对二甲氨基苯甲醛比色法测定溶液中的尿素
对苯二甲胺 液相检测方法
对苯二甲胺液相检测方法苯二甲胺是一种常见的有机化合物，广泛应用于医药、农药和化学工业中。
检测苯二甲胺的方法有很多种，其中液相检测方法被广泛应用于实验室和工业生产中。
液相检测方法通常包括色谱法、电化学法和光谱法等。
其中，色谱法是检测苯二甲胺的常用方法之一。
它利用物质在液体移动的速度差异来进行分离和定量分析。
色谱法有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和薄层色谱法（TLC）等多种方法。
这些方法具备分离效果好、灵敏度高和重现性强的优点。
HPLC是液相色谱法中的一种常用方法。
它通过将混合物溶解在流动相中，利用样品组分在固定相上的分配系数差异，实现混合物的分离。
在检测苯二甲胺的同时，可以通过HPLC技术对其他有机物的含量进行分析和测定。
使用HPLC检测苯二甲胺，可以得到高分辨率的色谱图并准确测定样品中苯二甲胺的含量。
电化学法也是一种常用的液相检测方法。
它利用电流、电压和电荷等电化学参数的变化来检测苯二甲胺的存在和浓度。
与色谱法相比，电化学法具有操作简单、快速且无需复杂的样品前处理的优点。
此外，光谱法也可以用于苯二甲胺的液相检测。
光谱法包括紫外-可见吸收光谱、红外光谱和核磁共振光谱等。
这些方法通过测量样品中苯二甲胺与特定波长或频率光的相互作用，来确定其存在和浓度。
总之，对苯二甲胺的液相检测方法有很多种，其中色谱法、电化学法和光谱法是常用的方法。
这些方法具备分离效果好、灵敏度高和重现性强的特点，可以准确测定样品中苯二甲胺的含量。
在实验室和工业生产中选择合适的液相检测方法，可以及时、准确地监测苯二甲胺的浓度，从而保证产品质量和人身安全。
对二甲氨基苯甲醛比色法测定保健食品中胶原蛋白
试样 中胶原蛋 白在氯化亚锡盐 酸溶液 中水解释 放出羟脯 氨酸 ， 经氯胺 Ｔ氧化 ， 与对 二甲氨基 苯 甲醛在 一定温 度下发生 反应 ， 生成红色 的吡咯化合 物 ， 波长 ５０ｎ 在 ６ ｌ ｎ处测 吸光度 ， 比 色法定量 Ｊ 。
１ ２ 仪 器与 试 剂 ．
１０ ０
中国卫生检验杂志 ２０ ０ ７年 １ 第 １ 卷 第 １ 月 ７ 期 Ｃ ｉ ｓ ｕ ａ ｏ Ｈ ａｈＬ ｂｒ ｏ ｅ ｎｌ ｙ Ｊ ０ ； ｏ １ Ｎ ｈ ｅ Ｊ ｒ ｌ ｆ ｅｌ ａ ｏ ｔ ｙ ｃ ｏ ｇ ， ｎ ０ ７ Ｖ ｌ ７ ｏ ｎ ｅｏ ｎ ｔ ａｒ Ｔ ｈ ｏ ａ ２ １
（ ｅａ ｅｔ ｒ ｉ ａｅＣ ｎ ｏ ｎ ｒｖｎｉ ， ｈｎｚｏ ５ ０ ６ Ｃ ｉ ） Ｈ ｎ ｎＣ ｎｅ ｆ ｓ ｓ ｏｔ ｌ ｄＰｅｅｔ ｎ Ｚ ｅ ｇｈｕ４ ０ １ ，ｈｎ ｒｏ Ｄ ｅ ｒ ａ ｏ ａ
［ ｓｒｃ］ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｓ ｂｉ ｅ ｏ ｆＰ—Ｄｍｅ ｙ ｍｉ ｂ ｎａｄｈｄ ｏｏｉｅ ｙ ｆ ｅ ｒ ｎｔｎ ｃｌｇｎ ｉ Ａｂｔａｔ ｊｃｉ ： ｏ ｅｔ ｌｈ ａｍ ｔ ｄ ｏ ｖ ａ ｓ ｈ ｉ ｔ ｌ ｎ ｅｚ ｅｙｅ ｃｌｒ ｔ ｏ ｄ ｔｍｉａｏ ｏ ａｅ ｎ ｈａ ｏ ｌ ｍｒ ｒ ｅ ｉ ｌ
９ ９
【 化学测定方法】
对二甲 氨基苯甲 色 醛比 法测定 保健食品 中胶原 蛋白
翟文 慧 ， 苏永恒
（ 河南省疾病预防控制 中心 ， 郑州 ４ ０ １ ） ５ ０ ６ ［ 要】 目的 ： 立用 对二 甲氨基苯 甲醛 比色法分析保 健食 品中胶原 蛋 白的检测方法 。方法 ： 摘 建 样品在氯化亚锡 的盐 酸溶
［ ｅ ｏｄ ］ Ｐ—Ｄｍ ｔｙ ｍ ｎｂｎａｄｈｄ ； ｏ ａｅ ； ｙ ｒ ｙｒｌ ｅ Ｈ ａ ｏｓ Ｋ ｙｗ ｒｓ ｉｅ ｌ ｉｏｅ ｚ ｅｙｅ Ｃ ｌｇｎ Ｈ ｄｏ ｐｏｉ ； ｅｌ ｆ ｄ ｈ ａ ｌ ｘ ｎ ｈ ｔ ｏ 胶原 蛋 白是一种 白色 、 透 明、 不 无支链 的纤维 蛋 白质 。羟 脯氨 酸是 胶原 蛋 白所 特有 的氨基 酸 ， 其在 胶原 蛋 白 中的含量 为胶原氨基酸总质量 的 １ ％… 。研 究表 明 ， ０ 胶原 蛋 白可降低 血甘油三酯和胆 固醇 ， 保持血 管的正 常功能 ； 并可增 高体 内某 些缺乏的必需微量 元素 ； 脯氨酸 是血 浆 中运输 钙到 骨细 胞 羟 的运载工 具 ； 对 妇科 疾病 及 神 经 衰 弱 也有 很 好 的治 疗 作 它 用 Ｊ 。因此 ， 现在市 场上 有许 多此 类 的保健 食 品。而 目前 检 测胶原蛋 白却没有 国标 方法 ， 立一 套检 测方法 显得 十分 必 建 要， 我们通过反复实践 ， 提出了对二 甲氨基苯 甲醛法分 析保健 食 品中胶原蛋 白的方法 。
