链霉菌操作手册
一种链霉菌及其发酵产乐普霉素b的方法与流程
一种链霉菌及其发酵产乐普霉素b的方法与
流程
链霉菌是一种常见的细菌，具有潜在的药物研发价值。
本文介绍了一种链霉菌
及其发酵产乐普霉素B的方法与流程。
首先，选择适合的链霉菌菌株。
链霉菌菌株的选择对于乐普霉素B的产量和质量非常重要。
通常，根据菌株的菌落形态、生长速度和产物产量等特性进行筛选，以获得高产量的菌株。
接下来，进行链霉菌的培养。
链霉菌属于革兰氏阳性菌，通常采用液态发酵的
方法进行菌株的培养。
需要选择合适的培养基，添加适量的碳源、氮源和矿物盐等，以提供菌株生长所需的营养物质。
发酵产乐普霉素B的关键是调节菌株的生长条件。
菌株在适宜的温度、pH值
和气体供应下能够获得更高的产量。
通常，发酵过程中要严格控制温度在28-32摄
氏度之间，pH值在6-8之间，并为菌株提供充足的氧气。
另外，添加适量的诱导剂也是促进乐普霉素B产量的重要措施。
通常，通过向培养基中添加特定的诱导剂，如乐普霉素B的前体物质或其类似物，可以刺激链
霉菌产生更多的乐普霉素B。
最后，经过一定时间的发酵培养，链霉菌菌体中的乐普霉素B会达到一定的浓度。
此时，可以采用适当的分离和提纯方法，如离心、过滤和柱层析等技术，以获得纯度较高的乐普霉素B产物。
总之，通过选择适合的链霉菌菌株，进行合理的发酵培养条件和添加适量的诱
导剂，可以高效地产生乐普霉素B。
这种方法与流程为乐普霉素B的生产提供了
可行的方案，对于药物研发和生产具有重要意义。
链霉菌亚甲蓝染色法实验报告
链霉菌亚甲蓝染色法实验报告实验：链霉菌亚甲蓝染色法实验一、实验目的：1.了解链霉菌的形态特征；2.掌握链霉菌亚甲蓝染色法的操作步骤；3.观察链霉菌在显微镜下的染色效果。
二、实验原理：链霉菌是一种常见的革兰氏阳性细菌，其形态特征为在培养基上形成长而曲折的链状菌丝。
链霉菌亚甲蓝染色法是一种常用的染色方法，用于观察链霉菌的形态结构。
该方法利用亚甲蓝染料，将链霉菌染色后，在显微镜下观察其形态特征。
三、实验材料与方法：1.实验材料：（1）链霉菌培养基；（2）链霉菌培养物；（3）亚甲蓝溶液（0.5%）；（4）显微镜；（5）玻璃片。
2.实验步骤：（1）取链霉菌培养物，加入适量的生理盐水进行稀释，制备菌液。
（2）取一片玻璃片，用酒精消毒并晾干。
（3）滴取一滴链霉菌菌液于玻璃片上，用火焰消毒的针头将滴液均匀涂抹于玻璃片上。
（4）将涂有链霉菌菌液的玻璃片，放置在亚甲蓝溶液中浸泡5分钟。
（5）取出玻璃片，用水冲洗干净。
（6）将玻璃片放在显微镜下，使用100倍的镜头观察链霉菌的形态结构。
四、实验结果：在显微镜下观察到的链霉菌呈现为一条条长而曲折的链状菌丝，菌丝之间相互交织，形成复杂的网络状结构。
链霉菌染色后呈现为蓝色，菌丝清晰可见。
五、实验讨论：链霉菌亚甲蓝染色法是一种简单而有效的染色方法。
亚甲蓝是一种碱性染料，具有较强的亲和力，能够与链霉菌细胞壁上的负电荷结合，使菌丝呈现出蓝色。
这种染色方法可以清晰地显示链霉菌的形态结构，有助于对其生长特征和菌株的鉴定。
在本实验中，我们观察到链霉菌在显微镜下的形态结构，即长而曲折的链状菌丝。
链霉菌的菌丝之间交织在一起，形成了复杂的网络状结构。
这种形态特征是链霉菌的重要鉴定特征之一，可以用于区分链霉菌和其他细菌。
六、实验总结：通过本次实验，我们了解了链霉菌的形态特征，并掌握了链霉菌亚甲蓝染色法的操作步骤。
链霉菌亚甲蓝染色法是一种常用的染色方法，能够清晰地显示链霉菌的形态结构。
通过染色后的链霉菌菌丝呈现出蓝色，使其在显微镜下更容易观察和鉴定。
链霉素过敏试验护理规范
链霉素过敏试验
链霉素的不良反应除过敏反应外还有中毒反应，也容易引起过敏性休克，其发生率仅次于青霉素，但病死率较青霉素高，其原因除过敏因素外，还与高敏休质及中毒因素有关。
因此，应引起重视。
一、皮试液的配制
皮内试验液2500u/ml的链霉素等渗盐水，皮内试验的剂量0.1ml(250u )。
具体配制如下：
链霉素1瓶为 lg(100万u)，用等渗盐水3.5ml溶解4ml，每ml含0.25g(25万u)
取0.1ml加等渗盐水至1ml，每ml含2.5万u。
取0.1ml加等渗盐水至1ml，每ml含2500u 。
二、试验方法
取链霉素试验0.1ml(含250u)作皮内注射，观察20分钟后判断结果。
三、试验结果判断
同青霉素过敏试验。
四、过敏反应的临床表现
1．同青霉素过敏反应，但较少见。
2．伴有全身麻木、肌肉无力、抽搐、眩晕、耳鸣、耳聋等毒性反应。
