临床真菌学
真菌感染的诊断与治疗
约有高达85%的播散性念珠菌病患者无法获得及时和正确的诊断，并给予适当的抗真菌药物治疗。
病情恶化快
Nolla-Salas J, Sitges-Serra A, Leon-Gil C, et al. Intensive Care Med 1997;23:23-30
肝脾念珠菌病
由门脉循环引起
系统性念珠菌病
由胃肠道播散
白念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 克柔念珠菌
白念珠菌
念珠菌血症菌种分布 （1992-2003）
% of Isolates by Year(no.tested) 1992 1995 1997 1999 2001 2003 Species (235) (332) (413) (320) (2770) (1715) Candida albicans 44.3 53.3 54.0 54.7 59.8 65.1 Candida glabreta 16.6 20.5 15.3 15.3 16.4 14.2 Candida parapsilosi 21.7 9.0 18.9 10.3 10.7 9.3 Candida tropicalis 11.9 11.4 7.0 11.9 7.9 6.9 Candida krusei 2.6 4.2 1.7 2.8 2.7 2.7 Candida lusitaniae 2.1 0.6 0.0 2.2 1.3 0.4 Candida guilliermondii 0.4 0.4 1.9 0.9 0.6 0.3
现状
病原体：白色念珠菌为第一位，但有下降趋势；非白念珠菌增加（其中热带第一位，克柔、近平滑增加）
途径：内源性为主（正常菌群）
【专家共识】临床微生物实验室真菌检测能力建设基本要求
临床微生物实验室真菌检测能力建设基本要求【专家共识】近年来侵袭性真菌感染呈持续增多趋势，准确、早期诊断是治疗疾病的关键。
然而，目前我国临床实验室真菌检测能力离临床诊治需求尚有较大差距，亟待改进。
国家卫生计生委办公厅于2016年底发布了《关于提高二级以上综合医院细菌真菌感染诊疗能力的通知》（国卫办医函[2016]1281号），要求在2020年以前加强临床细菌真菌感染诊疗体系的建设，促进抗菌药物的合理应用，维护人民群众健康。
本共识的制定旨在建立临床微生物实验室真菌检测能力基本要求，推动真菌检测技术的普及和人员能力的提升，从而提高综合医院真菌感染诊疗能力。
一、术语和定义（一）酵母菌单细胞真菌呈圆形或卵圆形，以出芽方式繁殖，称为酵母菌（yeast）。
临床致病的酵母菌主要包括念珠菌、隐球菌、毛孢子菌等。
（二）丝状真菌多细胞真菌有菌丝和孢子，菌丝延长分枝，交织成团，称为丝状真菌（filamentous fungi）。
又称霉菌（mold）。
临床重要的丝状真菌包括曲霉菌、毛霉菌、镰刀菌等。
（三）双相型真菌有些真菌可因环境条件（如营养、温度、氧气等）改变，由一种形态转变为另一种形态，称为双相型真菌（dimorphic fungi），如球孢子菌、组织胞浆菌、芽生菌、孢子丝菌、马尔尼菲篮状菌等。
这些真菌在体内或在含动物蛋白的培养基上，37 ℃培养时呈酵母相；而在普通培养基，25 ℃培养时呈霉菌相。
二、环境和设施要求真菌实验室环境和设施的设计应确保实验的质量和生物安全。
（一）环境要求真菌实验室应与细菌、病毒等实验室区分，以防发生交叉污染。
其面积以满足工作和安全要求为宜，合理布局。
在建设实验室或开展实验活动之前，应进行生物危害评估。
（二）基本设施设置防飞虫纱窗和门禁，有充足的照明、应急灯、通风、供水、供电、紧急疏散标识及信息系统，工作区设有洗手池、应急淋浴和洗眼装置；门外有生物安全级别标识[1]。
配置生物安全柜和不同温度培养箱（至少包括25~30 ℃以及35~37 ℃）。
医学微生物学(第9版)第三篇 真菌学 第三十六章 主要病原性真菌
