细胞生物学实验手册：细胞显微摄影
【生物科技公司】第二章细胞生物学实验技术
（生物科技行业）第二章细胞生物学实验技术第二章细胞生物学研究方法第一节显微技术显微镜是观察细胞的主要工具。
根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。
前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
—、光学显微镜（一）、普通光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成，即：①照明系统，包括光源和聚光器；②光学放大系统，由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定材料和观察方便（图2-1）。
图2-1尼康E-600显微镜显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力（resolution）有关，分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm处）能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率，用公式表示为：R=0.61λ/N．A．N．A．＝ｎsinα/2式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numericaperture）。
镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。
表2-1及中介质的折射率制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。
对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。
普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。
（二）、荧光显微镜图2-2尼康E800荧光DIC显微镜细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜（图2-2，3，4）就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
图2-3落射式照明原理荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上（图2-3）；2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。
实验四 细胞显微操作技术课件
一、目的要求
• 练习针刺细胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎细胞或体外培养细胞）； • 学习微吸管制备； • 了解显微移植技术（细胞核、外源基因）
二、原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显微操作器）将供体物 （基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、 胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动 物的技术。
（2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。
注射
作业
• 简述细胞显微注射过程以及注意事项 • 显微拍照注射前后的胚胎 • 请于9月14日下午5点前提交报告
ห้องสมุดไป่ตู้ 三、实验材料
斑马鱼 Danio sp.胚胎
2-cell
4-cell
主要仪器和用具 倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪
主要试剂 酚红/曙红
8-cell
四、显微注射操作过程
• 注射针制备 • 注射针内装液
使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头， 再将其固定到微操作仪的托针管上；
外源基因导入（基因沉默、过表达、转基因动物）
利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入 到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞 的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析；
显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接 用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基 因的长度不受限制, 可达100 kb；实验周期相对比较短。它 的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂； 导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位 点附近宿主DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严 重的生理缺陷。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
牛蛙细胞观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习显微镜的使用方法，掌握显微镜的规范操作步骤。
2. 通过观察牛蛙细胞，了解细胞的结构和功能。
3. 比较不同细胞类型的异同点，探讨其功能。
二、实验原理生物体由细胞构成，细胞是生物体的基本结构和功能单位。
牛蛙细胞作为实验材料，具有易于观察的特点。
通过观察牛蛙细胞，可以了解细胞的基本结构和功能，以及不同细胞类型的差异。
三、实验器材1. 显微镜：光学显微镜、高倍显微镜2. 牛蛙细胞样品：牛蛙肝细胞、肌肉细胞、皮肤细胞等3. 实验用品：载玻片、盖玻片、吸水纸、生理盐水、显微镜切片、显微镜目镜、显微镜物镜等四、实验步骤1. 准备工作（1）将牛蛙细胞样品分别制成切片。
（2）将切片放置在载玻片上，滴加适量生理盐水。
（3）用盖玻片覆盖切片，轻压使细胞平铺在玻片上。
2. 显微镜操作（1）取镜：右手握镜臂，左手拖镜座，将显微镜平稳地放在实验台上。
（2）对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，调节光圈，使视野明亮。
（3）观察：用低倍物镜观察细胞整体结构，然后转换高倍物镜，观察细胞细节。
3. 观察与分析（1）观察牛蛙肝细胞：注意细胞核、细胞质、细胞膜等结构，以及细胞质的流动情况。
（2）观察牛蛙肌肉细胞：注意肌纤维的排列、肌原纤维的结构，以及细胞膜的特点。
