4_实验四_霉菌的三点接种、真菌的载片培养和个体形态观察(1)
霉菌形态观察实验
霉菌的形态观察实验一．实验目的1．掌握配制合成马铃薯培养基（PDA）的一般方法。
2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。
3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态特征。
二．实验原理1．霉菌霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本节课用载玻片培养观察法。
2．载玻片培养法（小培养法）用无菌操作将培养基琼脂薄层小块（约1cm2）置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。
三．实验器材1．菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉（Penicillium sp.），根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养 2-5d 的斜面培养物。
2. 培养基：马铃薯培养基（PDA）3. 仪器或其他用具：超净台，无菌吸管，接种环，酒精灯，平皿，载玻片，盖玻片， U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50% 乙醇， 20%的甘油，滤纸片，以及显微镜等。
四．实验步骤载玻片培养观察法（小培养法）1．培养小室的准备及灭菌在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一 U 形玻棒，其上放一块洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于 110 ℃ 灭菌20-30min ，不烘干，备用。
2．琼脂块的制作取已灭菌的马铃薯培养基（PDA）无菌操作注入两个已灭菌平皿中，使之凝固成薄层。
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。
观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。
霉菌的培养与形态观察
姓名系年级学号科目题目组别同组者：一、【目的要求】1．学习并掌握霉菌的形态观察法——小室培养法；2．了解四类常见霉菌（青、根、毛、曲霉）的形态特征；3．巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
二、【实验原理】1.霉菌可产生分枝的菌丝体，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据（本次实验观察青霉、曲霉、根霉和毛霉菌四种霉菌）。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
2.观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。
3.载玻片培养观察法（小室培养法）：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。
三、【实验器材】1．菌种：曲霉，青霉，根霉和毛霉培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物2．培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）3.仪器和其他用品：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻璃棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等四、【实验内容】1．配培养基：根据报告后附录准确称取实验所需各种物质的质量，配置PDA培养基150ml，121℃灭菌20分钟；2．培养小室的准备及灭菌：在八个平皿底部各铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再各放一个姓名系年级学号科目题目组别同组者：Ｕ形玻璃棒，其上各放一洁净载玻片和四块盖玻片，盖上平皿盖，加上两个空平皿，包扎后于121℃灭菌30分钟，烘干备用；3．琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基分别注入两个灭菌平皿（事先在平皿底部画上1cm X 1cm或1.2cm X 1.2cm的方格）中，使之凝固成薄层。
实验四 细菌
实验四细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态观察实验四细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态观察一、实验目的1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。
2．放线菌、酵母菌和霉菌的细胞形态观察。
二、实验原理菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。
三、实验材料和用具圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；Bouin氏固定液，0．01％结晶紫溶液，酒精等。
显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环。
四、操作步骤（一）四大菌落的形态观察观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验菌落特征描述的方法记录结果。
（二）放线菌的形态观察用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。
然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。
找出3类菌丝及其分生孢子，并绘图。
注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。
（三）霉菌的形态观察1．粘片观察：取一滴棉蓝染色液置于载玻片中央，取一段透明胶带，打开霉菌平板培养物，粘取菌体，粘面朝下，放在染液上。
镜检。