链毒素过敏反应的机理系药物本身的毒性作用与所含杂质链霉素胍和二链梅胺）具有释放组织胺的作用，使小动脉和毛细血管扩张，血压下降，休克；链霉素与Ca2+结合，致使血钙降低，病人表现麻木、头晕、抽搐，最初仅口周麻木，严重者四肢、面部、头皮等全身麻木，甚至四肢抽动；阻滞神经、肌肉接头作用，可
发生呼吸抑制和四肢软弱；对第八对脑神经的影响引起眩晕、耳鸣、耳聋等，多呈进行性或永久性。
五、过敏反应的急救措施
1．同青霉素。
2．抽搐时予10％葡萄糖酸钙10ml静脉缓慢推注，小儿酌情减量。
3．肌肉无力、呼吸困难者按医嘱给予新斯的明0.5~1mg皮下注射，必要时予0.25mg静脉注射。
链霉素诱变育种的方案
• 2.菌丝过滤法
• 适用于真菌和放线菌 • 作用于丝状菌的孢子 • 3.高温杀菌法
• 适用于芽孢菌类
• 作用于芽孢菌类的芽孢和营养体
（三）、检出营养缺陷型
① 夹 层 培 养 法
② 限量补充培养法
③ 影印接种法
④ 逐个检出法
1.夹层培养法（延迟补给法）
2.限量补充培养法
3.影印接种法
• 需要注意两点
• 第一 防止菌落扩散和蔓延，在培养基中加入脱氧 胆酸钠 • 第二 为了克服孢子扩散而带来不纯现象，在操作 方法上改进。
4.逐个检出法
（四）、营养缺陷型的鉴 定
• 1 、鉴定方法
• 一种方法是加入一种物质测定多株缺陷型菌株 • 一种方法是测定一种缺陷型菌株对许多生长因子 的需求情况称为生长谱法
（一）、营养缺陷性的诱 变
筛选根据主次分为初筛和复筛
• 初筛：以多为主，尽量扩大筛选范围。 • 复筛：以质和精为主，反复多次，结合自然分离， 选育高产或其他优良菌株。 • 多级水平筛选：由于诱变产生高产突变株的频率很 低，而且实、验误差又很难避免，所以筛选工作中 常用多级筛选，一利于优良菌株的获得
（一）、初筛
• 平板菌落预筛 • 根据特定代谢产物的特异性，利用琼脂平板进行 筛选和活性粗测的方法，大幅度扩大有效筛选量，提 高筛选工作效率。 • 摇瓶发酵筛选 • 优点：不管种子或发酵过程的生产条件、生理条 件如何，都与发酵罐大生产条件相近，可以模拟进行。 缺点：在突变率小的情况下，如果菌落挑 取少，很难筛选到理想的突变株
（三）、影响诱变效果的因素
• （1）菌种遗传特性 • 各菌株因遗传特性不同，对诱变剂敏感性也不一 • 样。 • （2）菌体细胞壁结构 • 丝状菌孢子壁的厚度及表面的蜡质会阻碍诱变剂渗 • 入细胞。 • （3）环境条件的影响 • 环境条件的影响包括： • ①诱变前预培养和诱变后培养 • ②温度、pH、氧气等外界条件对诱变效应的影响
链球菌检验作业指导书(副本)
链球菌检验作业指导书1主题内容与适用范围本作业指导书规定了链球菌的检验方法。
本作业指导书适用于患者的生物样品（如：尿液、脓液、脑脊液、痰等）及医院物体表面涂抹样本及使用中消毒剂链球菌的检验。
2引用标准GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂全国临床检验操作规程（第三版）临床微生物学诊断与图解（第二版）周庭银编著3 设备和材料3.1 无菌棉拭子。
3.2 无菌5cm×5cm规格板。
3.3 温箱：36±1℃，42℃。
3.4 显微镜。
3.5 灭菌广口瓶：500mL。
3.6 灭菌三角烧瓶：500mL，250mL。
3.7 灭菌吸管：10mL、1mL。
3.8 天菌平皿：90mm×15mm。
3.9 灭菌小试管：内径3mm，长5cm。
3.10 灭菌毛细管。
3.11 无菌注射器：5mL、10mL3.12 橡皮乳头。
3.13 载玻片。
3.14 酒精灯。
3.15 灭菌金属匙或玻璃棒。
3.16 接种棒、镍铬丝。
3.17 试管架、试管篓。
4 培养基和试剂4.1 1%葡萄糖肉汤：按GB/T 4789.28中4.1规定。
4.2 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.3 SCDLP液体培养基：按卫生部《消毒技术规范》附录A.23中规定。
4.4 麦康凯琼脂：按GB 4789.24中4.4规定。
4,5 6.5%氯化钠肉汤：见附录A1。
4.6 马尿酸钠培养基：按GB/T 4789.28中3.9规定。
4.7 过氧化氢酶试验：按GB 4789.28中3.21规定。
4.8 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28中3.13规定。
4.9 氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB 4789.28中3.12规定。
4.10 糖发酵管：按GB 4789.28中3.2规定。
4.11 溶血性检查：见附录A1。
4.12 杆菌肽敏感试验：见附录A4。
