骨髓片组化染色
细胞化学染色
颗粒 什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。 有颗粒+POX阴性 做酯酶双染及免疫分型 （存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ） 无颗粒+POX阴性 +临床及形态 淋系 （1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a， 原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶 段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不 像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化 差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到 是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散 状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或 阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。 阴性为胞浆内无兰色颗粒。 正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占 颗粒大小 胞浆面积 （％）
骨髓切片制作[整理]
![骨髓切片制作[整理]](https://img.taocdn.com/s3/m/f27afd3e657d27284b73f242336c1eb91b373356.png)
骨髓活检切片制作技术—、取材1 术前准备：取1.5EP管，放入Bouin氏液或2.5%~3.8%戊二醛固定液70—80ML。
载玻片6片2 穿刺一步法二、固定Bouin固定液：苦味酸饱和水溶液75ml福尔马林（40%甲醛） 20ml冰醋酸 5mlBouin氏液固定30-60分钟，若组织块大或增生活跃的标本可适当延长时间，但不宜超过3小时。
三、脱水1 取出固定液中组织块，放入清水中漂洗（去除血块，若骨髓组织少并且带有血块可不去除，一面破坏组织块），与写好的标签一同放入一块小纱布，大头针固定，放入清水漂洗2-3次。
2 脱水（1）留置固定10分钟：水浴箱内组织块+60%乙醇+70%乙醇，45℃水浴，10分钟。
（2）组织块移入60%（一次）乙醇瓶内，依次70%（一次）80%（一次）95/96%（二次）100%（二次）乙醇，45℃,10分钟。
注：乙醇可重复使用。
3 包埋（使用塑胶包埋法）（1）经脱水处理后的组织块用针头挑入特制的聚乙烯模具中，用滴管吸取Hemapun865甲液滴入模具中，装满模具(约20ml)，4℃冰箱中浸入1-2小时。
（2）先取出组织块。
用8号针管吸取Hemapun865乙液，滴三滴入模具，迅速将甲乙两液搅匀，后将组织块摆在模具底部中央。
（3）放入-20℃冰箱，或者室温静置20分钟，或4℃冰箱静置40-60分钟，待其自聚.（4）在包埋块顶部尚湿润时贴上标号标签。
四切片每份标本切3微米：用于HGF、HE染色，切片备用。
5微米：用于Gomori染色。
一般先切5微米，每种染色放三条。
1 先用钢锉休整聚合块底部两侧，使之尽量锉至组织块，随即装入轮转式切片机，调节所需厚薄度，切除底部聚合块无组织块部分。
2 一般先切5微米。
均匀摇动切片机，右手用弯头镊子轻轻钳牢已切割下来的组织片，左手用毛笔协助将其取下，用镊子轻轻使每张切片充分平坦于水面。
3 贴片选择完整且无皱褶的组织片，左手拿玻片垂直入水，去贴附切片，右手拿镊子帮助推动，使组织片贴附玻片三分之一处。
Jy—Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用
