血清白蛋白测定
牛血清白蛋白实训报告
一、实验目的1. 熟悉牛血清白蛋白的基本性质和提取方法；2. 掌握牛血清白蛋白的鉴定技术；3. 提高实验室操作技能和实验数据分析能力。
二、实验原理牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）是牛血清中的一种球蛋白，具有分子量为66.446KDa，含有607个氨基酸残基，等电点为4.7。
BSA在生物化学、免疫学、细胞生物学等领域具有广泛的应用。
本实验通过提取和鉴定BSA，掌握其基本性质和应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜牛血清、硫酸铵、乙醇、磷酸盐缓冲溶液（PBS）、电泳仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计等；2. 实验试剂：硫酸铵、无水乙醇、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、考马斯亮蓝G-250等。
四、实验方法1. 牛血清白蛋白的提取（1）将新鲜牛血清置于离心管中，加入硫酸铵至终浓度为50%，室温下搅拌30分钟；（2）4℃条件下离心30分钟，收集沉淀；（3）将沉淀用磷酸盐缓冲溶液（PBS）洗涤三次，每次洗涤后离心；（4）将洗涤后的沉淀溶于适量PBS，即得BSA溶液。
2. 牛血清白蛋白的鉴定（1）紫外分光光度法：取适量BSA溶液，用紫外分光光度计测定其在280nm处的吸光度值，根据标准曲线计算BSA的浓度；（2）SDS-PAGE电泳：取适量BSA溶液，加入样品缓冲液，进行SDS-PAGE电泳，观察电泳图谱，鉴定BSA。
五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定BSA浓度根据标准曲线计算，实验组BSA浓度为1.5mg/mL。
2. SDS-PAGE电泳鉴定BSA实验组电泳图谱显示，在分子量约66.4kDa处出现一条明显的蛋白质带，与BSA标准蛋白带位置一致，证明实验组中存在BSA。
六、实验结论1. 成功提取了牛血清白蛋白；2. 通过紫外分光光度法和SDS-PAGE电泳技术对BSA进行了鉴定；3. 本实验掌握了牛血清白蛋白的提取和鉴定方法，为后续实验奠定了基础。
七、实验注意事项1. 实验过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染；2. 在提取BSA时，硫酸铵浓度和搅拌时间应严格控制，以确保提取效率；3. 在鉴定BSA时，应选择合适的检测方法和标准蛋白，以确保鉴定结果的准确性。
溴甲酚紫法检测血清白蛋白方法学评价
仪检测 。分析仪 器经 校准 后每 天用 质控 物进行 室 内质 控监
测 ， 在控 。 均
收稿 日期 ：０ １１ —８ 修 回 日期 ：０ ２０ —２ ２ １ －１２ ； ２ １—３ ０
作者简介 ： 王北 宁（９ ３ ） 主任技师 ， １５ 一 ， 教授 ， 主要从 事检验科 管理和临床免疫学 检验 等研 究。Ｅ ｍ ｉ ｗ ｎｂｉｉｇｉａｔｍ － ａ ： ａｇｅｎｎｓ ．ｏ ｌ ｎ
料结合法测定 Ａ Ｂ广泛应用于临床 ， Ｌ 国内大多数 医院 目前仍 然沿用这一方法 。但 近年来 ， 已有 国外 公司推 出 了溴 甲酚 紫 （ ｒｍ ｒｓｌ ｕｐｅ Ｂ Ｐ 法 测定 血清 Ａ Ｂ的商 品试 剂 ， 了 ｂｏ ｃｅｏ ｐ ｒｌ， Ｃ ） Ｌ 为
由德 国罗 氏公 司提供 ， 使用罗 氏 ＭＯ Ｕ Ａ Ｄ Ｌ Ｒ全 自动 生化分析
疲劳 的发生 ］ 。因此 ， 对于参加训练期 的新兵而言 ，ｋ ５ ｍ最大 程度 的跑步 ， 能够对身体形 成较 大强度 的刺激。在训 练时 可 以适 度调整 ， 训练安排 上每周次 数不应过 多 ， 同时 ， 在跑 完 应 ５ ｍ越野后安排适 当歇息 ， ｋ 避免对机体刺激过强的训 练。
应量 ， 但仍不足 以满足 机体供 能需 要 ， 肉处 于缺氧状 态 ， 肌 糖 酵解 因之 加强 ， 以补充所需 的能量 ， 肌细胞 可生成高出安静状
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（ 陈泮 藻编辑 ）
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血清前白蛋白测定标准规程
血清前白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清前白蛋白（缩写PAB)测定，组合项目申请：血生化中肝功能项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定24h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。