（3）观察牛蛙皮肤细胞：注意细胞间隙、细胞壁、细胞膜等结构，以及细胞内的色素颗粒。
4. 实验记录（1）记录不同细胞类型的观察结果，包括细胞结构、细胞功能等。
（2）分析不同细胞类型的异同点，探讨其功能。
五、实验结果与分析1. 牛蛙肝细胞（1）细胞核较大，核仁明显，细胞质丰富，含有许多细胞器。
（2）细胞膜完整，细胞质流动，细胞功能旺盛。
2. 牛蛙肌肉细胞（1）肌纤维排列整齐，肌原纤维结构清晰，细胞膜完整。
（2）细胞内含有大量肌红蛋白，具有收缩功能。
3. 牛蛙皮肤细胞（1）细胞间隙较大，细胞壁明显，细胞膜完整。
（2）细胞内含有色素颗粒，具有保护作用。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了显微镜的使用方法，了解了细胞的结构和功能。
细胞生物学试验课件
小鼠的脱臼处死法
3．给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、
尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。
[作业] 一、比较四种特殊的光学显微镜。 二、为什么说倒置相按显微镜是观察培养活细胞的最有效
显微镜? 三、荧光显微镜的两种滤光片各起什么作用? 四、描述在特殊光镜观察到的盐藻形态。
实验三、显微摄影技术
『目的要求』： 掌握显微摄影原理、装置及其操作技术，能独立完
成全过程
『实验用品』: 复式光学显微镜、摄影装置、各色滤光镜、胶片、
小白鼠
小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉， 小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶 部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2．处死方法：
处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。 常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。 断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放 入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法 是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左手捉住其尾 巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。
完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置 在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以 便观察。
(一)低倍镜的使用方法 1．对光 2．放置玻片标本 3．调节焦距
细胞生物学实验指导(植物版)
细胞生物学实验实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的]通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。
通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。
[实验原理]应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。
该实验完成需时6学时。
[实验材料、试剂和仪器]一、仪器普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。
二、材料洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。
三、试剂生理盐水，10µg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存）[实验步骤]一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。
用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。
2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。
3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。
4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。
5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。
二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。
用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。
2、将装片置于载物台上，在明视野用聚焦螺旋聚焦样品，将观察到的夹竹桃花丝毛细胞移到视野中央。
显微摄影技术和核型分析
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验英文名称：Cellular biological experiment课程编号：14070101 实验课性质：非独立设课课程负责人：张尚立开放实验项目数：25大纲主撰人：杨晓梅曹慧仁大纲审核人：张尚立时永香石梅一、学时、学分课程总学时：54 实验学时：54 课程总学分：1.5 实验学分：1.5二、适用专业及年级生物科学、生物技术、生态学、生物工程和生命基地三年级三、实验教学目的与基本要求细胞生物学实验是为生命科学学院1～3年级各专业学生开设的实验课程，本实验课程的教学目标是：培养学生的基本实验技能，专业基础类实验能力及创新思维能力；训练学生依据实验方案能够自主完成实验项目。
通过实验训练，使学生能够具有观察、比较、分析、专业基础类，实验动手，数据处理和书写实验报告、生物绘图、制表等方面的能力。
四、主要仪器设备普通光学显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、复式光学显微镜及其摄影装置、电子显微镜、超薄切片机、冷冻切片机、石蜡切片机、制刀机、离心机、恒温箱、冰箱、培养箱、二氧化碳培养箱、恒温蜡箱、恒温水浴锅、解剖器械、超净工作台、组织捣碎机、分析天平、放大机、电热板、流式细胞仪、电泳仪、湿盒、细胞电泳仪、计算机、酶联免疫仪。
六、考核方式根据细胞生物学理论及实验教学的要求，结合细胞生物学实验课程教学的特点，制定以下考核办法：实验课考核的最终成绩，由平时成绩和期末考评组成，平时成绩占40%，考试成绩占60%。