4.13 CAMP 试验：见附录A5。
4.14 胆汁-七叶苷试验：见附录A64.15 6.5%NaCl生长试验：见附录A7。
链霉素过敏实验法实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实际操作，了解和掌握链霉素过敏实验法的原理、步骤及注意事项，提高对链霉素过敏反应的识别和处理能力，确保临床用药安全。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX医院检验科四、实训对象XX医院呼吸内科患者，男，30岁，因肺部感染入院治疗。
五、实训原理链霉素过敏实验法是一种检测患者对链霉素是否过敏的实验方法。
其原理是利用链霉素与人体内的特异性抗体结合，形成抗原抗体复合物，通过检测这种复合物来判定患者是否对链霉素过敏。
六、实训材料1. 链霉素试剂2. 生理盐水3. 注射器及针头4. 皮试盘5. 医用酒精6. 医用棉签7. 医用记录本七、实训步骤1. 准备阶段- 确认患者病情及用药史，了解患者是否有链霉素过敏史。
- 准备实验所需材料，包括链霉素试剂、生理盐水、注射器、针头、皮试盘、医用酒精、医用棉签等。
2. 皮试操作- 在患者前臂内侧选择合适部位进行皮内注射。
- 将1ml生理盐水注入皮内，形成皮丘。
- 然后将0.1ml的链霉素试剂注入皮丘内，形成另一皮丘。
- 注射后15分钟观察结果。
3. 观察结果- 观察皮丘局部是否有红晕、硬结、风团等过敏反应。
- 若出现红晕直径大于1cm，硬结直径大于3cm，或有伪足、痒感等过敏反应，则判定为阳性。
- 若皮丘无红晕、硬结、风团等过敏反应，则判定为阴性。
4. 记录结果- 将实验结果详细记录在医用记录本上，包括患者姓名、年龄、性别、过敏实验结果等。
5. 注意事项- 实验前应详细询问患者病史，了解患者是否有药物过敏史。
- 实验过程中应严格执行无菌操作，避免交叉感染。
- 实验后应密切观察患者反应，如出现过敏反应应立即进行处理。
- 实验结果应准确记录，为临床用药提供依据。
八、实训结果本次实训中，患者皮试结果为阴性，表明患者对链霉素无过敏反应。
九、实训体会通过本次实训，我对链霉素过敏实验法的原理、步骤及注意事项有了更深入的了解。
以下是我的一些体会：1. 链霉素过敏实验法是一种简单、有效的检测方法，有助于提高临床用药安全性。
印片法链霉菌实验报告
印片法链霉菌实验报告
实验目的：
本实验旨在研究印片法对链霉菌进行分离和鉴定的效果，为链霉菌的研究提供实验数据和参考。
实验材料：
1. 链霉菌培养基
2. 无菌培养皿
3. 恒温培养箱
4. 实验室常用器材和试剂
实验步骤：
1. 准备工作：将链霉菌培养基培养至适宜的生长状态，确保培养基无污染。
2. 取一块无菌的培养基，倒入培养皿中，并均匀摊开。
3. 取一支火针，在火焰中消毒并冷却后，将其沾取链霉菌培养液的菌落，然后将其均匀涂抹在培养基上。
4. 用无菌的铁环或火针，在链霉菌菌落上进行串联接种，即将链霉菌菌落划过培养基表面，使菌落由密集到稀疏排列。
5. 将培养皿盖好，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，通常为24-48小时。
6. 观察菌落生长情况，并记录其形态、颜色、直径等特征。
7. 根据菌落的形态特征，进行初步的链霉菌鉴定。
8. 如有需要，可进行进一步的生化实验或分子生物学实验，以确认链霉菌的鉴定结果。
实验结果：
根据实验观察，链霉菌在培养基上形成了典型的菌落，呈现出特定的形态和颜色。
菌落直径在一定范围内，具有一定的变异性。
初步鉴定结果表明，该菌落为链霉菌。
实验结论：
本实验通过印片法成功分离和鉴定了链霉菌。
印片法是一种简单、快速且有效的方法，可用于微生物的分离和鉴定。
该实验结果可为链霉菌的进一步研究提供参考和基础数据。
链霉素皮试液的配制方法
链霉素皮试液的配制方法链霉素皮试液是一种常用的皮肤过敏试验药物，用于检测患者对链霉素的过敏情况。
正确的配制方法对于保证试验的准确性和安全性至关重要。
下面将介绍链霉素皮试液的配制方法，希望能对您有所帮助。
首先，准备所需材料和器具。
配制链霉素皮试液所需的材料包括链霉素粉末、生理盐水、酒精棉球、注射器、烧杯、橡胶塞和试管等。
在配制过程中，需要注意材料的干净和消毒，以避免外界污染对试验结果的影响。
其次，按照一定的比例将链霉素粉末和生理盐水混合。
通常情况下，链霉素皮试液的配制比例为1:1000，即每毫升生理盐水中加入1毫克的链霉素粉末。
在实际操作中，可以根据需要调整配制比例，但一定要确保配制的浓度准确无误。
然后，将链霉素粉末加入到烧杯中，并逐渐加入生理盐水。
