耐福美双的哈茨木霉菌株诱导及其几丁质酶生防特性研究
木霉菌的功过
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•生物防治应用
• 生防活性
1、 拮抗作用 木霉菌通过产生小分子的抗生素和大分子的抗菌蛋白戒胞壁降解酶类来抑制病 原菌的生长、繁殖和侵染。木霉菌在抗生和菌寄生中,可产生几丁质酶、β21 ,3 葡聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶来分解植物病原真菌的细胞壁戒分泌葡萄糖 苷酶等胞外酶来降解病原菌产生的抗生毒素。同时，木霉菌还分泌抗菌蛋白 戒裂解酶来抑制植物病原真菌的侵染。 2、 竞争作用 木霉菌可以通过快速生长和繁殖而夺取水分和养分、占有空间、消耗氧气等,以 至削弱和排除同一生境中的灰霉病病原物。 3、 重寄生作用 研究发现木霉菌会在特定环境里形成腐霉对灰霉病菌具有重寄生作用,它进入寄 主菌丝后形成大量的分枝和有性结构,因而能抑制葡萄灰霉病症状的出现。
• 木霉菌生物农药系新型生物杀菌剂。通过产生抗生素、营养
竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机制 ，对于多种植物病原菌具有拮抗作用，具有保护和治疗双重功效 ，可有效防治土传性真菌病害，在苗床使用木霉菌剂，可提高育 苗与移植的成活率，保持秧苗健壮生长。也可用于防治灰霉病。 本品特效期长，作用位点多，不产生抗药性，突破常规杀菌剂 受限条件，不怕高湿，而且湿度越大防治效果越好。杀菌谱广， 无残留毒性，对作物没有任何不良影响。
•生物农药应用
木霉菌可抑制多种植物真菌（至目前报道约29种真菌）病，研究最多的 真菌是根腐病、立枯病、猝倒病、枯萎病等土传病害、灰霉菌、腐霉菌、 丝核菌、炭疽菌、镰刀菌、菌核病。木霉菌使用于拌土、拌种、注射及喷 洒，经实验能减少土壤中病原真菌的密度，并降低病害的发生。
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生物农药是指利用生物活体或其代谢产物对害虫、病菌、杂草、线虫、 鼠类等；生物农药是有害生物进行防治的一类农药制剂，或者是通过仿 生吅成具有特异作用的农药制剂。关于生物农药的范畴，目前国内外尚 无十分准确统一的界定。按照联吅国粮农组织的标准，生物农药一般是 天然化吅物或遗传基因修饰剂，主要包括生物化学农药(信息素、激素、 植物调节剂、昆虫生长调节剂)和微生物农药(真菌、细菌、昆虫病毒、原 生动物，或经遗传改造的微生物)两个部分，农用抗生素制剂不包括在 内。我国生物农药按照其成分和来源可分为微生物活体农药、微生物代 谢产物农药、植物源农药、动物源农药四个部分。按照防治对象可分为 杀虫剂、杀菌剂、除草剂、杀螨剂、杀鼠剂、植物生长调节剂等。就其利 用对象而言，生物农药一般分为直接利用生物活体和利用源于生物的 生理活性物质两大类，前者包括细菌、真菌、线虫、病毒及拮抗微生物 等，后者包括农用抗生素、植物生长调节剂、性信息素、摄食抑制剂、保 幼激素和源于植物的生理活性物质等。但是，在我国农业生产实际应用 中，生物农药一般主要泛指可以进行大规模工业化生产的微生物源农 药。
哈茨木霉发酵条件的初步研究
哈茨木霉发酵条件的初步研究张爱华,白石,周国兴,张连学3 (吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118)摘要 [目的]了解哈茨木霉30371在自然情况下的培养条件。
[方法]将哈茨木霉30371的孢子悬液在液体培养基中摇床振荡培养,研究培养温度、pH 值、无机离子、各种碳源和氮源等条件对其生长的影响。
[结果]麦麸培养基中哈茨木霉30371的菌丝干重最高,其次是玉米粉培养基、P DA 培养基,豆饼粉培养基最低。
哈茨木霉30371在22～34℃下均能生长,22℃为其最适生长温度;在pH 值4.0～8.5均能生长,最适pH 值是5.5。
各因素对哈茨木霉30371生长的影响由大到小依次为:(NH 4)2S O 4>K H 2P O 4>MgS O 4·7H 2O >麦麸、豆饼粉。
[结论]哈茨木霉最适的发酵条件为:在麦麸培养基中培养,培养温度22℃,自然pH 值,2.00%麦麸,1.00%豆饼粉,1.00%(NH 4)2S O 4,0.25%MgS O 4·7H 2O,0.50%K H 2P O 4。