Jy—Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用目的探讨Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用。
方法收集200例骨髓活检穿刺组织，选取其中150例采用Jy-Ⅱ脱钙液脱钙，同时选取50例采用5%的硝酸脱钙液脱钙做对照观察，脱钙后分别做HE染色、特殊染色（Gomori氏网状纤维染色）和免疫组织化学染色（MaxVisionTM法CD38染色），观察Jy-Ⅱ脱钙液对骨髓活检组织结构的保存及染色情况。
结果经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。
镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好，脱钙时间短，为150 min。
脱钙完全，效果好。
经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织，结构保持不完整，完整率达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率达52.00%，染色情况欠佳，脱钙时间长，长达240 min，脱钙不完全，效果欠佳（P＜0.05）。
结论Jy-Ⅱ脱钙液效果明显优于5%的硝酸脱钙液，骨髓活检组织结构保持良好，操作简便，脱钙时间短，在脱钙过程中无需更换脱钙液，HE染色、特殊染色、免疫组化染色效果也较满意，实用性强，不失为一种良好的脱钙液，值得推广标签：Jy-Ⅱ脱钙液；骨髓活检组织脱钙过度，破坏组织形态结构和细胞成分性质，造成细胞核着色很浅或不着色，从而影响了组织的病理诊断[1]。
本医院病理科实验室根据多年的工作经验，将Jy-Ⅱ氏混合脱钙液应用在骨髓活检工作中，获得了良好的效果，现将方法介绍如下。
1 材料与方法1.1一般材料1.1.1 标本收集我院2010年1月～2013年11月骨髓活检标本200例。
1.1.2主要仪器及设备主要仪器：LeicaASP300型全自动脱水机，英国珊鈍石蜡包埋机，Leica HM2235轮转石蜡切片机，常规病理制片和免疫组织化学染色所需的试剂及仪器；Gomori氏网状纤维染色试剂盒，抗体采用鼠抗CD38和DAB试剂盒均为即用型（均购自福州迈新生物有限技术开发公司）。
骨髓小粒拉片细胞学检查在血液病诊断中的临床应用
骨髓小粒拉片细胞学检查在血液病诊断中的临床应用作者：彭碧曾白华来源：《中国医药导报》2013年第17期[摘要] 目的研究骨髓小粒拉片（简称拉片）细胞形态学检查对血液病的诊断价值。
方法收集四川省绵阳市人民医院2008年1月～2012年8月血液系统疾病患者83例，取患者的骨髓小粒制备拉片，以同期同部位采集的骨髓穿刺涂片（简称涂片）和骨髓活检切片（简称切片）为对照，进行细胞形态学检查。
结果在增生程度的判断上，以切片为金标准，拉片与切片差异无统计学意义（χ2=0.9051，P > 0.05），拉片显著高于涂片（χ2=6.1179，P < 0.05）；临床诊断符合率以拉片最高为86.7%，显著高于涂片（χ2=7.8253，P < 0.01），但与切片差异无统计学意义（χ2=0.4238，P > 0.05），三种方式联合检测诊断符合率达94.0%。
结论骨髓小粒拉片在增生程度的判断上及低增生性血液系统疾病的诊断上有明显优势，可作为骨髓涂片形态学检查的补充，二者联合切片检查，能提高血液病诊断的准确性。
[关键词] 骨髓小粒拉片；骨髓涂片；骨髓组织切片；血液病；诊断价值[中图分类号] R557 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2013）06（b）-0089-03骨髓穿刺涂片作为血液系统疾病诊断的主要依据，是目前各级医院广泛开展的细胞形态学检查方法，具有直观、简便、快速等特点，但由于骨髓易受穿刺技术、窦血稀释或骨髓纤维化等因素的影响，导致单纯依靠骨髓涂片不能很好地反映骨髓细胞及组织的全貌，造成误诊或漏诊；骨髓活检虽是评价有核细胞增生程度的金标准，但在骨髓肿瘤诊断中不占主导地位，需结合骨髓涂片才具有诊断价值[1]；而骨髓小粒拉片在国外被列为骨髓形态学检查方法之一[2-3]，国内有较少报道[4-6]，其是将细胞学和组织学结合起来，既具有形态学的观察优势，又可初步了解组织学概况，从而提高细胞形态学的诊断水平。
