盐酸博安霉素脂质体的制备及表征
盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究
盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究目的制备盐酸小檗碱前体脂质体，并对其理化性质进行考察。
方法采用薄膜载体沉积法制备盐酸小檗碱前体脂质体，正交实验优选处方；透射电镜观察形态；马尔文激光粒度仪测定粒径；高效液相色谱法测定包封率。
结果电镜下观察脂质体形态多为圆形或椭圆形，平均粒径为741 nm，包封率为（29.93±1.32）%。
结论该方法制备工艺简单，易于工业化生产。
[Abstract] Objective To prepare berberine hydrochloride proliposomes and investigate its physicochemical properties. Methods Proliposomes were prepared by film-deposition oncarriers. Orthogonal design was used to select the optimum formulation. The shape and particle size of proliposomes were investigated by transmission electron microscope and laser scatter. The encapsulation efficiency was determined by HPLC. Results The berberine hydrochloride liposome vesicles were globular or elliptic under the electronic microscopy. The average size of the liposomes was 741nm. The encapsulation efficiency was(29.93±1.32)%. Conclusion The preparation method is simple and easily industrialized preparation .[Key words] Berberine hydrochloride;Proliposomes;Liposomes小檗碱（berberine）又称黄连素，常用于治疗肠道炎症。
盐霉素钠纳米脂质体的制备及表征
盐霉素钠纳米脂质体的制备及表征巩志荣;何文婷;孙治国;郭海霞;钟延强;鲁莹【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的：制备并表征盐霉素钠纳米脂质体（SLN）。
方法采用薄膜分散法制备盐霉素钠纳米脂质体，通过调节脂质体中胆固醇比例，以盐霉素钠包封率为评价指标，筛选盐霉素钠纳米脂质体的优化处方。
结果透射电镜显示盐霉素钠纳米脂质体形态圆整，分散性良好，激光粒度仪显示盐霉素钠纳米脂质体平均粒径为99．0 nm ，Zeta电位为－33．5 mV ，包封率为85．7％，载药量为6．7％。
通过脂质体包裹，盐霉素钠在水中的最高浓度可提高15倍，并证明其具有一定缓释效果。
结论笔者得到了粒径大小在100 nm左右，形态均一，包封率和载药量较高的盐霉素钠纳米脂质体，为进一步测定其杀伤肿瘤活性奠定了坚实的制剂学基础。
%Objective To prepare and characterize salinomycin sodium‐loaded nano liposomes(SLN) .Methods The nano liposomes were prepared by a thin‐film dispersion method .The formula of SLN was optimized by regulating the cholesterol ratio of the nano liposomes ,using the encapsulation efficacy (EE) of SLN as the