分离出的化合物大多为黄酮类。
（1）黄酮类芒柄花素、樱黄素、阿夫罗摩辛、大豆素、卡亚宁、奥刀拉亭、毛蕊异黄酮、染料木素、野靛黄素、黄苷草苷、密花豆素、柚皮素、柚皮素、甘草素、圣草酚、二氢槲皮素、二氢山奈酚、黄苏木素、新异甘草素、甘草查尔酮、6-甲氧基圣草酚。
（2）花青素类Epicatechin、表食子儿茶素、（-）-catechin、Gallocatechin、Afzelechin Dulcisflavan、（Epi）afzelechin-（epi）catechin、（+）-catechin-（4→8）-（-）-epicatechin.（3）酚酸类3，5-二甲氧基-4-羥基酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、4-羟甲基-2，6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香酸葡萄糖苷、4，6-二羟基-2-O-（β-D-吡喃葡萄糖苷）、苯乙酮、松香、顺式紫丁香苷、没食子酸。
响应面法优选鸡血藤总黄酮的提取工艺
中药及天然药物响应面法优选鸡血藤总黄酮的提取工艺张祺嘉钰１,２,王文静１,２,张㊀琳１,孙㊀毅３∗(１．陕西中医药大学,咸阳㊀７１２０４６;２．陕西省中医药管理局中药炮制学重点学科,咸阳㊀７１２０４６;３．西藏民族大学附属医院,咸阳㊀７１２０８２)摘要:目的㊀采用响应面法优选鸡血藤总黄酮的提取工艺.方法㊀通过中心组合方法,研究乙醇体积分数㊁料液比㊁提取时间及提取次数对鸡血藤总黄酮得率的影响.结果㊀鸡血藤总黄酮的最佳提取工艺为:体积分数为５０％的乙醇,料液比为１ʒ４５,回流提取２次,每次２．５h .结论㊀在最佳提取工艺条件下,鸡血藤总黄酮得率为０．５８％,该工艺条件可为鸡血藤总黄酮的工业生产提供依据.关键词:鸡血藤;总黄酮;提取工艺;响应面法D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０２．００１中图分类号:R ２８４㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０２Ｇ１４３Ｇ０４O p t i m i z a t i o no f e x t r a c t i o n t e c h n o l o g y of t o t a l f l a v o n o i d s f r o m M i l l e t t i a r e t i c u i a t a b y r e s po n s e s u r f a c em e t h o d Z HA N G Q i j i a y u １,２,WA N G W e n j i n g １,２,Z HA N G L i n １,S U N Y i ３∗(１．S h a a n x iU n i v e r s i t y o fC h i n e s e M e d i c i n e ,X i a n y a n g ７１２０４６,C h i n a ;２．S h a a n x iT r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n eO f f i c e o f t h eK e y S u b j e c t o nC h i n e s eM a t e r i a M e d i c a ,X i a n y a n g ７１２０４６,C h i n a ;３．T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX i z a n g M i n z uU n i v e r s i t y ,X i a n y a n g ７１２０８２,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T oo p t i m i z e t h e e x t r a c t i o n p r o c e s s f o r t o t a l f l a v o n o i d s f r o m M i l l e t t i a r e t i c u i a t a b y a d o p t i n g r e s po n s e s u r f a c e m e t h o d ．