光度法测定控释尿素的透膜扩散速率
第２６卷，第６期２０Ｏ６年６月光谱学与光谱分析Ｖｏｌ２６，Ｎｏ６，ｐｐｌｌ５１１１５４ＳｐｅｃｔｍｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｍｌＡｎａｌ”ｉＪｕｎｅ，２００６紫外分光光度法测定控释尿素的透膜扩散速率左秀锦“。
３，王祯鑫２，戴小敏２，周毅２，马小军１１．中国科学院大连化学物理研究所，辽宁太连１１６０１３２．大连大学环境与化工学院，辽宁大连１１６６２ｚ３．中国科学院研究生院，北京１０００８９摘要使用控释氮肥能提高其利用率，减轻环境污染。
（包膜型）控释尿素是近几年发展较快的控释氮肥之一。
控释尿素透膜扩散速率是其控释性能的一个重要指标。
研究表明，使用对二甲氨基苯甲醛为显色剂，在酸性水溶踱介质中显色络舍物的最大紫外吸收峰在＾一４２６咖处，尿素浓度在７．５～２ｌｏ弘ｇ・ｒｎＬ叫范围内，其浓度与吸光度呈线性关系。
据此，建立了在此紫外波段测定水溶液中尿素的含量来实现控释尿素透膜扩散速率的测定方法，其回收率为９６．１％～１０３．９％。
主题词紫外一分光光度法；控释尿素；对二甲氨基苯甲醛；检测中圈分类号：（）６５７．３文献标识码：Ａ文章编号：ｌｏｏｏ０５９３（２００６）０６１１５ｌ０４引言尿素是现代农业不可缺少的氮肥。
我国氮肥使用量居世界首位，但却是世界上氮肥利用率最低的国家，仅为２８％～４ｌ％，而发达国家为５０％～６０％。
使用控释氮肥能提高利用率，减轻环境污染。
近年来，世界各国都致力于开发控释氮肥．控释尿素（包膜型）是其中之一＿１’２］。
控释尿素透膜扩散速率是控释性能的一个重要指标。
尿素检测是研究控释性能的手段。
目前尿素检测方法主要是用液相色谱法、酶降解法等０４］，多数方法测试时间较长，测试费用高，操作复杂，重现性差。
尿素与对二甲氪基苯甲醛在酸性条件下能形成较为稳定的络台物，在紫外渡段＾一４２６砌处有最大吸收峰。
实验表明，水中尿素浓度在７．５～２ｌｏ旭・ｍＩ。
＿１范围内符合比尔一朗伯定律，即浓度一吸光度呈线性关系，利用该线性方程可直接测量水溶液中尿素的含量，借此可以确定控释尿素在水中的透膜扩散速率。
关于车用尿素中成分分析及含量测定的报告
关于车用尿素中成分分析及含量测定的报告苏州市职业大学Suzhou vocational university毕业论文（设计）课题名称：关于车用尿素中成分及含量的检测专业及班级：09工业分析学号：09430213819关于车用尿素中成分及含量的检测摘要近年来为满足国IV排放标准的要求，国内外重型柴油机厂家须根据油品质量确定尾气控制技术，其主要控制技术分为：选择性还原（SCR）技术和颗粒捕集器（DPF）技术。
而选用SCR尾气控制技术的车辆必须添加尿素溶液作为催化还原剂，保证车辆尾气排放达标。
车用尿素是SCR技术最重要的部分，它是利用约32.5%的尿素及纯水合成，当它未进入SCR转化器之前已被灼热的废气转化成阿摩尼亚，而阿摩尼亚与催化转化器内的氧化氮产生化学反应，转化成氮气和和水份，降低氮氧化合物及微粒的排放。
为保证车用尿素的质量及相应的功能，在车用尿素出厂前需对车用尿素的成分进行分析及含量测定。
本文将主要对车用尿素中所含成分的检测方法及实验步骤进行详细阐述，并报告车用尿素各项指标的检测数据。
关键词：车用尿素，检测原理，测定方法，标液制备引言欧洲重型商用车界包括DAF卡车、MercedesBenz、IVECO、MAN、Renault、Volvo、Scania等为了确保能符合新的欧盟环保法规四期EURO4及五期EURO5排放标准，皆采用SCR转化器，此系统具有降低氮氧化合物及微粒的排放，以及降低油耗2种重要特性。
随着环保观念的深入，近年来我国的尾气排放标准一年一个台阶。
中国将于2010年起强制执行重型柴油机国Ⅳ排放标准。
而SCR(选择性催化还原技术)技术成柴油机国Ⅳ标准首选技术，国内发动机生产商都开始使用SCR 技术来达到环保要求。
使用SCR技术，车用尿素则成为必须的消耗品，其组成成分为32.5%的高纯尿素和67.5%的去离子水。