primary outcomemeasure .Results Transmission e‐lectron microscope (TEM) sho wed that SLN was round and had a good dispersion .Dynamic laser scatter (DLS) showed that SLN was of a desired size of 99 nm ,and zeta potential of -33 .5 mV .EE of SLN was 85 .7% and drug loading of 6 .7% .Ac‐cording to the formulation of nano liposomes ,the concentration of salinomycinsodium in water was greatly improved by 15 folds .Additionally ,the nano liposomes were observed to exhibit sustained releasecharacteristics .Conclusion Salinomycin sodi‐um‐loaded nanoliposomes of a desired size of about 100 nm were obtained ,which were well dispersion ,and high EE and drug loading .Solid pharmaceutics foundation for the activity examination of SLN was provided in this research .【总页数】5页(P36-39,43)【作者】巩志荣;何文婷;孙治国;郭海霞;钟延强;鲁莹【作者单位】第二军医大学药学院，上海 200433;第二军医大学药学院，上海200433;第二军医大学药学院，上海200433;解放军266医院，河北承德067000;第二军医大学药学院，上海 200433;第二军医大学药学院，上海 200433【正文语种】中文【中图分类】R945【相关文献】1.白藜芦醇柔性纳米脂质体的制备与表征 [J], 王春晓;夏强2.磁性阳离子纳米脂质体的制备及其性能表征 [J], 彭健;汤伟;刘路;谭亮;王荣兵;陈伟;周健3.和厚朴酚-交联羧甲基纤维素钠表面固体分散体的制备及表征 [J], 董武军;傅强;吕慧侠4.头孢噻呋钠纳米脂质体的制备及表征 [J], 王虹雅;陈胡羚;侯佳琪;辛怡霖;唐熙;李青云;张欣;孟佳;李引乾5.羧甲基纤维素钠/聚丙烯酸气凝胶钠离子电池隔膜制备及性能表征 [J], 王润玉;林秀仪;章伟伟;胡传双因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体
2.合成乳化剂
离子型 非离子型
• 纳米乳常用非离子型乳化剂，如脂肪酸山梨坦 （亲油性）、聚山梨酯(亲水性）、聚氧乙烯脂 肪酸酯（亲水性）、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚 氧乙烯聚氧丙烯共聚物类、蔗糖脂肪酸酯类和 单硬脂酸甘油酯等。非离子型的乳化剂口服一 般没有毒性，静脉给药有一定毒性。
一、定义
• 聚合物胶束(polymeric micelles)是由合成的 两亲性嵌段共聚物在水中自组装形成的一种 热力学稳定的胶体溶液。
一、定义
•纳米乳(nanoemulsion)是粒径为10~100nm的 乳滴分散在另一种液体中形成的胶体分散系 统，其乳滴多为球形，大小比较均匀，透明 或半透明，经热压灭菌或离心也不能使之分 层，通常属热力学稳定系统。
2) 水溶性及脂溶性药物都可包裹在同一脂质体 中，药物的包封率主要与药物本身的油水分 配系数及膜材的性质有关；
3) 脂质体本身对人体毒性小，并且脂质体对人 体无免疫抑制作用；
4) 在体内使药物具有定向分布的靶向性特征， 包括：被动靶向、物理和化学靶向、转移靶 向、主动靶向；
2. 脂质体的作用特点
5）药物包裹在脂质体中是非共价键结合，因此 易与载体分离，进入体内可以在指定部位完 全释放出来；