M e t h o d s T h e i n f l u e n c e o f t h e e t h a n o l v o l u m e f r a c t i o n ,r a t i o o f s o l i d t o l i q u i d ,e x t r a c t i o n t i m e a n d t h e e x t r a c t i o n f r e q u e n c yo n t h e t o t a l f l a v o n o i d s f r o m M i l l e t t i a r e t i c u i a t a w a s s t u d i e db y u s i n g c e n t r a l c o m p o s i t e d e s i g n ．R e s u l t s T h e o pt i m a l c o n d i t i o n so f e x t r a c t i o nw e r e a s f o l l o w s :５０％e t h a n o l ,t h e r a t i o o f s o l i d t o l i q u i d １ʒ４５,r e f l u x i n g a n d e x t r a c t i n g t w i c e ,a n d ２．５h f o r e a c h t i m e ．C o n c l u s i o n U n d e r t h e o p t i m i z e de x t r a c t i o n c o n d i t i o n s ,t h e a c t u a l e x t r a c t i o n y i e l dw a s ０．５８％．A n d t h em e t h o dc a n p r o v i d e ab a s i s f o r i n d u s t r i a l pr o d u c t i o no f t h e t o t a l f l a v o n o i d s f r o m M i l l e t t i a r e t i c u i a t a ．K e y wo r d s :M i l l e t t i a r e t i c u i a t a ;t o t a l f l a v o n o i d s ;e x t r a c t i o n t e c h n i q u e ;r e s p o n s e s u r f a c em e t h o d 基金项目:国家自然科学基金项目(编号:８１４０２１８６);陕西中医药大学科研基金项目(编号:２０１６Q N ３８)作者简介:张祺嘉钰,女,实验师∗通信作者:孙毅,男,住院医师㊀㊀鸡血藤(M i l l e t t i a r e t i c u i a t a )为豆科崖豆藤属植物,是传统的活血化瘀药[１],常取干燥藤茎入药[２],主要分布于越南㊁老挝及我国广西和广东等地[３],具有活血补血㊁调经止痛和舒筋活络的功效[４].鸡血藤主要成分包括黄酮类㊁萜类和木质素类等[５Ｇ６].现代研究表明,其药理作用和临床应用较为广泛[７Ｇ８],能够降血脂㊁抗病毒和抗肿瘤等[９].响应面法能有效结合实验技术与统计设计[１０],灵敏考察各因素之间的交互作用并找到最佳点[１１].目前,对鸡血藤总黄酮的提取工艺研究尚未见任何报道.本实验首次在单因素实验的基础上,以乙醇为溶剂,选取乙醇体积分数㊁料液比及提取时间３个因素进行响应面设计,通过响应面法优化鸡血藤总黄酮的提取工艺,为工业化生产制备鸡血藤总黄酮提供理论依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀R ２００D 电子分析天平(德国S a t o r i u s 公司);U V Ｇ１１０２紫外可见分光光度计(上海天美责任有限公司).１．２㊀试药㊀鸡血藤药材,购于咸阳市百姓乐大药房,经陕西中医药大学王继涛高级实验师鉴定为豆科崖豆藤属鸡血藤的藤茎;芦丁为对照品,购于陕西省食品药品检验研究院,批号为MU S T Ｇ１４１０１４１０.２㊀方法２．１㊀溶液的制备㊀取芦丁对照品５．０m g ,加入体积分数为６０％的乙醇,配制成质量浓度为０．５m gm L －１的对照品溶液;取鸡血藤干燥粗粉５．０g ,加入体积分数为６０％的乙醇１００m L ,加热回流提取２h ,共２次,过滤并合并滤液,用体积分数为６０％的乙醇溶解水浴蒸干后的残留物,过滤,取续滤液,用体积分数为６０％的乙醇定容至刻度,即得供试品溶液.２．２㊀建立鸡血藤总黄酮的测定方法２．２．