果糖含量的测定
HPLC-RID法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖含量
分析检测HPLC-RID法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖含量赵 芳（晋中市综合检验检测中心，山西晋中 030600）摘 要：建立了高效液相色谱-示差折光检测法（High Performance Liquid Chromatography Differential Refractive Detector，HPLC-RID）测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖5种还原糖含量的分析方法。
蜂蜜试样用水提取，摇匀过滤后，经Kromasil 100-5-NH2色谱柱分离，用示差折光检测器测定。
结果表明，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖在1.0～10.0 mg/mL线性关系良好，5种还原糖的方法检出限均为0.5 g/100 g，加标回收率为82.4%～109.7%，相对标准偏差RSD为0.87%～3.77%。
该方法前处理过程简单、准确度高、精密度好，适用于蜂蜜中5种还原糖的定量检测。
关键词：蜂蜜；还原糖；高效液相色谱-示差折光检测器法Determination of Fructose, Glucose, Sucrose, Maltose andLactosein Honey by HPLC-RIDZHAO Fang(Jinzhong General Inspection and Testing Centre, Jinzhong 030600, China) Abstract: The method was established for the determination of fructose, glucose, sucrose, maltose and lactose in honey by HPLC-RID. Honey samples were extracted with water, shaken and filtered, separated by Kromasil 100-5-NH2 chromatographic column and determined by differential refractive detector. The results showed that the linear relationship among fructose, glucose, sucrose, maltose and lactose was good in the concentration range of 1.0～10.0 mg/mL. The detection limits of the five reducing sugars were 0.5 g/100 g, the spiked recoveries were 82.4%～109.7%, and the relative standard deviation RSD was 0.87%～3.77%. The method has the advantages of simple pretreatment process, high accuracy and good precision. It is suitable for the quantitative determination of the above five reducing sugars in honey.Keywords: honey; reducing sugar; high performance liquid chromatography differential refractive detector蜂蜜中富含多种糖类、氨基酸、维生素等营养成分，清甜爽口、老少皆宜，饮用蜂蜜具有缓解疲劳、有益身体健康和抗菌消炎、保养皮肤的功效[1-3]。
不同水果中还原糖含量的测定【参考借鉴】
