酸性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，通过分光光度比色法测定400～415nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于2ml ALP Assay buffer ，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在6h 内用完。
② 配制标准品工作液。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。
编号 名称TE0003 100T Storage试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 试剂(D): Stopping Solution 12mlRT 使用说明书1份3、加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
土壤磷酸酶(酸性、中性和碱性磷酸酶
土壤磷酸酶测定（酸性、中性和碱性磷酸酶）1. 分析意义土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。
在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。
积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。
研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。
磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
2. 试验原理Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。
测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。
前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。
后一种称为无机磷含量法。
研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。
所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。
测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。
测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。
常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。
3. 试剂配制a. 0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）；b. pH5醋酸盐缓冲液、pH7柠檬酸盐缓冲液、pH9.4硼酸盐缓冲液；c. 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。
保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；d. 酚的标准溶液：酚原液－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；酚工作液－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；e. 甲苯；f. 0.3％硫酸铝溶液。
4. 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、0.0018、0.0022和0.0026mg ·g -1浓度的酚标准溶液梯度。
土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明
土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。
通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。
碱性磷酸酶活力测定
诊断常用血清酶
血清酶
鸟氨酸氨基甲酰转移酶 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 谷氨酸脱氢酶 山梨醇脱氢酶 丙氨酸氨基转移酶 异柠檬酸脱氢酶
-谷氨酰转肽酶 5ˊ-核苷酸酶 单胺氧化酶 天门冬氨酸氨基转移酶 肌酸激酶 乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶 酸性磷酸酶 淀粉酶 脂肪酶
符号 5ˊ
来源
肝 肝 肝
肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心
注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。
酶活性的测定方法
• 固定时间法： （终点法） • 通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内底
物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应的平均速度。 • 连续监测法： （速率法） • 连续监测法是指每隔一定时间（2～60s），连续多次测定酶反应过程中某一反应产物或底物量
•
在血浆中发挥特定催化作用的酶。如凝血酶、胆碱酯酶（）、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶
等。
•
它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功
能试验的一部分。
•
血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。
（二）非血浆特异酶
•
在血浆中浓度很低，且无功能，分为两种。
• • 临床上测定活性主要用于肝脏疾病和骨骼疾病的诊断。
• 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍 ，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。
第13章 精斑斑检验
2. 精液斑（seminal stain）：简称精斑，精液 浸润或附着于基质上，干燥后形成的斑痕。
特点： 1）附着的部位或基质多样化； 2）阴道擦拭物（阴道拭子）是常见的重要的 精斑检材； 3）精斑没有固定的形态，外观常因附着物不 同而有差异。
2. 精浆组成（seminal plasma）
精浆是由男性各附属性腺分泌物所组成： 精囊液占50%-80% 呈碱性，含有两种主要成分： 果糖和凝固酶。 前列腺液占15％-30％，呈透明的酸性液体含有 高浓度的酸性磷酸酶，纤溶酶和中性水解酶。 尿道球腺液和尿道旁腺液约占5％，呈浅灰色的 液体。
第十三章 精斑检验 (test for seminal stain)
教学要求
掌握精斑的概念、特点；精斑的检验目的和 检验程序；精斑的肉眼观察、预试验（酸性 磷酸酶实验）、确证试验（精子检出法、前 列腺特异抗原P30检测）、个人识别（中和 法测定ABO血型、DNA分型）； 熟悉精斑的血清型检验和酶型检验； 了解精斑检验的其它检测方法。