（4）光敏脂质体 光敏脂质体是将光敏物质的药物包裹在脂质体 内用来进行光学治疗。当在一定波长的光照射 时，脂质体膜与囊泡物质间或脂质体之间发生 融合作用而释放药物。制备了含胡萝卜素或全 反视黄醇的光敏脂质体，光照后可发生不可逆 光反应，从而影响膜的流动性，增加其通透性。
药剂学--脂质体的制备技术
四、脂质体的质量评价
4、磷脂的氧化程度
? 氧化指数的测定
氧化指数＝A233nm / A215nm
? 氧化产物的测定
HCl MDA + TBA
H2O
丙二醛 硫巴比妥酸
TBA-Pigment
5、有机溶剂残留量
五、类脂质体
类脂质体／泡囊（niosomes ） 用非离子型表面活性剂为囊材制成的单
层囊泡（nonionic surfactant vesicles ）。
一、脂质体（liposomes ）概述
一、脂质体（liposomes ）概述
3、膜材组成
?磷脂（卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂、合成磷脂） ?附加剂（胆固醇、十八胺、磷脂酸）
胆固醇用于调节磷脂膜的流动性，又称
“流动性缓冲剂”
脂质体的结构
脂质体的结构
脂质体的结构
一、脂质体（liposomes ）概述
4、脂质体的理化性质
?相变温度（phase transition temperature ）
当温度升高时，脂质体分子层中酰基侧键可从有序排 列变为无序排列，从而引起一系列变化，如由“胶晶” 变为液晶态，膜的横切面增加、厚度减少、流动性增加 等。转变时的温度即为相变温度。
一、脂质体（liposomes ）概述
二、脂质体的制备方法
1、薄膜分散法脂溶性药物溶有机溶剂 水溶性药物溶于缓冲液
二、脂质体的制备方法
2、逆相蒸发法
膜材
有机溶剂 药物水溶液
超声
W/O 乳剂
减压蒸发
胶态 缓冲液
除游离药物
水混悬液
脂质体
二、脂质体的制备方法
3、冷冻干燥法
膜材
缓冲液
超声 冷冻干燥
第六节 脂质体制备技术
四、脂质体的制法
1、薄膜分散法 将磷脂、胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于氯仿(或其他 有机溶剂中)然后将氯仿溶液在茄形瓶中旋转蒸发，在瓶内 壁上形成一层薄膜；将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中， 加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。
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2、注入法 将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于有机溶剂中 (一般多采用乙醚)，然后将此药液经注射器缓缓注入加 热至50℃(并用磁力搅拌)的磷酸盐缓冲液(或含有水溶性 药物)中，加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止，即制得大 多孔脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。再将脂质 体混悬液通过高压乳匀机二次，则所得成品大多为单室 脂质体，少数为多室脂质体，粒径绝大多数在1μm以下。
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磷脂的结构式中含有一个磷酸基团和一个含氨的碱 基(季铵盐)，均为亲水性基团，还有两个较长的烃链 为亲油团。
分子中磷酸部分极性很强，溶于水；但烃链R与R 为非极性部分， 不溶于水。
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把类脂质的醇溶液倒入水面时，醇很快地溶解于水， 而类脂分子则排列在空气-水的界面上， 它们的极性 部分在水里， 亲油的非极性部分则伸向空气中，当 极性类脂分子被水完全包围时，其极性基团面向两 侧的水相，而非极性的烃链彼此面对面缔合成双分 子而形成球状。
（四）脂质体的理化性质