骨髓涂片免疫组化、骨髓活检在恶性淋巴瘤骨髓受侵中的价值分析
骨髓涂片免疫组化、骨髓活检在恶性淋巴瘤骨髓受侵中的价值分析摘要】骨髓是恶性淋巴瘤常见受侵部位，合并骨髓受侵患者将出现淋巴瘤细胞白血病、淋巴瘤骨髓浸润等症状，这部分患者预后较差。
骨髓涂片免疫组化、骨髓活检是恶性淋巴瘤骨髓受侵常用检测技术，下面就两项检测技术的实际价值及对比优势进行了分析。
【关键词】骨髓涂片免疫组化；骨髓活检；恶性淋巴瘤；骨髓受侵【中图分类号】R733.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）26-0138-02骨髓活检是临床常用检测技术，主要通过特制的穿刺针来取出骨髓组织并进行病理检查，该检测技术在分析骨髓细胞结构及成分上具有极高价值，并可对细胞形态进行分析，在淋巴瘤、骨髓异常增殖、再生障碍性贫血等疾病的诊断上具有重要意义。
骨髓涂片免疫组化是传统骨髓相关疾病诊断技术之一，其在细胞形态血检查上具有显著优势，可对各系血细胞形态进行精确辨认[1]。
随着MRI、PET/CT等医疗技术的发展，骨髓活检及骨髓涂片免疫组化检测在恶性淋巴瘤骨髓受侵中的应用越来越广泛。
1 恶性淋巴瘤概述恶性淋巴瘤是血液系统高发恶性肿瘤之一，是一种原发于淋巴结或结外淋巴组织的恶性肿瘤，疾病具有异质性、侵袭性特征，可对患者全身器官进行侵袭。
临床常根据瘤细胞分型将疾病分为霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤两类，霍奇金淋巴瘤病灶内多含有浆细胞、嗜酸性粒细胞以及淋巴细胞；而非霍奇金淋巴瘤病灶内主要含有网状细胞、组织细胞以及淋巴细胞[2]。
非霍奇金淋巴瘤发病率远高于霍奇金淋巴瘤，且具备强异质性，具有高侵袭性。
淋巴瘤侵袭至骨髓及外周血内，可诱发淋巴瘤骨髓浸润、淋巴瘤细胞白血病等疾病，此时患者预后较差。
因此，临床认为早期的恶性淋巴瘤骨髓诊断是恶性淋巴瘤骨髓侵袭防治要点[3]。
目前，常规骨髓检查方法主要有骨髓涂片免疫组化、骨髓活检、流式细胞术、染色体及融合基因检查等，这些检测方法各有优缺，骨髓受侵的标准：骨髓中淋巴瘤细胞或原幼淋巴细胞≥5％而<20％为淋巴瘤骨髓侵犯；骨髓中原幼淋巴≥20％，为淋巴肉瘤细胞白血病。
骨髓造血细胞形态学检查(贺)
骨髓涂片检查的基本步骤和内容
新乡医学院临床一系诊断学教研室
一、血细胞的生成
新乡医学院临床一系诊断学教研室
二、造血细胞的命名
新乡医学院临床一系诊断学教研室
一般
三、造血细胞发育的一般规律
特殊
胞体
大→小 巨核细胞胞体小→大 胞浆 少→多 胞核 大→小 染色质 疏松→密集 核仁 清楚 → 模糊 → 消失 核浆比 大→小
新乡医学院临床一系诊断学教研室
五、淋巴细胞
数量：约20%
分布：全部为成熟淋巴细胞，婴幼
儿偶可见到幼稚淋巴细胞。 形态：正常。
新乡医学院临床一系诊断学教研室
六、单核细胞
正常不超过5%，全部为成熟 型，原虫感染、粒细胞缺乏恢复期， 单核细胞增多，单核细胞白血病和 MDS时单核细胞增多并且有大量原 始、幼稚单核细胞出现。
新乡医学院临床一系诊断学教研室
新乡医学院临床一系诊断学教研室
新乡医学院临床一系诊断学教研室
新乡医学院临床一系诊断学教研室
新乡医学院临床一系诊断学教研室
新乡医学院临床一系诊断学教研室二、粒系/红系来自值 正常参考值 2～4/1
粒、红比值的分析
结合有核细胞增生度综合分析
临床意义
增高：粒系增多和/或红系减少
分布
缺铁贫：中晚幼增多 巨幼贫：早中幼增多
形态
缺铁贫：胞体小，浆量少，边缘不整，浆发育落后于核发
育，成熟细胞体积小，中央淡染区扩大。 巨幼贫：胞体大，浆量多，核染色质疏松，核发育落后于 浆发育，成熟细胞体积增大，中央淡染区消失。 MDS：胞体偏大，核浆发育不平衡，呈类巨幼样变。核畸 形，偏位，或脱核障碍。
3.组织化学染色
脂类物质染色