还有精原细胞、睾丸细胞、白细胞、脱落 柱状上皮细胞； --对于没有检查到精子的精斑，仍可以采用 DNA分型； 前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、各种形状 的精胺结晶、色素颗粒、脂肪球、胆碱、 丰富的微量元素等。 --特殊气味、精斑的确证试验等
三、精斑检验的目的与程序
1. 检验目的 1）可疑斑痕是否为精斑？ 2）若为精斑，确定精斑的个人来源。 2. 检验程序 1）肉眼观察; 2）预试验； 3）确证试验； 4）遗传标记的检测，进行个人识别。
苏木素伊红染色法（HE）
复染法 酸性品红亚甲栏染色法
3.注意事项
（1）精斑陈旧，取材部位不准或遇到少精子症者，涂片 上往往 仅见少量精子。但只要找到一个完整的典型精 子，即能确证人精斑。 （2）精斑在浸渍过程中，精子尾部断落，常只检见精子 头部。 应与阴道滴虫，酵母菌等鉴别。 （3）精子的检出期限与性交后精子在女性生殖道内存活 时间，被害人 的体位，活动情况及月经周期有关。 （4）在性犯罪案件调查中，取阴道拭子的时间越早越好。 精子检出率也与阴道拭子提取方法与部位有关。
《酸性磷酸酶的》课件
基因克隆与表达
基因克隆
通过分子生物学技术，从生物体中提取酸性磷酸酶基因的全 长或部分序列，并在实验室中进行复制。
基因表达
将克隆的酸性磷酸酶基因转染至适当的细胞或生物体中，使 其表达产生相应的蛋白质。
基因突变与功能研究
基因突变
研究酸性磷酸酶基因突变对其功能的 影响，包括酶活性、底物特异性等方 面的变化。
功能研究
通过体外实验和体内实验，深入了解 酸性磷酸酶在生物体内的生理功能和 作用机制。
基因治疗与药物研发
基因治疗
利用酸性磷酸酶基因或其相关分子进行治疗，以纠正或补偿某些遗传性疾病或病理状态 。
药物研发
基于酸性磷酸酶的特性，开发具有治疗作用的新型药物，用于癌症、感染性疾病等的治 疗。
06 酸性磷酸酶的未来研究方 向与展望
低副作用。
抑制剂的优化
02
对已有抑制剂进行结构优化，以提高其选择性、稳定性和口服
生物利用度。
抑制剂的作用机制研究
03
深入探讨酸性磷酸酶抑制剂的作用机制，为进一步的药物设计
和优化提供理论支持。
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药效学特性
抑制剂对酸性磷酸酶的抑制作用具有选择性，对其他酶的影响较小。抑制剂的作 用强度与抑制常数（Ki）成反比，Ki越小，抑制作用越强。
药代动力学特性
抑制剂在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程受多种因素影响。药物的生物利用 度、半衰期、血药浓度等药代动力学参数对药物的疗效和安全性具有重要影响。
05 酸性磷酸酶的基因工程研 究
它具有一些重要的特性，包括 对pH值的敏感性，通常在酸性 环境下表现出较高的活性。
此外，酸性磷酸酶还具有底物 特异性，只作用于特定的磷酸 酯底物。
酶活性测定方法
酶活性测定1、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)试剂：0.1% p-nitrophenylphosphate disodium salt（P-硝基苯磷酸二钠）0.2mol/L 碳酸盐/碳酸氢盐缓冲溶液(pH: 9.6)——buffer0.2mol/L NaOH测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% P-硝基苯磷酸二钠及buffer 37°C孵化30 min；(2) 1mL污泥样品+1mL0.1% P-硝基苯磷酸二钠+2mL buffer 37°C孵化30 min；(3) 加入2mL 0.2mol/L NaOH终止反应；(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。
计算：每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。
[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.704 (Eu)2、酸性磷酸酶(Acid phosphatase)试剂：0.1% p-nitrophenylphosphate disodium salt（P-硝基苯磷酸二钠）0.2mol/L HAc/Ac缓冲溶液(pH: 4.8)——buffer0.2mol/L NaOH测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% P-硝基苯磷酸二钠及buffer 37°C孵化30 min；(2) 1mL污泥样品+1mL0.1% P-硝基苯磷酸二钠+2mL buffer 37°C孵化30 min；(3) 加入2mL 0.2mol/L NaOH终止反应；(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。
计算：每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。
[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.719 (Eu)3、a-葡萄糖甘酶(a-glucosidase)试剂：0.1% p-nitrophenyl a-D glucopyranoside（p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷）0.2mol/L Tris-HCl (pH: 7.6)测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷及Tris-HCl 37°C 孵化30 min；(2) 1mL污泥样品+1mL 0.1% p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷+2mL Tris-HCl 37°C孵化60 min；(3) 沸水加热3min 终止反应；(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。
土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml 水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。
三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。
再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。
然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。
第十五章 精斑检验
NSMC XDD
1
精液（斑）检验是法医学鉴定实践中的一项重 要内容，与血痕检验占有同等重要地位，特别是 对有关性犯罪或有性犯罪嫌疑的案件，以及对死 亡性质不明的女尸检查，精液（斑）的检验尤为 重要。 精液（斑）的法医学鉴定，可为判断案件性质、 划定侦查范围、认定或排除犯罪嫌疑人提供重要 线索。在亲子鉴定或其它有关性功能鉴定中，有 时需对新鲜精液进行检验。
7
凝固酶（精囊腺）5min内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺）20-30min内液化成稀薄 半流动体