关键词 哈茨木霉;菌丝干重;液体培养中图分类号 S182 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)23-09821-02Prelim i nary Study on Ferm ent a tion Conditions of Trichoderm a ha rzianumZHANG A i 2hua et a l (College of Traditional Chinese Medicinal material,J ilin Agricultural University,Changchun,J ilin 130118)Abstract [Objective ]The study was to understand the culture conditi ons of Trichoder m a harzianum 30371under natural condition .[Meth 2od ]The s pore sus pension of T .harzianum 30371was put in liquid medium for shaking culture t o study the effects of culture conditi ons such as the temperature,pH value,inorganic ions,various carbon s ources and nitrogen s ources etc .on its growth .[Result]The mycelial dry weight of T .harzianum 30371was highest in wheat bran medium,the second was that in maize powder medium and PDA medium,the lowest was that in bean cake powder medium.T .harzianum 30371could gr ow under 22-34℃,and the op ti mum growth temperature was 22℃.It could grow under pH of 4.0-8.5,and the op ti m um pH was 5.5.The effects of these conditions on the gr owth of T .harzianum 30371from big t o s mall was (NH 4)2S O 4dosage >KH 2PO 4dosage >MgS O 4·7H 2O dosage >wheat bran and bean cake powder dosage .[Conclusi on ]The best suitable fer mentati on conditions of T .harzianum were:culturing in wheat bran medium,culture temperature of 22℃,natural pH,2.00%wheat bran, 1.00%bean cake powder, 1.00%(NH 4)2S O 4,0.25%MgS O 4·7H 2O and 0.50%KH 2P O 4.Key words T .harzianum ;D ry weight of mycelium;L iquid culture作者简介 张爱华(1978-),女,山东泰安人,博士,从事药用植物学研究。
哈茨木霉LTR-2对椒样薄荷耐盐生理特性的影响
ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｐ ｅ ｐ ｐ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｔ （ Ｍｅ ｎ ｔ ｈ ａ ｐ ｉ ｐ ｅ ｒ ｉ ｔ ａ Ｌ ． ）
Ｌ Ｉ Ｚｈ ｅ ，ＧＵＯ Ｋ ａ ｉ ， ＷＵ Ｘｉ ａ ｏ— ｑｉ ｎ ｇ ， ＣＨＥ Ｎ Ｑｕ ａ ｎ ， Ｌ Ｉ Ｊ ｉ — ｓ ｈ ｕ ｎ ， Ｙ ＡＮＧ Ｈｅ — ｔ ｏｎ ｇ ＇
农 业微 生 物专栏
哈 茨木 霉 Ｌ Ｔ Ｒ 一 ２对椒 样 薄荷 耐盐 生理特 性 的影响
李哲 ， 郭凯 ， 吴 晓青 ， 陈泉 ， 李纪顺 ， 杨合 同 ＇
（ １ ． 山东省科 学院生物技 术研 究 中心 ， 山 东省应用微 生物重点 实验 室， 山东 济南２ ５ ０ ０ １ ４ ；
２ ． 山东理 工大学生命科 学学院 ， 山 东 淄博 ２ ５ ０ ０ ４ ９ ）
摘要 ： 木 霉 菌（ Ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍ ￣ｓ ｐ ｐ ． ） 是一 类能 够刺 激作物 生长 并增 强其抵 抗 生物和 非生物 胁迫 能力 的 多功 能益 生真 菌 ， 目前 国 内外 对 于生 防木霉 菌在增 强植 物耐 盐性及 其作 用机 理方 面 尚缺 乏深入 、 系统 的研 究 。本 文研 究 了生 防木 霉 菌Ｌ Ｔ Ｒ ． ２ 对
山东科学
ＳＨＡＮＤＯＮＧ ＳＣＩ ＥＮＣＥ
第２ ７卷
第４期
２ ０ １ ４年 ８月出版
ＶＯＩ ． ２ ７ ＮＯ． ４ Ａｕ ｇ． ２ ０１ ４
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ７ ６ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ — ４ ０ ２ ６ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ４ ． ０ ０ ４
Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ ０ １ ４ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ．Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｓｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｚ ｉ ｂ ｏ ２ ５ ５ ０ ４ ９，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
木霉菌的功过ppt课件
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•生物农药应用
木霉菌可抑制多种植物真菌（至目前报道约29种真菌）病，研究最 多的真菌是根腐病、立枯病、猝倒病、枯萎病等土传病害、灰霉菌、 腐霉菌、丝核菌、炭疽菌、镰刀菌、菌核病。木霉菌使用于拌土、拌 种、注射及喷洒，经实验能减少土壤中病原真菌的密度，并降低病害 的发生。
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• 木霉菌生物农药系新型生物杀菌剂。通过产生抗生素、营养
竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机 制，对于多种植物病原菌具有拮抗作用，具有保护和治疗双重 功效，可有效防治土传性真菌病害，在苗床使用木霉菌剂，可 提高育苗与移植的成活率，保持秧苗健壮生长。也可用于防治 灰霉病。 • 本品特效期长，作用位点多，不产生抗药性，突破常规杀 菌剂受限条件，不怕高湿，而且湿度越大防治效果越好。杀菌 谱广，无残留毒性，对作物没有任何不良影响。
木霉菌的功与过
11环监 端玉倩 201102110106
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目录
• 发展前景 • 生物防治应用 • 生物农药应用 • 危害
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简介
木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目， 丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不同环境条件下的 土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉菌已有了初步 的认识，但直到上世纪60年代木霉菌的分类地位才 得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真 菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比 如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作 物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因 此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂。 由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对 环境较为友好的生物农药木霉菌受到了广泛的关注Biblioteka 2019-5
哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌对人参灰霉病和根腐病病原菌的拮抗作用
哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌对人参灰霉病和根腐病病原菌的拮抗作用关一鸣;潘晓曦;王莹;吴连举【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2014(42)5【摘要】已有研究表明，从健康人参根际土壤筛选的哈茨木霉菌SF-08和枯草芽孢杆菌B11是有较高抑菌活性和广谱作用的生防菌。
初步研究表明，哈茨木霉菌SF-08及其代谢物可以抑制人参灰霉病病菌和根腐病病菌菌丝的生长，枯草芽孢杆菌B11可以抑制人参灰霉病病菌和根腐病病菌菌丝的生长和孢子萌发，且均表现出强烈的抑制作用。
SF-08对人参灰霉病病菌、根腐病菌菌丝生长的抑制率分别达到71．4％、72．0％，其代谢产物原液的抑制率分别达到71.3％、70．5％。
B11菌株对人参灰霉病病菌、根腐病病菌的菌丝生长有较强的抑制作用，原液对人参灰霉病病菌、根腐病病菌菌丝的生长抑制作用均达到80％以上，对孢子萌发抑制率均超过85％；显微观察显示，SF-08、B11菌株通过重寄生作用、竞争作用、溶菌作用使病原菌菌丝生长受到影响，从而起到抑菌作用。