在加入生理盐水的过程中，需要充分搅拌使链霉素充分溶解，直至完全溶解。
搅拌的过程中要注意避免空气的进入，以免氧化影响链霉素的稳定性。
接着，将配制好的链霉素皮试液倒入试管中，并用橡胶塞封闭。
封闭试管后，需要在试管表面标注配制日期和有效期限，以便及时使用和管理。
最后，配制好的链霉素皮试液需要储存在阴凉干燥的地方，并避免阳光直射和高温。
在使用前，需要检查试管是否有沉淀或变色等异常情况，如有异常情况应及时淘汰。
另外，在使用时也需要遵循相关的操作规程和安全注意事项，以确保试验的准确性和安全性。
总之，正确的链霉素皮试液配制方法对于保证过敏试验的准确性和安全性至关重要。
希望以上介绍的配制方法能够对您有所帮助，谢谢阅读！以上就是链霉素皮试液的配制方法，希望对您有所帮助。
发酵工程制药实验-链霉菌发酵方案
实验2灰色链霉菌的活化一、实验目的学习制备高氏一号斜面培养基的方法以及斜面接种技术。
二、实验原理高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。
三、实验试剂与仪器1. 菌种：灰色链霉菌；2. 培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，硫酸镁0.5 g，硫酸亚铁0.01 g，琼脂20 g，水1000毫升，PH7.2—7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中）；3. 器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。
四、实验步骤1. 高氏一号培养基的制备（1）按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。
趁热分装于18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。
（3）分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。
2. 斜面接种接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。
为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。
一般是在无菌室内，超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。
（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。
（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。
在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。
划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。
注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。
（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。
接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。
（4）斜面置于28℃恒温箱中，培养5～6d观察结果。
实验3 灰色链霉菌的摇瓶种子制备一、实验目的学习制备摇瓶种子培养基的方法以及种子扩大培养技术。
链霉菌基因转移的方法
链霉菌基因转移的方法链霉菌基因转移是一种将DNA从一个链霉菌转移到另一个链霉菌的技术。
这种技术可用于研究链霉菌的遗传学和生物学特性，并有潜力用于开发新的抗生素和其他医疗用途。
下面是一篇介绍链霉菌基因转移方法的600字的文章。
链霉菌是一类广泛存在于土壤中的细菌，其在医学和工业领域中具有广泛应用。
然而，由于抗生素的广泛使用，链霉菌已经出现了许多抗药性品系。
因此，研究链霉菌的遗传学和生物学特性及开发新的抗生素就显得非常重要。
链霉菌基因转移技术是一种通过垂直传递DNA(水平基因转移除外),实现链霉菌之间互相转移DNA片段而创造出来的技术。
这种技术的本质是将源链霉菌中的目标DNA片段转移到宿主链霉菌中，从而使宿主链霉菌获得新的遗传信息和功能。
目前，有两种主要的链霉菌基因转移方法：穿孔体介导转移和转租介导的转移。
穿孔体介导转移是一种直接将目标DNA大量移植到受体链霉菌细胞内的方法，该过程通过细胞壁上的穿孔体完成。