2.3.2注意有无应用影响测试项目的药物。
2.3.3可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理人血清PA与其相应抗体在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。
该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。
通过与同样处理的校准比较，计算未知样品的PA含量4 试剂及其他用品4.1试剂：前白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。
4.2试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。
血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定
血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定1.实验原理在pH值4.2时，白蛋白和溴甲酚绿染料结合产生蓝绿色复合物，在630nm处比色，颜色的深度与白蛋白浓度成正比。
pH4.2白蛋白+溴甲酚绿--------------绿色化合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。
在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周，在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定一个月，-20℃保存至少可以稳定3个月。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 上海奥林巴斯白蛋白测定试剂盒6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。
手工测定计算方法为：Au白蛋白(g/L)= ×校准液浓度As12. 参考值范围成人35～52g/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
糖化血清白蛋白测定(1)
糖化血清白蛋白测定(1)
在高血糖情况下血清白蛋白同样会发生糖基化。
主要是白蛋白肽链189位赖氨酸与葡萄糖结合形成高分子铜胺结构，其结构类似果糖胺，故也称为果糖胺测定。
由于白蛋白半衰期比血红蛋白短，转换率快，约17-19天，因而，可通过测定血清糖基化白蛋白水平来反映近2-3周糖控制情况，制定控制糖尿病人血糖浓度的短期方案，结合GHb的长期数据，采用更有效的治疗措施，控制病人血糖维持在正常范围。
糖基化白蛋白测定可以采用硝基四氮唑蓝法，即糖基化白蛋白末端氨基与葡萄糖形成的铜胺结构能在碱性环境中与硝基四氮唑蓝发生反应生成甲月替，在550nm检测，呈色深浅与糖基化白蛋白的含量成正比。
还可采用铜胺氧化酶法。
血清总蛋白和血清白蛋白的测定1
【注意事项】
• 1.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠 以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性； 子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘 化钾能防止两价铜离子还原 能防止两价铜离子还原。 化钾能防止两价铜离子还原。 • 2.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓 由于各种血清蛋白质的分子量不同， 由于各种血清蛋白质的分子量不同 度不宜用mol/L表示。 表示。 度不宜用 表示 • 3.高脂，黄疸及溶血标本应做血清空白对照来 高脂， 高脂 校正误差。含脂类极多的血清， 校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试 剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行 剂后会出现混浊，可用乙醚 抽提后再进行 比色。 比色。 • 4.在浓度小于 在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。 时呈良好的线性关系。 在浓度小于 时呈良好的线性关系
实验十一 血清白蛋白的测定 溴甲酚绿法） （溴甲酚绿法）
【实验目的】 实验目的】
• （1）熟悉学啊 白蛋白的测定方法（溴甲 白蛋白的测定方法（ ）熟悉学啊ing白蛋白的测定方法 酚绿法）。 酚绿法）。 • （2）掌握血清白蛋白测定和白蛋白与球蛋 ） 白的含量比（ 白的含量比（A/G）的临床意义。 ）的液； 缓冲液； 缓冲液 甘氨酸； 甘氨酸； 各种硫醇