１．相变温度 (phasetransitiontemperature)
当升高温度时脂质双分子层中酰基侧链从有序 排列变为无序排列，这种变化引起脂膜的物理性质 一系列变化，可由“胶晶”态变为“液晶”态，膜 的横切面增加，双分子层厚度减小，膜流动性增加， 这种转变时的温度称为相变温度。
1、磷脂类 磷脂类包括卵磷脂、脑磷脂、大豆磷脂以及其它合 成磷脂等都可以作为脂质体的双分子层基础物质。 我国研究脂质体，以采用大豆磷脂最为适宜，因其 成本比卵磷脂低廉，乳化能力强，原料易得，是今 后工业生产脂质体的重要原料，而卵磷脂的成本要 比豆磷脂高得多，不宜大量生产。
脂质体的制备及包封率的测定(新)
吉林大学生物基础实验教学中心
脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。 • 薄膜分散法：是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声 处理，得到小单室脂质体。特点是操作简便，但包封率 较低。 • 注入法：根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入 法。乙醚注入法是将磷脂、胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等 溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入50～60℃水性溶液 中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备 脂质体。本实验采用此法制成脂质体，安定为模型药物。乙 醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％～20％ 乙醇。最近还有人研究用Freon为溶剂溶解磷脂质等脂溶性成 分，采用注入法制备脂质体。此法适于不耐热的药物。 • 反相蒸发法：是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率 高。 • 冷冻干燥法：适于在水中不稳定的药物制备脂质体。 • 熔融法：适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。
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试剂与器材
1.试剂：水杨酸 、卵磷脂 、胆固醇 生理盐水 2.器材：磁力搅拌器、光学显微镜、超滤 器、分光光度计
吉林大学生物基础实验教学中心
实验步骤
1.处方 水杨酸 卵磷脂 胆固醇 生理盐水
0.25g 2g 0.2g 加至50ml
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2.操作 (1)磷脂、胆固醇乙醇溶液的配制：取处方量的卵
脂质体的制备 及检测
吉林大学 国家级生物基础实验教学示范中心
1、目的要求 2、实验原理 3、试剂与器材 4、实验步骤 5、注意事项 6、思考题
目的要求
1.掌握注入法制备脂质体的工艺。 2.掌握脂质体包封率的测定方法。
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脂质体 吕万良
三、制备脂质体的方法 Preparation of liposomes
• 例 pH梯度法包封阿霉素 • 空白脂质体的制备：以pH为4的300mmol/L枸橼酸
白或载药脂质体）
典型脂质体制备方法
薄膜法又称干膜分散法
• 即将脂质材料及脂溶性药 的混合于有机溶剂中，通 过氮气或减压除去有机溶 剂，在容器底壁上形成脂 质薄膜；
• 然后将溶有药物的水溶液 加到脂质薄膜上，室温下 放置30min使脂质水化， 然后在高于Tc 振荡分散脂 膜，类脂膜碎片吸水膨胀， 形成大多室脂质体。
高包封率：遥控装载—硫酸铵梯度法 包封隐形脂质体
• 硫酸铵梯度法包封脂质体是根据化学平衡移动原 理而设计的，空白脂质体包封阿霉素的前提是：
（1）脂质体膜可透过分子型药物； （2）离子型化合物较少或几乎不透过脂膜； （3）硫酸阿霉素的溶度积 << 盐酸阿霉素的溶度积。