１㊀确定最大吸收波长㊀分别量取２．１项下制备的对照品溶液和供试品溶液各０．３m L ,用硝酸铝Ｇ亚硝酸钠法显色[１２],经紫外分光光度计扫描全程波长,结果在５０６n m 波长处显示最大吸收.２．２．２㊀标准曲线的绘制将不同体积的对照品溶液显色后,在５０６n m波长处测定吸光度值A.以质量m为横坐标(x)㊁吸光度值A为纵坐标(y),绘制标准曲线,回归方程:y＝１０．０８６x＋０．０３８４(r＝０．９９９４).２．２．３㊀鸡血藤总黄酮得率的计算㊀称取１．０g鸡血藤,用硝酸铝Ｇ亚硝酸钠法显色,计算鸡血藤总黄酮得率Y,公式:Y＝CˑNˑVˑ１０－６ːm(C表示提取液总黄酮质量浓度g m L－１,N表示提取液稀释倍数, V表示提取液体积m L,m为样品质量g).２．２．４㊀精密度㊀精密量取２．１项下制备的对照品溶液０．２m L,显色后连续测定６次吸光度值A,R S D值为０．０９％,结果表明精密度良好.２．２．５㊀稳定性㊀精密量取２．１项下制备的供试品溶液适量,显色后分别在０,０．５,１．０,１．５和２．０h测定吸光度值A,R S D值为０．２１％,结果表明稳定性良好.２．２．６㊀重复性㊀取同一批次鸡血藤药材６份,按照２．１项下方法制备供试品溶液,显色后测定吸光度值A,R S D值为０．３１％,结果表明重复性良好.２．２．７㊀加样回收率㊀取同一批次鸡血藤药材６份,每份５g,按照２．１项下方法制备供试品溶液,分别吸取１m L滤液,显色后测定吸光度值A.另取６份滤液,各加入０．１m L芦丁对照品溶液,分别测定吸光度值A,计算加样回收率.结果见表１.表１㊀加样回收率实验结果T a b．１R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t供试品/g 样品含量/m g对照品加入量/m g测得量/m g回收率/％平均回收率/％R S D/％１．０００２７０．３２０．０５７１．３２１００．１９９．９８０．５８０．９９９７７４．３３０．０５７３．３５９８．０１．０００３７３．１２０．０５７４．０９９７．６０．９９９８６８．０９０．０５６９．１０１０１．２０．９９９６７２．９８０．０５７３．９７９９．８１．０００１７７．８４０．０５７８．８７１０３．２２．３㊀单因素实验２．３．１㊀乙醇体积分数㊀分别精确称取鸡血藤粗粉７份,每份１．０g,料液比为１ʒ４０,依次加入体积分数分别为２０％,３０％,４０％,５０％,６０％,７０％和８０％的乙醇溶液,回流提取２次,每次２h.结果表明,乙醇体积分数为５０％时鸡血藤总黄酮得率最高.２．３．２㊀料液比㊀分别精确称取鸡血藤粗粉７份,每份１．０g,依次加入体积分数为５０％的乙醇,料液比分别为１ʒ１０,１ʒ２０,１ʒ３０,１ʒ４０,１ʒ５０,１ʒ６０及１ʒ７０,回流提取２次,每次２h.结果表明,料液比为时鸡血藤总黄酮得率最高.２．３．３㊀提取时间㊀分别精确称取鸡血藤粗粉７份,每份１．０g,料液比为１ʒ４０,用体积分数为５０％的乙醇加热回流提取２次,每次提取１．０,１．５,２．０,２．５,３ ０,３．５和４．０h.结果表明,提取时间为２ ５h时鸡血藤总黄酮得率最高.２．３．４㊀提取次数㊀分别精确称取鸡血藤粗粉４份,每份１．０g,料液比为１ʒ４０,用体积分数为５０％的乙醇加热回流,分别提取１,２,３和４次,每次２．５h.结果显示,加热回流提取２次时鸡血藤总黄酮得率最高.２．４㊀提取工艺研究㊀通过研究鸡血藤总黄酮方法学及单因素实验,分析结果数据,考察乙醇体积分数㊁料液比及提取时间对鸡血藤总黄酮得率Y的响应值.根据D e s i g nE x p e r t８．０．５软件B o xＧB e h n k e n３因素３水平实验设计方案,见表２.表２㊀响应面实验设计方案和结果T a b．２D e s i g ns c h e m ea n dr e s u l t so f r e s p o n s es u r f a c ee x p e r iＧm e n t实验编号A,乙醇体积分数/％B,料液比C,提取时间/hY,总黄酮得率/％１５０１ʒ４０２．５０．５６７２５０１ʒ４０２．５０．５９５３５０１ʒ４０２．５０．５６６４４０１ʒ５０２．５０．５２２５６０１ʒ４０３．００．４３６６５０１ʒ３０３．００．５１２７５０１ʒ４０２．５０．５７３８５０１ʒ５０３．００．５１６９６０１ʒ４０２．００．５２８１０４０１ʒ４０２．００．４４２１１６０１ʒ３０２．５０．５２４１２６０１ʒ５０２．５０．５２９１３５０１ʒ５０２．００．５２２１４５０１ʒ４０２．５０．５８３１５４０１ʒ４０３．００．