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第3节
地方性流行真菌 pathogens of endemic mycoses
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-
毛癣菌属 20 + +
+
传染源
人
动物
絮状表皮癣菌
无
奥杜安小孢子菌 犬小孢子菌 石膏样小孢子菌
石膏样毛癣菌 红色毛癣菌
石膏样毛癣菌
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医学微生物学（第9版）
二、角层癣菌
寄生于皮肤角层或毛干表面 引起角层型和毛发型病变 主要病原菌：
第1节
浅部感染真菌 pathogens of cutaneous mycoses
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医学微生物学（第9版）
一、皮肤癣菌
疾 病：皮肤癣（tinea），手足癣最多见 三个属：表皮癣菌属（Epidermophyton spp.）
医学微生物学（第9版）
1. 病原菌种类：
荚膜组织胞浆菌（Histoplasma capsulatum） 厌酷球孢子菌（Coccidioides immites） 皮炎芽生菌（Blastomyces dermatitides） 巴西副球孢子菌（Paracoccidiodes brasiliensis） 马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei）
（1）大分生孢子：侧生或顶生，棍棒状，壁薄 （2）小分生孢子：无
真菌影像学表现
真菌影像学表现真菌感染是一种常见的疾病，它可以影响人体的各个器官系统。
在临床中，通过使用影像学技术可以帮助医生明确诊断和评估真菌感染的严重程度。
本文将介绍真菌感染在不同器官系统中的影像学表现。
1. 真菌肺炎真菌肺炎是最常见的真菌感染形式之一。
在胸部X线或CT扫描中，真菌肺炎通常呈现为以下几种表现：•磨玻璃样阴影：这是一种密度略高于正常肺组织的模糊阴影，代表了肺泡壁增厚和渗出物积聚。
•结节影：真菌性结节通常较小，直径多在1-3厘米范围内，有时会融合成片。
•支气管扩张：由于支气管黏膜受到真菌感染引起的炎症反应，支气管可能扩张。
此外，在高分辨率CT（HRCT）图像上还可以观察到以下特征：•气囊征：代表肺泡破裂，形成气囊样扩张。
•空洞形成：真菌感染引起的坏死组织可导致空洞形成。
•支气管壁增厚：支气管黏膜受到真菌感染引起的炎症反应，导致支气管壁增厚。
2. 真菌心内膜炎真菌心内膜炎是一种罕见但严重的感染，通常发生在有心脏手术、人工瓣膜或其他心血管设备植入的患者身上。
在超声心动图中，真菌心内膜炎可以表现为以下特征：•瓣膜结构异常：真菌感染可导致瓣膜结构异常，包括增厚、穿孔和溃疡。
•瓣周积液：由于感染引起的炎症反应，周围组织可能出现积液。
•瓣下隧道：真菌感染可导致瓣下隧道形成。
3. 真菌脑膜炎真菌脑膜炎是一种严重的中枢神经系统感染。
在脑脊液检查和MRI扫描中，真菌脑膜炎可以表现为以下特征：•脑脊液检查：真菌感染引起的脑膜炎会导致脑脊液中白细胞计数升高和蛋白质含量增加。
•弥漫性强化：在MRI图像上，真菌感染可引起蛛网膜下隙弥漫性强化。
•脑室积聚物：真菌感染引起的炎症反应可导致脑室内积聚物堵塞。
4. 真菌骨髓炎真菌骨髓炎是一种罕见但严重的感染，在影像学中常表现为以下特征：•骨质破坏：真菌感染引起的骨质破坏可以在X线或CT扫描中观察到。
•软组织肿胀：由于感染引起的炎症反应，周围软组织可能出现肿胀。
5. 真菌眼部感染真菌眼部感染通常表现为以下特征：•角膜溃疡：真菌感染可引起角膜溃疡，常伴有角膜上皮缺损和浑浊。
临床微生物学检验
临床微生物学检验引言临床微生物学检验是一种通过检测和分析患者体内微生物的存在和活动水平来帮助诊断和治疗感染性疾病的方法。