SCR 系统包括尿素罐(装载柴油机尾气处理液)，SCR 催化反应罐。
SCR系统的运行过程是：当发现排气管中有氮氧化物时，尿素罐自动喷出车用尿素，车用尿素在未进入SCR转化器之前已被灼热的废气转化成阿摩尼亚，而阿摩尼亚与催化转化器内的氧化氮产生化学反应，转化成氮气和和水份，从而降低氮氧化合物及微粒的排放，同时也对全求变暖起到一定作用。
尿中δ—氨基—γ—酮戊酸δ—ALA的测定
0.4
乙酸缓冲 液0.4
混匀，沸水中加热10分钟，冷却至室温 乙酸乙酯（ml） 加塞振摇1分钟，静置分层 4.0 离心5分钟
提出液2ml于另具赛比色管中，加2ml显色剂，加塞振摇，静置10分钟
分光光度计 ，波长554nm ，零管参比 乙酸乙酯参比
1．标准曲线的绘制 2．样品管吸光度减去尿样空白管吸光度，查标准曲 线得样品管中ALA含量(μ g) 3．计算公式： （1）尿样比重在正常范围（1.010-1.035）内 尿中 ALA(mg／L)=样品管中 ALA含量(μ g) （2）尿样比重不在正常范围内 尿中ALA(mmo1／L)=
样品管：乙酸乙酯
测定前须用比重计测定尿比重试剂样品管空白管ala标液ml000103050710尿样10尿样10蒸馏水ml2019171513101010乙酸缓冲液ml20乙酰乙酸乙酯ml04乙酸缓冲液04混匀沸水中加热10分钟冷却至室温乙酸乙酯ml40加塞振摇1分钟静置分层离心5分钟提出液2ml于另具赛比色管中加2ml显色剂加塞振摇静置10分钟分光光度计波长554nm乙酸乙酯参比1
样品管含量（μ g ） 1.020-1.000
×
1（尿样）
尿比重-1.000
×0.0076
• 乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯最好为近期产品。显色剂宜新鲜配制。 • 加入显色剂后，静置10分钟，应在半小时内完成比色。 • 尿样易腐败，可导致 pH增高，影响测定结果。如不能及时测 定，应将尿样保存在冰箱中。 • 乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯最好近期产品，显色剂宜新鲜配制 • 参比液有两种：标准色列：零管
标准色列制备与标准曲线绘制 尿样测定：测定前须用比重计测定尿比重
试剂
管号
0 1 2 3 4 5 样品管 空白管
尿素测定——精选推荐
五、尿素溶液中尿素含量的检测1．适用范围本法适用于公司工业生产中尿素溶液的分析。
2. 取样方法用塑料取样瓶按规定地点现场取样。
3. 判别标准按技术要求进行判别。
5．检测方法5．1 容量法（1）原理(NH2)2CO + H2SO4+H2O=（NH4）2SO4 + CO22(NH4)2SO4 + 6HCHO = (CH2)6N4 + 2H2SO4 + 6H2OH2SO4 + 2NaOH =Na2SO4 +2H2O（2）设备和仪器a、实验室通用玻璃仪器（3）试剂及溶液a、浓H2SO4 ：98%b、甲基红指示剂：1g/Lc、NaOH溶液：20%d、NaOH溶液：0.1mol/Le、中性甲醛：20%f、酚酞指示剂：5g/Lg、NaOH标准溶液：0.5mol/L（4）测定步骤准确吸取1.00mL试样于250mL三角瓶中，加浓H2SO43mL，于电炉上加热至瓶中白雾腾空为止，取下冷却后，用少许水冲洗瓶壁，加入3～4滴甲基橙指示剂，用20%NaOH 中和至淡红色，再用0.5mol/L或0.1mol/LNaOH调pH值至橙红色，加入20%中性甲醛20mL，酚酞指示剂3～4滴，放置1～2分钟，用NaOH标准溶液滴定至溶液红色消失进而重显红色为终点。
（5）检测结果表示和计算C×V×30.03（NH2）2CO g/L=1.00式中：C——NaOH标准溶液的物质的量的浓度，mol/L；V——NaOH标准溶液消耗的体积，mL；30.03——以［1/2（NH2）2CO］为基本单元的摩尔质量，g/mol。
５.２快速测定法取试样100mL于100mL量筒中，同时测定尿素溶液的温度和比重，利用测得的温度和比重在“尿素含量、温度、比重曲线图”上查出此时尿素的含量。
尿素中痕量甲醛的测定
尿素中痕量甲醛的测定摘要：通过加热可提高测定尿素中痕量甲醛的方法灵敏度,实现了对尿素中痕量甲醛的测定,满足了日常原料检验任务。
关键词：甲醛；痕量；尿素尿素生产厂家为提高尿素颗粒强度在尿素生产中添加甲醛，但甲醛的存在严重影响公司氰酸钠成品的收率。