转租介导的转移则依赖于质粒或噬菌体粒子的传递，这些粒子在源链霉菌细胞与宿主链霉菌细胞之间进行介导。
穿孔体介导转移：穿孔体介导转移需要以下步骤:1.构建包含目标DNA的质粒:在将DNA转移到宿主链霉菌之前，需要将目标DNA插入质粒中。
质粒是圆形双链DNA分子，在链霉菌基因转移中使用的质粒通常具有链霉菌和其他已知类型的细菌共同拥有的特殊序列。
2.培养链霉菌:源菌株和宿主菌株都需要进行培养，以确保细胞生长和适宜的质量准备。
3.接种源菌:将源菌株接种到一定数量的培养液中，以使链霉菌细胞增殖并产生目标DNA。
4.收集表达目标DNA的源菌细胞:通过离心等方法将源菌细胞收集到单独一盘中，以便进行下一步处理。
5.处理源菌细胞:源菌细胞需要被置于一个样品中，两边有电极，在通过一定电压传导下，细胞壁上的穿孔体会在细胞膜的通道中向宿主链霉菌传输目标DNA。
6.培养和筛选宿主链霉菌:转移到宿主细胞的DNA可能会获得宿主细胞的新功能，因此，宿主细胞需要被筛选出来，以确认是否达到预期的结果。
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链霉菌室实验操作手册（2003 年）第一章培养基抗生素生长因子 (3)常用抗生素及其使用浓度 (3)LB （Luria-Bertani ）培养基 (3)LA (3)基本培养基（MM ） (3)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用 (4)YEME（酵母膏-麦芽膏培养基）1L （液体培养链霉菌） (4)TSBY （1L）（液体培养链霉菌） (4)MS培养基 (5)2CMY 培养基（用于井岗的接合转移） (5)YMS培养基（阿维，井岗产孢） (5)YD培养基 (5)生长因子补充物的使用浓度 (6)第二章DNA 基本操作 (7)大肠杆菌质粒的抽提 (7)酶连反应 (7)DNA片段凝胶回收 (8)DNA纯化 (9)E.coil总DNA的提取 (9)链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进） (10)去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明） (10)AT克隆（详见说明书） (10)Souther n Blot (11)第三章PCR及相关技术 (13)PCR (13)PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429重叠延伸技术） (14)PCR定点诱变（Dpnl法） (14)第四章基因片段转移技术 (15)大肠杆菌CaCl 2法制备感受态细胞及DNA转化 (15)DNA转化 (15)大肠杆菌质粒的快速检测 (15)接合转移（详见英文《手册》249页） (16)链霉菌原生质体的制备 (16)链霉菌原生质体的转化 (17)PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 (17)第五章RNA操作技术 (19)链霉菌总RNA的抽提 (19)链霉菌的RT-PCR （promega RT kit ） (19)第六章蛋白质基本操作技术 (21)SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色 (21)大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）： (21)链霉菌总蛋白扌由提： (22)大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）： (22)Western Blot (23)第七章遗传作图相关技术 (25)链霉菌孢子悬液的制备 (25)链霉菌中NF的证明 (25)孢子杂交 (25)在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因 (25)第八章其他技术 (27)链霉菌菌种保藏 (27)检测链霉菌淀粉酶的活性 (27)第一章培养基抗生素生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度（mg/ml）MM 使用终浓度（卩链霉菌g/ml）大肠杆菌LA 或LB 2CM YBME氨苄青霉素Ampicillin, Amp bla100R R R50-100氯霉素Chloramphenicol, Cml cat25（无水乙醇配）10——25潮霉素Hygromycin, Hyg hyg501025—50卡那霉素Kanamycin, Km aac 或aph252?50—50壮观霉素Spectinomycin, Spc aadA5050505050链霉素Streptomycin, Str str501025—25硫链丝菌素Thiostrepton, Thio tsr25(DMSO 配)510 2.5不敏感红霉素Erythomycin, Ery ermE100100——20阿泊拉霉素Apramycin, Am aac (3) IV5010505030-50 *-表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考！！！