记分办法：1.实验课课堂表现：包括实验态度、操作技能，实验记录及实验结果。
（10分）2.实验报告：要求实验报告书写规范，简明扼要，结果真实，对出现的问题、现象能以科学态度分析，进行结果讨论。
（20分）3.纪律卫生：不迟到、不旷课，不在实验室打闹、不大声喧哗。
实验结束，认真整理实验室台面，值日生负责清扫实验室卫生，离开实验室前检查实验室水电安全情况。
（10分）期末考试：实验动手能力，实验设计能力和实验创造性能力检验，老师设计各种命题让学生抽签选择，学生根据命题要求回答、操作，给出考查成绩（60分）。
细胞生物学实验考考试样题及实验思考题参考答案
细胞生物学实验考试样题一、填空题（分每空，共分）、洗液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水组成。
、培养基包括培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。
、鉴别活细胞的染液是台盼蓝溶液;鉴别细胞核的染液是甲基绿派洛宁染液；鉴别线粒体的染液中性红詹纳斯绿染液。
、细胞核分离的基本步骤是组织匀浆、离心、纯化、鉴定。
、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是。
二、简答题（共分）.线粒体在分离提取过程中，为什么要在4℃中进行？答：①为了保持组分的生理活性;②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？答：①确保实验是在等渗条件下进行；②防止物质的进出；③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。
.细胞的计数步骤和方法。
答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞无色，死细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。
（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。
Ⅰ：每毫升原液细胞数个大格细胞总数**稀释倍数Ⅱ：细胞存活率()(细胞总数死细胞数)细胞总数。
细胞生物学实验思考题答案实验一利用各种显微镜观察细胞形态、结构、简述显微镜的主要结构和操作要领。
普通生物显微镜由部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等使用（一）、观察前准备检查：底座右侧的光源亮度旋钮是否在“”位置，即顺时针选到最底位。
开机：①.打开后座主电源开关——绿色按钮②打开后座电源开关——红色按钮白平衡调整：不放切片，在倍物镜下将电源调整到最亮，然后按底座右方的白平衡按钮（红色）－秒之后将光源亮度调回到适中状态。
精品文档收集整理汇总（二）、观察操作放上切片，将光源调到自己习惯的亮度。
视度补偿：调节目镜双筒找到自己的瞳距，此时两眼镜下的图象重合在一起，横拉板上的数字（例如：）就是自己的瞳距，然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置。
细胞生物学实验
《细胞生物学实验》是高等教育出版社于2011年出版的一本书。
作者是王崇英和高庆祥。
该教科书首先介绍了对常见实验动物的理解，解剖仪器的使用，细胞生物学实验的绘制方法和要求以及特殊显微镜的原理和应用。
在此基础上，学生将学习动物细胞的基本形态学观察和显微测量，细胞显微摄影以及细胞核和线粒体的分类和分离。
然后开始研究细胞化学：核酸细胞化学，酶细胞化学，a啶橙荧光染色，免疫细胞化学；重新研究细胞的生理活性：细胞生理活性的实验观察和细胞分裂的形态学观察；最后是综合能力和创新能力的培养：细胞的原代培养，细胞的亚培养，培养细胞的生长特性和形态分类，培养细胞的形态观察和计数，细胞生长曲线的测定，细胞分裂指数，细胞融合，早熟染色体凝集（PCC）的诱导，观察和分析，正常细胞和肿瘤细胞的常规核型的检测和分析。
1.什么是细胞培养？它是指从活体动物中取出组织，将它们分散到单个细胞中（机械或酶消化），在体外模拟生理环境，并使其在人工培养条件下生长，分裂和繁殖，抑制细胞接触并老化。
通常有两种细胞，一种是原代细胞，另一种是继代培养细胞。
原代细胞是指这样的过程，其中动物组织被诸如胰酶或胶原酶的酶消化并分散以获得单个细胞，然后这些单个细胞在培养容器中生长。
大多数组织可以制备原代细胞，但制备方法略有不同，制备细胞的生长速度和难度也不同。
不同的原代细胞具有不同的形态。
通常，十代之内的细胞称为原代细胞。
传代细胞通常指无限期繁殖的细胞系。
从理论上讲，这些细胞可以无限期传代。
实验中经常使用这种细胞，例如Hela，293，Vero等。
2.细胞生长周期空闲期：从细胞接种到新培养容器中到附着之前的时间。
此时间的长短取决于细胞类型，范围从几分钟到几小时不等。
粘附期：细胞从自由状态变化到粘附在培养皿表面并显示出一定细胞形态的时期。
潜伏期：细胞附着在壁上后，不会立即增殖，但会储存必要的物质和能量进行增殖。
这个时间称为等待时间。
对数生长期：完成材料和能量存储后，细胞开始大量增殖的时期。
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实验二十三细胞显微摄影
【实验目的】
了解生物显微摄影的基本原理和装置，以及照相暗室工作的基本过程。
【实验用品】
一、材料和标本人类染色体标本，其它染色的生物标本片。
二、器材和仪器显微镜、35毫米照像机、显微照明装置、自动曝光控制器、ASAl00黑白135胶卷、洗印和放大等成套的暗室设备。
三、试剂 D一72式普通显影液、SB-1式停影剂、F一5酸性定影液
【实验内容】
一、原理
生物显微摄影(Microphotography)是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。
在生物医学方面，主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。
二、操作步骤
(一)拍摄前准备
1．光路合轴使光轴与光束处于同一轴线上。
2．柯勒氏照明使观察的视野获碍均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。
3．物镜与目镜合理组合依标本的不同和显微摄影要求，物镜与目镜的组合有一定规范，如：拍摄人类染色体影像，采用高分辨率的100倍油镜，配合10倍目镜，可获得良好分辨的理想放大影像。
4．调整视场光阑和孔径光阑使两者与所用物镜的数值孔径(N．A．镜口率)相等，所得的分辨力最高；视场光阑一旦调好，不要再动，而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换，做相应的调整。
一般来说，把孔径光阑的大小调成等于相应该物镜孔径像的2／3为宜，尽管丧失了少许的分辨力，却能提高影像的反差、焦点深度和清晰度。
总之，上述作法是调整显微镜至最佳状态。
(二)拍摄程序。