微生物学检验可以确定感染的原因和类型，并确定适当的抗生素治疗方案。
本文将介绍临床微生物学检验的概念、常见的检验方法和其在临床实践中的应用。
临床微生物学检验的概念临床微生物学检验是通过收集患者样本（如血液、尿液、血液培养物等）并对其中的微生物进行培养、分离和鉴定来确定感染病原体的方法。
它涉及一系列实验室操作和技术，包括细菌培养、抗生素敏感性测试、鉴定和分子生物学方法等。
这些方法可以帮助确认感染病原体的存在、确定其感染类型（细菌、真菌、病毒等）以及选择适宜的治疗药物。
临床微生物学检验的常见方法细菌培养细菌培养是一种常见的微生物学检验方法，它涉及将患者样本置于培养基中以促进微生物的生长。
不同类型的培养基可以支持不同类型的微生物生长，如常见的血液琼脂培养基可用于细菌培养。
细菌培养的时间可以从几小时到几天不等，具体取决于患者样本中微生物的增殖速度和种类。
抗生素敏感性测试抗生素敏感性测试是一种用于确定感染病原体对不同抗生素的敏感性和抵抗性的方法。
常见的抗生素敏感性测试方法包括纸片扩散法和微量稀释法。
这些测试可以帮助医生选择最适合的抗生素治疗方案，以避免抗生素的滥用和抵抗性的产生。
分子生物学方法分子生物学方法在临床微生物学检验中也扮演着重要的角色。
这些方法可以通过检测微生物的核酸（如DNA或RNA）来快速鉴定微生物的存在和类型。
其中常用的方法包括PCR （聚合酶链反应）和实时荧光定量PCR。
分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，可以快速准确地检测微生物。
临床微生物学检验的应用临床微生物学检验在临床实践中具有广泛的应用。
它可以帮助确定感染的病原体，指导治疗方案的制定和调整，并监测治疗的疗效。
以下是临床微生物学检验在不同感染疾病中的应用示例：细菌感染在细菌感染的诊断和治疗中，临床微生物学检验可以帮助确定感染的菌种、菌株的数量和敏感性，从而选择适当的抗生素治疗方案。
常见皮肤真菌病临床及真菌形态学检查
常见皮肤真菌病临床及真菌形态学检查冉玉平;杨琴;庄凯文;唐教清;徐小茜;游紫梦;肖慧;冉昕;代亚玲【摘要】真菌感染所致疾病包括浅部、皮下和深部真菌病,其中浅部真菌主要为皮肤癣菌、马拉色菌,引起毛发、头皮、甲、掌跖及光滑皮肤感染;皮下和深部真菌多为条件致病菌,如念珠菌、孢子丝菌、暗色真菌、接合菌等.一种真菌可致多种临床表现,相似皮损可由多种真菌引起.该文特介绍皮肤科临床常见真菌感染皮损所对应的真菌镜检、培养等形态学特征.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2017(035)010【总页数】8页(P750-757)【关键词】真菌性皮肤病;直接镜检;培养;形态学【作者】冉玉平;杨琴;庄凯文;唐教清;徐小茜;游紫梦;肖慧;冉昕;代亚玲【作者单位】四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041;四川大学华西医院皮肤性病科,成都610041【正文语种】中文【中图分类】R446.5真菌感染所致皮肤病不仅病原菌种类多，发病率高，且流行范围广，包括毛发、头皮、甲、掌跖、全身皮肤、黏膜、皮下组织感染。
本文通过描述皮肤真菌感染常见病的直接镜检、培养形态特征，以助于临床和实验室结合做出正确诊断。
临床标本(皮屑、毛发、甲、黏膜、组织、耵聍、痰、脓等)的取材方法因部位各异：颜面、褶皱部、龟头及婴幼儿皮肤等皮肤薄嫩处用透明胶带粘贴法；头皮、掌跖、指(趾)甲及痂壳等肥厚处用无菌刀片刮取法；毛囊角栓用止血钳钳夹法；口腔、阴道的假膜和分泌物用棉拭子擦拭法。
常用载液有1.78～3.57 mol/L(10%～20%) KOH、棉蓝染液、美蓝染液、派克墨水、荧光染液等。
《真菌学》真菌
l 症状：皮肤癣，特别是手足癣。 l 种类：毛癣菌、表皮癣菌、小孢子癣
菌。
致病特点：