【总页数】3页(P123-124,125)【作者】关一鸣;潘晓曦;王莹;吴连举【作者单位】中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112; 吉林农业大学，吉林长春130118;中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112;吉林农业大学，吉林长春130118;中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112【正文语种】中文【中图分类】S435.675【相关文献】1.枯草芽孢杆菌ge25对两种人参病原菌的抑制作用及脂肽类抑菌代谢产物的鉴定2.枯草芽孢杆菌对三种水产动物病原菌体外拮抗作用的研究3.人参内生细菌GS-1的分离鉴定及对灰霉病菌的拮抗作用4.两种木霉对陇南花椒根腐病病原菌的拮抗作用研究5.木霉菌株NF9和TC3对芋艿根腐病病原菌的体外拮抗作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
哈茨木霉T28对苗木立枯病病原菌的室内抑菌效果
哈茨木霉 Ｔ ２ ８对 苗 木 立枯 病 病原 菌 的 室 内抑 菌效 果
焦 喜 来 ， 尹 大 川 ， Ｉ ｌ ａ ｎ Ｃ ｈ ｅ ｔ 。 ， 邓 勋 ， 宋瑞清孙
（ １ ． 黑 龙 江 省 丰 林 自然保 护 区 管理 局 ， 黑龙江 伊春 １ ５ ３ ０ ３ ３ ； ２ ． 东北林业大学 林学 院， 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ４ ０ ； ３ ． 以 色 列 耶路 撒 冷 希 伯 莱 大 学 农 学 院）
种病 原 茵均有一 定的拮 抗效 果 ， 抑 制率分 别 为 ６ Ｏ 、 ２ ３ ％和 ３ ８ ； 其非挥 发性代 谢产 物对病 原 菌株 的 生长均 有不 同程度 的抑制 效果 ， 抑制 率分 别 为 ４ ５ 、 ２ ０ 和 １ ６ 。无 论 是拮 抗 实验 还是 抑 茵试 验， 哈 茨木霉 Ｔ ２ ８对 立枯 丝核 茵的抑 制效果 最 为显著 。 关键 词 ： 哈 茨木 霉 Ｔ２ ８ ； 苗木 立枯病 ； 抑 菌效果 苗木 立枯 病又 称 苗木 猝 倒病 ， 是 由立 枯 丝 核菌 （ 尺 ｈ ｉ ｚ ｏ ｃ ｔ ｏ ｎ ｉ ａ ｓ ｏ ｌ ａ ｎ ｉ ） 、 德 巴利 腐 霉 （ Ｐ ｙ ｔ ｈ ｉ ｕ ｍ ｄ ｅ — ｂ ａ ｒ ｙ ａ ｎ ｕ ｍ） 和尖孢镰 刀菌 （ Ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｕ ｍ ｏ ｘ ｙ ｓ ｐ ｏ ｒ ｕ ｍ） 引起 的苗 圃病 害 ， 发 生普遍 、 危 害严重 。该病 主要 发
第 ３期 （ 总第 １ ２ ４期 ）
２ ０ １ ３年 ６月
中 国 林 副 特 产
Ｆｏ ｒ ｅ ｓ ｔ Ｂｙ － Ｐｒ ｏ ｄ ｕｃ ｔ ａ ｎｄ Ｓｐ ｅ ｃ ｉ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ Ｃｈｉ ｎ ａ
Ｎｏ ． ３（ ＧＳＮＯ． １ ２ ４）
哈茨木霉对商洛烟区植烟土壤细菌多样性的影响
个属 ３０ 种的植物病原菌具有良好的生防效果，且具有分布
广、适应性强及繁殖快等特点［６－８］ ，不仅对多种植物病原菌具
及土壤的可持续发展具有重大意义。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料 供试烟草品种为云烟 ９９，供试土壤类型为
有拮抗 作 用， 还 可 以 改 善 作 物 根 际 土 壤 微 生 物 群 落 结
黏壤土，取自陕西省商洛市洛南县，哈茨木霉 Ｚ－１９ 菌剂由河
著提高土壤中有益微生物的含量，有效改善了土壤根际微生
１．２ 试验设计 采用随机区组排列方法，设 ２ 个处理，重复
构［９－１０］ 。 张丽荣等［１１］ 在西瓜根际土壤中施加木霉制剂可显
态效应。 刘正洋等［１２］ 通过施用木霉生物有机肥发现土壤微
ＣＫ 相比，Ｔ１ 土壤的全碳、铵态氮和速效磷含量分别提高了
氮及速效钾含量分别提高了 １６．７％、９１．３％、５９．０％且与 ＣＫ 存
氮、硝态氮及速效钾的含量，虽未显著提高土壤全碳、铵态氮
和速效磷的含量，但也稍有提高。
表 １ 各处理土壤化学指标
Ｔａｂｌｅ １ Ｓｏｉｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ；Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ；Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ；Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｓｏｉｌ ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；Ｈｉｇｈ⁃ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