实验报告——不同水果中还原糖的含量测定与比较一、目的1.熟悉还原糖测定的基本原理；2.熟练掌握用3,5二硝基水杨酸法测定还原糖的方法；3.测定并比较常见水果中的还原糖含量，对平时食用提供参考。
二、原理1.搜集相关资料知，常见水果（如：葡萄、柑橘、苹果、梨）中均含有较为丰富的还原糖，即单糖（如葡萄糖、果糖）和某些寡糖（如麦芽糖等），它们含有游离的醛基或酮基，具有还原性。
2.3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的原理：还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖含量。
三、实验器材材料：新鲜水果：黑加仑，砂糖桔，秦冠苹果，皇冠梨；仪器：电子分析天平、水浴锅、紫外可见分光光度计、移液枪、量筒、100mL 容量瓶、吸管、玻璃漏斗、试管若干、研钵、三角烧瓶；试剂：1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，备用；2.DNS试剂：将0.63gDNS和26.2ml2mol/L NaOH溶液，加到50ml含有18.5g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加0.5g结晶酚和0.5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至100ml，存于棕色瓶中备用。
四、实验操作及数据记录㈠材料处理1.取实验材料黑加仑，砂糖桔，秦冠苹果，皇冠梨，经（剥）削皮处理后，各取50g左右，放入研钵中研磨，至匀浆状；2.分别准确称取2g果浆放于三角烧瓶中，并用编号标记，再加入约30ml蒸馏水，用封口膜封口，放入沸水浴中提取30min；3.待冷却后，用分液漏斗过滤，并用蒸馏水冲洗玻璃棒及三角烧瓶，一同转移至100ml容量瓶中并进行标记（黑加仑→A；砂糖桔→B；秦冠苹果→C；皇冠梨→D），用蒸馏水定容，摇匀，即得到四种待测样品液；㈡制作标准曲线取6支干净的试管，分别编号为0、1、2、3、4、5并按下表剂量依次加入相关试剂，进行标准曲线的制作；◆以标准葡萄糖含量(mg)作横坐标, 540nm处吸光值作纵坐标，作出标准曲线㈢测定样品液中还原糖的测定◆取12支干净的试管，分别编号为A1、A2、A3，B1、B2、B3，C1、C2、C3，D1、D2、D3，并按表二剂量依次加入相关试剂，测定样品液的吸光值，操作方法与标准液类似，每种材料做三组。
葡萄糖检测方法
葡萄检测方法汇总与葡萄糖检测相关的国家地方标准汇总：GB/T 30390-2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定高效液相色谱法DB41/T 321-2003 食品添加剂。
葡萄糖含量测定方法NY/T 2279—2012 食用菌中岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、核糖的测定离子色谱法GB/T 22428.1-2008 淀粉水解产品还原力和葡萄糖当量测定GB/T 20379-2006 淀粉衍生物葡萄糖浆、果糖浆和氢化葡萄糖浆成分的测定GB/T 16285—2008 食品中葡萄糖的测定酶—比色法和酶-电极法CNS 2874—N5083 葡萄糖浆及干葡萄糖浆GB/T18932.22—2003蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法GB/T22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定高效液相色谱法YC/T252—2008烟用料液葡萄糖、果糖、蔗糖的测定离子色谱法国家地方标准检测方法汇总表葡萄糖的应用范围葡萄糖作为人体的基本元素和最基本的医药原料,其作用和用途十分广泛。
尤其是随着广大人民生活水平的提高，葡萄糖作为蔗糖的替代用糖应用于食品行业，为葡萄糖的应用开拓了更广阔的领域.（一）发酵工业微生物的生长需要合适的碳氮比，葡萄糖作为微生物的碳源,是发酵培养基的主料，如抗生素、味精、维生素、氨基酸、有机酸、酶制剂等都需大量使用葡萄糖，同时也可用作微生物发酵多聚糖和有机溶剂的原料。
1。
