芯片上的双重标记物直接在血清基础检测癌症生物
分子生物学练习题库及参考答案
分子生物学练习题库及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、不属于移植配型中常用的分子生物学检测技术是 ( )A、RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSPB、PCR-SSCPC、PCR-SequencingD、PCR-SSO/基因芯片技术E、FISH正确答案：E2、定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得：A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案：A3、PCR 反应中延伸的时间取决于A、引物长度B、待扩增片段的长度C、模板的纯度D、Taq DNA 聚合酶的量E、模板的含量正确答案：B4、第三代测序技术的最主要特征：A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：A5、下列属于单基因遗传病的是A、糖尿病B、冠心病C、精神与神经疾病D、珠蛋白生成障碍性贫血E、原发性高血压正确答案：D6、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、焦磷酸测序B、边合成边测序C、寡连测序D、双脱氧终止法测序E、化学降解法测序正确答案：A7、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、40~50℃B、30~40℃C、15~25℃D、5~10℃E、10~15℃正确答案：C8、基因多态性连锁分析中，第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C9、用于病毒基因突变检测的技术是A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：B10、检测目标是 RNA 的技术是：A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：C11、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D12、下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案：C13、众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、乳腺癌B、肝癌C、肺癌D、结直肠癌E、前列腺癌正确答案：D14、下列不是目前用于 O157：H7 型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规 PCRB、多重 PCRC、荧光定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA 测序正确答案：E15、DNA 自动化测序技术中，不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B16、HBV DNA 中最大的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S1 基因区E、C 基因区正确答案：A17、镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、酪氨酸B、丝氨酸C、丙氨酸D、苯丙氨酸E、缬氨酸正确答案：E18、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B19、线粒体疾病的遗传特征是A、母系遗传B、发病率有明显的性别差异C、近亲婚配的子女发病率增高D、交叉遗传E、女患者的子女约 1/2 发病正确答案：A20、引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B21、下列关于Taq DNA 聚合酶的描述，错误的是A、以 dNTPs 为原料B、催化形成3’,5’-磷酸二酯键C、使 DNA 链沿5’→3’方向延伸D、不具有3’→5’外切酶活性E、扩增的DNA 片段越长，碱基错配率越低正确答案：E22、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E23、DCC 基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5’端纯合性缺失C、3’端纯合性缺失D、DCC 基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C24、不属于脆性 X 综合征分子诊断人群的是A、发育迟缓或自闭症的患者B、有 FraX 体格或性格阳性征象者C、未诊断的 MR 家族史D、已明确母亲为携带者的婴儿E、没有 FraX 家族史正确答案：E25、有关 HPV 描述错误的是A、核酸类型为 DNAB、结构蛋白 L1 和 L2 是包膜上的主要和次要蛋白C、HPV 对皮肤和黏膜上皮细胞具有高度亲嗜性D、病毒核酸合成主要发生在棘层和颗粒层E、大多数宫颈癌组织中病毒以整合状态存在正确答案：B26、关于 APC 基因说法不正确的是A、是一种抑癌基因B、定位于染色体 5q21 上C、通过编码 APC 蛋白发挥作用D、APC 蛋白在细胞周期进程、细胞生长调控及维持自身稳定中起着重要作用E、APC 蛋白在肿瘤发生发展的全过程中并不稳定正确答案：E27、关于电转移下列描述不正确的是A、快速、高效B、需要特殊设备C、缓冲液用 TAE 或 TBED、可产生高温E、常用NC 膜作为支持介质正确答案：E28、以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案：E29、结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：B30、FMR-1 基因上 CGG 重复序列异常扩增导致A、镰状细胞贫血B、脆性 X 综合征C、地中海贫血D、血友病 AE、血友病 B正确答案：B31、关于 DNA 变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案：B32、在对病原体检测中，一次性获得信息量最大的技术是 ( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E33、荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D34、基因芯片技术的本质是 ( ) ：A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案：A35、珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、珠蛋白链合成速率降低B、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变C、出现异常血红蛋白 SD、血红蛋白破坏加速E、铁代谢异常正确答案：A36、以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量 PCR 方法是A、TaqMan 水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBR Green Ⅰ荧光染料技术E、数字 PCR 技术正确答案：D37、以下哪种方法是检测耐药基因突变的金标准 ( )A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、PCR-SSCPE、DNA 测序技术正确答案：E38、DNA 芯片的样品制备过程错误的是( )A、核酸分子的纯化B、样品的扩增C、样品的标记D、常用的标记物为荧光E、标记后的样品不必再纯化正确答案：E39、关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是：A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案：E40、下列 DNA 序列中的胞嘧啶易发生甲基化修饰的是A、5’-CCCCCT-3’B、5’-GGGGCC-3’C、5’-CGCGCG-3’D、5’-GCACAC-3’E、5’-CTCTCCC-3’正确答案：C41、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、豚鼠衣原体B、肺炎衣原体C、鹦鹉热衣原体D、沙眼衣原体E、鼠衣原体正确答案：D42、检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D43、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C44、在核酸检测体系中加入内质控，其作用不是监控的是A、核酸提取效率太低所致的假阴性B、样本吸取错误所致的假阴性C、试剂失效或 