５０１１６４０１ʒ３０２．５０．４９５１７５０１ʒ３０２．００．４７２３㊀结果与分析３．１㊀结果㊀对B o xＧB e h n k e n实验设计研究进行鸡血藤总黄酮得率的考察,结果见表２.３．２㊀方差分析㊀采用D e s i g nＧE x p e r t８．０．５软件,通过对实验数据结果的方差分析进行研究,结果见表３.模拟失拟项(P＝０．３５３４)差异无统计学意义,表明实验过程中有误差产生.P值结果表明,影响鸡血藤总黄酮得率大小的３个因素依次为:提取时间＞乙醇体积分数料液比.表３㊀响应面二次模型方差分析结果T a b ．３R e s u l t s o f v a r i a n c e a n a l y s i s o f t h e e s t a b l i s h e d r e g r e s s i o nm o d e l 方差来源平方和自由度均方F P 显著性模型０．０３２９３．５６ˑ１０－３２０．０００．０００３∗A ４．０６ˑ１０－４１４．０６ˑ１０－４２．２８０．１７４７B ９．２５ˑ１０－４１９．２５ˑ１０－４５．１９０．０５６８C １．２５ˑ１０－７１１．２５ˑ１０－７７．０２ˑ１０－４０．９７９６A B １．２１ˑ１０－４１１．２１ˑ１０－４０．６８０．４３６９A C ５．７０ˑ１０－３１５．７０ˑ１０－３３２．０１０．０００８∗B C ５．２９ˑ１０－４１５．２９ˑ１０－４２．９７０．１２８５A２８．１６ˑ１０－３１８．１６ˑ１０－３４５．８３０．０００３∗B ２９．８２ˑ１０－４１９．８２ˑ１０－４５．５２０．０５１２C ２０．０１３１０．０１３７４．２１＜０．０００１㊀∗残差１．２５ˑ１０－３７１．７８ˑ１０－４失拟性６．５０ˑ１０－４３２．１７ˑ１０－４１．４５０．３５３４误差５．９７ˑ１０－４４１．４９ˑ１０－４总离差０．０３３１６㊀注:∗为差异有统计学意义.３．３㊀响应面结果分析㊀见表３.乙醇体积分数和料液比的交互作用不显著(P ＝０．４３６９＞０．０５).当乙醇体积分数固定时,料液比越大,总黄酮得率越大;而料液比接近１ʒ４５时,总黄酮得率增加不明显.当固定料液比时,乙醇体积分数与总黄酮得率呈正比;当乙醇体积分数接近５０％时,总黄酮得率最大.由此可知,当料液比为１ʒ４５,体积分数为５０％的乙醇时,鸡血藤总黄酮得率最大时.乙醇体积分数和提取时间的交互作用显著(P ＝０．０００８＜０．０５).当乙醇体积分数不变时,提取时间与总黄酮得率呈正比.当提取时间接近２．５h 时,总黄酮得率最大;当固定提取时间时,乙醇体积分数越大,总黄酮得率越大.当乙醇体积分数接近５０％时,总黄酮得率最大.由此可知,当提取时间为２．５h ㊁体积分数为５０％的乙醇时,鸡血藤总黄酮得率最大.提取时间和料液比的交互作用不显著(P ＝０ １２８５＞０．０５).当固定料液比时,提取时间越长,总黄酮得率越大.当提取时间接近２．５h 时,总黄酮得率增加不明显;当固定提取时间时,料液比越大,则总黄酮得率越大;当料液比接近１ʒ４５时,总黄酮得率最大.由此可知,当提取时间为２．５h ,料液比为１ʒ４５时,鸡血藤总黄酮得率最大.各因素交互作用的响应面图见图１.图１㊀各因素交互作用的响应面图F i g ．１R e s po n s e s u r f a c e p l o t s o f t h e i n t e r a c t i o n s o f d i f f e r e n t f a c t o r s ３．４㊀最佳提取工艺条件的确定㊀通过对响应面实验数据的处理及分析,确定鸡血藤总黄酮的最佳提取条件为:乙醇体积分数为５０．８７％,料液比为１ʒ４３．６１,提取时间为２．４７h ,得到的最大总黄酮得率为０ ５７％.结合生产实际及实验数据处理分析,得出鸡血藤总黄酮的最佳提取工艺条件:乙醇体积分数为５０％㊁料液比为１ʒ４５㊁提取时间为２．５h .３．５㊀验证实验㊀按照体积分数为５０％的乙醇,料液比为１ʒ４５,提取时间为２．５h 又进行了３次验证重复性实验,结果显示,得到的鸡血藤总黄酮得率分别为０ ５８％,０．５６％和０．５５％,平均得率为０．５６％.４㊀讨论黄酮类物质是鸡血藤的主要有效成分,具有广泛的药理活性[１３].现代研究表明,提取鸡血藤总黄酮的溶剂主要有水㊁甲醇㊁乙醇㊁乙酸乙酯㊁丙酮㊁氯仿㊁乙醚和石油醚等[１４Ｇ１７].本实验在制备样品溶液时,分别比较了最常用的水㊁乙醇及丙酮３种溶剂,最终以乙醇为溶剂提取得到的鸡血藤总黄酮得率较高,故本实验选用乙醇作为提取溶剂.