遥控装载—硫酸铵梯度法
• 制备脂薄膜；
• 用逆相蒸发法制备的脂质体一般为大单层脂质体， 常称为REVs。
• 本法特点是包封的药物量大，体积包封率可大于超 声波分散法30倍，它适合于包封水溶性药物及大分 子生物活性物质如各种抗生素、胰岛素、免疫球蛋 白、碱性磷脂酶、核酸等。
典型脂质体制备过程
• 称量脂材料， 如 EPC/CHOL/PEG-DSPE =55/40/5 mol/mol/mol • 将脂材料溶解 • 蒸发形成脂膜 • 水化形成粗脂质体 • 挤压形成小脂质体（空
• 用高浓度硫酸铵溶液使脂膜水化（hydration）；
主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体
二、常用载体材料
纳米乳和亚微乳的制备材料：
乳化剂 助乳化剂
选用乳化剂的原则： （1）要考虑乳化剂使纳米乳稳定的乳化性能， （2）要考虑毒性、对微生物的稳定性和价格等。
1.天然乳化剂
• 如多糖类的阿拉伯胶、西黄蓍胶及明胶、白蛋 白和酪蛋白、大豆磷脂、卵磷脂及胆固醇等。
四、纳米乳的制备
（一）纳米乳的形成条件与制备步骤
1.纳米乳的形成条件
（1）需要大量乳化剂：纳米乳中乳化剂的用量一 般为油量的 20%~30%，而普通乳中乳化剂多低于油 量的10%。
（2）需要加入助乳化剂：助乳化剂可插入到乳化 剂界面膜中，形成复合凝聚膜，提高膜的牢固性和 柔韧性，又可增大乳化剂的溶解度，进一步降低界 面张力，有利于纳米乳的稳定。
• 亚纳米乳(subnanoemulsion) 粒径在 100~500nm之间，外观不透明，呈浑浊或乳 状，稳定性也不如纳米乳，虽可加热灭菌， 但加热时间太长或数次加热，也会分层。
二、常用载体材料
聚合物胶束的载体材料：
（通常用合成的线形两亲性嵌段共聚物）
亲水段材料：PEG,PEO,PVP 疏水段材料：聚丙烯，聚苯乙烯，聚氨 基酸，聚乳酸，精胺或短链磷脂等
（二）自乳化
• 自乳化药物传递系统（self-emulsifying drug delivery systems,SEDDs)自身包含 一种乳化液，在胃肠道内与体液相遇， 可自动乳化形成纳米乳(O/W)。
（三）修饰纳米乳
• 用聚乙二醇（PEG）修饰的纳米乳可增加表面的 亲水性，减少被巨噬细胞的吞噬，明显延长在血 液循环系统中滞留的时间,称为长循环纳米乳。
脂质体及其用于药物包装
制备脂质体的方法
对于两亲性药物其油水分配系数受介质的pH值和离子强 度的影响较大，包封条件不易掌握，包封率不会太高，这 种情况就应该采用主动载药法,不仅可大大提高两亲性药 物的包封率(特别是弱酸、弱碱类药物)还能降低药物的泄 露。
• 1971年英国莱门(Rymen)等人开始将脂质体用药 物载体。
载药脂质体的结构示意图
药物被脂质体包封后有以下特点：
1．靶向性 2．长效性 3．细胞亲和性与组织相容性 4．降低药物毒性 5．提高药物稳定性
靶向性
被动靶向性——这是脂质体静脉给药时的基本特征：脂质体被巨噬细 胞作为异物吞噬自然倾向所产生的靶向性。 主动靶向性——这种靶向性是在脂质体上，联接一种识别分子，即所 谓的配体。通过配体分子的特异性专一地与靶细胞表面的互补分子相 互作用，而使脂质体在指定的靶区释放药物。 物理和化学靶向性——这种靶向性是应用某种物理因素或化学因素的 改变（如用药局部的pH、病变部位的温度等）而明显改变脂质体膜 的通透性，引发脂质体选择性地释放药物。
• 该技术和常规的醇注入技术有类似之处，所不同 的是溶解磷脂和胆固醇时用的是超临界流体。采 用该技术，Aphios 已经成功的将紫杉醇 （paclitaxel）, 喜树碱（camptothecin）等难 溶性药物制成了脂质体制剂。
• 临床实验表明：Taxosomes.（紫杉醇脂质体） 的毒性远小于Taxol.（紫杉醇注射液），并且其 治疗乳腺癌的有效 性是Taxol.的2 倍左右。
K+-Na+梯度
pH梯度
纳米药物制剂的制备与性能分析
纳米药物制剂的制备与性能分析随着纳米科技的飞速发展，纳米药物制剂在药物研究与应用领域中扮演着越来越重要的角色。
本文将重点探讨纳米药物制剂的制备方法以及对其性能的分析。