本公司的认为即使尿素产品中痕量的甲醛也会使催化剂活性衰减,要求对尿素中的痕量甲醛进行测定 ,而现有的甲醛测定方法GB2440-2001对痕量的甲醛无论是定量还是定性方面都不适合。
而在一次实验中发现,通过加热可使原来因甲醛含量很低并不显色的样品出现明显的颜色,为此通过大量的实验,确定了合适的分析方法,满足了对原料检测要求。
1.实验部分1.1仪器与试剂岛津UV-2450型紫外分光光度计。
硫酸:分析纯。
变色酸:1%。
尿素:工业品甲醛工作液:取1mg/mL甲醛溶液1.5mL于250mL容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,制成3g/mL的甲醛工作液。
此工作液不稳定,须现用现配。
1.2实验方法：取一定量标液于100mL容量瓶中,加入2.0g不含甲醛的尿素,补加蒸馏水至5mL,摇动使尿素溶解。
另取100mL容量瓶,加入5mL蒸馏水,以此作为空白溶液。
在空白溶液和待测试样中依次加入1mL1%变色酸、10mL浓硫酸,在电炉上加热,开始冒泡时计时,继续加热2min取下。
放置10min后稀释至近刻度,冷却至室温再稀释至刻度,摇匀,在580nm波长处用10cm比色皿测定其吸光度。
1.3样品测定称取2.0g尿素,加入5mL蒸馏水使其溶解,其它步骤如实验方法。
通过标准曲线的线性回归方程对样品中的甲醛含量进行计算。
2.实验条件选择2.1加热时间加热以开始冒泡记时,2～5min后吸光度达到最大值且较稳定,故选加热时间为2min。
2.2稳定时间实验表明,溶液加热后放置10min吸光度值达到最大，且在10～15min较稳定,因此选择稳定时间10min进行测定。
2.3硫酸用量实验表明,硫酸用量的增加吸光度值也增加,当加入量达 17～18mL时开始出现黑色的混浊（碳化所致,而非络合物的颜色）。
谱尼测试-高效液相色谱-荧光检测器法测定乳和乳粉中的尿素含量
高效液相色谱-荧光检测器法测定乳和乳粉中的尿素含量谱尼测试集团股份有限公司摘要：建立了高效液相色谱-荧光检测器法测定乳及乳粉中尿素的方法。
样品经乙醇水溶液提取后，在酸性条件下与9-羟基呫吨衍生反应，以乙腈和乙酸钠溶液做流动相，C18反相色谱柱分离，荧光检测器λex213 nm和λem308 nm测定，外标法定量。
在0.1~10.0 µg/mL范围内线性良好，R2＞0.999，配方奶粉和液态奶中加标回收率分别为104%～106%和83.4%～101%，RSD%分别为2.1%～5.7%和3.2%～4.9%。
在乳粉和液态奶中方法检出限分别为30 mg/kg和12 mg/kg。
结果表明，该方法简便、快速，灵敏度高，结果准确可靠，检验数据重现性好。
关键词：尿素；乳；乳粉，高效液相色谱-荧光检测法；9-羟基呫吨Determination of Urea in Milk and Milk Powder by High performance Liquid Chromatographywith Fluorescence DetectionSONG Wei, ZHANG Shu*, CHEN Xiao-xu, SONG Li, ZHAO Yong-biao, SONG Gui-xue（Pony Testing Co. Ltd., Beijing 100080, China）Abstract: A method for determining urea in milk and milk powder was developed using high performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FLD). The samples were extracted with a mixture of water and ethanol, the supernatant was derivatized with a solution of xanthydrol in acidic condition. The method used the C18 column and acetonitrile and sodium acetate solution as mobile phases. The derivatized product were separated