Taq 酶活性降低所致的假阴性D、标本中抑制物或干扰物所致的假阴性E、仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性正确答案：B45、下列不是影响DNA 复性因素的是A、DNA 浓度B、DNA 的分子量C、温度D、碱基组成E、DNA 的来源正确答案：E46、下列叙述哪项是错误的( )A、原核生物基因组具有操纵子结构B、原核生物结构基因是断裂基因C、原核生物基因组中含有插入序列D、原核生物基因组中含有重复序列E、原核生物结构基因的转录产物为多顺反子型mRNA正确答案：B47、基因诊断与其他诊断比较，最主要的特点在于 ( )A、针对基因结构B、取材方便C、诊断费用低D、针对病变细胞E、诊断周期短正确答案：A48、延伸的温度通常为A、55℃B、72℃C、37℃D、25℃E、95℃49、目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D50、关于 HPV 各亚型遗传物质的描述正确的是A、同时存在脱氧核糖核酸和核糖核酸B、都是脱氧核糖核酸C、都是核糖核酸D、有的是脱氧核糖核酸，有的是核糖核酸E、脱氧核糖核酸与核糖核酸可交替互换正确答案：B51、下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、熔解曲线分析D、逆转录 PCR正确答案：D52、为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用，最好( )A、将核酸冻干保存B、将核酸沉淀保存C、将核酸溶解保存D、将核酸大量保存E、将核酸小量分装保存正确答案：E53、以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR 技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术54、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A55、硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A56、下列有关 cDNA 探针的描述不正确的为A、利用mRNA 通过 RT-PCR 在体外反转录可制备大量的 cDNA 探针B、cDNA 探针不包含内含子C、cDNA 探针不包含大量的高度重复序列D、由于 cDNA 探针自身所携带的 poly(dT)，有可能产生非特异性杂交的问题E、cDNA 探针合成方便，成为探针的重要来源正确答案：E57、关于 Ct 值的描述，不正确的是A、Ct值是荧光定量 PCR 获得的最初数据资料B、Ct代表了反应达到预定设置的阈值时的循环次数C、Ct 与反应模板的初始模板量成正比D、Ct越小代表其模板核酸拷贝数越多E、Ct值处于扩增曲线和荧光本底基线的交叉点正确答案：C58、不适宜于直接作为第一代测序技术测序的 DNA 模板( )A、双链 DNA 片段和 PCR 产物B、单链 DNA 片段C、克隆于质粒载体的DNA 片段D、克隆于真核载体的DNA 片段E、提取的染色质 DNA正确答案：E59、Southern 印迹转移的步骤不包括 ( )A、用限制性内切酶消化 DNAB、DNA 与载体的连接C、用凝胶电泳分离 DNA 片段D、DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上E、用一个标记的探针与膜上 DNA 杂交正确答案：B60、一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称A、复杂性B、杂交C、复性D、变性E、探针正确答案：B61、人类基因组的碱基数目为A、4.0×10 bp6B、4.0×10 bp9C、2.9×10 bp6D、4.0×10 bp8E、3.0×10 bp9正确答案：E62、第二代测序技术一般不用到A、双脱氧链终止法B、文库接头C、高通量的并行 PCRD、高通量的并行测序反应E、高性能计算机对测序数据进行拼接和分析正确答案：A63、基因芯片技术的优点不包括A、高通量C、芯片检测稳定性高D、微缩化E、观察结果直观正确答案：C64、关于逆转录 PCR 的描述，不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用DNA 聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d (T) 理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E65、关于抑癌基因的说法正确的是A、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能B、呈隐性作用方式C、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化D、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因E、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因正确答案：B66、下列密码子中，终止密码子是 ( )A、UUAB、UGAC、UGUD、UAUE、UGG正确答案：B67、大肠杆菌类核结构的组成是A、双链 DNAB、蛋白质+DNAC、支架蛋白D、RNA+支架蛋白+双链 DNA正确答案：D68、描述 PCR-RFLP 技术在耐药突变检测方面错误的是：A、分型时间短C、突变要存在限制性内切酶酶切位点D、目前被广泛应用于耐药监测E、只能检测特定的突变位点正确答案：D69、不符合分子诊断特点的是A、易于早期诊断B、检测对象为自体基因C、样品获取便利D、灵敏度高E、特异性强正确答案：B70、mtDNA 中基因数目为A、39 个B、27 个C、22 个D、37 个E、13 个正确答案：D71、具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称A、变性B、复性C、杂交D、探针E、复杂性正确答案：B72、Southern 杂交通常是指( )A、DNA 与 RNA 杂交B、DNA 与 DNA 杂交C、RNA 与 RNA 杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA 与蛋白质杂交正确答案：B73、阳性质控品失控的原因不包括A、提取的核酸残留有抑制物B、扩增仪孔间温度不一致C、Taq 酶失活D、核酸提取试剂失效E、扩增产物污染正确答案：E74、线粒体基因组与核基因组之间，下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录，之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍，影响细胞呼吸、氧化功能，进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制，但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立，但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ，相互影响，相互协调正确答案：A75、线粒体糖尿病属于A、1 型糖尿病B、2 型糖尿病C、新发现的第 5 种糖尿病D、妊娠期糖尿病E、特殊类型糖尿病正确答案：E76、构成完整的病毒颗粒的成分是A、结构蛋白B、核酸C、糖蛋白D、蛋白质E、蛋白质与核酸正确答案：E77、mtDNA 突变不会导致A、综合征型耳聋B、非综合征型耳聋C、神经性耳聋D、药物性耳聋E、氨基糖苷类抗生素耳毒性正确答案：C78、关于 NC 膜下列描述不正确的是A、能吸附单链 DNAB、能吸附单链 RNAC、依赖于高盐浓度结合靶分子D、对小分子 DNA 片段 (<200bp) 结合力强E、易脆正确答案：D79、关于多重 PCR，错误的是A、在同一反应体系中加入多对引物B、同时扩增一份 DNA 样品的靶 DNAC、扩增的产物为序列相同的DNA 片段D、扩增时应注意各对引物之间的扩增效率基本一致E、扩增产物可以通过电泳分离正确答案：C80、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、可以用于基因定位B、无需经过核酸的提取C、用荧光素标记探针D、可以用于遗传病的产前诊断E、用放射性核素标记探针正确答案：E81、关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D82、关于定量 PCR 的描述，不正确的是A、可以定量或半定量检测PCR 产物的方法B、定量 PCR 主要进行基因表达的分析和病原体的核酸检测C、水解探针技术中TaqMan 探针的位置位于两条引物之间D、分子信标在自由状态下为发夹结构，荧光信号极低E、定量 PCR 