一、纳米药物制剂的制备方法1. 脂质体制备法脂质体是一种由磷脂双分子层组成的微胶囊结构，可以用于载药和提高药物的稳定性。
制备脂质体的方法包括溶剂沉淀法、薄膜分散法等。
2. 纳米乳液制备法纳米乳液是由药物和乳化剂组成的乳液，乳化剂可以有效稳定药物，并提高药物的生物利用度。
制备纳米乳液的方法包括超声法、高压均化法等。
3. 纳米颗粒制备法纳米颗粒是由药物和聚合物或其他材料组成的微粒子，具有较大的比表面积和药物负载能力。
制备纳米颗粒的方法包括凝胶法、共沉淀法等。
二、纳米药物制剂的性能分析1. 粒径和分布分析纳米药物制剂的粒径和分布对其稳定性和溶解性都有重要影响。
可以使用动态光散射仪（DLS）或扫描电镜（SEM）等设备来测定粒径和分布。
2. 药物包封率和载药量分析药物包封率和载药量是评价纳米药物制剂的关键指标。
可以使用荧光分析法或高效液相色谱法（HPLC）等方法来测定药物的包封率和载药量。
3. 稳定性评估纳米药物制剂在制备和储存过程中需要具备良好的稳定性。
可以通过测定制剂的溶解度、药物释放动力学或稳定性指标的变化来评估其稳定性。
4. 体外释放动力学研究纳米药物制剂的体外释放动力学研究有助于了解药物在制剂中的释放行为。
可以使用离体释放法或者体内模型来研究纳米药物制剂的体外释放。
5. 生物活性评估纳米药物制剂的生物活性评估是了解制剂在体内药效的重要手段。
可以通过细胞毒性实验、药物疗效实验等方法来评估纳米药物制剂的生物活性。
结论纳米药物制剂的制备与性能分析是纳米技术在药物领域的重要应用之一。
通过合适的制备方法和全面的性能分析，可以优化纳米药物制剂的制备工艺，提高其稳定性和疗效。
未来，随着纳米技术的进一步发展，纳米药物制剂将成为新药研发和临床治疗的重要手段。
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盐酸博安霉素脂质体的制备及表征王金晶;张芹;肖晗;陈立江;李丽;张文君;李铁福;刘宇【摘要】目的探讨制备方法对博安霉素脂质体包封率的影响,考察其制备的影响因素,优化处方工艺,并对其特性进行表征.方法分别采用乙醇注入法和逆向蒸发法制备博安霉素脂质体(boanmycin liposomes,BAM-Ls),确定最终工艺及处方.并对其包封率、粒径、Zeta电位和形态进行综合评价.结果逆向蒸发法制备BAM-Ls时药物包封率明显高于乙醇注入法,最终处方磷脂浓度为10mg/mL、磷脂胆固醇比为4:1(W/W)、水/乙醚比为1:3(V/V)时,所得脂质体包封率最高,约为30％.粒径为150nm,Zeta电位为-22.8mV,7d内脂质体稳定性良好.结论逆向蒸发法制备的BAM-Ls理化性质及稳定性良好.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2014(039)003【总页数】5页(P220-223,233)【关键词】博安霉素;乙醇注入法;逆向蒸发法;脂质体【作者】王金晶;张芹;肖晗;陈立江;李丽;张文君;李铁福;刘宇【作者单位】辽宁大学药学院,沈阳110036;湖北省钟祥市中医院妇产科,钟祥431900;辽宁中医药大学经济管理学院,沈阳110032;辽宁大学药学院,沈阳110036;辽宁大学药学院,沈阳110036;辽宁大学药学院,沈阳110036;沈阳药科大学制药工程学院,沈阳110016;辽宁大学药学院,沈阳110036【正文语种】中文【中图分类】R978.1博安霉素(boanmycin，BAM)，是从我国浙江平阳土壤中分离得到的轮枝链霉菌平阳新变种产生的抗癌有效物质，其化学结构与国外报道的博莱霉素A6(bleomycin A6, BLM A6) 完全一致，属博莱霉素类抗肿瘤抗生素。
为我国自行研制开发的国家Ⅰ类新药，2002年，以冻干粉形式正式上市销售。
BAM分子式为C60H96N20O21S2·nHCl，分子量1497.66，极易溶于水，溶于甲醇，不溶于乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂。
在BAM对原发性肝癌的II期103例临床研究中，单药介入有效率30.8%，联合用药介入有效率42.1%，表明BAM 对肝癌具有较为显著的疗效[1-4]。