耗费时间长； 耗费时间长；操作要严 格计时； 格计时； 颜色深浅随不同蛋白质 变化
考马斯亮蓝法 (Bradford法) 法
灵敏度最高 1～5µg ～ µ
快速 5～15分 ～ 分 钟
考马斯亮蓝染料与蛋 白质结合时， 白质结合时，其 λmax由465nm变 由 变 为595nm
【实验试剂】 实验试剂】
• 1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 溴甲酚绿（ 溴甲酚绿 ） ， 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至 溶解， 定容至1000mL。 溶解 。 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取 加水 溶解。 溶解。 • 2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH= 4.2）：分别配制 柠檬酸缓冲液（ ）：分别配制 柠檬酸缓冲液 ）： 0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按 柠檬酸和柠檬酸钠溶液， 柠檬酸和柠檬酸钠溶液 然后按12.3：7.7的体 ： 的体 积比例混合。 混合液加入NaN3 100mg。 积比例混合。每1000ml混合液加入 混合液加入 。 • 3.30%聚氧化乙烯月桂醚 聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加 聚氧化乙烯月桂醚 溶液 加 少量水， ℃水浴溶解，加水至100ml（此可用 少量水，60℃水浴溶解，加水至 （此可用Tween20或Tween-80代替 。 代替)。 或 代替 • 4.BCG应用液 BCG贮存液 贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液 应用液 贮存液 ， 柠檬酸缓冲液 也可以用Tween-20 8ml或 （pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用 也可以用 或 Tween-80 10ml代替）混合而成。 代替） 代替 混合而成。 • 5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白 标准蛋白溶液（ 称取人白蛋白1.00g，用生 标准蛋白溶液 ， 理盐水
牛血清白蛋白的提取与鉴定 自主设计实验 PDF
牛血清白蛋白的提取与鉴定自主设计实验 PDF 摘要本文旨在介绍牛血清白蛋白的提取与鉴定。
为此，实验采用单步萃取法和透析离心胶体金法对已酶分解过的牛血清蛋白粗提取物进行提取与鉴定。
实验结果显示，经单步提取的白蛋白丰度为1.84mg/ml；经透析离心胶体金法制备的抗原纯度为1.07mg/ml，质量比约为58%。
实验结果进一步表明，采用现有技术，牛血清白蛋白可以有效地提取到并且可靠地鉴定。
关键词：牛血清白蛋白；单步提取；透析离心胶体金法；抗原纯度1 引言白蛋白是一种非常重要的蛋白质，它是一种营养组分，建设身体免疫能力，可以用来防止缺乏病及疾病的发生。
牛血清白蛋白（BSA）是一种多肽结构的蛋白质，具有一定的物理化学性质。
近年来，由于BSA在各种细胞和生物体内具有多项重要作用，它已经成为研究和医学领域中许多应用的优质蛋白质材料。
牛血清白蛋白的提取与鉴定是节约、有效使用其中蛋白质的关键一步[1]。
2 实验材料和方法2.1 材料原料：牛血清；试剂：2mol/L硫酸铵溶液，0.3mol/L乙醇；废液：含有30mol/L硫酸铵键溶物的废液；器材：静水器，透析袋，离心管，离心机，分光光度计；2.2 抗原提取方法（1）利用2mol/L硫酸铵溶液将牛血清酶分解，获得血清蛋白粗提取物。
（2）将血清粗提取物在室温条件下悬浮于0.3M乙醇溶液中，冷凝回流30min，获得BSA纯提物；（3）采用透析离心胶体金法，将BSA纯提物透过30mmol/L硫酸铵在室温条件下进行离心，并用放射性同位素（125I）标记，以定量提取BSA；（4）用交换容量法，以30mmol/L硫酸铵对BSA标记物进行洗脱，洗脱后的溶液中BSA的浓度分别测定，并绘制曲线，计算其纯度。
3 结果与讨论3.1 BSA的纯度测定结果实验结果显示，BSA经单步提取后的丰度为1.84mg/ml；经透析离心胶体金法所制备的抗原纯度为1.07mg/ml，质量比约为58%（表1）。
血清总蛋白和白蛋白、球蛋白比值测定在蛋白质代谢异常的检查及临床意义
血清总蛋白和白蛋白、球蛋白比值测定：血清总蛋白（TP）是血清白蛋白和球蛋白（G）的总和。
双缩脲比色法是目前推荐检测TP的定量方法，显色强度受蛋白质种类影响较小。