在封闭状态下进行，有效避免了产物的实验室污染正确答案：A83、目前测序读长最大的测序反应：A、焦磷酸测序B、双脱氧终止法C、边合成边测序D、化学裂解法E、连接测序正确答案：B84、常见基因芯片合成的两大类方法是( )A、原位合成和在片合成B、离片合成和直接点样C、分子印章多次压印合成和在片合成D、光引导原位合成和喷墨合成E、原位合成和直接点样正确答案：E85、阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组 DNA 或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C86、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D87、人类基因组的组织特点描述不正确的是A、大部分为非编码序列B、功能相关的基因常散在分布于不同的染色体上C、每个结构基因都有单独的调控序列D、基因组中各个基因的大小和内部组织的差异不大E、基因组含重复序列正确答案：D88、目前所知的原癌基因激活机制不包括A、点突变B、抑癌基因的丢失C、异位激活D、癌基因甲基化程度降低E、原癌基因扩增正确答案：B89、第一代 DNA 测序技术的核心技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、DNA 自动分析技术正确答案：A90、限制性长度多态性是由于以下哪项所致A、碱基变化发生在微卫星序列上B、碱基变化发生在内含子C、碱基变化发生在增强子上D、碱基变化发生在酶切位点上E、碱基变化发生在外显子正确答案：D91、可以用来判断不同生物体之间的基因组 DNA 信息的是哪一种 PCR 技术：A、反转录 PCRB、原位 PCRC、连接酶链反应D、随机扩增多态性 PCRE、原位杂交 PCR正确答案：D92、下列不能被列入可移动基因范畴的是A、插入序列B、质粒C、染色体 DNAD、转座子E、可转座噬菌体正确答案：C93、SDS 是一种阴离子表面活性剂，其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A94、对于镰刀状红细胞贫血的基因诊断不可以采用 ( ) ：A、PCR-RFLPB、DNA 测序C、核酸分子杂交D、设计等位基因特异性引物进行 PCRE、Western blot正确答案：E95、GeneXpert 全自动结核检测平台不具有的优势是 ( )A、检测高度自动化B、单标本单试剂检测，避免浪费C、检测快速准确D、同时检测TB 与利福平耐药E、检测费用低廉正确答案：E96、人类基因组中包含的基因数目约为A、大于 10 万B、1 万~2 万C、4 万~6 万D、6 万~8 万E、2 万~3 万正确答案：E97、细菌感染分子生物学检验的检验对象是A、镜检病原体形态B、测定样本中核酸含量C、测定血清中病原体蛋白含量D、测定血清中蛋白酶活性E、测定血清中抗体抗原正确答案：B98、利用DNA 芯片检测基因突变，杂交条件应：A、短时间内、低盐、高温条件下的高严紧性杂交B、长时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交C、短时间内、高盐、高温条件下的低严紧性杂交D、短时间内、低盐、低温条件下的高严紧性杂交E、短时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交正确答案：A99、作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理，其表面存在活性基团 (如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案：A100、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式，与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制，不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E。
DNA分子识别及传感技术
进展评述DNA分子识别及传感技术林 琳 江 龙3(中国科学院化学研究所分子科学中心胶体与界面实验室 北京 100080)摘 要 DNA杂交生物传感器为基因的识别及疾病的诊断提供了一种快速、简便、廉价的方法。
此文从DNA的固定及检测技术两个方面,举例介绍了各不同方式的研究应用现状及对传感器灵敏度、杂交专一性、杂交速度及使用寿命的影响,对DNA识别技术的发展前景进行了展望。
关键词 DNA 分子识别 传感技术Abstract DNA m olecular biosens or which based on the DNA hybridization offered a highly rapid and sim ple method for the detection of genetic variations and in fectious disease pathogens.This article presents a concise descrip2tion of DNA sens or technology that has been em ployed in DNA biosens or development.The advantages and disadvan2tages of each way are discussed.Future prospects of DNA biosens or technology are suggested.K ey w ords DNA,Malecular recognition,Sens or technology自1953年Wats on和Crick创立生物遗传分子脱氧核糖核酸(DNA)的双螺旋结构,建立生物遗传基因的分子机理以来,有关DNA分子的识别、测序一直为人们所关注。
1990年美国制定了世界最庞大的基因研究计划“人类基因组计划”,旨在15年内定位近10万个人体基因序列。
美天旎细胞治疗全线-130723
细胞特异性的免 疫磁性标记试剂
管道
Mo-DC culture
5~7 ds
2 ds
美天旎DC细胞治疗方案
GM-CSF 1000 IU/mL IL-4 1000 IU/mL
流式细胞检测CD11c， CD40 ，CD80，CD83，CD86
IL-6 1000 IU/mL TNFα 1100 IU/mL IL-1β 1900 IU/mL PGE2 1 µg/mL
某些不适合手术、不能耐受放化疗的中晚期癌症
非T细胞相关的白血病和淋巴瘤
乙型肝炎，丙型肝炎，慢性寄生虫感染等
对于手术、放化疗或造血干细胞移植后患者体内微小残留病灶的清除， 防止癌细胞扩散和复发
T细胞相关淋巴瘤和白血病；器官移植后，长期使用免疫抑制药物或正 在使用免疫抑制药物的患者；自身免疫病患者
美天旎产品在CIK细胞治疗中的应用
NK治疗简介 NK（Natural Killer）来源尚不清楚，体外实验
表明，胸腺细胞在体外IL-2、 IL-12、IL-15、 IFN-α、TNF-α等细胞因子存在条件下培养也可 诱导出NK细胞。
NK细胞表面标记物为：CD3- CD56+
NK 细胞杀死肿瘤细胞特点
广泛识别肿瘤细胞，自然杀伤活性无MHC限制 分泌穿孔素及肿瘤坏死因子 起效快、杀伤能力强
重悬NK细胞 ，调整 浓度2×10e6
过夜培养(1000 U/ml IL-2)。用 5% HSA溶液洗
涤两次，重悬浮 细胞
NK细胞终产品 ，调整 细胞浓度2×10e7，回输人 体, 注射Hi-Cy/Flu，连续14
天注射IL-21 （1.75*10e6 IU/m2）
流式鉴定表型（CD3,CD4,CD8,CD56，CD25）
分子生物学基本技术
分子生物学基本技术包括核酸的纯化，体外合成、分子杂交、基因克隆、基因表达研究技术等第一节DNA的体外合成一、DNA的化学合成（无要求）一亚磷酸三酯法DNA的化学合成广泛用于合成寡核苷酸探针和引物，有时也用于人工合成基因和反义寡核苷酸。
目前寡核苷酸均是用DNA合成仪合成的，大多数DNA合成仪是以固相亚磷酸三酯法为基础设计制造的合成的原理：核酸固相合成的基本原理是将所要合成的核酸链的末端核苷酸先固定在一种不溶性高分子固相载体上，然后再从此末端开始将其他核苷酸按顺序逐一接长。
每接长一个核苷酸残基则经历一轮相同的操作，由于接长的核酸链始终被固定在固相载体上，所以过量的未反应物或反应副产物可通过过滤或洗涤的方法除去。
合成至所需长度后的核酸链可从固相载体上切割下来并脱去各种保护基，再经纯化即可得到最终产物。
（末端核苷酸的3’-OH与固相载体成共价键，5’-OH被二甲氧基三苯甲基（DMT）保护，下一个核苷酸的5’-OH亦被DMT保护3’-OH上的磷酸基上氨基亚磷酸化合物活化碱基上的氨基用苯甲酸保护。
每延伸一个核苷酸需四步化学反应（1）脱DMT游离出5’-OH。
⑵缩合（偶联反应）：新生成的5’-OH与下一个核苷活化的3’单体缩合成亚磷酸三酯使链增长（3）盖帽（封端反应）：有少量（小于0.5%）未缩合的5’-OH要在甲基咪唑或二甲氨基吡啶催化下用乙酸苷乙酰化封闭，以防进一步缩合造成错误延伸。