植物从土壤中汲取养分来完成各种生命活动，意味着土
资源微生物利用与土壤保育研究。
收稿日期 ２０２２－０５－１６
南农业大学烟草科教园区微生物实验室制备、保存。
５ 次。 处理①常规施肥；处理②常规施肥 ＋ 哈 茨 木 霉 菌 剂
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© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net第25卷 第2期 云南农业大学学报 Vol125 No12
2010年 3月 JournalofYunnanAgriculturalUniversity Mar.2010
收稿日期:2009-02-23 修回日期:2009-07-11
3基金项目:四川木霉菌种改良及微生物农药试验示范[农业部20062G54(A)]。
作者简介:杨春林(1982-),男,四川资阳人,硕士研究生,主要从事植物病害生物防治研究。E-mail:myone23456789@yahoo1com1cn33通讯作者Correspondingauthor:彭化贤(1956-),女,四川成都人,研究员,主要从事植物病害生物防治。
E-mail:penghuaxian@yahoo1com1cn
耐福美双的哈茨木霉菌株诱导及其几丁质酶生防特性研究3
杨春林1,2,席亚东1,谢华蓉1,刘波微1,张 敏2,彭化贤133(1.四川省农业科学院植物保护研究所,四川成都610066;2.四川农业大学农学院,四川雅安625014)
摘要:用紫外线诱变与药剂驯化相结合的方法,以哈茨木霉Th230为出发菌株诱导得到4株能在含杀菌剂福美双210
×105μg/L的培养基上正常生长的耐受性提高近10倍变异菌株。其中变异菌株UV24在高浓度福美双培养基能正常生长并产生具有生防功能的几丁质酶,该几丁质酶能抑制黄瓜炭疽病菌产孢能力的85143%,抑制致病力达68188%,并能降解该病菌菌丝的细胞壁。UV24菌株遗传稳定,具与福美双混用协同防治蔬菜上的真菌病害的潜力。关键词:哈茨木霉;抗药性;几丁质酶;黄瓜炭疽病菌;拮抗作用中图分类号:S432144 文献标识码:A 文章编号:1004-390X(2010)02-0183-06
InductionofThiram2resistantIsolatesandChitinaseBiocontrolPropertiesofTrichodermaharzianum
YANGChun2lin1,2,XIYa2dong1,XIEHua2rong1,LIUBo2wei1,ZHANGMin2,PENGHua2xian1
(1.InstituteofPlantProtection,SichuanAcademyofAgriculturalSciences,Chengdu610066,China;
2.AgronomyCollegeofSichuanAgriculturalUniversity,Ya′an625014,China)
Abstract:FourmutantsofTrichodermaharzianumTh230wereobtainedbyUV2lightandthiramstressonPDAmedium.Theywereresistanttothiramandcouldgrownormallyonthemediummixedwiththi2ramof210×105μg/L.TheresultoftoxicitytestshowedthatEC50ofthiramforthemutantswere10timeshigherthantheirparentstrainTh230.Amutant,UV24,couldgrowwellininhighthiramstressandproducebiocontrolfunctionalchitinase,whichinhibited85143%ofsporulationand68188%ofpathogenicityofColletotrichumlagenarium,causingcucumberanthracnose,anddegradecellwallofthepathogen.Themutantwasstablegenetically,suggestingthatitshouldhavethepotentialtobemixedwiththiramforvegetablediseasecontrol.Keywords:Trichodermaharzianum;fungicideresistance;chitinase;Colletotrichumlagenarium;an2tagonism
近代农业生产上对化学农药的过度依赖,很多病原真菌对化学农药产生了强烈的抗药性,更进一步导致了对化学农药的滥用,对全球的环境健康和食品安全构成了巨大威胁。为避免这一局面的进一步恶化,寻找新的病害防治途径,成了历史必然。木霉菌(Trichodermaspp1)属于半知© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