本实验是首次以鸡血藤总黄酮得率为指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法确定鸡血藤总黄酮提取的最优工艺条件.结果表明,在体积分数为５０％的乙醇㊁料液比为１ʒ４５㊁回流提取２次㊁每次２ ５h 的工艺条件下,鸡血藤总黄酮得率为０ ５８％,高于其他条件,与理论预测值基本一致,故该工艺条件可为鸡血藤总黄酮的工业生产提供依据.参考文献:[１]㊀何玉琴,金晨,黄斌,等．丰城鸡血藤化学成分分离及鉴定[J ]．中国实验方剂学杂志,２０１８,２４(２):５１Ｇ５６．[２]㊀邓家刚,梁宁,周程艳．鸡血藤药效及作用机理研究进展[J ]．广西中医药,２００６,２９(６):３１１Ｇ３１３．[３]㊀陈晓军．鸡血藤的药理作用研究综述[J ]．中国民族民间医药,２００９,１３(１１):３Ｇ５．[４]㊀国家药典委员会．中国药典:２０１５年版:一部[S ]．北京:中国医药科技出版社,２０１５:１９４．[５]㊀孙立东,李琦,尹婕,等．肿瘤细胞诱导的血小板聚集在肿瘤转移中的作用及鸡血藤治疗的应用展望[J ]．中国实验方剂学杂志,２０１８,２４(１４):２２９Ｇ２３４．[６]㊀余弯弯,双鹏程,张凌．鸡血藤化学成分及药理作用研究概况[J ]．江西中医药大学学报,２０１４,２６(４):８９Ｇ９２．[７]㊀秦建鲜,黄锁义．鸡血藤药理作用的研究进展[J ]．时珍国医国药,２０１４,２５(１):１８０Ｇ１８３．[８]㊀李雪,李萍,王燕,等．鸡血藤在银屑病中的应用及现代研究进展[J ]．中华中医药学刊,２０１８,３６(２):３６０Ｇ３６４．[９]㊀秦双双,朱艳霞,韦坤华,等．鸡血藤的本草沿革与黄酮类成分及其药理学研究进展[J ]．中国中药杂志,２０１８,４３(１１):２２１６Ｇ２２２３．[１０]白璐,贺文娟,崔春利,等．B o x ＧB e h n k e n 响应面法优化延胡索配方颗粒的提取工艺[J ]．西北药学杂志,２０１３,２８(１):１Ｇ４．[１１]陈睿,杨范莉,张琳．响应面法优选桑寄生总黄酮的提取工艺[J ]．西北药学杂志,２０１６,３１(４):３６７Ｇ３７０．[１２]白殿罡．荠菜总黄酮的含量测定及抗氧化分析[J ]．长春大学学报,２００９,１９(１):７５Ｇ７７．[１３]符影,程悦,陈建萍,等．鸡血藤化学成分及药理作用研究进展[J ]．中草药,２０１１,４２(６):１２２９Ｇ１２３４．[１４]陈育平．正交分析法筛选陈皮总黄酮的提取溶剂[J ]．大家健康,２０１２,６(６):４Ｇ６．[１５]徐桂花,于颖．溶剂提取法提取银杏叶总黄酮的工艺研究[J ]．农业科学研究,２００８,２９(３):３７Ｇ３９,６１．[１６]刘文辉,崔鸿江,王静峰．紫外可见分光光度法测定抱茎苦荬菜中总黄酮的含量[J ]．内蒙古医学杂志,２０１０,４２(９):１０４２Ｇ１０４４．[１７]高健,李凤伟．荠菜总黄酮的提取工艺条件研究[J ]．盐城工学院学报:自然科学版,２０１１,２４(２):７Ｇ１０．(收稿日期:２０１８Ｇ０７Ｇ０９)基金项目:山东省农业科学院青年科研基金项目(编号:２０１５Y Q N ５７)作者简介:李秀娟,女,硕士,教授∗通信作者:刘超,男,博士,副研究员,硕士生导师乌奴龙胆的化学成分研究李秀娟１,孙㊀会２,杨清梅３,裴树峰３,刘㊀超３∗(１．日照职业技术学院海洋工程研究中心,日照㊀２７６８２６;２．山东诚创医药技术开发有限公司,济南㊀２５０１０１;３．山东省农业科学院农产品研究所,济南㊀２５０１００)摘要:目的㊀研究龙胆科龙胆属植物乌奴龙胆G e n t i a n a u r n u l a H．S m i t h 全草的化学成分.方法㊀运用硅胶㊁S e ph a d e xL H Ｇ２０凝胶和M C I 色谱进行分离和纯化,通过现代波谱学方法,包括红外光谱㊁紫外光谱㊁旋光谱㊁质谱和核磁共振进行结构鉴定.结果㊀１２个单体化合物从乌奴龙胆乙酸乙酯部位中分离获得,分别鉴定为:莨菪亭(１);３,５Ｇ二羟基Ｇ６,７,３ᶄ,４ᶄＧ四甲氧基黄酮(２);１,５,８Ｇ三羟基Ｇ３Ｇ甲氧基酮(３);１,５,７Ｇ三羟基Ｇ３Ｇ甲氧基酮(４);１,３,７,８Ｇ四羟基酮(５);１,７Ｇ二羟基Ｇ３,８Ｇ二甲氧基酮(６);１,３,８Ｇ三羟基Ｇ７Ｇ甲氧基酮(７);２Ｇ羰基坡曼酸(８);１９αＧ羟基Ｇ３Ｇ乙酰基乌苏酸(９);槲皮素(１０);科罗索酸(１１)和苜蓿素(１２).结论㊀除化合物３和５,其余化合物均为首次从该植物中分离获得.关键词:乌奴龙胆;龙胆属;酮;黄酮;三萜;化学成分D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０２．００２中图分类号:R ２８４㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０２Ｇ１４６Ｇ０５。