（4）氧化：新增核苷酸链中的磷为三价亚磷，需用碘氧化成五价磷（磷酸三酯）。
上述步骤循环一次，核苷酸链向5’方向延伸一个核苷酸二、聚合酶链式反应技术聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）是一种体外特定核酸序列扩增技术。
一）PCR的基本原理双链DNA热变性成两条单链，降温使反应体系中的两个引物分别与两条DNA单链两侧的序列特异性复性，在合适的条件下，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应体系中的4种dNTP合成其互补链（延伸），在适宜的条件下,这种变性一复性一延伸的循环重复1次DNA的量可以增加1倍，30次循环后，DNA的量增加230倍。
乙肝核心抗原的检测与应用
1.2免疫反应
采用治疗性疫苗打破宿主对HBV的免疫耐受状态来 治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的 有效途径。HBV核心抗原区AA1-AA151段含有多个不 连续的抗原表位，对刺激机体产生特异性的体液免疫和 细胞免疫均具有重要作用。Kuhober和Geissier et al作了 HBcAg DNA疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。该 DNA疫苗具有良好的细胞免疫原性，确可刺激宿主产生 较强的CTL反应。这一结果为我们进一步探索该DNA疫 苗在治疗主要因机体CTL功能低下所致HBV慢性持续感 染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。
乙肝核心抗原的检测与应 用
摘要
HBcAg存在于Dane颗粒的核心，是HBV的结构蛋白 即病毒核壳蛋白，具有重要的生物学特性和临床病理意义， HBcAg由HBV基因组的C开放读码区（ORF）编码，具有 高度免疫原性，对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要 作用。血清HBcAg阳性可提供肝内HBV合成的信息，是病 毒存在的直接标志，HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应 攻击的靶细胞，肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故 能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。检测肝组织 HBcAg有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死 炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的 预后。血清和肝组织HBcAg检测具有多种实用价值，值得 推荐。
1.1一般特性
HBcAg可在受染的肝细胞核中查到，但它 主要在胞质中产生，由胞核定位序列（nuclear localization sequences，NLS）介导HBcAg进人 细胞核中。胞核定位序列位于HBcAg的羧基末 端区（C端区）第145-156位和第172-183位的氨 基酸序列，具有与细胞核特异性结合，并将与 之相连的蛋白或DNA转运到细胞核中的功能。
蛋白表达的Western Blot检测
实验13 蛋白表达的Western Blot 检测实验目的：使学生掌握Western Blot 印迹法检测蛋白质的实验技术。
实验原理：蛋白质印迹法是将蛋白质混合样品经SDS-PAGE 后，分离为不同条带，其中含有能与特异性抗体（antibody ）结合的待检蛋白质（抗原，antigen ），将PAGE 胶上的蛋白条带转移到硝酸纤维素（Nitrocellulose ，NC ）膜或聚偏二氟乙烯 [poly(vinylidene difluoride)，PVDF ）]膜上，此过程称为转印（blotting ），以便随后的免疫学检测。
转印后，将NC 膜或PVDF 膜与抗血清（含特异性抗体，即第一抗体）一起孵育，使第一抗体与待检蛋白结合，再用酶标第二抗体孵育膜，使第二抗体与第一抗体结合反应。
最后用酶的显色底物或发光底物显示靶蛋白条带（图13-1、2、4）。
图13-1 Western Blots 实验操作流程图13-2 Western Blot 的主要步骤 易生物 w w w .e b i o e .c o m蛋白质印迹法中将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到硝酸纤维素膜上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。
毛细管印迹法是将凝胶放在缓冲液浸湿的滤纸上，在凝胶上放一片硝酸纤维素膜，再在上面放一层滤纸等吸水物质并用重物压好，缓冲液就会通过毛细作用流过凝胶（图13-3、8）。
缓冲液通过凝胶时会将蛋白质带到硝酸纤维素膜上，硝酸纤维素膜可以与蛋白质通过疏水相互作用产生不可逆的结合。
这个过程持续过夜，就可以将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。
但这种方法转移的效率较低，通常只能转移凝胶中一小部分蛋白质（10％～20％）。
电泳印迹可以更快速有效的进行转移。
这种方法是用有孔的塑料和有机玻璃板将凝胶和硝酸纤维素膜夹成“三明治”形状，而后浸入两个平行电极中间的缓冲液中进行电泳，选择适当的电泳方向就可以使蛋白质离开凝胶结合在硝酸纤维素膜上（图13-4、9）。
胶体金快捷免疫诊断技巧
管会在其表面留下印痕.划痕容易对层析的金标复合物形成阻力,导 致假阳性。
干燥
■干燥方法的比较
37度干燥４h：颗粒感较强，易中间白，周边深; 低温真空干燥３h：颜色均一，只是两端稍浅，有一定的柔性。
试纸条组装
■ 在干燥间内准备好吸水滤纸、样品垫、PVC底板，在 PVC底板中央贴上包被好的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜 上缘粘贴吸水滤纸，硝酸纤维素膜下缘粘贴胶体金垫，胶 体金垫下缘粘贴样品垫，完成后用裁切机将贴好的试纸板 切成4 mm宽的试纸条。再将试纸条密封于铝箔袋中，完 成产品的组装。
径粒(nm) 147 97.5 71.5 40 24.5 15
胶体金的鉴定
1. 肉眼观察：在日光下仔细观察胶体金颜色，可以大致估计 金颗粒大小。同时良好的胶体金应该是清澈透明的，若浑 浊或有漂浮物提示有较多的凝集颗粒。
2. 分光光度计扫描吸收峰时光波长来估计金颗粒的大小。
3. 电镜可见精确测定金颗粒的大小。
2. 用微孔滤膜或超速离心除去蛋白质溶液中的细小微粒。 3.胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或略 偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于 蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。
■ 蛋白质最适用量测定:
■ 将待标记的蛋白质（鼠抗人IgG）储存液作系列稀释后， 分别取0.1ml加到 1ml胶体金溶液中，另设一管不加蛋白质 的对照管，5分钟后加入0.1ml 10％NaCl溶液，混匀后静置 2小时。
DNA重排的检测方法
小麦－簇毛麦F1 代染色体间易位
染色体涂染显示人染色体组
荧光标记探针
• 不对环境构成污染 • 灵敏度能得到保障 • 可进行多色观察分析，可同时使用多个
探针，缩短因单个探针分开使用导致的 周期过长和技术障碍。
4. 比较基因组杂交
Comparative Genomic Hybridization (CGH)
• 原理：在扩增反应中加入不等量的两段寡核 苷酸引物，引物量相差100倍，通过PCR扩增 获得单链DNA，然后利用双脱氧法直接测序。
• 应用：扩增产物的测序，可以很容易确定群 体中某一特定基因的序列变异情况，这种方 法是了解目的基因突变的较理想的方法。
(5) 原位PCR技术
• 原理：即聚合酶原位扩增技术。将PCR技术 与原位杂交技术结合起来，不改变周围组织 的原有位置，直接在组织、细胞或病原体原 位研究基因变化的技术。
光谱核型分析原理(Spectral karyotyping, SKY)
1996 年 Schroch等首次描述了SKY技术。 应用5种荧光素同时标记24条人染色体，制成 染色体涂染探针，应用Fourier光谱仪，CC成 像和荧光显微镜进行检测分析，经计算成像处 理，46条染色体形成具有不同颜色的核型影像, 可用以分析各种染色体异常。
应用：
• 主要应用在检测肿瘤细胞的遗传变化 • 物种间染色体同源性比较 优势：
• 可快捷检测中期、间期基因组 • 不需预先知道DNA发生改变的部位 • 一次实验即可检出待测样本整个基因
组拷贝数的增减
四、分子生物学技术
1. Southern-blotting • 应用于基因重排检测是1981年Korsmeyer等