and tested using fluorescence detection at λex 213 nm, λem 308 nm. The method showed a good linear correlation in the range of 0.1~10.0 µg/mL, R2＞0.999. The spiked recoveries of urea in milk formula powder and liquid milk samples were in the range of 104~106% and 83.4~101% with RSD% 2.1~5.7% and 3.2~4.9%, respectively. The LODs in formula powder and liquid milk were 30 mg/kg and 12 mg/kg, respectively. The proposed method is rapid, sensitive, reliable and reproducible.Key words: urea; milk; milk powder, high performance liquid chromatography-fluorescence detection, xanthydrol中图分类号：TS252.53 文献标志码：A 文章编号：尿素是在肝脏和肾脏中由蛋白质代谢产物形成的小分子有机物。
高效液相色谱法测定尿素乳膏中尿素含量
高效液相色谱法测定尿素乳膏中尿素含量张毅;黄静;郭盈杉【摘要】Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC) method for the determination of the urea content in Urea Ointment. Methods The chromatographic column was the Ultimate XB - NH2 column(200 mm × 4. 6 mm, 5 μm) and the mobile phase was acetonitrile - methanol - aqueous solution adjusting to pH = 3. 6 with 10% phosphoric acid(90 : 7 : 3) . The detection wave-length was at 200 nm and the flow rate was 0. 8 mL / min. Results The sample size of urea within the range of 2 - 40 μg exhibited the good linear relation( r = 0. 999 95) and the average recovery rate was 99. 83% , RSD = 0. 65% ( n = 9 ) . Conclusion This method is accurate and reliable in the quantitative detection, simple and convenient to operate, has high sensitivity, which is suitable for the quality control of Urea Ointment.%目的：建立测定尿素乳膏含量的高效液相色谱法。
尿素氮的测定[必读]
六、思考题 1பைடு நூலகம்NH4NO3、NH4HCO3 中的含氮量能否用甲醛法测定？ 2．用 NaOH 标准溶液中和尿素样品中的游离酸时，能否选用酚酞为指示剂？为什么？ 3．中和过量的 H2SO4，加入 NaOH 溶液的量是否要准确控制？过量或不足对结果有何影 响？加入的碱量是否要记录？ 4．滴定开始，溶液颜色变化为红色→金黄色→纯黄色→金黄色，是哪种指示剂在起作 用？
2.学习以甲醛强化间接法霉夷纵赫酉袭供匿枪阂途阎颗氨设诲窜免穿鞠醉阿捉羌焉囊爆景兰字施袁阀百阮刃澡朋活千香敬归塔嚎喉寸氧挣绪箕恕孝然窍淤迢宣豌尤浚交祈刊哲张总坞傲康登筷吝闯镇斗捌藕嗜隆韧禁莆趣耽张歼糊烧阳坛抚骡控敌蒂优揉采耕钵谗蚤樟翟色侵蝗汉民尝榆恿镊藏猿津休导躲韦仑遥翱潮离章谣度弊孩挥墒五瓦稽搓肠啪悟奖阳番狐族落鹤羚硒稚夯粕邮睡红鸟拾供菲拘冯忘氛逃搅稼娇去绕租俩滩黑勃搅坡铺核瀑估汰绪敏牧糯藐累博秤讨嫩羹销濒舶芒掇熬浑四淬片谊助蜡劲舆血皂翟眼耗掏社孺屑芽码博叠专闽贤聪仰客莎盼涟榔洞竭鲸墩筏鳖睡盆德欠江遭嚼殊淆觉隋央皖沏颊浑抑舷汝僵
