系统操作规程

系统操作规程

1. 基本操作

1.1 色谱柱的选择和安装：根据色谱条件选择合适的色谱柱，根据需要确定是否安装预柱或保护柱，阅读说明书后，与色谱柱一起安装入色谱系统中。

1.2 开机准备：使用前把各流动相加入相应的试剂瓶中。仪器使用间隔两天以上，实验前须用有机溶剂冲洗泵，冲洗方法为：打开系统全部电源，启动色谱工作站，打开排气阀，以5mL/min流速冲洗泵约5min，溶剂用量相当于2倍泵的容积。

1.3 设置流动相试剂容积；根据所用的色谱条件设置流动相组成、流速；设置柱温，一般不得超过40℃。

1.4 柱平衡：调整流速后，关闭排气阀，让流动相进入色谱柱，经一段时间（约相当于三倍的柱体积）后达到平衡，一般需30min 以上，或根据检测器的基线变化调整平衡时间。

1.5 质谱检测器的设置：根据预期的分子量范围选择扫描范围，根据官能团结构和性质选择扫描模式（正离子或负离子）。根据扫描所得的结果确定SIM方式。

1.6 进样：柱平衡后，经处理后的样品，设置自动进样。

1.7 检测数据处理：数据采集完毕后，进入Data Analysis 即可进行数据分析。设置色谱峰处理的积分条件，设置数据报告的输出样式。

1.8 以保留时间和分子量作为定性依据，峰面积或峰高作为定量依据。

1.9 每次进样须经一定时间间隔后，确定系统没有杂质保留，基线走稳后方可进行下个样品的进样。

1.10 检测方法的编辑：对于已建立检测方法的药品，以上条件和设置经编辑后作为该药品的检测方法保存。以后只要调用该方法即可，不用再重复设置。

1.11 检测结束后，调用Wash方法冲洗系统。

2. 色谱工作站（CHEMSTATION）的使用

2.1 安装

色谱工作站软件已经安装，可正常使用。如遇到损坏不能正常使用时，应及时报告

管理人员，由管理人员重新进行安装。

2.2 使用

工作站正常运行后会生成两个快捷方式，分别为Online（在线）和Offline（离线），在线用于操作HPLC，离线用于在不连接HPLC设备的情况下读取和处理色谱数据。

2.3 开机和结束实验

开机：打开设备电源和计算机→ 输入Pass word：3000hanover→ 待屏幕下方GAG Bootp Server出现→ 等待5分钟→ 双击instrument online→ 等待仪器所有在线图标出现→ 编辑或调用方法→ 按Start运行所编辑的方法。

结束实验：实验完毕时按图标上off按钮，使泵和检测器关闭，质谱检测器处于standby状态即可。

2.4 关机

冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液→ 在View栏中进入Diagnosis界面→ 点Maintenance进入MSD Vent→ 将rough pump顺时针关闭→ 点击Start放真空→ 真空度放空后按Close→ 回到Methord and Run control界面→ 退出工作站，关闭整个系统。

3. 注意事项

3.1 所有的溶剂均选用HPLC级试剂。

3.2 禁止使用含不挥发性缓冲盐的流动相。如含有挥发性缓冲盐，必须用5%甲醇或5%乙腈过渡冲洗，且缓冲液浓度一般不高于20mmol。水相流动相需经常更换，防止长菌变质。

3.3 样品均用0.45μm的滤膜过滤后才可进样。

3.4 质谱的真空度一般要大于10-6PSI，才可正常工作。

3.5 关闭质谱检测器必须按一定的程序进行，此项操作由管理人员执行，仪器使用者不得随意关闭质谱检测器电源。

3.6 若需运行sequence程序，按sequence table 进行编辑，运行前务必确认sequence parameter下的subdirectory，以免覆盖其他文件。