显微镜的使用及涂片染色技术
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
染色的基本原理、方法及注意事项！
染⾊的基本原理、⽅法及注意事项！染⾊的基本原理、⽅法及注意事项！！染⾊的基本原理、⽅法及注意事项百欧博伟⽣物涂⽚及染⾊是微⽣物学的基本技术，也是观察细菌最简单且⾏之有效的⽅法。
通常情况下，由于细菌个体较⼩，较透明或半透明，如未经染⾊往往不易观察识别。
因此借助于染⾊法可使细菌着⾊，与视野背景形成鲜明对⽐，从⽽易于在显微镜下进⾏观察。
简单染⾊法即只⽤⼀种染料对涂⽚进⾏染⾊，该法简便易⾏，适⽤于菌体的⼀般形态观察。
通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合⽽被染⾊，因此常⽤碱性染料进⾏简单染⾊，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。
所有的苯胺染料，均可⽤来做简单染⾊法的染⾊剂。
在进⾏染⾊之前的制⽚过程是影响染⾊结果好坏的关键性步骤。
制备细菌染⾊⽚⼀般要经过涂⽚、固定、染⾊、⽔洗、⼲燥等步骤(见下图),然后⽤显微镜，甚⾄油镜观察。
(⼀)涂⽚取⼀⼲净的载玻⽚，滴加⼀⼩滴蒸馏⽔于载玻⽚中央。
按⽆菌操作要求，接种环经灼烧灭菌，待冷却后⽤接种环从菌种试管斜⾯上(培养⽫表⾯)挑取少量培养物(不要挑破培养基),置于载玻⽚上的⽔滴中，与⽔混合并轻轻涂布成直径约1cm左右的均匀薄层。
操作完成后，接种环要再经灼烧灭菌，放归原处。
(⼆)⼲燥将涂⽚于室温中⾃然⼲燥或者置于酒精灯⽕焰⾼处，微热烘⼲。
切记不能直接在⽕焰上烘烤，以免菌体烤焦变形，影响对菌体的观察。
(三) 固定涂⽚标本⾯向上，快速通过酒精灯⽕焰外焰2次~3次，进⾏标本固定。
固定的⽬的在于杀死细菌以固定其细胞结构；保证菌体牢固地粘附在载玻⽚上，染⾊或⽔洗时不⾄于脱落；同时改变菌体对染料的通透性，有利于着⾊，增强染⾊效果。
固定时，以载玻⽚背⾯加热处触及⽪肤⽽不觉过烫为宜(⼀般不超过60 )。
(四)染⾊标本玻⽚⽔平放置，滴加1滴~2滴染⾊液，使染⾊液完全覆盖涂⽚区域，染⾊时间视不同标本和染料的性质⽽定。
(五)⽔洗染⾊到⼀定时间后，倾去染液，斜置玻⽚，⾃玻⽚上端⽤⾃来⽔冲洗⾄流下的⽔⽆⾊为⽌；或将玻⽚置于玻⽚架上，⽤洗瓶倾注⽔流进⾏⽔洗。
血涂片的操作方法
血涂片的操作方法
血涂片是一种常见的实验技术，用于观察血液中的细胞形态和数量。
下面是血涂片的操作方法：
1. 准备材料：显微镜玻璃片、无菌注射器、血液样本（静脉血或毛细血管血）。
2. 取一只无菌注射器，将其抽空。
然后将血液样本放入注射器中，释放一到两滴血液样本到玻片中。
3. 将另一只玻片压平在已经滴有血液的玻片上，使血液样本均匀涂开。
4. 沿着玻片的一侧，将已经涂有血液的玻片平行于另一只干净的玻片上，使其逐渐移动。
5. 保持持续的均匀速度，将带有血液样本的玻片从一侧滑动到另一侧，形成一层均匀的涂片。
6. 确保血液干燥后，用染色剂（如Wright染色液）对涂片进行染色。
按照染色剂的说明操作。
7. 将涂片放在显微镜下，使用适当的放大倍率（如100倍或1000倍）观察涂
片。
注意细胞数量、形态和其他特征。
血涂片操作是一个相对简单的过程，但需要仔细操作以确保获取准确的结果。
在进行操作时，请注意实验室的安全规范，并遵守任何实验室指南。
用显微镜观察真菌细胞涂片的实验教案
用显微镜观察真菌细胞涂片的实验教案实验目的：通过显微镜观察真菌细胞涂片，了解真菌细胞的结构和形态特征，进一步认识真菌的生物学特性。
实验原理：真菌是一类以多细胞形式存在的微生物，其细胞结构与植物细胞和动物细胞有些许不同。
真菌细胞的主要结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
显微镜是观察微生物的重要工具，通过显微镜的放大作用，我们可以更清晰地观察真菌细胞的细节。
实验步骤：1.将一个已经培养好的真菌菌落取出。
2.取一片玻璃片，用酒精或火消毒并晾干。
3.在玻璃片上涂抹一层适量的凝胶剂（例如明胶），使其均匀分布在玻璃片上。
4.使用消过毒的镊子，将一小块真菌菌丝块直接放置在凝胶剂上。
5.用消毒的玻璃棒将菌丝块轻轻铺开，尽量保持均匀。
6.将涂片晾干，并用显微镜载玻片将其封装起来，以免外界灰尘污染。