抗生素发酵葡萄糖是医药工业的重要原料，尤其是抗生素发酵必不可少的原料,抗生素中最主要的品种是青、链霉素，而这两种抗生素发酵都是以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液（即葡萄糖液）为碳底物。
链霉素发酵以结晶葡萄糖为主,也可用高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液）;其他如利福平也以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液）为主要碳源；沽霉素、红霉索、麦迪霉素也是以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液（即葡萄糖液）为底物;卡那霉素、庆大霉素等也需要用葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液（即葡萄糖液）为底物.2。
果实品质测定
果实品质测定柑橘果实糖、酸、VC含量的测定方法熊庆娥（四川农业大学）Eleven手打第一部分测定程序及计算公式建议先通读这些方法几遍，借好仪器，想好人员分配后，再到实验室一、样品制备样品果至少10个。
擦净果皮后，用水果刀在每个果对称位置切取两块。
去皮后，用纱布包裹好果肉，挤压果汁于干燥烧杯中，总量不低于100ml。
样品液混合搅拌均匀后，可供测定可溶性固性物（TSS）、糖、酸、Vc。
二、总酸含量的测定1．用移液管将5ml果汁转入100ml三角瓶，加酚酞1—2滴，用0.1N NaOH（以标定浓度为准）滴至溶液出现粉红色不消失至。
记录滴定所消耗NaOH量。
重复3次。
2．总酸含量（g/100ml）=V：NaOH滴定用量 N：NaOH浓度（标定为准）B：被滴定样品用量（5ml） 0.064：柠檬酸折算系数Eleven补充分析：②N表示mol/L。
② 0.064的来历: 折算系数即1ml氢氧化钠溶液摩尔浓度柠檬酸的质量。
NaOH与柠檬酸的反应中，NaOH与柠檬酸的比例是1:3。
柠檬酸的分子量为192.14。
假设氢氧化钠浓度为A mol/L，即 A mol/ml。
1ml氢氧化钠溶液与柠檬酸反应，则柠檬酸用量为A mol。
柠檬酸质量为A192.14=0.06405A。
三、Vc含量的测定1．取果汁5ml，用1%草酸稀释，定容至50ml。
即稀释10倍。
用移液管吸取稀释液5ml至50ml三角瓶，通过半微量滴定管滴入2，6D至溶液呈粉红色且30秒不退色。
记录所耗2，6D用量。
重复三次。
2. Vc含量（mg/100ml）=V: 2,6-D滴定用量 A：每毫升2，6-D相当的Vc量（mg）B：滴定所用样品量（5ml） C: 样品稀释倍数（10）Eleven分析补充：抗坏血酸在溶液中易氧化，在整个测定中，操作应迅速。
滴定开始时，染料迅速加入，直至红色不立即消失，而后逐滴加入，并不断摇动锥形瓶直至终点，整个滴定时间不宜超过2.分钟。
葡萄糖溶液与果糖溶液旋光度的测定
实验课程：有机化学实验实验名称：葡萄糖溶液与果糖溶液旋光度的测定【实验目的】1、学习旋光仪的使用方法。
2、根据测得的旋光度求葡萄糖和果糖含量。
3、学习比旋光度的计算。
【实验原理】某些化学物质由于其分子空间结构的不对称，即手性，会表现出一定的光学特性。
当一束平面偏振光透射过他们时，能使偏振平面旋转一定的角度，这个角度称为旋光度。
使振动平面向右旋转的物质为右旋物质，向左旋转的为左旋物质。
光线从光源经过起偏器，在经过装有旋光性物质的盛液管时，因物质的旋光性致使偏振光不能通过第二个棱镜，必须扭转检偏器，才能通过。
因此要调节检偏器进行配光由标尺盘上移动的角度，可以指示出检偏镜的转动角度，即为该物质在此浓度时的旋光度。
一个化合物的旋光性，可用它的比旋光度来表示。
物质的旋光度与溶液的浓度、溶剂、温度、盛液管长度和所用光源的波长都有关系。
纯溶液的比旋光度==溶液的比旋光度==*100[Α]表示旋光性物质在温度T，光源波长为Λ时的比旋光度。
T为测定时的温度Λ为光源波长Α为标尺盘转动角度的读数（即旋光度）L为样品管的长度C为浓度（1ML溶液中所含样品的克数）【实验器材与药品】器材：旋光仪药品：葡萄糖溶液（待测）=+52.5°果糖溶液（待测）=-92°【实验步骤】（一）仪器预热接通电源，打开开关，预热5min使钠光灯发光正常(稳定的黄光)后即可开始工作。