目前，除博安霉素冻干粉制剂，尚未见其它剂型的研究报道。
临床研究表明，其肌注后吸收迅速，血药达峰的时间18.6min，血药浓度0.20μg/mL，240min后降为零，主要毒副反应表现为肺纤维化。
大剂量使用时，易造成大鼠肾脏损伤，肾功能生化指标异常升高以及组织形态学病变。
将其制成脂质体制剂，利用脂质体对药物的保护作用，延长其在体内的转运时间，提高生物利用度。
同时，利用脂质体的被动肝靶向性，提高药物在肝脏的分布浓度，降低对其它组织器官的毒副作用。
1.1 药品与试剂注射用博安霉素冻干粉(辽源市迪康药业有限责任公司，纯度74.5%)；博安霉素对照品(辽源市迪康药业有限责任公司，纯度78.6%)；大豆卵磷脂(EPCS，德国Lipoid公司，纯度98%)；胆固醇(Chol，天津市博迪化工有限公司)；曲拉通(Triton X-100，上海源叶生物科技有限公司)；其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器PB-10型pH计(德国赛多利斯股份公司)；FA1004N电子天平 (上海精密科学仪器有限公司)；Scientz-11D型超声波细胞粉碎机(新芝生物科技股份有限公司)；L-7110高效液相色谱仪(日本日立公司)；N-1000型真空旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司)；CS120GXL超速离心机(日本日立公司)。
2.1 博安霉素脂质体的制备乙醇注入法：将EPCS和Chol溶于20mL乙醇中，在一定温度下，注入到10mL 快速搅拌的BAM水溶液中，减压蒸发除去乙醇后，定容至10mL，超声波细胞粉碎机处理4min，分别过0.8及0.45μm微孔滤膜，即得BAM-Ls溶液。
逆向蒸发法：精密称取处方量的EPCS和Chol溶于10mL氯仿中，超声溶解，减压蒸发成膜，加入无水乙醚30mL，震荡溶解，取BAM适量溶于10mL蒸馏水中，将其加入上述乙醚溶液中，超声波细胞粉碎机处理2min，得到均一溶液，减压蒸发至乙醚完全挥散，蒸馏水定容至10mL，超声波细胞粉碎机处理4min，分别过0.8及0.45μm微孔滤膜，得到BAMLs溶液。
2.2 HPLC分析方法[5-6]色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm, 5μm)；流动相：水相：有机相=72:28(水相：0.055 M乙烷磺酸钠溶液，加入0.08 M醋酸，混匀后用氨水调pH至4.3；有机相：甲醇-乙腈=3:1)；流速：1.0mL/min，检测波长：291nm；进样量：20μL。
2.3 博安霉素标准曲线的制备精密称取BAM对照品13.2mg于10mL量瓶中，加蒸馏水定容，混匀，BAM最终浓度约为1mg/mL, 作为BAM储备液。
精密量取储备液适量，以蒸馏水稀释至浓度依次为30，60，120，240和480μg/mL的溶液，分别吸取20μL上述溶液注入到色谱仪中，测定药物峰面积。
并以峰面积(A)对质量浓度(C)作线性回归，回归方程为A=10328C-118948，(r=0.9999)，结果表明BAM在浓度范围30～480μg/mL范围内线性关系良好。
2.4 博安霉素脂质体包封率的测定精密量取BAM-Ls 4.0mL，于55000r/min离心1h，取上清液HPLC法测定游离药物浓度。
另取BAM-Ls 1.0mL，加入10% Triton X-100的70%乙醇水溶液定容至5mL，水浴超声至溶液澄清透明，HPLC法测定脂质体溶液药物浓度，包封率计算按照Eq 2-1计算其中Ci为未被脂质体包封的游离药物量(或浓度)，Ct为总的药物量(或浓度)。
2.5 博安霉素脂质体粒径、Zeta电位的测定将制得的BAM-Ls用去离子水适当稀释，置纳米粒度测定仪的石英测量池和毛细管小池中，分别测定其粒径和Zeta电位，每份样品平行测定3次。
3.1 乙醇注入法制备BAM-Ls的影响因素考察3.1.1 EPCS浓度考察在确定了BAM-Ls的处方构成以后，接下来对EPCS的浓度进行了筛选，并采用乙醇注入法分别制备不同磷脂浓度的脂质体，包封率结果见图3。