7.使用显微镜，先调整到低倍镜，将涂片放置在载玻片上，将载玻片固定在显微镜载玻片夹上，然后调节焦距和照明角度。
8.缓慢转动镜头，观察涂片中的真菌细胞。
9.适时转到高倍镜，继续观察细胞的细节结构。
实验注意事项：1.操作时要注意个人卫生，避免将真菌接触到眼睛、口腔等部位。
2.实验前要使用消毒剂对工作台、试管架等实验器材进行消毒处理。
3.在涂片制备过程中，要防止玻璃棒和镊子等工具的交叉污染，避免影响实验结果。
4.使用显微镜时，要注意镜头的清洁，避免灰尘或污染物附着在镜头上而影响观察。
5.在观察过程中，不要用手触碰载玻片或显微镜镜头，以免污染涂片或损坏显微镜。
实验结果和讨论：通过观察真菌细胞涂片，我们可以看到真菌细胞的形态特征，例如细胞壁和细胞膜的厚度、细胞质的颜色和形状、细胞核的大小和位置等。
通过这些观察，可以进一步了解真菌细胞的生物学特性，例如真菌的繁殖方式、对环境的适应性等。
同时，我们还可以观察到真菌在不同生长阶段的变化，了解真菌的生长和发育规律。
总结：通过本实验，我们利用显微镜观察了真菌细胞涂片，了解了真菌细胞的结构和形态特征，增加了对真菌生物学特性的了解。
显微镜的使用与观察人血涂片1
显微镜的使用与观察人血涂片1试题一显微镜的使用及观察人血涂片实验要求：1、正确使用显微镜。
2、识别人血涂片中的血细胞。
实验方案评分标准满分一、取镜和安放一手握镜臂，一手托镜座,将显微镜从镜箱中取出并放在实验台上，略偏左。
1、一手握镜臂，一手握镜座。
（0.5分）2、略偏左,距边缘7—10厘米。
（0.5分）1分二、对光1、转动转换器，使低倍物镜正对通光孔。
2、转动遮光器，选择较大的光圈对准通光孔。
3、一眼注视目镜内，一眼睁开，同时把反光镜转向光源，通过目镜看到白亮视野后并报告教师。
1、转动转换器。
(0.5分)2、选择低倍物镜。
(0.5分)3、看到白亮视野。
(0.5分)1．5分三、1、把涂片放在载物1、正确固定标3分观察台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。
2、从侧面注视物镜，转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢下降接近涂片。
3、一眼注视目镜内，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直至看到物像，再略微转动细准焦螺旋，直至物像清晰，报告老师。
4、正确填写实验报告。
本。
(0.5分) 2、从侧面注视物镜接近涂片。
(0.5分)3、物像清晰。
（0.5分）4、并将白细胞移到视野中央或用指针指出。
(0.5分)5、填写正确。
（1分，每空0.5分）四、整理1、取下涂片并复位。
2、用纱布擦拭显微镜外表。
3、转动转换器，让两物镜偏到两旁，并将镜筒降至最低位置。
涂片复位，显微镜擦拭、复位，桌面整洁，缺一不得分。
(0.5分)0.5分4、将显微镜放回镜箱。
实验步骤一、取镜和安放二、对光三、观察四、整理实验记录在你观察的视野中，数目最多的血细胞是，在显微镜下呈现色。
试题二探究种子萌发的环境条件实验要求:尝试探究种子萌发的环境条件。
实验方案评分标准满分一、问题情境许多农作物是在春天播种的，天寒地冻不适于播种。
在播种之前往往要在地里浇一些水，使土壤潮湿，如果刚下过一场小雨，不用浇水就可以播种了；但是过于潮湿又容易使种子霉烂。
播种前往往要松土，使土壤中有充足的空气。
2实验二显微镜油镜的使用、细胞形态的观察及革兰氏染色
取大肠杆菌和白色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（采用 三区涂片法：分别将上述2种菌液延伸至玻片中央，混匀 并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多， 涂片要均匀，不可过于浓厚。
三区涂片法
菌体
载玻片
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率：是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D（R）=0.61λ/n· Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；
弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都