一种皮肤癣菌可在不同部位引起病变； 相同部位的病变也可由不同的皮肤癣菌引起；
脚癣
手癣
股癣
黑点癣
白癣
脓癣
皮肤癣菌可在沙保培养基上形 成丝状菌落，其菌落形态、颜色及 大小分生孢子可作为皮肤癣菌初步 鉴定的依据。
n快速显色培养基
主要致病性真菌—深部真菌感染
l 侵袭深部组织和内脏以及全身的真菌。 l 外源性感染，致病性较强，引起慢性
肉芽肿样炎症、溃疡和坏死。
l 代表：新生隐球菌。
2.新生隐球菌
属于隐球菌属。隐 球菌属种类繁多，在自然 界分布广泛，鸽粪中大量 存在。人因吸入鸽粪污染 的空气而感染，特别是免 疫功能低下者引起肺脑的 急性/亚急性/慢性感染。
假菌丝
白色假丝酵母菌菌落
丝状菌落
是多细胞真菌的菌落形式，由许 多疏松的菌丝体构成。
绒毛状
棉絮状
粉末状
霉菌和酵母菌培养特征的区别
霉 菌 酵母菌
１－４周形成菌落 ２４－４８小时
丝状菌落
酵母型（类酵母型）
多细胞真菌菌落 单细胞真菌菌落
棉絮状/绒毛状/粉末状 与细菌菌落类似
2、内服药物适用于角化过度型足癣或有 较广泛癣病者；
治疗注意事项： ① 疗程要足。
② 防止癣病再感染。
三、皮下组织真菌感染
l 为腐生真菌，存在于土壤和植物中； l 经创伤部位侵入人体皮下组织； l 一般感染只限于局部，也可播散到其
他器官引起深部感染； l 主要有：着色真菌和孢子丝真菌
1 着色真菌
真菌学
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（二）结构 典型的真核细胞结构，还含有特殊结构。 细胞壁外成分 部分真菌细胞壁外有一层粘液。 细胞壁 主要成分是多糖。 隔膜 多个细胞核 核糖体沉降系数80s，由60s和40s两个亚基组成
第三篇 真菌学
免疫与病原生物学系 寻萌
第三十三章 概述
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2
概述
真菌（fungus）：一类具有典型细胞核和细胞壁的 真核细胞型微生物。
细胞核 核膜、核仁、染色体 细胞质 线粒体、内质网、高尔基体 细胞壁 几丁质或纤维素 无根、茎、叶，不含叶绿素 多数以腐生，少数为寄生或共生方式生活
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2. 致病性 通常寄生在正常人皮肤、口腔、上呼吸道、肠道
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2. 致病性 直接或间接接触（毛巾、衣服、浴盆、理 发工具等）传播。皮肤癣菌在局部皮肤的增殖及其 代谢产物刺激机体产生病理反应，引起感染部位的 病变。
3. 微生物学检查法 取甲屑、鳞屑或病发等标本，置 于玻片上，滴加10% KOH微加热消化后，镜检 如见到菌丝和孢子，即初步诊断。如进行菌种鉴定， 可培养后，根据菌落特征、菌丝和孢子形态等鉴定。
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4. 防治原则
注意清洁卫生，避免与患者接触。保持鞋袜干燥， 防止真菌孳生。
头癣可用灰黄霉素、伊曲康唑等。 体癣和股癣宜用伊曲康唑。 甲癣用灰黄霉素和伊曲康唑。 （二）角层癣菌
主要侵犯皮肤角质或毛干表面，不引起组织炎症反 应的一类真菌。糠秕孢马拉色菌。可引起花斑癣 （俗称汗斑），一般只影响外观而不影响健康。
糖尿病患者真菌性角膜炎27例临床与真菌学分析
【 图 分 类 号 】Ｒ ２ ２ 中 ７ ． １ ７ ３
【 献 标 识 码 】Ａ 文
【 章 编 号 ｌ１ ７ － ７ ２２ １ ） ２ａ一Ｏ ５ －０ 文 ４ ０ ４ （ ０ ｏ （） ０ １ ６ ２ ５