2．假根观察：将培养根霉假根的平皿打开，取出皿盖内的载玻片标本，在附着菌丝体的一面盖上盖玻片，置显微镜下观察。
只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝，观察时注意调节焦距以看清各种构造。
（四）酵母菌的形态观察酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定1．以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔，制成菌悬液。
2. 取0.05%美蓝染色液1滴，置载玻片中央，并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2～3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态，区分其母细胞与芽体，区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
霉菌的形态观察
霉菌的形态观察一、【实验目的】1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征二、【实验原理】1、霉菌霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3~10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
2、PDA培养基PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它是一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
3、载玻片培养观察法（小室培养法）观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。
载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌记载载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期培养物。
三、【实验器材】1、菌种：曲霉( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉( Rhizopus sp. ) ，毛霉（Mucor sp. ），培养7d 的马铃薯琼脂平板培养物2、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）3、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等四、【操作步骤】1.配置PDA培养基：按配方配置马铃薯培养基200ml，其做法是先将马铃薯洗净去皮,再切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即马铃薯块可），先用一层纱布过滤，再用六层纱布过滤，取滤液，加热，加入葡萄糖补水至200ml。
霉菌和酵母菌认知 酵母菌和霉菌的个体形态观察
酵母菌的形态观察
基本原理
• 对酵母菌用美蓝染色，活细胞的代谢能力较快， 能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型。死 细胞或代谢缓慢的老细胞，变为蓝色或淡蓝色。
操作步骤
• ①载玻片上滴加1滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，取酵 母放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀 混合；
• ②用镊子取盖玻片一块，小心地盖在液滴上； • ③用制好的水浸片放置约3min后镜检； • ④染色30min后，再观察死细胞数量是否增加；⑤
霉菌和酵母菌 的形态观察
霉菌的形态观察
基本原理
① 霉菌的菌丝体及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌 的重要依据。
② 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多， 通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍显 微镜即可观察。
1 直接制片观察法
基本原理：菌丝粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易分散， 因此将培养物置于乳酸石碳酸棉蓝染色液中，制成制片镜 检。 制成标本特点：细胞不变形，有杀菌防腐作用，不易干燥， 且保持较长时间；防止孢子飞散，溶液本身呈蓝色，能增 强反差。
操作步骤：①干净的载玻片上，滴一滴乳酸石碳酸棉蓝 染色液；②用解剖针从霉菌尽量的边缘处取少量带有孢 子的菌丝，先置于50%的乙醇中浸以下，以洗去脱落的 孢子，再置于染色液中；③小心将菌丝挑散开，然后盖 上盖玻片，置显微镜下观察。
2 载玻片培养观察法
基本原理：接种霉菌于载玻片上的适宜培养基上，接种盖 上盖玻片培养，霉菌就在载玻片和盖玻片之间的有限空间 内沿盖玻片横向生长。培养一段时间后，将载玻片上的培 养物置于显微镜下观察。
用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
谢谢！
3 玻璃纸培养观察法
基本原理：用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生 长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻 璃纸减取一小片，贴在载玻片上用显微镜观察。
真菌的观察实验报告
一、实验目的1. 了解真菌的基本形态结构；2. 掌握观察真菌的方法；3. 认识常见的真菌种类。
二、实验原理真菌是一类具有细胞壁、无叶绿素的真核生物，广泛分布于自然界。
真菌的细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
真菌繁殖方式多样，包括无性繁殖和有性繁殖。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：酵母菌、曲霉、青霉、毛霉等；2. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、无菌水、无菌棉签、酒精灯、酒精杯等。