呈现阴性反应。
（四）、革兰氏染色原理
根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的
结构差异来达到染色的目的的。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的
蓝紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复
合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
镜口率 N.A=n· Sinα/2
油镜(OI,HI,100X)，即油浸 接物镜。当光线由反光镜通 过玻片与镜头之间的空气时， 由于空气与玻片的密度不同， 使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中 间的介质是一层油（其折射 率与玻片的相近），则几乎 不发生折射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清 晰。
初染
媒染
脱色
复染
（三）革兰氏染色的操作方法
微生物实验四细菌的涂片及简单染色法和革兰氏染色法经典法
【实验报告】
• 2）填表
•
表1 细菌形态的描述
【实验报告】
•
2．思考题
•
（1）涂片为什么要固定，固定时应注
意什么问题？
•
（2）你在涂片染色过程中遇到了什么
问题？试分析其中原因？
•
ห้องสมุดไป่ตู้
（3）革兰氏染色中哪一步是关键，为
什么？你如何控制这一步。
•
（4）不经复染这一步，能否区别革兰
氏阳性菌和阴性菌？
• 2、仪器 显微镜(25台)； • 3、材料 载玻片（每组4个），酒精灯（每组1个）
，接种环（每组1个），擦镜纸，二甲苯、香柏油 ，吸水纸，染色缸等；
【实验用品】
• 4、染料 草酸铵结晶紫（Crystal Violet , CV）、沙黄、吕氏碱性美蓝染液。
1）草酸铵结晶紫染液的配制：
A液： 结晶紫
•
染色前必须先固定细菌，其目的有二
：一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘
附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力
。常用的有加热和化学固定两种方法。固
定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞
膨胀或收缩。
【基本原理】
• 二、革兰氏染色法（经典法）基本原理 • 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重
要性状 • 革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观
【方法步骤】
• 3、染色
•
⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结
晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。
倾去染色液，用自来水小心地冲洗。
•
⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。
•
⑶脱色 滴加95%乙醇2-3次，脱色20-25s立
单目显微镜使用方法
单目显微镜使用方法
单目显微镜是一种常用的实验室设备，通常用于观察和研究微小的生物、细胞和组织，以及纤维、晶体、金属等物质的结构和特性。
使用单目显微镜需要注意以下几点：
1. 确认样品：在使用单目显微镜前，需要确认所要观察的样品。
不同的样品需要不同的处理方法，如涂片、切片、染色等。
同时，也需要注意样品的大小、形状和颜色等。
2. 调节光源：单目显微镜通常配有光源，可以通过调节光源的
亮度和方向来获得最佳的观察效果。
调节光源时应避免直接照射样品，以免影响观察。
3. 调节目镜和物镜：单目显微镜的镜头由目镜和物镜组成，需
要同时调节两个镜头才能获得清晰的图像。
首先应选择合适的物镜，然后通过调节目镜来使图像清晰。
4. 调节焦距：在观察样品时，需要通过调节焦距来获得清晰的
图像。
通常可以通过转动焦轮或移动样品平台来实现调节焦距。