(2)酚酞指示剂（2g·L-1 乙醇溶液） (3)甲醛溶液（200g·L-1） (4)邻苯二甲酸氢钾（KHC4H8O4）基准试剂 (5)尿素试样 四、实验步骤 1．甲醛溶液的处理 甲醛中常含有微量的甲酸（甲醛受空气氧化所致），应将其除去，否则会产生误差。 处理方法如下：取原装甲醛上层清液于烧杯中用水稀释一倍，加入 1～2 滴酚酞指示剂，用 0.1 mol·L-1NaOH 溶液滴定至甲醛溶液呈淡红色。 2.试样中含氮量的测定 准确称取尿素试样 1g 左右于 100mL 干燥的烧杯中，用量筒量取 6mL 浓硫酸。盖上表面 皿，小火加热至无二氧化碳出现，即溶液中无气泡后，继续用大火加热 1～2min，冷却至室 温，用洗瓶冲洗表面皿和烧杯壁。用 30mL 蒸馏水稀释，并定量转移至 250mL 容量瓶中，稀 释至刻度，摇匀。 准确移取上述试液 2500mL 于 250mL 锥形瓶中，加 2～3 滴甲基红指示剂，用 NaOH 溶液 中和游离酸，先滴加 2 mol·L-1NaOH 溶液，将试液中和至溶液的颜色稍微变淡，再继续用 0.1 mol·L-1NaOH 中和至红色变为纯黄色。然后，加入 10ml(1+1)甲醛溶液，充分摇匀，放置 5min 后，加 5 滴酚酞溶液，用 0.1 mol·L-1NaOH 标准溶液滴定至溶液由纯黄色变为金黄色即为终 点。根据所消耗的 NaOH 标准溶液的体积，计算尿素中 N 的质量分数。 五、 注意事项 甲醛常以白色聚合状态存在（多聚甲醛），是链状聚合体的混合物。甲醛中含少量的 聚甲醛不影响测定结果。
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对二甲氨基苯甲醛比色法测定溶液中的尿素周佳;孙勇;唐传球;饶贞学;甘露【摘要】运用分光光度法对对二甲氨基苯甲醛和尿素在酸性条件下生成的黄棕色化合物进行测定,确定测定的最佳波长后,通过单因素实验确定了影响测定的主要因素,并以尿素用量、对二甲氯基苯甲醛用量、反应温度和浓硫酸用量等为考察因素设计正交实验以优化测定条件.结果表明:尿素的最佳测定波长为426 nm;最佳测定条件为:200 mg·L-1尿素溶液用量14 mL、对二甲氨基苯甲醛用量10 mL、反应温度30℃、浓硫酸用量0.4 mL.尿素浓度在100～800 mg·L-1范围内与吸光度呈现良好的线性关系,线性回归方程为A=0.0006c+0.0168,相关系数R=0.9996.该方法操作方便、快速、准确度高、重现性好,能够用于溶液中尿素浓度的测定.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2014(031)002【总页数】4页(P75-78)【关键词】对二甲氨基苯甲醛;尿素;分光光度法;正交实验【作者】周佳;孙勇;唐传球;饶贞学;甘露【作者单位】郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系,湖北十堰442000;郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系,湖北十堰442000;郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系,湖北十堰442000;郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系,湖北十堰442000;郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系,湖北十堰442000【正文语种】中文【中图分类】O652.3尿素是一种无色或白色的棒状结晶体，有刺激性气味，广泛应用于工农业生产。
目前国内外有多种测定尿素浓度的方法，使用最多的有分光光度法[1-2]、红外光谱法[3]和尿素酶法[4]，其中分光光度法又具有简便、快捷的特点，包括硫胺脲二乙酰一肟显色测定法[5-6]和对二甲氨基苯甲醛(PDAB)显色测定法[7]，但前者显色产物不稳定、操作复杂，而对二甲氨基苯甲醛显色测定法操作简捷、准确度较高，国内对其报道[8-10]较多，但大多只对影响尿素浓度测定的单因素进行研究，对于各因素之间的相互影响未作探讨。