• 优势：Southern分析已被应用于IgH、 Igk、 Igl及各种TCR(T-细胞受体)克隆性重排的检测， 并以其令人满意的灵敏度和可靠性被视为基因 重排检测的“金标准”。
分子生物学试题含答案
分子生物学试题含答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.关于 APC 基因说法不正确的是A、是一种抑癌基因B、定位于染色体 5q21 上C、通过编码 APC 蛋白发挥作用D、APC 蛋白在细胞周期进程、细胞生长调控及维持自身稳定中起着重要作用E、APC 蛋白在肿瘤发生发展的全过程中并不稳定正确答案：E2.基因芯片原位合成的描述错误的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针B、适用于寡核苷酸探针C、适用于制作大规模 DNA 探针芯片D、可实现高密度芯片的标准化和规模化生产E、也称为离片合成正确答案：E3.关于 NC 膜下列描述不正确的是A、能吸附单链 DNAB、能吸附单链 RNAC、依赖于高盐浓度结合靶分子D、对小分子 DNA 片段 (<200bp) 结合力强E、易脆正确答案：D4.焦磷酸测序技术不使用的酶是A、DNA 聚合酶 (DNA polymerase)B、DNA 连接酶 (DNA ligase)C、ATP 硫酸化酶 (ATP sulfurylase)D、荧光素酶 (luciferase)E、三磷酸腺苷双磷酸酶 (Apyrase)正确答案：B5.以下不是原癌基因的特点的是A、广泛存在于生物界，是细胞生长必不可少的B、在进化过程中，基因序列呈高度保守性C、通过表达产物 DNA 来实现功能D、在某些因素的作用下会形成能够致瘤的癌基因E、对正常细胞不仅无害，而且是细胞发育、组织再生、创伤愈合等所必需正确答案：C6.唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C7.关于 PCR 反应引物的描述，不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列，防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的Tm 值应该尽量相近正确答案：D8.关于mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能，轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因，可转录 22 种 tRNA，以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因，编码 2 种 rRNA，即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D9.关于 TaqMan 探针技术的描述，不正确的是A、R 基团与Q 基团相距较远，淬灭不彻底，本底较高B、易受到Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析，减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案：C10.下列不属于血友病 B 间接诊断方法的是A、PCR-RFLPB、PCR-SSCPC、双脱氧指纹图谱D、毛细管电泳E、变性高效液相色谱正确答案：D11.关于抑癌基因的说法正确的是A、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因B、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能C、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化D、呈隐性作用方式E、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因正确答案：D12.引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B13.关于非放射性探针标记，下列描述不正确的是A、目前应用的非放射性标志物都是抗原B、可长时间使用C、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶D、灵敏度不如放射性探针E、对人体危害小正确答案：A14.单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A15.人类基因组的组织特点描述不正确的是A、基因组含重复序列B、功能相关的基因常散在分布于不同的染色体上C、每个结构基因都有单独的调控序列D、基因组中各个基因的大小和内部组织的差异不大E、大部分为非编码序列正确答案：D16.珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、出现异常血红蛋白 SB、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变C、铁代谢异常D、血红蛋白破坏加速E、珠蛋白链合成速率降低正确答案：E17.纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，可使比值降低的是 ( ) ：A、蛋白质B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：A18.关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A19.表达谱芯片主要用于分析( )A、蛋白质之间作用B、单个碱基缺失C、目标序列富集D、SNPE、差异基因表达正确答案：E20.DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、电泳技术正确答案：B21.描述 PCR-RFLP 技术在耐药突变检测方面错误的是：A、分型时间短B、技术简便C、突变要存在限制性内切酶酶切位点D、目前被广泛应用于耐药监测E、只能检测特定的突变位点正确答案：D22.绝大多数β-地中海贫血系由位于第 11 号染色体上的β-珠蛋白基因中的基因突变所致，下列方法中不能用于分子生物学检验的技术是A、PCR-ASOB、PCR-RDBC、基因芯片D、多重 PCRE、MOEA-PCR正确答案：D23.DCC 基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5’端纯合性缺失C、3’端纯合性缺失D、DCC 基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C24.PCR 反应中延伸的时间取决于A、引物长度B、待扩增片段的长度C、模板的纯度D、Taq DNA 聚合酶的量E、模板的含量正确答案：B25.关于 mtDNA 非编码序列，描述正确的是A、不参与mtDNA 的复制、转录等，属于“无用”信息B、是高度重复序列C、占整个 mtDNA 的 15%，比例较大D、mtDNA 中有两段非编码区E、位于 mtDNA 的轻链正确答案：D26.下列属于抑癌基因的是 ( )A、RbB、mycC、rasD、c-erb-2E、sis正确答案：A27.关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E28.提取 DNA 的原则除外A、保证核酸一级结构完整性B、保留所有核酸分子C、核酸样本中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子D、蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度E、排除 RNA 分子的污染与干扰正确答案：B29.连接酶链反应正确的是A、不能用来检测DNA 点突变B、DNA 连接酶代替DNA 聚合酶C、不需预知靶 DNA 的序列D、引物在模板上的位置不能紧密相连E、属于靶序列扩增正确答案：B30.关于分子信标技术的描述，不正确的是A、灵敏度高B、分子信标设计简单C、特异性强D、背景信号低E、操作简便正确答案：B31.线粒体基因组与核基因组之间，下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录，之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍，影响细胞呼吸、氧化功能，进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制，但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立，但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ，相互影响，相互协调正确答案：A32.对于相同大小的核酸片段，最快的转移方法是A、虹吸转移B、真空转移C、毛细管电泳D、电转移E、向下虹吸转移正确答案：B33.