四、实验步骤1. 酵母菌观察（1）取一小块酵母菌菌落，用接种针挑取少量菌体；（2）将菌体涂在载玻片上，滴一滴无菌水；（3）盖上盖玻片，轻轻压平；（4）在显微镜下观察酵母菌的形态、大小、细胞核等。
2. 曲霉观察（1）取一小块曲霉菌落，用接种针挑取少量菌体；（2）将菌体涂在载玻片上，滴一滴乳酸-石炭酸液；（3）盖上盖玻片，轻轻压平；（4）在显微镜下观察曲霉的形态、大小、孢子囊等。
3. 青霉观察（1）取一小块青霉菌落，用接种针挑取少量菌体；（2）将菌体涂在载玻片上，滴一滴0.1%美蓝液；（3）盖上盖玻片，轻轻压平；（4）在显微镜下观察青霉的形态、大小、分生孢子梗等。
4. 毛霉观察（1）取一小块毛霉菌落，用接种针挑取少量菌体；（2）将菌体涂在载玻片上，滴一滴乳酸-石炭酸液；（3）盖上盖玻片，轻轻压平；（4）在显微镜下观察毛霉的形态、大小、菌丝等。
五、实验结果与分析1. 酵母菌：酵母菌为单细胞真菌，呈圆形或椭圆形，细胞核明显，细胞质内含有大量的小液泡。
2. 曲霉：曲霉为多细胞真菌，菌丝呈放射状排列，分生孢子梗顶端生有分生孢子。
3. 青霉：青霉为多细胞真菌，菌丝呈螺旋状排列，分生孢子梗顶端生有分生孢子。
4. 毛霉：毛霉为多细胞真菌，菌丝呈网状排列，菌丝顶端生有孢子囊。
六、实验结论通过本次实验，我们观察了酵母菌、曲霉、青霉、毛霉等真菌的形态结构，了解了真菌的基本特征和繁殖方式。
在实验过程中，我们掌握了观察真菌的方法，为今后进一步研究真菌奠定了基础。
实验四 微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏ppt课件
断外，还可以借助其它工具
进行直接接触区分判断（牙
签、接种工具等）
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细菌菌落扫描电镜显微照片
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实验内容二
——从分离平板上挑取单菌落
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▪ 挑取细菌单菌落接种于牛肉膏蛋白 胨培养基斜面上——接种环
▪ 挑取放线菌单菌落接种于高氏1号 培养基斜面上——接种环、接种钩
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实验三、霉菌的形态观察
置低倍镜或高倍镜下观察。
根霉：假根、匍匐菌丝、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子
毛霉：菌丝、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子
青霉：菌丝、分生孢子梗、帚状分支小梗及分生孢子
曲霉：菌丝、足细胞、分生孢子梗、初生小梗、 次生小梗、顶囊、分生孢子
实验结果
绘图说明你所观察到的霉菌的形态特征。
思考题
你主要根据哪些形态特征来区分四种不同的霉菌？ (包括菌落特征与个体特征)
实验三
霉菌的形态观察
目的要求
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。
了解四类常见霉菌的基本形态特征。
基本原理
霉菌的营养体是分枝的丝状体，分为基内菌丝 和气生菌丝。气生菌丝中又可分化出繁殖丝。不同 霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。常见的观察 霉菌的有三种：直接制片观察法、载玻片培养观察 法和玻璃纸培养观察法。 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容 易飞散，所以采用直接制片法制标本时常用乳酸石 炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片的特 点是：细胞不变形，具有杀菌防腐作用，且不易干 燥，能保持较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定染 色效果。
实验器材
菌种
曲霉、青霉、根霉、毛霉
培养基
察氏琼脂培养基
溶液或试剂
乳酸石碳酸棉蓝染色液、 50％乙醇
仪器或其他用具
显微镜，盖玻片，载玻蓝染色液；
用解剖针挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先用50
％乙醇洗去脱落的孢子，再放在载玻片的染液中 (青霉、曲霉取菌丝时需连同培养基一起挑取)；
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实验四 霉菌的三点接种、真菌的载片培养和个体形态观察（1）
内容：1) 霉菌的三点接种；2) 蓝色犁头霉的八字接种；3) 真菌的载片培养和个体形态观察
(1)：4）肉汤琼脂的配制和湿热灭菌；5)培养皿、试管、涂布棒、移液管的包扎和灭菌。
1、三点接种
2、“八”字接种
平板做标记，底部划八字
蓝色犁头霉“＋”“－”菌株“八” 字型接种
28℃倒置培养7天 和三点接种平板一起放在培养箱上层，培养过程中勿动！
3、载片培养和个体形态观察
整理湿室
载片上放2块无菌PDA琼脂小块
接种（热带假丝酵母划短线，顶青霉、焦曲霉点接4点）
盖上无菌盖片，轻压
加保湿剂，盖上皿盖
28℃正置培养2天（放在培养箱的下层）
观察个体形态，特别是假菌丝，分生孢子穗和分生孢子头
如结果不理想，可以继续培养并观察
4、肉汤琼脂培养基的配制和灭菌
5、湿热灭菌
1． 菌种：顶青霉、黑曲霉和匍枝根霉；
2． 皿底标记等距离的三点；
3． 平板与火焰平行，相距2－5cm；
4． 接种针灭菌后沾无菌水后取菌（孢子）；
5． 防止无意过火杀菌；
6． 菌种应该轻柔点接在平板表面。 每组倒PDA培养平板4块 三点接种要点 28℃倒置培养7天
牛肉膏粉0.9g，蛋白胨3.0g，
NaCl 1.5g，水 300ml；
配方
加热，溶解彻底
调节pH 7.2－7.4（用1mol/L的NaOH）
分装
包扎，湿热灭菌
2个250ml三角瓶各加入琼脂2.5g；
再各加150ml液体培养基。
100ml生理盐水（100ml水加0.9g NaCl），包扎；包扎涂布棒3个；试管7个，加帽后包扎。
121℃ 20min。
6、干热灭菌材料
10套培养皿，装铁桶，放车上；移液管，1ml和5ml全部重塞棉花，装铁桶后放车上。