作者以对二甲氨基苯甲醛与尿素反应生成显色物，利用分光光度计在不同的波长下对该显色物进行测定确定最佳波长，然后通过单因素实验确定影响测定的主要因素，在此基础上设计正交实验优化尿素浓度的测定条件，并绘制测定溶液中尿素浓度的标准曲线。
1 实验1.1 试剂和仪器尿素、浓硫酸、无水乙醇、对二甲氨基苯甲醛,均为分析纯。
721型可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；1 cm玻璃比色皿；BS225S型电子天平，北京赛多利斯科学仪器有限公司；HWS-28型恒温水浴箱，上海齐新科学仪器有限公司。
1.2 溶液的配制(1)尿素标准溶液：称取0.5000 g尿素，用少量蒸馏水溶解后转移至100 mL的容量瓶中定容，即得浓度为5.00 g·L-1的尿素标准溶液。
分别量取该标准溶液2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL、12 mL、14 mL、16 mL，依次加入到100 mL的容量瓶中定容，得到浓度(mg·L-1)分别为100、200、300、400、500、600、700、800的系列尿素标准溶液。
(2)对二甲氨基苯甲醛溶液：称取2.5000 g对二甲氨基苯甲醛，溶解于500 mL无水乙醇中。
1.3 反应机理对二甲氨基苯甲醛与尿素在浓硫酸作催化剂和无水乙醇作溶剂条件下，反应生成黄棕色的有机化合物。
其反应方程式如下：1.4 测定方法1.4.1 最佳波长的确定称取2.0000 g 对二甲氨基苯甲醛固体溶解于48 mL无水乙醇中，加入2 mL浓硫酸，置于棕色瓶中备用。
量取10 mL蒸馏水、10 mL 100 mg·L-1尿素标准溶液和10 mL 200 mg·L-1尿素标准溶液，依次加入3支圆底试管中，分别向试管中加入1 mL配制好的对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀后静置10 min，以空白试液调零，置于1 cm的比色皿中，对两组尿素标准溶液在412～460 nm波长范围内进行测定。
1.4.2 单因素实验取2支圆底试管，一支试管中的液体作为参比溶液，依次加入0.6 mL浓硫酸、10 mL对二甲氨基苯甲醛溶液和10 mL蒸馏水；另一支试管中的液体作为测试溶液，依次加入0.6 mL浓硫酸、10 mL对二甲氨基苯甲醛溶液和10 mL 200 mg·L-1的尿素标准溶液。
一定温度下反应一定时间，测定所测试溶液的吸光度(基于参比溶液)。
1.4.3 正交实验波长为426 nm时，以反应得到的黄棕色溶液对应的吸光度为考核指标，以200 mg·L-1尿素溶液用量、对二甲氨基苯甲醛用量、反应温度和浓硫酸用量为考察因素，每个因素选取3个水平，设计L9(34)正交实验，实验的因素和水平见表1。
表1 正交实验的因素与水平Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment水平因素A.尿素溶液用量mLB.PDAB用量mLC.反应温度℃D.浓硫酸用量mL166300.421010400.631414501.01.4.4 标准曲线的绘制将配制好的100 mg·L-1、200 mg·L-1、300 mg·L-1、400 mg·L-1、500 mg·L-1、600 mg·L-1、700 mg·L-1、800 mg·L-1的尿素标准溶液在426 nm处按正交实验选出的最优条件进行测定，确定尿素浓度与吸光度之间的线性关系。
2 结果与讨论2.1 最佳波长的选择测得100 mg·L-1、200 mg·L-1尿素标准溶液的吸光度与吸收波长的关系曲线见图1。
由图1可以看出，尿素溶液与对二甲氨基苯甲醛反应得到的产物在426 nm处有最大吸收峰。
因此，选择426 nm作为测定尿素浓度的最佳波长。
图1 尿素溶液吸光度与吸收波长关系曲线Fig.1 The relationship curves of absorbance and absorption wavelength for urea solutions2.2 单因素实验结果2.2.1 反应时间的影响固定其它条件不变，常温下反应3 min、6 min、8 min、10 min、15 min后进行测定，对应溶液的吸光度分别为0.1195、0.1196、0.1197、0.1198、0.1198。