【 ｓｒ ｃ Ｔ ｎ ｅ ｔ ａ ｅ ｈ ｓａｕ ｆ ｆ ｎ ｕ ｎ ｅ ｔ ｎ ｉ ｈ ｅ ａ ｔ ｅ ｔ ｏ ｉ ｂ ｔｓ ｉ ｒ ｅ ｏ ａ ａ ｙ ｅ ｔ ｅ ｉｋ ｆ ｃｏ ｓ ａ ｄ Ａｂ ｔａ ｔ ｏ ｉ ｖ ｓ ｉ ｔ ｔ ｅ ｔｔ ｓ ｏ ｕ ｇ ｓ ｉ ｆｃ ｉ ｎ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒｍ ｎ ｆ ｄ ａ ｅ ｅ ｎ ｏ ｄ ｒ ｔ ｎ ｌｚ ｈ ｒｓ ａ ｔ ｒ 。 ｎ Ｊ ｇ ｏ
真 菌 二 重 感 染 的 主 要 原 因 之一 。 尿 病 合 并 真 菌感 染的 预 防 应 注 糖
早 期 临 床症 状 均 不 明显 ， 现 眼部 不 适 时 主要 表 现 为 眼 痛 、 出 分 泌 物 多 、 物 模 糊 和 畏 光流 泪 等 。 科 检 查 ： 膜 溃 疡 ， 现 为 角 视 眼 角 表 膜 白 色基 质浸 润 病 灶 ， 隆起 于表 面 ， 密 且 欠 光泽 。２ 呈牙 膏 略 致 １例 状 外 观 ， 中８ 溃 疡 周缘 可 见 不 全 浅环 沟 以及 散 在 的卫 星 病 灶 ； 其 Ｎ １例患者 角膜病灶呈灰 白或黄白色 ， ３ 干燥 而 粗 糙 ， 力 仅 轻 微 下 视 降 ；例 患 者 可 见 轻 度 前 房 积 脓 ， 力 为 手 动 ／ 前 。 ２ 视 眼 １ ３ 真 菌 学 检 查 ． ２ 例 患者 角 膜 溃 疡 灶 刮 片 检 查 并 进 行 真 菌 培 养 ， 菌 学涂 片 ７ 真 阳性 患 者２ 例 ， 例 真 菌 培 养及 涂 片 均 为 阴 性 ， 生 素 眼 水 无 效 ， ４ ３ 抗 并 进 行 性 加 重 ， 真 菌 眼 水 应 用后 ， 眼 明 显 好转 。 养 １ 例为 镰 抗 患 培 ８
真菌体外敏感性及临床意义解读
Li zhang,He wang,yingchun Xu. PLOS ONE ,2014, 9(12),1-12
比较方法
• 采用酵母菌稀释法新折点进行分析 • Essential agreement（EA）：MIC值相差两个稀释度以内 • Categorical agreement（CA）：分类一致，如两个药敏结果均为S、SDD(I)或者 R
• 棘白菌素类：卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净
抗真菌药作用机制
细胞膜
• 多烯类：插入含麦角固醇的细胞膜，形 成通道，造成K+外排 • 唑类：阻断麦角固醇合成
DNA/RNA合成
• 5-氟胞嘧啶
细胞壁
• 棘白菌素类：阻断葡聚糖合成
PUMCH W.Yao
Atlas of fungal Infections, Richard Diamond Ed. 1999 Introduction to Medical Mycology. Merck and Co. 2001
接种量 孵育条件
1×103~3×103 CFU/ml 35℃ 培养至产孢良好
30
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物：分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml，重复性好
– 诱导产孢：大部分霉菌PDA 35±2⁰C 7d或至产孢良好，毛霉和曲 霉48h，镰刀菌35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养至第7天 – 1ml 0.85%盐水，可加入1滴或0.01ml吐温20，尽量去除菌丝片段 。 – 静置3~5min，取上清转移至无菌管，振荡15s（注意气溶胶） – 使用1cm比色杯，测定530nm光密度：
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CLSI M27-A3酵母菌 微量肉汤稀释法判读时间和标准
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白假丝酵母菌