在核酸杂交中，目前应用最广泛的一种探针为A、基因组 DNA 探针B、寡核苷酸探针C、cDNA 探针D、RNA 探针E、克隆探针正确答案：C34.关于 Ct 值的描述，不正确的是A、Ct值是荧光定量 PCR 获得的最初数据资料B、Ct代表了反应达到预定设置的阈值时的循环次数C、Ct 与反应模板的初始模板量成正比D、Ct越小代表其模板核酸拷贝数越多E、Ct值处于扩增曲线和荧光本底基线的交叉点正确答案：C35.关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式，与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制，不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E36.开展耳聋基因诊断有重要临床意义，但不包括A、可以预测耳聋疾病的病情和预后B、可作为有效治疗耳聋的手段之一C、可以了解患者发生耳聋的分子病因D、可作为听力筛查的一个有效辅助手段E、可以预测下一代出现耳聋的概率正确答案：B37.稀有碱基主要存在于A、核糖体 RNAB、信使 RNAC、转运 RNAD、核 DNAE、线粒体 DNA正确答案：C38.HCV 基因分型的“金标准”是( )A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光 PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案：B39.以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案：E40.下列病毒中，基因组可直接作为mRNA 的 3 种病毒是A、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、流感病毒B、脊髓灰质炎病毒、AIDS 病毒、麻疹病毒C、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、新型肠道病毒D、脊髓灰质炎病毒、乙型肝炎病毒、轮状病毒E、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、甲型肝炎病毒正确答案：C41.迪谢内肌营养不良 (DMD) 说法错误的是A、基因缺陷是 DMD 发生的主要原因B、DMD 属于 X 连锁性隐性遗传C、最常用的诊断技术为多重 PCRD、抗肌萎缩蛋白结构改变导致 DMDE、发病者都为女性正确答案：E42.在如下情况时，可考虑通过基因连锁分析进行分子生物学检验A、基因表达异常B、基因点突变C、基因插入D、基因结构变化未知E、基因缺失正确答案：D43.细菌感染分子生物学检验的检验对象是A、测定血清中病原体蛋白含量B、镜检病原体形态C、测定血清中蛋白酶活性D、测定血清中抗体抗原E、测定样本中核酸含量正确答案：E44.荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C45.关于真菌，以下描述正确的是A、真菌种类繁多，其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性，对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B46.关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、无需经过核酸的提取B、用荧光素标记探针C、可以用于遗传病的产前诊断D、用放射性核素标记探针E、可以用于基因定位正确答案：D47.基因芯片技术的本质是 ( ) ：A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案：A48.检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D49.在核酸检测体系中加入内质控，其作用不是监控的是A、仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性B、标本中抑制物或干扰物所致的假阴性C、核酸提取效率太低所致的假阴性D、试剂失效或 Taq 酶活性降低所致的假阴性E、样本吸取错误所致的假阴性正确答案：E50.次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B51.HBV 耐药性的检测在临床上主要是针对A、HBV DNA 聚合酶 S 基因的检测B、HBV DNA 聚合酶 P 基因的检测C、HBV DNA 聚合酶 C 基因的检测D、HBV DNA 聚合酶前 C 基因的检测E、HBV DNA 聚合酶 X 基因的检测正确答案：B52.关于 PCR-RFLP 错误的是A、采用特定的限制性内切酶对 PCR 产物进行处理B、对酶切后的片段长度进行分析C、判断有无点突变D、突变位点不必在限制酶识别序列中E、需先进行 PCR 扩增正确答案：D53.质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D54.线粒体疾病的遗传特征是A、发病率有明显的性别差异B、近亲婚配的子女发病率增高C、交叉遗传D、母系遗传E、女患者的子女约 1/2 发病正确答案：D55.指导合成蛋白质的结构基因大多数为：A、回文序列B、散在核原件C、单拷贝序列D、高度重复序列E、中度重复序列正确答案：C56.关于 p53 基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53 蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体 17q13 上正确答案：E57.下列有关遗传病的叙述中正确的是A、遗传病一定是先天性疾病B、遗传病是指由遗传物质改变而引起的疾病C、遗传病都是由基因突变引起的D、先天性疾病都是遗传病E、遗传病只能诊断不能治疗正确答案：B58.DNA 芯片的样品制备过程错误的是( )A、核酸分子的纯化B、样品的扩增C、样品的标记D、常用的标记物为荧光E、标记后的样品不必再纯化正确答案：E59.DNA 双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A60.探针基因芯片技术的本质就是A、酶切技术B、基因重组技术C、蛋白质分子杂交技术D、核酸分子杂交技术E、聚合酶链反应技术正确答案：D61.PCR-SSCP 描述中错误的是A、检测核酸点突变的技术B、需制备成单链 DNAC、根据空间构象由 DNA 的碱基组成决定的原理D、不需电泳E、敏感性与待分离 DNA 的长度有关正确答案：D62.延伸的温度通常为A、37℃B、55℃C、95℃D、72℃E、25℃正确答案：D63.下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C64.众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、前列腺癌B、结直肠癌C、肺癌D、乳腺癌E、肝癌正确答案：B65.表达谱芯片A、是在 DNA 水平研究基因之间的表达关系B、是在 mRNA 水平研究基因之间的表达关系C、是在蛋白质水平研究基因之间的表达关系D、不能用于疾病机制的研究E、不能指导个体化治疗正确答案：B66.不适宜于直接作为第一代测序技术测序的 DNA 模板( )A、双链 DNA 片段和 PCR 产物B、单链 DNA 片段C、克隆于质粒载体的DNA 片段D、克隆于真核载体的DNA 片段E、提取的染色质 DNA正确答案：E67.下列不属于 SNP 检测技术特点的是 ( )A、易实现分析的自动化B、富有代表性C、遗传稳定性D、密度高E、密度低正确答案：E68.FMR-1 基因上 CGG 重复序列异常扩增导致A、镰状细胞贫血B、脆性 X 综合征C、地中海贫血D、血友病 AE、血友病 B正确答案：B69.规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、试剂储存和准备区B、扩增区C、标本制备区D、隔离区E、产物分析区正确答案：D70.变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E71.基因芯片技术的临床应用不包括 ( )A、指导个体用药B、药物的筛选C、疾病的诊断D、由于蛋白质翻译后修饰的改变而引起的疾病E、基因突变的检测正确答案：D72.检测靶序列是 DNA 的技术是：A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：A73.有关 SNP 位点的描述，不正确的是A、生物芯片技术可提高 SNP 位点的检测准确性B、单个 SNP 位点信息量大，具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有 300 万个 SNP 位点D、被称为第三代 DNA 遗传标志E、SNP 位点是单个核苷酸的变异正确答案：A74.