*R表示不敏感*Km和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。
*Hyg易见光分解，应用锡箔纸包好。
*有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, VioLB（Luria-Bertani ）培养基胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 5g，葡萄糖1g，蒸馏水加至1000ml，pH7.3左右（灭菌后第一次用时还要调一次）LALB中加入终浓度为 1.5-2%的琼脂粉（不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%）。
*做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基（MM溶液：L-天冬酰胺0.5g，K2HPO4 0.5g,MgSO4・7H2O 0.2g,FeSO4 -7H2O 0.01g,蒸馏水至1000ml将每250ml溶液分装到装有 2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50 % 葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。
配置MM 的琼脂有lab agar、Ice agar（IA）R5（ 1L）链霉菌原生质体转化时用蔗糖K2SO4MgCl 2 • 6H2O葡萄糖Difco酪蛋白氨基酸微量元素溶液Oxoid酵母提取物TES加蒸馏水至103g 0.25g 10.12g 10g 0.1g2ml5g 5.73g 1000ml称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。
使用时，将培养基融化，每瓶中加入：KH 2PO4(0.5%) CaCl2 ・2H2O(5M) L-脯氨酸(20%)2.5ml 1ml3.75mlNaOH（1M）调pH 至7.3对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）YEME酵母膏-麦芽膏培养基）1L （液体培养链霉菌）Oxoid酵母提取物3gOxoid 蛋白胨Tryptone 5g麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）3g葡萄糖10g蔗糖* 340g蒸馏水至1000ml高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113- 114° C, 15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。
）MgCl 2 • 6H2O（2.5M）2ml/L制备原生质体时，还要加入：甘氨酸（20%）* 25ml/L*蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
*甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）Oxoid胰胨豆汤粉（TSB）30g蔗糖* 340gOxoid酵母抽提物5g蒸馏水至1000ml*不同菌株培养需要不同浓度的蔗糖，蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
培养基将黄豆饼粉加蒸馏水煮2到3小时，用纱布过滤得到滤液，将每250ml滤液分装到装有5g 琼脂，5g甘露醇的500ml三角瓶中，10磅灭菌，使用时调pH7.2-7.3。