应用： 证实和区别脂肪变性。 显示病变的脂质沉着，如动脉粥样硬化斑块内 胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质 沉积病，如戈谢病（Gaucher disease），尼 曼－皮克病（Niemann-Pick disease ）等。 脂肪源性肿瘤的诊Amyloid）是一种细胞外无定形，嗜酸性物
• 中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十 二指肠腺等处；
• 酸性黏多糖：其基质成分可分为硫酸性（HID染色呈棕 黑色）和非硫酸性（AB染色呈蓝绿色）两种形式存在， 主要分布于消化道、呼吸道及其他部位的黏液腺分泌物 中； • 黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白， 见于各种组织上皮和腺体导管的分泌物中。
染色方法的分类
按照染色方法分类 一般方法分类：常规染色，特殊染色等 按主要组织和细胞成分分类：结缔组织染色， 肌组织染色，神经组织染色 按染色对象种类分类：切片染色法，组织块 染色法，大体标本染色法
染色方法的命名
按发明者姓名命名：如Van. Gieson（VG） 染色 按所有染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色 按所染组织分类：如网状纤维染色 其他分类：
染色的常用术语
促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不 参与染色反应，如乙酸 异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与 染料不同的颜色
分化：指用某种溶液选择性脱去过深的着色，并使 不应着色的组织细胞成分脱色的过程，HE染色时的 盐酸酒精分化 蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色， 碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱 性水使核变蓝，称蓝化
质，刚果红染色后在偏正光镜下呈“苹果绿”的双折射，具 有独特的原纤维超微结构，大多数由B-折叠层构象的蛋白质 构成。 淀粉样物的沉积与很多疾病有关，不同疾病所构成的淀粉 样物的蛋白质不同。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻 链；Alzheimer病为淀粉样蛋白B前体。
细胞化学染色
•【染色方法】
• 1.取新鲜骨髓涂片置浓福尔马林中蒸3分钟。（2 滴） • 2.放入作用液37℃温箱30分钟。 • 作用液配制：取固兰40mg，1%α -萘酚（以50%丙 酮做溶剂）0.8ml，0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （PH7.4）40ml混合，过滤后使用。 • 3.用自来水冲洗，晾干。 • 4.用1%沙黄复染45秒。 • 5.水洗，晾干后镜检。
【正常血细胞的染色结果】
• 细胞中如有蓝黑色即为阳性细胞。根据阳性 颗粒的有无及多少，将染色结果分为（-）、 （+）、（++）、（+++）、（++++）。
阳性反应细胞 阳性强度 阳性特征 阴性反应细胞 部分原粒细胞 嗜碱性粒细胞 大部分单系细胞 淋巴细胞 浆细胞 红系细胞
部分原粒细胞 +~++ 颗粒细小，分布稀疏 早幼粒细胞 ++~++++ 颗粒状或弥散状 中性成熟粒细胞 ++~+++ 同上 嗜酸性粒细胞 ++~++++ 粗颗粒状，密集 少数单系细胞 +~++ 细小，弥散，较少
• 【标本要求】
• 一般用新鲜的骨髓涂片做POX染色； 如果外周血中白血病细胞多而骨髓涂 片不够的情况下，可选择新鲜的血涂 片来做。为了保证酶的活性，片子一 般应在固定后一周内完成染色。
•【染色方法】
• 一、试剂：甲液：联苯胺（0.3g）；95%乙醇 （99ml）；亚硝基氰化钠饱和溶液（1ml） 乙液：3%过氧化氢（0.3ml）；蒸馏水（2ml） 注：乙液必须现配现用（5mlH2O+1滴H2O2） 二、染色：1.滴加甲液在干的涂片上。 2.待30秒后滴加乙液。（比例为2:1） 3.过3-4分钟后用自来水冲洗3-4分钟。 4.复染15分钟。