5. 注意细节：在使用单目显微镜时，需要注意细节，如保持显
微镜的清洁、避免触碰镜头、调节光源时避免直接照射眼睛等。
总的来说，使用单目显微镜需要有一定的技巧和经验，但只要掌握了基本的使用方法和注意事项，就可以轻松地进行观察和研究。
- 1 -。
实验一 普通光学显微镜的使用
4、荚膜染色原理
荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时， 可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细 胞区别开来
细菌荚膜
5、鞭毛染色法原理
细菌鞭毛直径为10-12nm，超过了光学显微镜的分辨 能力。所以染色时，不仅要使鞭毛染色，还要使一部分 染料堆积在鞭毛上，加粗鞭毛的直径以便能观察。
染色成功的关键： 一、必须使用新鲜培养、活动活泼的菌体进行染色； 二、是使用绝对无油的干净玻片，以便菌液流过玻片时 能保持自然形态。细菌的运动性，可通过悬滴法制片观 察。注意区分布朗运动和细菌本身的运动。
【思考题】
1.革兰氏染色法涂片要薄而均匀，脱色程度要控 制得当，为什么？
2.为什么要用培养24小时内的菌体进行革兰氏染 色？
3.鞭毛染色为何有那么多要求？ 4.菌体荚膜的成分是什么？为何常用负染色法？ 5.芽孢染色为何要加热或延长时间？
实验3 酵母菌、 放线菌形态的观 察
【实验目的】
1、 观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式， 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
◆ 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一 类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基 表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌 丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝， 并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光 滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形 态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
注意：使用油镜时，在通过目镜观察时，切勿用 粗调上升镜台来调节焦距，以免压碎玻片，损坏 镜头。
【思考题】
1、如何区别显微镜的低倍镜、高倍镜和油 镜？
2、 油镜和高倍镜在使用时应注意哪些问 题？
3、观察完毕后，如何维护显微镜？
实验2 细菌的形态观察
儿童显微镜使用教程
儿童显微镜使用教程儿童显微镜使用教程显微镜的认识1、目镜盖：保护目镜，以免将灰尘、油污、尖锐物件进入目镜，操作镜片，影响观察。
2、目镜：观察物体之用。
如有油污、灰尘等，可用镜头纸沾上乙醇，做圆圈状清洗。
千万不能用手去触摸镜片。
3、调焦手轮：用手轮来调整镜筒的上下位置，以便得到清晰的聚集来观察物体。
4、反光镜：有两种光源：a 可用反光镜借助自然光源或灯光的折射，将光束从载物台中心的通光孔中通过，并通过角度的变动来获得自己满意的光强度，使观察物更清晰。
B 装上电池，将灯泡向上，调节光源至满意的效果。
5、载物台：是用来置放所观察物体的。
载物台上的两个金属压片是用来固定载玻片的。
6、镜座：取下底垫就可以更换电池，注意电池的正、负极。
7、转盘：轻轻的用手旋转转盘，听到清晰的“咔嗒”声，则表示定位准确。
转盘上有三个物镜，通过变换物镜的倍数，可以获得不同的放大倍数，以便清晰地观察物体。
建议：先用最小的倍数的物镜来观察，然后逐步放大倍率。
图一：图二：显微镜的附件：1、塑胶瓶：可放置做实验所需的物品。
如海盐、虾卵、染色剂、胶水等。
2、孵卵盒：用来孵化虾卵或当培养皿。
3、标签盒和盖片盒：存放空白标签和盖片。
是为你动手做标本的。
4、标本载片：先学会观察这些标本。
5、空白载片：你可以用身边熟悉的东西做标本观察。
6、吸管：吸取染色剂之用。
7、蝴蝶标本：通过显微镜的放大，可以看到蝴蝶的角须、足、鳞粉等。