• 白假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道和 阴道粘膜上，当机体发生菌群失调或抵抗力降低 时，可引起各种念珠菌病。
• 可引起阴道炎、外阴炎、龟头炎、包皮炎。 • 白假丝酵母菌可引起体质虚弱婴儿的鹅口疮。 • 引起肠炎、肺炎、膀胱炎、肾盂肾炎、脑膜炎、
脑脓肿，长期用静脉内导管引起全身假丝酵母菌 病，病死率极高。
• 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮
肤感染如股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。
絮状表皮癣菌生物学性状
• 皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检可见 分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子。
• 沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅毛 状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球 拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生 孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可 见厚膜孢子。
白假丝酵母菌引起的皮炎
白假丝酵母菌引起的粘膜白斑
（一）微生物特性 • 白假丝酵母菌呈圆形
或卵圆形，革兰阳性， 着色不均匀。出芽方 式繁殖，在组织内可 见芽生孢子，假菌丝 在玉米粉培养基中可 产生假菌丝和厚膜孢 子。
白色念珠菌革兰染色镜下形态
白色念珠菌在玉米培养基形成的厚膜孢子
（二）微生物检验
内处理5min
生理盐水洗3次 接种沙氏琼
脂斜面25℃培养观察菌落特征。
四、其他鉴定试验
毛发穿孔试验
脲酶试验
特殊营养需要试验
毛癣菌：菌落灰白、红、 橙或棕色,表面呈绒毛状、 粉粒状或蜡样。大分生孢 子细长棒状薄壁。菌丝有 螺旋状、球拍状、鹿角状 和结节状
1.表皮癣菌属
• 表皮癣菌属目前有2个种，但只有絮状表皮癣菌, 能引起人类感染。。
血平板上形成的菌落和
沙氏培养基上相似。
• 在血平板上形成光滑突 白色念珠菌在沙氏培养基上
起奶油色的菌落
的菌落特鉴 定
• 酵母样菌落，镜检可见假菌丝及芽生孢子。 • 此外还可以用芽管形成试验、厚膜孢子形成试验、
糖同化和发酵试验进行鉴定。 • 芽管形成试验(掌握)：白假丝酵母菌接种于0.2-
临 床 真 菌 学）
第二十二章 真菌学概述
• 一 、分类与命名 • 二、生物学特性 • 三、真菌的检验技术
一 分类与命名
• 最新的分类真菌界分为4个门:接合菌门、担 子菌门、子囊菌门和壶菌门，并且把卡氏 肺囊虫称为卡氏肺孢菌。
二、生物学特性 单细胞真菌形态
主要为酵母菌 和酵母样菌， 菌体呈圆形或 卵圆形，
1.标本采集
• 浅部真菌：75%乙醇棉球擦拭局部后取皮屑、 毛发、指（趾）甲屑等
• 深部真菌：根据病情取痰、血液、脑脊液等
2.直接镜检和意义
• 直接镜检对真菌的诊断较细菌更为重要。 • 许多标本不需染色即可直接镜检。 • 如癣病标本多用KOH湿片检查法，即取病变或病损
部位、皮屑、甲屑置于载玻片，加一滴10%KOH液 然后加盖玻片微微加热，使标本组织溶解透明，在 显微镜下可观察到真菌的孢子和菌丝。
表皮癣菌：菌落初为 白色鹅毛状,以后变为 黄绿色粉末状。粗棒 状薄壁大分生孢子。 菌丝球拍状
2.毛癣菌属
• 常见的有红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛 癣菌、断发毛癣菌和许兰毛癣菌
3.小 孢 子 菌 属
• 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌 和犬小孢子菌等。