白蛋白是由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为20天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆TP的40％～60％。
白蛋白是血浆中重要的运输蛋白。
许多非水溶性的物质易与白蛋白结合后被运输，如：胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、药物等。
白蛋白具有维持血浆胶体渗透压和缓冲血液酸碱的能力，血清白蛋白的浓度也能反映肝损伤的程度、疗效的观察及预后的判断。
血清白蛋白的定量常采用溴甲酚绿法，也有采用抗原抗体复合物沉淀的散射比浊法或透射比浊法。
后一种方法特异性较强，但试验成本高于前一种方法。
从TP中减白蛋白量，即为球蛋白含量。
参考值：血清总蛋白：60～82g／L 白蛋白：35～52g／L，球蛋白：20～30g／L，A／G l.0～2.0：1 临床意义：①急性肝脏损伤早期或局灶性肝脏损伤等轻度肝损害时，自蛋白（A）可正常或轻度下降、球蛋白（G）可轻度升高、TP和A／G均可正常。
亚急性重症肝炎早期多数TP为明显下降，而γ-球蛋白增加；晚期发生肝坏死，TP明显下降。
②慢性肝病，如慢性肝炎、肝硬化、肝癌等，肝实质细胞受损，常见白蛋白减少和球蛋白（主要是γ球蛋白）增加，A／G比值下降。
随病情加重而出现A／G 比值倒置，此时提示肝功能严重损害。
白蛋白持续下降者多预后不良；治疗后白蛋白上升，说明治疗有效；白蛋白减少到30g／L以下，易产生腹水。
③肝外疾病：总蛋白或白蛋白减少可见于蛋白质丢失过多，如：肾病综合征、大面积烧伤等；蛋白质分解过盛，如恶性肿瘤、甲状腺功能亢进等；蛋白质摄入不足，如慢性营养障碍等。
球蛋白增加：可见于自身免疫病，如系统性红斑狼疮等；γ球蛋白单克隆增生，如多发性骨髓瘤；慢性感染，如黑热病、血吸虫病等。
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血清白蛋白测定
1.实验原理
在pH值4.2时，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在628nm 处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比与同样处理的白蛋白标准液比较，可求得血清中白蛋白的浓度。
pH4.2
白蛋白+溴甲酚绿--------------绿色化合物
2. 标本采集
2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。
在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周，在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定一个月，-20℃保存至少可以稳定3个月。
4. 标本运输室温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:
6.1 上海骏实生物科技公司白蛋白测定试剂盒
6.1.1 试剂组成
琥珀酸盐75mmol/L
溴甲酚绿(BCG) 0.15mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：日立7060生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以罗氏复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。
12. 参考值范围：34～55g/L
13. 临床意义：白蛋白是血浆中多种物质重要的结合与运输蛋白，并是维持血浆渗透压的主要组分。
血清白蛋白可用于众多疾病的诊断。
血清白蛋白升高通常由于严重失水、血浆浓缩所致，并非蛋白质绝对量的增加。
临床上，尚未发现单纯白蛋白浓度增高的疾病。
急性血清白蛋白降低多见于急性大量出血或严重烫伤时血浆的丢失。
慢性白蛋白降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、腹水形成时白蛋白的丢失和肾脏病时白蛋白从尿中的丢失。
妊娠晚期，由于体内对白蛋白的需要量增加，同时伴有血浆容量增高，血清白蛋白可明显下降，但分娩后可迅速恢复正常。
还有极少数先天性白蛋白缺乏症患者，由于白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白，但患者不出现水肿。
白蛋白的定量测定有助于对肝脏疾病如肝硬化的诊断与监视。
此外，白蛋白量反映了个体的健康与营养状况，因此可用于营养不良的诊断及老年住院患者的预后评估。
14. 线性范围：2～60g/L
15. 超出范围结果处理本法线性上限为60g/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。