3.1.2 EPCS与Chol比例考察将EPCS浓度固定为20mg/mL，分别考察EPCS和Chol之间比例对包封率的影响，结果见表1。
结果表明，当EPCS/Chol比为4:1时，包封率最高，故按照此比例进行后续试验。
3.1.3 水相与有机相比例考察EPCS浓度为20mg/mL时，考察水相与有机相乙醇的比例对包封率的影响，结果见图1。
结果表明，水相和乙醇的比例对药物包封率影响较大，由图1可知，当二者比例达到1:1时，包封率达到最大值。
3.1.4 搅拌速度的影响当EPCS浓度为20mg/mL，乙醇和水相体积比1:1时，考察搅拌速度对药物包封率的影响，结果见图2。
结果显示，在转速在300～600r/min之间变化时，药物包封率波动不大，故认为磁力搅拌速度对包封率无明显影响。
3.2 逆向蒸发法制备BAM-Ls试验中逆向蒸发法的工艺条件按照文献[7]中的最优化条件进行，在乙醚和水相体积比3:1时，分别考察了不同磷脂浓度对包封率的影响。
结果见图3。
由结果可以看出，逆向蒸发法对药物的包封率显著高于乙醇注入法，由此可见，同乙醇注入法相比较，使用逆向蒸发法更适用于水溶性药物的包封，这也与相关文献报道的结果相符[8]。
3.3 博安霉素脂质体的表征使用逆向蒸发法，按优化后的处方制备BAMLs，并考察其表征。
3.3.1 粒径、Zeta电位测定按“2.5”项下方法，测得BAM-Ls的平均粒径为(153±2.3)nm，Zeta电位为(-22.8±1.11)mV。
3.3.2 脂质体形态观察将制备的脂质体用蒸馏水适当稀释，取一滴于专用铜网上，静置后用 3%磷钨酸负染色，用滤纸吸去多余的染色液后，透射电镜观察粒子形态，结果见图4。
由图4可见，BAM-Ls为球形粒子且呈单分散分布，粒径范围小于200nm，且其外观圆整，大小均匀，且可以清晰地观察到所制备脂质体为单室结构。
3.3.3 稳定性考察将制备的BAM-Ls于0～4°C冰箱保存，分别在第0、1、2、3、4、5、6和7d取样测定包封率和粒径变化，结果见表2。
4 讨论脂质体的制备方法众多，从最初的薄膜分散法到新近产生的单相溶液冻干法。
在制备某一药物的脂质体制剂时，首先要考虑该药物的理化性质，主要包括分子量(MW)、溶解度(S)、油水分配系数(logP)、电离常数(pKa)。
博安霉素极易溶于水，属于分步电离的弱碱性药物，其电离常数pKa＞7.4、4.7和2.7。
本文首先采用被动载药法-乙醇注入法尝试制备BAMLs，该方法对BAM的包封率极低(小于10%)。
Jaafar-Maalej[8]等研究了乙醇注入法对制备水溶性药物(阿糖胞苷)和脂溶性药物(丙酸倍氯米松)脂质体的包封率比较。
他们使用乙醇注入法制备脂质体粒径范围在80～170nm。
结果表明，磷脂和胆固醇的量显著影响药物包封率。
对制备工艺进行单因素考察后，脂溶性药物包封率接近100%，而水溶性药物仅为16%。
但乙醇注入法凭借其操作简单、重现性好、避免了使用有机溶剂，易于实现大量生产等特点，还是制备成为了制备脂质体制剂的首选方法之一。
1978年Szoka等提出逆向蒸发法[7]，研究人员通过该方法制备出了内水相体积大且包封率高的脂质体，其水相体积比小单室脂质体高30倍。
该方法的提出，实现了对大多数水溶性药物的包封，并显著提高药物的包封率。
逆相蒸发法的是脂质体领域里一个里程碑式的重大发现，其制备的大单室脂质体尤其适用于水溶性药物包封。
有机相和水相比例在3:1时，包封率最高。
在制备过程中，磷脂浓度较低时，很难看到明显的凝胶态形成，当磷脂浓度较高时，能够观察到凝胶态的产生，但是并未观察到凝胶层的塌陷。
脂质体的制备与圆底烧瓶的大小、水相和有机量的体积比、真空度等因素均有很大关系。
实验表明，逆向蒸发法制备的脂质体粒径差异较大，每次制备后都需测定粒径。
粒径范围在300～1000nm之间不等。
当磷脂浓度过大超过60mg/mL时，制备出的脂质体粘度较大，不能完全转移，同时过膜困难，会造成磷脂较大损失，导致包封率下降。
脂质体的粒径大小和形态也能够影响药物的包封率，对于水溶性药物，粒径大的脂质体的内水相容积大，包封药物较多。
一般常用的减小粒径的方法主要有超声法和高压均质法。
本研究中尝试使用微射流减小脂质体粒径，结果表明，经过微射流次数不同时，脂质体粒径上下波动较大。