下列不属于单基因遗传病产前诊断常用方法的是A、巢式 PCRB、全基因组扩增C、多重 PCRD、Western blotE、PCR-SSCP正确答案：D75.Tm 值主要取决于核酸分子的A、A-T 含量B、G-C 含量C、A-C 含量D、T-G 含量E、C-T 含量正确答案：B76.PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C77.关于 HPV 各亚型遗传物质的描述正确的是A、有的是脱氧核糖核酸，有的是核糖核酸B、都是核糖核酸C、脱氧核糖核酸与核糖核酸可交替互换D、同时存在脱氧核糖核酸和核糖核酸E、都是脱氧核糖核酸正确答案：E78.研究得最早的核酸分子杂交种类是( )A、菌落杂交B、液相杂交C、原位杂交D、Northern 杂交E、Southern 杂交正确答案：B79.下列不是片段性突变引起原因的是A、碱基缺失B、转录异常C、碱基扩增D、碱基插入E、基因重排正确答案：B80.寡核苷酸探针的最大的优势是A、易分解B、易合成C、易标记D、杂化分子稳定E、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列正确答案：E81.Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、α-35S-dNTPB、ddNTPC、α-32P-dNTPD、NTPE、dNTP正确答案：B82.硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A83.SNP 的实质不包括A、碱基颠换B、碱基转录异常C、碱基转换D、碱基插入E、碱基缺失正确答案：B84.关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D85.下列哪种质粒带有抗性基因A、F 质粒B、Col 质粒C、接合型质粒D、ColEIE、R 质粒正确答案：E86.最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A87.有关 HBV 长链和短链叙述正确的是A、长链和短链 DNA 的5’端位置是固定的，短链3’端的位置是可变的B、长链和短链 DNA 的3’端位置是固定的，短链5’端的位置是可变的C、短链 DNA 的3’端位置是固定的，长链和短链5’端的位置是可变的D、短链 DNA 的5’端位置是固定的，长链和短链3’端的位置是可变的E、长链 DNA 的5’端位置是固定的，长链和短链3’端的位置是可变的正确答案：A88.重复序列通常只有 1~6bp，重复 10~60 次并呈高度多态性的 DNA 序列称为A、微卫星 DNAB、小卫星 DNAC、cDNAD、高度重复顺序 DNAE、单拷贝顺序 DNA正确答案：B89.实时荧光 PCR 中，GC 含量在 20%~80% (45%~55%最佳) ，单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、55~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案：B90.镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、酪氨酸B、丙氨酸C、丝氨酸D、缬氨酸E、苯丙氨酸正确答案：D91.遗传病的最基本特征是A、患儿发病的家族性B、遗传物质发生了改变C、先天性D、酶的缺陷E、染色体畸变正确答案：B92.一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、10~15℃B、15~25℃C、40~50℃D、5~10℃E、30~40℃正确答案：B93.基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B94.以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基正确答案：D95.硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、共价键结合B、脆性大C、非共价键结合D、本底低E、高结合力正确答案：D96.以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量 PCR 方法是A、TaqMan 水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBR Green Ⅰ荧光染料技术E、数字 PCR 技术正确答案：D97.关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D98.目前最常用的TB 分子检测方法是A、PCRB、real-time PCRC、SDAD、LPAE、DNA chip正确答案：B99.目前所知的原癌基因激活机制不包括A、癌基因甲基化程度降低B、异位激活C、原癌基因扩增D、抑癌基因的丢失E、点突变正确答案：D100.K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、基因扩增C、插入突变D、缺失突变E、点突变正确答案：E。
饲料及畜产品中雌激素检测方法的研究进展_达剑森
人 雌 激 素 受 体 （Human estrogen receptor， HER） 酵 母 表 达 载 体 和 雌 激 素 效 应 元 件 （ Estrogen response elements， ERE） 调控的酵母报告基因 （β-半乳糖苷 酶的 Lac-Z 基因） 载体导入酵母细胞， 建 立 重 组 酵 母筛选系统， 利用转基因酵母菌株， 采用摇瓶法、 96 孔板法和单板法筛选雌激素。 由于酵母不含雌激 素受体 （Estrogen receptor， ER）， 克服了内源性 ER 的影响。 重组基因酵母法可将生物体内复杂的新陈 代谢和信号通路简化为受体配体反应过程， 使体外 检测更易操作。 达剑森等 [20] 建立的重组酵母测评体 系 ， 对 E2 的 检 测 灵 敏 度 达 到 了 10-12mol/L。 Coldham 等 [21] 应用重组基因酵母法 对 E2 检 测 灵 敏 度 进 行 了 评估， 证实该方法比人体乳腺癌细胞系 MCF-7 增殖 实验和子宫增重实验高 2~5 个数量级。 该方法不仅 灵敏度和特异性高， 而且方便快捷， 无同位素污染， 应用广泛 [22， 23]。 利用该方法可建立起筛选雌激素污 染物的高灵敏度的监测新技术以及环境安全的预警 体系。 3.1.3 DNA 阵列芯片筛选实验： DNA 阵列芯片也称 基因芯片， 通过在玻璃片上固定寡核苷酸阵列来研 究生物样品基因表达的芯片技术， 也称微阵列 （Microarray） 芯片。 该法不依赖其他生物体的作用， 而且具有高度平行性、 多样性、 微型化和自动化等 优点。 其不足在于非特异性背景结合量大， 干扰实 验结果。 3.2 体内实验 3.2.1 子 宫 生 长 试 验 ： 子 宫 生 长 试 验 （ Uterus growthtest） 是 最 早 建 立 的 检 测 雌 激 素 活 性 的 经 典 方 法。 其优点主要是作为整体实验， 可以检测某些需 要在体内代谢活化后才有活性的物质以及中间代谢 产物。 但不够灵敏， 影响因素较多， 动物实验结果 外推到人时有较大难度。 3.2.2 子宫血管渗透性 实 验 ： 小 鼠 经 过 双 侧 卵 巢 切 除 术 ， 恢 复 16～20d 后 ， 皮 下 注 射 不 同 浓 度 的 受 试 物。 注射后 3.5h 给动物静脉 注 射 125 I 标 记 的 人 血 清 白蛋白， 30min 后， 处死动物， 取血浆和子宫， 分别 测定二者的放射性， 以子宫组织放射活性与血浆的 放射活性之比来表示子宫血管对受试物的渗透性， 该渗透性大小与物质雌激素活性呈正比。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
On-chipdualdetectionofcancerbiomarkersdirectlyinserumbasedonself-assembledmagneticbeadpatternsandquantumdots
XuYua,b,He-ShunXiac,Zuo-DongSuna,YiLina,b,KunWangc,JingYuc,HaoTanga,c,Dai-WenPanga,b,Zhi-LingZhanga,b,n
aKeyLaboratoryofAnalyticalChemistryforBiologyandMedicine(MinistryofEducation),CollegeofChemistryandMolecularSciences,andStateKeyLaboratoryofVirology,
WuhanUniversity,Wuhan430072,PRChinabWuhanInstituteofBiotechnology,Wuhan430075,PRChina
cHubeiCancerHospital,Wuhan430079,PRChina