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）可溶性淀粉10g胰蛋白胨2gNaCl1g(NH4)2SO42gK2HPO41gCaCO32g无机盐溶液* 1 ml琼脂20g蒸镏水1000 mlPH7.2无机盐溶液（每升）FeSO4 .7H2 O1gMgCl.6 H 2 O1gZn SO4. 7H2 O1gYMS培养基（阿维，井岗产抱）酵母抽提物4g可溶性淀粉4g麦芽糖10gCoCl. .6 H2 O5mg琼脂20g蒸镏水1000 mlPH7.2YD培养基酵母抽提物4g麦芽糖10g葡萄糖4gMgCl2gCaCl 1.5g琼脂15g蒸镏水1000 mlPH7.2生长因子补充物的使用浓度天蓝色链霉菌1258、J1501等都是营养缺陷型菌株，培养这些菌株时一般需向培养基中补加营养因子，使用浓度如表生长因子补充物的使用浓度表化合物储存液（mg/ml）1终作用浓度（卩g/ml）组氨酸（Histidine）1050其它氨基酸27.537腺嘌呤，鸟嘌呤， 1.57.5胸腺嘧啶，尿嘧啶维生素0.10.51.储存液用无菌去离子水配置，8磅火菌后4°C保存。
2.对于半胱氨酸营养缺陷型菌株，补充光氨酸。
第二章DNA基本操作大肠杆菌质粒的抽提苯酚/氯仿溶液抽提法1. 接种5ml LB，37C摇床过夜培养（12小时）2. 离心，3000rpm, 5min去上清3. 振荡混匀沉淀，分装在2个离心管中，spin 一下，吸去上清，加入150卩I的溶液I（50mmol/L 葡萄糖，25mmol/L Tris CI（PH8.0）, 10mmol/L EDTA（PH8.0）在10lbf/in2 （6.895 x 104Pa）高压蒸气下灭菌15min （8磅），贮存于4C）,剧烈振荡5分钟打散菌体（菌体不打散容易在产物中出现较多蛋白）。
4. 加入300卩l溶液II （0.2mol/LnaOH, 1%SDS,用2倍的溶液现配现用）后立即振荡混合均匀，处理2分钟后加入225卩l溶液111（ 5mol/L乙酸钾60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml）混合均匀，12000rpm离心5min，取上清液中于新的离心管。
5. 加120卩l酸性苯酚/氯仿溶液，振荡混匀，12000rpm离心5min ,再取上清液中于新的离心管中。
6. 用120ul氯仿重复操作5。
7. 加等体积的异丙醇或2倍体积的乙醇，混匀，12000rpm离心7min。
8. 沉淀用70%乙醇洗涤两次，每次10min。
50C烘干后加适量无菌去离子水（ddH2O）溶解，-20 C保存。
氯化锂抽提法1. 前四部同苯酚/氯仿溶液抽提法（用Solution I II III处理）2. 加等体积的异丙醇，混匀，沉淀DNA , 12000rpm离心7min。
去上清，尽量去干净。
3. 用少量70%乙醇洗一下（洗去异丙醇），离心去尽酒精，50C烘干沉淀，用适量ddH2O（100ul）充分溶解（可在50度水浴中助溶）后加入4/5体积的氯化锂溶液（浓度约10mol/L ）处理1min沉淀RNA和蛋白。
4. 12000rpm离心5min，取上清液于新的离心管中，用等体积的异丙醇混匀，12000rpm离心8min，去上清。
5. 将沉淀用70%乙醇洗涤两次，每次10min。
50C烘干后加一定量的无菌去离子水（ddH2O）溶解，-20 C保存。
酶连反应一般米用10卩l反应体系：T4连接酶1卩I ,连接酶缓冲液1卩I ,外源片段与载体按DNA摩尔含量3:1加入即可。
如果是粘端连接，则需把外源片段和载体的混合物在50度处理10分钟使粘端变性，然后立即放入冰中5分钟。
平端连接采用14度，粘端连接采用16度，连接4小时以上（一般可过夜）。
*外源片段与载体按DNA摩尔含量为3:1或外源更多。
DNA 片段凝胶回收1试剂盒回收（离心法）（详见说明书）（1）在长波紫外灯下切下含有目标 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小 ,该重量作为一个凝胶体积 ，加DE-A 液 DE-A 溶液体积3个凝胶体积 个凝胶体积 个凝胶体积混匀后于75o C 加热,（低熔点琼脂糖凝胶于 45o C 加热），间断混合，直到凝胶熔化（6-8分钟）. （3）加0.5个DE-A 体积的DE-B 溶液，混匀（是否需调整PH 值，见注意事项1）;当分离的DNA 片段小与400bp 时加入异丙醇至终浓度为20%;⑷ 吸3中的混合液，转移到DNA 制备管,3600rpm 离心1分钟.如制备管中有残留，适当提高 速度,再离心1分钟，去滤液；⑸ 将制备管置回离心管，加0.5ml W1溶液,3600rpm 离心30,弃滤液；⑹将制备管置回离心管，加0.7ml W2溶液,3600rpm 离心30,弃滤液，重复一次；（W2中含有 酒精，应保证瓶子密封。