菌类常见的土壤真菌,广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等生态环境中[1],是一类重要生防真菌[2],目前已有许多商品化制剂[3]。由于筛选技术的缺陷和自然界中木霉菌的生防能力一般不强,故对菌株进行改良十分必要。菌株改良手段主要有诱变育种,原生质体融合以及遗传改造等[4]。但直到20世纪80年代,诱变育种技术才真正用于木霉研究,目前已有很多成功的案例[5～9]。拮抗性木霉主要以重寄生作为生防的重要机制,在包括趋向生长、识别、接触、缠绕和穿透等步骤的真菌重寄生过程中,木霉菌分泌产生的一系列细胞壁降解酶起着重要的作用,其中以几丁质酶尤为重要[10]。几丁质酶可直接作为农药使用,或与化学杀真菌剂混用起增效作用,在某些场合,几丁质酶混合剂的抑菌效果可与商业杀菌剂媲美[11],已有不少关于木霉几丁质酶的研究报道[12,13]。由于几丁质酶被认为与木霉的生物防治活性有关[14],且不同种类的几丁质酶表现出对作用底物、病原微生物拮抗活性等方面的特异性,比如有些几丁质酶只具有水解几丁质的活性而无拮抗真菌的活性[15]。因此,筛选产几丁质酶的木霉生防菌株时,不仅要检测产几丁质酶的情况,同时还要测定该菌株产几丁质酶对重要的拮抗病原真菌的拮抗活性。福美双是应用得较为广泛的农药之一,目前国内还没有诱导抗福美双木霉菌株的报道。本研究以1株在田间生防促生效果较好[16]的哈茨木霉作为出发菌株,通过紫外光诱变与药剂驯化相结合的方法,获得抗福美双的突变菌株,探讨突变菌株的几丁质酶活性及其对病原真菌的拮抗作用,为木霉生防制剂和几丁质酶的应用提供素材。1 材料与方法111 材料 哈茨木霉菌Th-30(TrichodermaharzianumTh-30)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichumlagenarium)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、辣椒疫病菌(Phytophthoracapsici)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)由四川省农业科学院植保所病害室提供;50%福美双EC,济南春秋龙制药有限公司生产;黄瓜品种:二早子,四川省鑫佳禾种子有限公司生产。112 主要试剂几丁质(SIGMA);N-乙酰-D-氨基葡萄糖(SIGMA);DNS试剂:酒石酸钾钠91g,3,5
-二硝基水杨酸3115g,NaOH20g,苯酚215g,无水亚硫酸钠215g,dH
2O1000mL;营养盐溶液:
KH2PO42010g/L,CaCl2・2H2O310g/L,MgSO4
・7H2O310g/L;微量元素盐溶液:MnCl2・4H
2O
116g/L,ZnSO4・7H2O114g/L,Fe(NH4)2510g/L,CoCl2・6H2O317g/L。几丁质酶诱导基础培养基:几丁质710g,蛋白胨210g,营养盐溶液5010mL,微量元素盐溶液110mL,H2O1000mL;几丁质酶诱导选择培养基:在基础培养基中加入110×105μ
g/L的50%福美双EC。
113 耐福美双木霉菌株的诱导11311 耐福美双木霉菌株紫外诱变 参照Papavizas等[17]方法。在50%福美双可湿性粉剂110×104μg/L及对照PDA培养基平板上涂抹110mL供试木霉菌的分生孢子悬浮液(110×106cfu/mL)。25℃下预培养24h后,去盖置于20W紫外灯管下30cm处,室温20～23℃的黑暗中照射20～50min后马上转移至黑暗5℃条件下过夜,
次日置于黑暗20℃下培养7d,检查平板菌落,将所形成的菌落转移至含110×104μg/L50%福美双可湿性粉剂的PDA平板上培养4d。11312 重复诱导及药剂驯化从培养4d含110×104μg/L福美双的PDA平板上,选取生长快速的突变型菌株,在菌落边缘取直径5mm菌饼,接种在210×104μg/L福美双的PDA平板上,在25℃恒温培养7d,再选生长速率较快的菌落边缘,取直径5mm的菌饼接种在含310×104μ
g/L福美双平板上。如果菌落不扩展,则继续
在原来浓度的药物培养基上重复紫外线诱变。11313 毒力及遗传稳定性测定含药培养基的制备及测定方法按FAO推荐方法[18]进行。抗药性遗传稳定性测定按照叶钟音等[19]方法进行。11314 抗性突变体产孢能力及生长速率的测定将抗性突变体菌株在20℃下培养3d,用直径5mm的打孔器沿菌落边缘截取菌块接种于PDA培养基上,在20℃恒温黑暗条件下分别于2d和7d
测量菌丝生长速率和产孢量。每处理3次重复。114 突变菌株几丁质酶的初步研究11411 几丁质酶的诱导 活化培养目标木霉于PDA培养基上,直到产生大量绿色孢子,每皿用5mL灭菌水洗下分生孢子,收集分生孢子液,血球计数板计数,并将孢
481云南农业大学学报 第25卷