骨髓活检组织切片和骨髓涂片在骨髓转移性肿瘤中的应用
所 长 ， 辅 相 成 。虽 然 活 检 检 出率 明显 高 于 涂 片 ， 骨 髓 活 相 但
检不能完全取代涂 片， 而将 两者 联合应用则 会在骨髓转 移
骨 髓 穿 刺 涂 片 检 查一 直是 骨 髓 转 移 性 肿 瘤 最 常 用 的 检 查 方 法 之 一 ， 临 床 上 应 用 广 泛 ， 要 观 察 单 个 细 胞 的 结 构 在 主
作时容易于抽和稀释 ； 穿刺标本 少 ， 且 负压 或 血 窦 破 坏 、 骨 髓 基 质 水肿 ， 混入 外 周 血 ， 态 细 胞 被 稀 释 。 易 病 因此 ， 出 的 抽 骨 髓 标 本 不 能 全 面客 观地 反 映 骨 髓 的 真 实 情 况 ， 为 地 导 人 致 阳性 检 出率 偏 低 。 骨 髓 活 检 因 为取 材标 本 较 大 ， 骨 髓 结 构 增 生 程 度 的 对 判 断 较 精 确 。 着 对 骨髓 切 片检 查 的重 要 性 的认 识 ， 来越 随 越 多 的单 位 已 开 展 了 这 项 检 查 ， 在最 新 的 ｗＨＯ 髓 系 及 淋 这 巴系 肿 瘤 疾 病 分类 标 准 ［ 中有 所 体现 。 表 １中可 以看 出 骨 ２ ］ 从
染色 。
３ 统计学处理
髓 穿刺 涂 片 检 出 率 明 显 低 于 骨 髓 活 检 ， 异具 有 统 计 学 意 差
义（ 尸＜ Ｏ Ｏ ） 表 明骨 髓 活 检 受 干 抽 和 稀 释 的影 响 较 涂 片 ．５ ，
小 ， 更 明 确 反 映 骨 髓 的 真 实 情 况 ， 具 客 观 性 ， 疾 病 的 能 更 为 正 确 治 疗 提 供 了保 证 ， 别 是 在 淋 巴瘤 骨 髓 侵 犯 病 例 中 ， 特 活
断 手段 。 着 塑 料 包 埋技 术 的广 泛 应 用 ， 髓 活 检组 织 切 片 随 骨
免疫分型报告单和骨髓组织病理
免疫分型报告单和骨髓组织病理
免疫分型报告单是一份记录免疫分型结果的文件。
在传染病诊断中，免疫分型用于确定病原体的种类和亚型，以帮助医生确定最合适的治疗方案。
免疫分型报告单通常包括以下内容：
1. 基本信息：患者的姓名、年龄、性别等基本信息。
2. 检测项目：详细列出进行的免疫分型检测项目，例如ELISA、PCR等。
3. 检测结果：记录各项检测结果，包括阳性或阴性判定、抗体或病原体的种类和亚型等详细信息。
4. 解读与建议：根据检测结果，医生会对结果进行解读，并提供相应的治疗建议，例如选择合适的药物治疗、预防措施等。
骨髓组织病理是指通过病理学方法对骨髓组织进行检查，以诊断骨髓疾病。
骨髓是人体内主要产生血细胞的器官，经过骨髓组织病理检查可以帮助医生确定骨髓异常增生、骨髓增生异常综合征、白血病等疾病的诊断和分型。
骨髓组织病理报告单通常包括以下内容：
1. 基本信息：患者的姓名、年龄、性别等基本信息。
2. 标本来源：记录检查的骨髓组织标本的来源和采集方法。
3. 检测方法：详细列出进行的骨髓组织病理检测方法，如组织切片染色、免疫组化等。
4. 检测结果：描述骨髓组织的形态学特点和异常改变，如细胞数量、细胞形态、细胞比例等。
同时也会记录组织学类型、细胞学分级、染色体畸变或基因突变等相关结果。
5. 诊断与建议：根据检测结果，医生会提供诊断结果，并提供相应的治疗建议，包括药物治疗、骨髓移植等。
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2.２滴H2Ｏ２＋５ｍｌH2O（蒸馏水），混匀后直接加于上步玻片上（１：１比例），混匀，５ｍｉｎ后水洗
3.９５％乙醇脱色１０ｍｉｎ，水洗，干燥
4.瑞氏染色３０ｍｉｎ，水洗，干燥
结果判读：
（-）无棕黑色颗粒
（+/-）散在稀疏的小颗粒
（+）颗粒较粗，局部分布
（+/-）少量红色颗粒1-3个
（+）少量红色颗粒4-10个
（++）红色颗粒>10个
（+++）暗红色粗大颗粒
（++++）紫红色粗大颗粒
附：
原单：胞浆边缘或伪足呈颗粒状
原粒：胞质内均匀弥散细小颗粒
原淋：粗大颗粒（核周）
阳性程度：粒<单<淋，M7 PAS最强。（异常早幼粒，内浆弥散状，外浆细小颗粒）