articleinfoArticlehistory:Received15May2012Receivedinrevisedform25July2012Accepted1August2012Availableonline16August2012Keywords:DualdetectionMagneticbeadpatternsCancerbiomarkersQuantumdotsMicrofluidicchipabstractAsandwichimmunoassaymethodforrapiddetectionofdualcancerbiomarkersinserumonamagneticfieldcontrollablemicrofluidicchip(MFCM-Chip)wasestablished.Anickelpatternwasusedtogeneratehighmagneticfieldgradientstoincreasethemagneticforceonthesuperparamagneticbeads(SPMBs),whichenabledtherapidgenerationofcontrollableSPMBpatternsinmicrofluidicchannels.TheSPMBpatternscouldkeepstableduringthefastcontinuouswashingprocessevenataflowrateof50mL/min.Thisapproachdemonstratedexcellentspecificitybecausethefastcontinuouswashingcouldremovenon-specificallyadsorptivecontaminantsmoreefficientlythanfixedvolumebatchwashing.Thisapproachwasusedtosimultaneouslydetectcarcinomaembryonicantigen(CEA)anda-fetoprotein(AFP)directlyinserums.Thewholeon-chipdetectionwasfinishedwithin40min,whichwasmuchfasterthanconventionalenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)method.HighluminescentstreptavidinmodifiedQDs(SA-QDs)wereusedasfluorescenceindicators,andthedetectionlimitswere3.5ng/mLand3.9ng/mLforCEAandAFP,respectively.Thelinearrangeswerefrom10.0ng/mLto800.0ng/mL.Withthehighsensitivity,highselectivityandshortassaytime,thisapproachcouldbeusedforrapid,highthroughputdetectionofcancerbiomarkersinclinicaltrials.&2012ElsevierB.V.Allrightsreserved.
1.IntroductionItiscrucialtodetecttheoccurrenceofcancerintheearlystages,becauseeffectivetreatmentforthiscanremarkablyimprovethesurvivalrateofpatients.Inaroutinephysicalexamination,theearlydiagnosisofcancerisoftenachievedbyscreeningthebiomarkersinpatients’serums.Sofar,manykindsofcancerbiomarkershavebeenreported(Zhouetal.,2006;Baskicetal.,2007;Dungchaietal.,2007).Forexample,thecancerantigen125(CA125)ismeasuredasabiomarkeroftheovariancancer(Bastetal.,2005;Smithetal.,2011),andtheprostatespecificantigen(PSA)isrelatedtotheprostatecancer(Smithetal.,2011).Meanwhile,simultaneousdetectionofmultiplecancerbiomarkersinserumsamplesismoreaccurateinthecancerdiagnosisthanindividualbiomarkermeasurements(Leeetal.,2008),becausesomespecificcancerswillcausemultiplecancerbiomarkers
overexpressed.Thecancerantigen15-3,CA125andhumanepidermalgrowthfactorreceptor2(HER2)areoftenutilizedtodiagnosebreastcancer(Duffy,2006;Baskicetal.,2007).However,inclinicalpractice,cancerbiomarkersareusuallydeterminedonebyoneinpatient’sserum,whichislesstimeefficient.Therefore,itisnecessarytodevelopasimple,rapidandlow-costmethodforthedetectionofmultiplebiomarkersinpatients’serumssimulta-neously,becausethiscouldhelpthedoctorsaccuratelydiagnosecancer,monitorandassessthetreatmenteffects.Microfluidicchipshavetheadvantagesofsmalldimension,low-sample-cost,fastmasstransfer,aswellasintegrationandmultiplexingcapabilities(KhandurinaandGuttman,2002;SiaandKricka,2008),whichcouldmeettheabovedemands.Magneticbeadsasapowerfultoolwithmanypropertiessuchaswellcontrolledsurfaces,flexiblefunctionalization,easymanipulationbythemagnetandlargesurface-to-volumeratio,werewidelyappliedtoimprovetheselectivityandsensitivityofanalysismethods.Duetotheirefficientenrichmentandseparationcapability,themagneticbeadsweresuccessfullyutilizedinimmunoassay(Dungchaietal.,2007;Zhangetal.,2009),DNAhybridization(LiandHe,2009;Caietal.,2010),virusdetection(Zhaoetal.,2012),proteinanalysis(Centietal.,2007),
ContentslistsavailableatSciVerseScienceDirectjournalhomepage:www.elsevier.com/locate/biosBiosensorsandBioelectronics
0956-5663/$-seefrontmatter&2012ElsevierB.V.Allrightsreserved.http://dx.doi.org/10.1016/j.bios.2012.08.007
nCorrespondingauthorat:KeyLaboratoryofAnalyticalChemistryforBiology
andMedicine(MinistryofEducation),CollegeofChemistryandMolecularSciences,andStateKeyLaboratoryofVirology,WuhanUniversity,Wuhan430072,PRChina.Tel.:þ862768756759;fax:þ862768754067.E-mailaddress:zlzhang@whu.edu.cn(Z.-L.Zhang).
BiosensorsandBioelectronics41(2013)129–136