（二）旋光仪零点的校正将盛液管洗干净，装上蒸馏水使液面管口，将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好，旋上螺帽，不要过紧，使玻璃盖产生扭力管内产生空隙，影响旋光。
擦干放入旋光仪,旋转粗动、微动，手轮使视野内Ⅰ和Ⅱ部分的亮度均匀一致，记下读数。
重复操作至少5次，取其平均值，若零点相差太大，应重新校正。
本实验没有空的盛液管，校正时不放入盛液管，其他操作一致。
ⅠⅡⅠⅠⅡⅠⅠⅡⅠ不正确不正确正确亮度不均匀一致亮度不均匀一致亮度均匀一致（三）旋光度的测定在桌面上有已装溶液的盛液管，分别取盛液管，测旋光度。
蔗糖组成的实验报告
一、实验目的1. 了解蔗糖的化学组成及其特性。
2. 掌握利用化学方法分析蔗糖组成的原理和方法。
3. 培养实验操作技能，提高化学实验素养。
二、实验原理蔗糖（C12H22O11）是一种二糖，由葡萄糖和果糖通过糖苷键连接而成。
在实验中，我们可以通过水解蔗糖，然后分别测定水解产物葡萄糖和果糖的含量，从而了解蔗糖的组成。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蔗糖、浓硫酸、无水乙醇、氢氧化钠溶液、葡萄糖标准溶液、果糖标准溶液、蒸馏水、滴定管、锥形瓶、试管、量筒、移液管、酸式滴定管、酸式滴定瓶、pH计、电子天平、加热器、旋转蒸发仪、旋光仪等。
2. 试剂：硫酸、氢氧化钠、盐酸、葡萄糖标准溶液、果糖标准溶液、硫酸铜、碘化钾、淀粉指示剂等。
四、实验步骤1. 葡萄糖和果糖的制备（1）称取一定量的蔗糖，加入适量的蒸馏水，溶解。
（2）将溶解好的蔗糖溶液转移至锥形瓶中，加入适量的浓硫酸，搅拌均匀。
（3）将锥形瓶置于加热器上，加热至沸腾，保持沸腾状态约30分钟。
（4）将沸腾后的溶液冷却至室温，用氢氧化钠溶液中和至pH值为7。
（5）将中和后的溶液转移至旋转蒸发仪中，蒸去大部分水分。
（6）将蒸干后的溶液用无水乙醇溶解，得到葡萄糖和果糖的混合溶液。
2. 葡萄糖和果糖含量的测定（1）葡萄糖含量的测定①用移液管准确移取一定量的葡萄糖标准溶液，加入适量的蒸馏水，溶解。
②用移液管准确移取一定量的葡萄糖和果糖混合溶液，加入适量的蒸馏水，溶解。
③用酸式滴定管准确加入一定量的硫酸铜溶液，搅拌均匀。
④用酸式滴定瓶准确加入一定量的碘化钾溶液，搅拌均匀。
⑤用淀粉指示剂滴定至溶液变为蓝色，记录滴定所消耗的碘化钾溶液体积。
⑥根据滴定所消耗的碘化钾溶液体积，计算葡萄糖含量。
（2）果糖含量的测定①用移液管准确移取一定量的果糖标准溶液，加入适量的蒸馏水，溶解。
②用移液管准确移取一定量的葡萄糖和果糖混合溶液，加入适量的蒸馏水，溶解。
③用酸式滴定管准确加入一定量的硫酸铜溶液，搅拌均匀。
果聚糖测定
果聚糖的测定方法
1．试剂
(1) 0.182g/L果糖标准溶液：称取0.0182g分析纯果糖(预先在55 ℃下真空干燥至恒重)，用少量蒸馏水溶解后定容至100mL，冰箱保存备用。
(2) 0.5g/L间苯二酚(A 试剂)：称取0.05g间苯二酚，溶于100 mL蒸馏水中，贮存于冰箱中备用。
(3) 0.216g/L 硫酸铁铵[ FeNH4(SO4)2.12H2O ，B试剂] ：称取0.1082g FeNH4 (SO4)2·12H2O ,溶于500mL浓盐酸中,密封储存备用。
2. 方法
2.1标准曲线的绘制
2.2 样品的测定根据Seliwanoff反应,硫酸铁铵为催化剂，多糖在酸性条件下生成果糖，与间苯二酚生成橘红色配合物，该配合物的颜色深浅在一定范围内与果糖的量成正比。
吸取适量样液加水稀释至1 mL ，加入1.5 mLA试剂，1.5 mL B 试剂，在80 ℃水浴上加热50 min ，冷却在473 nm 测定吸光度值。
3. 计算
果聚糖含量（%）=（C×V/a×n）/(W×106)
式中C---标准方程求的果聚糖量(微克)。
a---吸取样品液体积(ml)
V---提取液(ml)
n---稀释倍数(ml)
W---重量（g）。
高效液相色谱法测定烟草中的果糖、葡萄糖和蔗糖