精子产生过程
8
精斑检验的目的：
为案件侦查和审理提供线索和证据。
需解决的问题：
斑痕是否为精斑？若是精斑，确定精斑的个体来源。
精斑检验程序：
肉眼检验→预试验→确证试验→个人识别
9
第二节 精液斑的肉眼检查
12
尸体 上的 精斑
13
强奸杀人现场遗留纸团
14
紫外辅助检查：
原理： 精斑中的黄素在紫外线下呈银白色荧光，斑痕边缘呈浅紫蓝色 特点：
对检材无污损、无破坏，不影响进一步检验 特异性差（干扰物：阴道液、尿液、唾液、某些色素染料）
作用：仅能为进一步检验提供可疑部位 结果分析：
阳性仅表明可能是精斑，阴性不能轻易否定精斑
液）等也可形成类似结晶。同时，精液斑受到尿 液、血液等污染时，则不出现阳性反应。 结晶试验灵敏度低、特异性差，仅作为指向实验。
28
过碘胆碱 29
30
苦味酸结晶试验
原理：
精素分解产物与苦味酸生成精素苦味酸结晶
（青黄色有折光的十字、柱、星形结晶）
特点： 动物精液一般不出现阳性。
31
土壤酶活性实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过测定土壤酶活性，了解土壤中酶的分布、活性以及与土壤理化性质的关系，为土壤质量评价和植物生长提供科学依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料- 土壤样品：采集于我国某典型农田，分为0-20cm和20-40cm两个土层。
- 仪器设备：分光光度计、pH计、微孔板、酶标仪、水浴锅、离心机等。
- 试剂：葡萄糖、果糖、丙酮、盐酸、硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠等。
2. 实验方法（1）土壤样品处理：将采集的土壤样品风干、磨碎，过筛后备用。
（2）土壤酶活性测定1）酸性磷酸酶活性测定：采用分光光度法，以磷酸苯二钠为底物，测定在酸性条件下土壤酶催化产生的酚的量。
2）β-葡萄糖苷酶活性测定：采用分光光度法，以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷为底物，测定在碱性条件下土壤酶催化产生的对硝基苯的量。
3）蛋白酶活性测定：采用分光光度法，以酪蛋白为底物，测定在碱性条件下土壤酶催化产生的酪氨酸的量。
（3）土壤理化性质测定1）土壤pH值测定：采用pH计测定土壤溶液的pH值。
2）土壤有机质测定：采用重铬酸钾容量法测定土壤有机质的含量。
3）土壤全氮、全磷、全钾测定：采用凯氏定氮法、过硫酸钾消解-分光光度法、火焰光度法分别测定土壤中的全氮、全磷、全钾含量。
三、实验结果与分析1. 土壤酶活性测定结果表1 土壤酶活性测定结果| 土层 | 酸性磷酸酶（U/g）| β-葡萄糖苷酶（U/g） | 蛋白酶（U/g） || --- | --- | --- | --- || 0-20cm | 10.2 | 9.8 | 8.5 || 20-40cm | 8.9 | 8.3 | 7.2 |由表1可知，0-20cm土层中的酸性磷酸酶、β-葡萄糖苷酶和蛋白酶活性均高于20-40cm土层。
2. 土壤理化性质测定结果表2 土壤理化性质测定结果| 土层 | pH值 | 有机质（g/kg） | 全氮（g/kg） | 全磷（g/kg） | 全钾（g/kg） || --- | --- | --- | --- | --- | --- || 0-20cm | 6.8 | 27.5 | 1.5 | 0.9 | 20.1 || 20-40cm | 6.5 | 22.1 | 1.2 | 0.8 | 19.0 |由表2可知，0-20cm土层中的土壤pH值、有机质、全氮、全磷、全钾含量均高于20-40cm土层。
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酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)
简介：
酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二钠，产生酚和无机磷，经碱处理后酚能与4-AAP 反应，产物经氧化生成红色醌类化合物。
该试剂盒主要用于检测血清中前列腺酸性磷酸酶活性，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
① 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的
测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。
② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，-20℃冻存，用于酸性磷酸酯酶的检测。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或
PBS 等进行稀释，也可以采用ACP Assay buffer 稀释。
2、 稀释标准品：
加入物(μl) 0 1 2 3 4 5 Phenol(1mg/ml) 0 5 10 15 20 25 蒸馏水
50 45 40 35 30 25 相当于ACP 活性(U/L)
10
20
30
40
50
编号 名称
TE0032 50T TE0032 100T Storage
试剂(A): Phenol(1mg/ml) 1ml 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 酸性基液
0.75ml 1.5ml RT 试剂(C): ACP Assay buffer 0.5ml 1ml -20℃ 避光 试剂(E): ACP 显色基液 1.5ml 3ml 4℃ 避光 试剂(F): ACP 显色液 1.5ml
3ml
RT 避光
说明书
1份
3、ACP加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注
意避免产生气泡。
如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
加入物(μl) 空白孔标准孔测定孔
蒸馏水5－－
系列Phenol标准－ 5 －
待测样品－－ 5
酸性基液10 10 10
ACP Assay buffer 5 5 5
37℃准确保温15min，依次加入下列溶液，每加一种均应混匀。
碱性基液180 180 180
ACP 显色液25 25 25
4、ACP检测：轻轻混匀，室温放置10min，空白孔调零，酶标仪检测510nm处吸光度。
一般应数小时内检测完毕。
计算：
ACP活性单位的定义：在该实验条件下，每分钟每ml酶液产生1nmol酚(nmol/ml·min)为一个活性单位。
求平均值，以各标准管吸光度值为纵坐标，相应的酚含量为横坐标绘制酚含量-吸光度值曲线，即为标准曲线。
根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的酚含量，乘以稀释倍数后，换算为”nmol/ml·min”的活性单位。
注意事项：
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定。
4、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。
5、待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。