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作者：黄锁义 罗建华 张丽丹
【摘要】 目的探讨鸡血藤总黄酮的提取、鉴别及对羟自由基的清除作用，以充分利用鸡血藤
植物资源，避免资源的浪费。 方法 采用超声波乙醇浸提法从鸡血藤中提取黄酮类物质，对
所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量，用鸡血藤总黄酮对羟自由基清除
作用进行试验。结果测得样品中总黄酮的含量c=0.3167mg/ml，回收率为99.94%，其纯度和
产率均较高。结论 该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取鸡血藤黄酮类物质的有效途
径。鸡血藤总黄酮提取液对fenton体系产生的·oh自由基有很好的清除作用。
【关键词】 超声波提取 鸡血藤 总黄酮 自由基
1 仪器与试剂
1.1 仪器kq5200db型数控超声波清洗器（超声工作频率40 khz、江苏省昆山市超声仪
器有限公司）；uv-755b紫外可见分光光度计（上海 分析 仪器总厂）；zf-i型三用紫外分析
仪(上海顾村光电仪器厂)；shb-iii循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
1.2 试剂95%乙醇ar；亚硝酸钠ar；硝酸铝ar；氢氧化钠ar；三氯化铝ar；盐酸ar；
氨水ar；冰醋酸ar；醋酸乙酯ar；乙酸镁ar；甲醇ar；镁粉ar；正丁醇ar；芦丁标准品
（中国药品生物制品检定所）；双氧水ar；硫酸亚铁ar；水杨酸ar；新鲜鸡血藤采自广西百
色市。
2 方法与结果
2.1 总黄酮成分提取取新鲜鸡血藤，烘干，粉碎。称取鸡血藤粉末6 g，加80 ml 95%
乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合
并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml左右为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙
醇稀释至刻度，得样品液。
2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定鸡血藤中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时
控制适宜ph值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 定量实验-总黄酮的含量测定
2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝
酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于
510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，
3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静
置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，
用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测吸光度。
结果见表1。
表1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度结果（略）
根据上表得回归方程：a=-0.031 1+13.518 4c，r=0.999 9。
2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制
备方法测定吸光度a=0.183，根据回归方程：a=-0.031 1+13.518 4c， 计算 样品中总黄酮
的含量c=0.3167 mg/ml。
2.3.4 回收率实验精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.10 mg/ml），
同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为99.94% 。