高效液相色谱法测定烟草中的果糖、葡萄糖和蔗糖黄翼飞【摘要】以72%(体积比)乙腈/28%水预混合溶液作流动相,High-Performance Carbohydrate卡套柱作色谱柱,等梯度洗脱,采用带示差折光检测器的高效液相色谱仪测定了烟草中的果糖、葡萄糖和蔗糖含量.结果表明:方法的日内精密度和日间精密度的范围分别为0.46%～1.54%和0.96%-4.74%,回收率97.0%～102.3%,果糖、葡萄糖和蔗糖的检出限(LOD)分别为95,107和105μg/mL(s/N=3∶1),可以满足烟草中果糖、葡萄糖和蔗糖含量的日常检测要求.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2010(000)001【总页数】4页(P40-43)【关键词】高效液相色谱;示差折光;果糖;葡萄糖;蔗糖;烟草【作者】黄翼飞【作者单位】广东中烟工业有限责任公司技术中心,广州市中山七路333号,510145【正文语种】中文【中图分类】TS411.1目前,烟草中果糖、葡萄糖和蔗糖的测试方法主要有液相色谱法和离子色谱法。
离子色谱法的测定灵敏度高[1],但包括柱平衡在内的色谱运行时间需 1 h以上,而且对色谱柱和流动相管路要进行较多的维护工作,样品处理时间也相对较长,不利于实验室日常检测效率的提高[2]。
YC/Z 240-2008[3]建议制定这 3种糖的高效液相色谱测定方法。
高效液相色谱结合示差折光检测 (HPLC2R I)是一种直接、快速、成本低的测定方法。
现今的 HPLC2R I仪器已经对流速恒定和光学元件温度控制有了一定的改进,有效地提高了检测稳定性。
HPLC2R I法广泛应用于糖类分析[426],对果糖、葡萄糖和蔗糖的检测结果可靠。
示差折光检测器(R ID)的灵敏度相对较低,但烟草中的葡萄糖、果糖和蔗糖含量较高,R ID的灵敏度可以满足日常分析要求。
蔗糖、D(-)-果糖、D-(+)-无水葡萄糖 (纯度≥99.5%,Sigma2Aldrich公司);乙腈(纯度≥99.9%,MERCK公司);超纯水;烟草样品(广东中烟工业有限责任公司提供)。
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果糖含量的测定
摘要
本文介绍了果糖含量的测定方法。
果糖是一种重要的简单糖，在食品工业、药品研发等领域中应用广泛。
准确测定果糖含量对于保障产品质量、评估食品安全以及药物研发具有重要意义。
本文以色谱法为例，介绍了果糖含量测定的步骤和操作，以及可能遇到的问题和解决方案。
1.背景
果糖是一种单糖，常见于水果、蜂蜜和一些糖类产品中。
它是一种低热值的天然甜味剂，味道甜美且易溶于水，因此广泛应用于食品工业中的各种食品和饮料中。
果糖的含量不仅与产品的风味和甜度密切相关，还与产品的质量和安全性有关。
因此，及时准确地测定果糖的含量对于食品生产和研发具有重要意义。
2.测定方法
果糖的含量可以通过多种方法进行测定，包括高效液相色谱法、气相色谱法和光学旋光法等。
下面以色谱法为例，介绍果糖含量的
测定方法。
2.1 仪器与试剂
使用的仪器主要包括高效液相色谱仪、色谱柱、检测器和样品
处理器等。
常用的试剂包括纯水、果糖标准溶液和色谱试剂。
2.2 步骤
1.样品处理：将待测样品进行处理，去除杂质和干扰物质。
可
以采用过滤、离心、降解等方法。
2.标准曲线制备：准备一系列不同浓度的果糖标准溶液，并使
用色谱法进行测定。
根据浓度与峰面积的关系绘制标准曲线。
3.样品测定：将经过处理的样品注入色谱仪进行测定，记录峰
面积。
4.数据处理：利用标准曲线计算样品中果糖的含量。
2.3 遇到的问题和解决方案
在进行果糖含量测定时，可能会遇到一些问题，如峰分离不清晰、峰形异常或噪声干扰等。
以下是对一些常见问题的解决方案：
1.峰分离不清晰：调整柱温、流速、溶剂比例等参数，优化分
离条件。
2.峰形异常：检查仪器是否正常运行，确保试剂和仪器的质量。
3.噪声干扰：检查仪器和试剂是否存在污染，进行清洗和更换。
3.结论
色谱法是一种常用的测定果糖含量的方法，通过标准曲线计算
样品中果糖的含量。
对于食品行业和药物研发而言，准确测定果糖
含量具有重要意义，能够保证产品质量和安全性。
在进行果糖含量
测定时，需要仔细操作、注意参数优化和仪器维护，以获得准确的测定结果。