ＰＯＸ（过氧化物酶）：
⑷、复染苏木素复染１０ｍｉｎ，水洗，干燥
附：CE缓冲液配制（PH7.6）Na2HPO4 87ml+KH2PO4 13ml混匀
AE（非特异性酯酶）：
⑴、固定玻片先用甲醛固定10min,水洗，干燥
⑵、Ａ液0.005gAE萘酚0.5ml丙酮（先加）0.5ml丙二酮（再加）
B液取锥形瓶，加入PH7.0AE缓冲液20ml
⑶、用吸管吸取A液慢慢滴加入B瓶内，边加边摇晃锥形瓶
⑷、加入坚固兰0.02g充分混匀后再分为a,b两管。a管10ml插入AE玻片，
b管加入0.015gNAF，插入+NAF玻片，37℃水浴1h,放在流水下冲洗10min，待干
5复染苏木素复染5min,水洗，干燥
附：AE缓冲液配制（PH7.0）61mlNa2HPO4+39mlKH2PO4混匀待用
（++）粗大较密集，占胞质１／２—２／３
（+++）粗大，团块分布，布满胞质
（++++）胞质内充满团块并覆盖胞核
附：１.POX强阳性会呈黄色颗粒，＞２％为阳性
２.＞＝３％ 髓系 ＜３％ 淋系
老年人POX＜３％慎打急淋
３.POX散在阳性 单POX局部阳性 粒
CE：特异性酯酶
1.固定 用AKP固定液固定３０S，水洗，干燥
⑶、９５％乙醇脱色１０ｍｉｎ，水洗，干燥
⑷、复染：瑞氏染色３０ｍｉｎ，水洗，干燥
CE（特异性酯酶）：
⑴、固定用AKP固定液固定３０S，水洗，干燥
⑵、Ａ液0.００１ｇＣＥ萘酚0.５ｍｌＮ-Ｎ－二甲酰胺混匀使溶解
B液先加付品红２滴４％NａＮO２２滴９.５ｍｌＣＥ缓冲液
A液与B液倾倒混匀８次
⑶、玻片插入试管后放３７℃水浴１ｈ，放在流水下冲洗１０ｍｉｎ，待干
3.用吸管吸取A液慢慢滴加入B瓶内，边加边摇晃锥形瓶
4.加入坚固兰0.02g充分混匀后再分为a,b两管。A管10ml插入AE玻片，b管加入0.015gNAF，插入+NAF玻片，37℃水浴1h,放在流水下冲洗10min，待干
5.复染苏木素复染5min,水洗，干燥
附：AE缓冲液配制（PH7.0）
61mlNa2HPO4+39mlKH2PO4混匀待用
2.Ａ液
1.００１ｇＣＥ萘酚
1.５ｍｌＮＮ－二甲酰胺
混匀使溶解
B液
付品红２滴
４％NａＮO２２滴
９.５ｍｌＣＥ缓冲液
A液与B液倾倒混匀８次
3.玻片插入试管后放３７℃水浴１ｈ，放在流水下冲洗１０ｍｉｎ，待干
4.复染苏木素复染１０ｍｉｎ，水洗HPO4 87ml+KH2PO4 13ml混匀
结果判读
（-）胞质无红色
（+）淡红色
（++）布满鲜红
（+++）布满深红
（+）>2% M1—M4
（+）<=2% M5,ALL
AE：非特异性酯酶
2.固定玻片先用甲醛固定10min,水洗，干燥
2. A 0.005gAE萘酚
0.5ml丙酮（先加）
0.5ml丙二酮（再加）
B取锥形瓶，加入PH7.0AE缓冲液20ml
PAS（糖原）
1.固定PAS髓片用甲醇固定10min(或糖原固定液5min)，水洗
2.PASⅠ加血膜覆盖，置10min,水洗干燥
3.加PASⅡ液（雪夫试剂）10ml于试管，玻片插入置37℃水浴箱暗处，30-45min后水洗（水下冲10min，干燥）
4.复染：苏木素复染3min，水洗，干燥
结果判读
（-）胞质无红色
⑵、PASⅠ加膜覆盖，置10min,水洗干燥
⑶、加PASⅡ液（雪夫试剂）10ml于试管，玻片插入置37℃水浴箱暗处，30-45min后水洗（水下冲10min，干燥）
⑷、复染：苏木素复染5min，水洗，干燥
ＰＯＸ（过氧化物酶）：
⑴、POXⅠ液铺满玻片１ｍｉｎ，小玻片１５滴，大玻片２０滴
⑵、２滴H2Ｏ２＋５ｍｌH2O（蒸馏水），混匀后直接加于上步玻片上（１：１比例），混匀，５ｍｉｎ后水洗、干燥
结果判读：
（-）无蓝色颗粒
（+/-）少量稀疏蓝色颗粒
（+）胞质1/2区域出现颗粒沉淀
（++）胞质3/4区域出现颗粒沉淀
（+++）胞质全部颗粒沉淀
（++++）胞质全部浓集颗粒沉淀
抑制率趋势：0——30%——70%——100%
M1-M3 M4 M5
不抑制部分抑制受抑制
组化染色步骤
PAS（糖原）：
⑴、固定PAS髓片用甲醇固定10min(或糖原固定液5min)，水洗、干燥