• 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感染指甲。
方法：
10%KOH
皮肤癣菌：湿片，不染色； 假丝酵母菌：革兰染色； 隐球菌：墨汁染色
• 有些真菌标本需要做染色观察，常用的染色 方法有乳酸酚棉兰染色、瑞氏染色、革兰染 色、美蓝染色、荧光染色还有墨汁负染色。 如革兰染色后，真菌孢子呈革兰阳性。
• 检测病人脑脊液标本中的新生隐球菌，需要 做墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐 球菌和荚膜不着色，直接镜检简便、快速。
一条菌丝可产生多个孢子 为繁殖方式之一 形状多种多样
一个细菌体只形成一个芽胞 不是繁殖方式 圆形或椭圆形
孢子的分类
有性孢子：同一/不同菌体上两细胞 融合减 数分裂而成
无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不发生细 胞融合。
分生孢子 无性孢子
叶状孢子 孢子囊孢子
大分生孢子
小分生孢子 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子
•培养温度：浅部22～28C℃，生长慢：1～4W；
深部37℃，生长快：3～4d
（2）菌 落 类 型
酵母型菌落（单细胞真菌菌落形式）
• 酵母型菌落，为单细胞真菌的菌落形态，菌落光滑湿润，柔 软而致密。与一般细菌菌落相似，如新生隐球菌。
• 酵母样菌落（类酵母菌落），部分单细胞真菌在出芽繁殖后， 芽管延长不与母细胞脱落，形成假菌丝。假菌丝由菌落向下 生长，伸入培养基中，这样的菌落称酵母样菌落，如白假丝 酵母菌。
真菌非培养检测技术
• 动物试验:分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病 性、研究药物对真菌的作用等。
• 核酸检测:操作简便、省时省工、敏感性和特异性 高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处于 实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴定 方法 。
• 真菌毒素的检测:生物学方法、薄层层析法、高效 液相色谱法和间接竞争ELISA法等。
分支交织成团
菌丝体
• 真菌菌丝按物理性状分：有隔菌丝和无隔 菌丝
有隔菌丝
无隔菌丝
（2）孢子(spore)
• 孢子（spore）是真菌的繁殖结构。孢子分有性与无性两类。 孢子与细菌芽胞不同。 真菌孢子与细菌芽胞的区别
抵抗力
真菌孢子 不强， 60～70℃短时间即死
细菌芽胞 强， 煮沸短时间不死
数目 作用 形状
其形成的菌落 主要为酵母型 和类酵母型， 临床常见的有 念珠菌属和新 生隐球菌
孢子
假菌丝
类酵母菌—白假丝酵母菌
由菌丝和孢子组成，菌丝伸长分支，交织 成团，形成菌丝体，并长有各种孢子
多细胞真菌形态
• 二相型真菌
机体内寄生37℃
单细胞型：
酵母菌
含动物蛋白培养基
多细胞型： 普通培养基25℃ 丝状菌
沙保氏培养基25℃
第二十三章 常见感染性真菌感染
第一节 皮肤黏膜感染真菌
• 浅部真菌即引起皮肤和软组织感染的真菌，主要指 侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生于 表皮、毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病。
• 浅部感染真菌包括皮肤癣真菌、表面感染真菌和皮 下组织感染真菌三类。临床上最多见的浅部真菌为 皮肤癣真菌，包括毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子 菌属。