8、滤色盘：将滤色盘安装在载物台的下面，转动滤色盘，可变换红、黄、蓝三种不同的颜色来分别观察物体的奇异变色现象。
观察物体1、取镜和安装把显微镜放在实验台距边缘7厘米左右处，略偏左。
检查一下物镜和目镜。
2、对光转动转盘，使低倍率物镜对准通光孔。
调整光源，使光线通过通光孔，达到最好的效果。
3、观察把所要观察的载玻片放在载物台上，用压片夹住，标本要正对通光孔的中心。
或自制一个字母装片。
A、从报纸或书刊上剪下一个字母；B、将字母放在干净的空白载片上；C、用吸管吸水后挤上一滴水；D、将透明盖玻片取出，盖在滴水后的纸片上；E、置于压片下，将其移放到载台小孔中央。
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明视野显微镜的原理及使用
1、定义：
通过聚焦镜汇聚到样品上，因而形成一个锥形的明亮光束并通过样品进入物镜的显微镜。
用于观察经染色或本身具备颜色的细胞、组织片等标本。
明视野显微镜是最通用的一种光学显微镜。
2、组成部件
⑴机械系统部分
①镜座显微镜的基本支架，由底座和镜臂组成。
②载物台支持被检标本的平台。
③镜筒空心的圆筒，装置于镜臂上端，上接目镜，下接转换器。
目前，显微镜多见斜筒式，特别是双镜斜筒的，使观察时眼睛
不易疲劳，用起来方便。
④转换器位于镜筒的下端，是一个可以旋转的圆盘，用于装物
镜。
镜检时，转动转换器转换物镜。
⑤调焦装置包括粗细调焦旋钮，是调节载物台上下移动的装
置。
它是获得清晰图像的关键。
粗调只做粗略的调焦，对低倍
观察仅用粗调就能获得清晰图像，在采用高倍镜和油镜时，粗
调获得模糊物象后，还需细调才能看清物象。
⑵光学系统部分
①物镜分为干燥系物镜（放大60倍以下的物镜）和油浸系物
镜（放大100被的物镜）。
干燥系物镜和标本之间的介质是空
气；油浸系物镜与标本之间必须加入香柏油才能观察到清晰物
象。
物镜的放大倍数常有8×、10×、20×、40×、60×、100
×。
一般光学显微镜仅有其中的3-4种。
②目镜插入镜筒上端，供眼睛观察物象用。
一般目镜镜筒越长，
放大倍数越小。
常有3×、5×、8×、10×、15×等种数。
③集光器可以上下移动，以调节最适光度，附有的虹彩光圈，
用于调节光线的强弱。
3、使用方法及注意事项。
⑴观察任何需要镜检的标本都可以先用低倍镜观察，找到目标物，然后旋动转化器转换成高倍镜观察，再适度旋转细调焦旋钮，就能观察到目的物象。
⑵油镜的使用镜检细菌及真菌菌体形态时需采用放大100被的油镜。
需要在标本与镜头之间滴加香柏油。
镜检完毕后，先用插镜纸将镜头上的香柏油擦去，再用擦镜纸蘸少许二甲苯，将镜头上残留的香柏油擦去，并将二甲苯擦去。
使用次数比较少的显微镜，如果忘记擦除油镜上的香柏油，油干后极难擦除，会直接损坏油镜，因此务必记得擦拭油镜。
⑶显微镜的总放大率是物镜和目镜放大倍数的乘积。
⑷未经染色处理的生物标本，由于对光线的吸收很少，造成反差低的影像，不利于明视野显微镜观察。
使用染料对生物标本染色后增加了反差，成为明视野显微镜的主要观察对象。
染色与制片技术
1、为什么镜检的标本都要染色处理？
一般的微生物细胞含水量都在80——90%，因此细胞对光的吸收和反射与水溶液相差不大，特别在油镜下观察时细胞与背景几乎没有反差，呈现一片透明状态。
所以在观察微生物细胞的一般构造及特殊构造时都采用染色法，目的是通过细胞对染料的吸着所产生的与背景较明显的明暗差，便于观察。
2、碱性复红如何配置？
0.3g碱性品红加5g石碳酸溶于95%乙醇10ml中，加水至100ml即可。
3、单染色操作步骤及注意点有哪些？
⑴实验材料：酒精灯，接种环，显微镜，香柏油，洗瓶。
⑵操作步骤
a)涂片干燥取一块干净的载玻片，用酒精灯灼烧接
种环直至发红，完后蘸取菌液，涂到玻片上，涂匀即可，
需要观察食用菌菌丝的生长情况，也可挑起一些絮状的菌
丝涂到玻片上。
b)固定固定常用高温，手持载玻片，标本面朝上，
在火焰外层快速来回通过，要求玻面温度不超过60℃，此
时以手背皮肤接触不觉得过烫为度，将玻片上的菌液及菌
丝烤干至牢牢的贴伏。
放置待冷后染色。
固定的目的是：1、
杀死微生物，固定其细胞结构。
2、保证菌体能牢固的粘
附在载玻片上，因而可防止标本被冲洗掉
c)染色滴加碱性复红染液覆盖，染色30s。
碱性复红
染色液着色快、时间短，菌体呈红色。
d)水洗掉染液，吸干。
e)油镜观察菌丝形态及污染情况。