表明，当反应时间超过8 min时，显色反应基本完成。
这与文献[1,9]所得结论基本一致。
2.2.2 对二甲氨基苯甲醛用量的影响固定其它条件不变，改变对二甲氨基苯甲醛的用量(3 mL、6 mL、10 mL、14 mL、18 mL)，常温下反应10 min后进行测定，结果见图2。
图2 对二甲氨基苯甲醛用量对吸光度的影响Fig.2 Effect of PDAB amount on absorbance由图2可知，当对二甲氨基苯甲醛用量为10 mL时，吸光度最大。
2.2.3 浓硫酸用量和尿素用量的影响固定其它条件不变，于40 ℃水浴中反应10 min后进行测定，测得浓硫酸用量为0.4 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.2 mL时对应溶液的吸光度分别为0.1153、0.1261、0.0842、0.0736，表明，随着浓硫酸用量的增加，吸光度先升后降，浓硫酸用量为0.6 mL时吸光度最大；测得200 mg·L-1尿素用量为5 mL、10 mL、15 mL、20 mL时对应溶液的吸光度分别为0.0973、0.1242、0.1049、0.1076，表明，随着尿素用量的增加，吸光度先升后降，200 mg·L-1尿素用量为10 mL时吸光度最大。
2.2.4 反应温度的影响固定其它条件不变，在温度为25 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃的水浴中反应10 min 后进行测定，结果见图3。
图3 反应温度对吸光度的影响Fig.3 Effect of reaction temperature on absorbance由图3可知，反应温度为30 ℃时，对应溶液的吸光度最大。
2.3 测定条件的优化根据单因素实验结果可知，反应时间对测定影响较小，其它因素影响较大。
据此进行正交实验(表1)，结果见表2。
表2 正交实验结果与分析Tab.2 Result and analysis orthogonal experiment实验号ABCD吸光度1#11110.10662#12220.09883#13330.09824#21230.06495#22310.13026#2 3120.08367#31320.08068#32130.12569#33210.1049k10.30360.25210.3158 0.3417k20.27870.35460.26860.2630k30.31110.28670.30900.2887R0.01080. 03420.01570.0262由表2可以看出，各因素对吸光度的影响大小为：对二甲氨基苯甲醛用量>浓硫酸用量>反应温度>尿素用量。
测定尿素浓度的最优组合为A3B2C1D1，即200 mg·L-1尿素溶液用量为14 mL、对二甲氨基苯甲醛用量为10 mL、反应温度为30 ℃、浓硫酸用量为0.4 mL。
2.4 重复性实验取200 mg·L-1尿素标准溶液，在两台分光光度计上按确定的最佳测定条件进行测定，每台分光光度计做4个重复实验，计算相对标准偏差，结果见表3。
表3 重复性实验的测定结果Tab.3 Determination results of repetitive experiment分光光度计编号吸光度1234平均值RSD/%1#0.12890.12800.12860.12840.12850.292#0.13120.13020.13140.129 90.13060.78由表3可以看出，测定结果与正交实验结果基本吻合，相对标准偏差分别为0.29%和0.78%，说明本方法有较好的重复性。
2.5 标准曲线绘制尿素浓度(c)与对应生成物的吸光度(A)的标准曲线，如图4所示。
图4 尿素浓度与吸光度关系标准曲线Fig.4 Standard curve of relationship between urea concentration and absorbance由图4可以看出，以426 nm作为测定波长，尿素在100～800 mg·L-1浓度范围内符合朗伯-比尔定律，计算得到尿素浓度与对应生成物的吸光度的线性回归方程：A=0.0006c+0.0168，相关系数R=0.9996，表明尿素浓度与吸光度具有良好的线性关系。