0.5ml的人血清中，37℃1.5-4h后形成芽管，其他 假丝酵母菌不形成芽管。热带假丝酵母菌在6h后也 可形成芽管。
芽管形成试验
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厚膜孢子形成试验：假丝酵母菌接种到玉米粉琼 脂中，27℃培养1-2天，镜检厚膜孢子形成试验。
糖同化发酵试验：（P223） 酵母菌能发酵某种 糖，一定能同化该糖。
• 酵母菌显色培养法 利用培养基上特殊的显色物质鉴定念珠菌
酵母型菌落
白假丝酵母菌菌落(类酵母型)
棉絮状菌落、环癣、小培养
曲霉菌
青霉菌
致病性
➢ 致病性真菌感染：多见于外源性真菌感染。浅部真菌病如皮 癣。
➢ 条件致病性真菌感染：多见于内源性真菌感染。深部真菌病 如肺假丝酵母菌病。多见于机体抵抗力下降患者。
➢ 真菌超敏反应性疾病：食入或吸入某此真菌的孢子或菌丝体 时引发的各种超敏反应。如荨麻疹、变应性皮炎、哮喘等。
致病性
➢ 真菌性中毒症：摄入真菌或其产生的毒素后 引起急、慢性中毒。可引起肝肾功能损伤， 或造血系统抑制，或神经系统功能紊乱。
➢ 真菌毒素与肿瘤的关系：黄曲霉 双呋喃氧杂萘邻酮的衍化物，毒性强，与
致癌有密切关系
真菌检验技术
• 各种真菌的形态和结构有一定的特殊性, 一般可用 直接镜检 分离培养 两种方法进行鉴定
大多真菌行有性/无性生殖，病原性真 菌多以无性生殖为主。
2.真菌的繁殖与培养
(1)培养特性
•真菌营养需求不高，常用沙氏培养基 ❖成分：1%蛋白胨 4%葡萄糖 2%琼脂 pH5.5（4-6） ❖抑菌剂：放线菌酮和氯霉素 ❖前者抑制污染真菌，后都抑制普通细菌 ❖但放线菌酮可以抑制部分致病性真菌如白假丝酵母菌、组织 孢浆菌、新生隐球菌等的生长，故初次分离上述真菌，需使用 不加放线菌酮的培养基
• 第二节 侵袭性感染的真菌
一、酵母型真菌：念珠菌属、隐球菌属 –指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要 有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆 菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见， 组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、 毛霉和卡氏肺胞菌等为条件致病菌。
一、白假丝酵母菌
• 假丝酵母菌属（Candida)，俗称念珠菌， 生物学分类为半知菌亚门，半知菌纲，隐 球菌目、假丝酵母属。白假丝酵母菌为最 常见的致病菌。主要菌种：白假丝酵母菌， 近平滑假丝酵母菌，热带假丝酵母菌，克 柔假丝酵母菌等。
1.标本直接检查
（1）直接显微镜检查：取脓汁，痰和局部 炎性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检， 显微镜下见到革兰阳性、圆形或卵圆形菌 体或孢子及假菌丝，可确认假丝酵母菌感 染。
（2）抗原检测
（3）核酸检测
2.分离培养与鉴定
（1）分离培养
• 将标本接种在沙氏培养 基上，25℃或37℃培养 1-4天后，培养基表面 可出现奶油色类酵母型 菌落。
直接镜检意义
阳性结果意义 1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘
膜假丝酵母菌病等。 2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真
菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的 厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮 肤癣菌、曲霉等。 3.判断某些真菌种的致病性等。
直接镜检局限性 1.阴性结果不能排除真菌感染。 2.有假阳性结果。
足癣
股癣