佛山科学技术学院 分子生物学 期末试题

命题方式：集体

佛山科学技术学院医学院2008—2009学年第一学期

《医学分子生物学》课程期末考试试题—A卷

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命题方式：集体

佛山科学技术学院医学院2008—2009学年第一学期

《医学分子生物学》课程期末考试试题—B卷

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五、问答题（每题5分，共25分）：

1、基因工程技术的基本步骤包括什么？

1)获取目的基因；

2)DNA重组体的构建；

3)将目的基因导入受体细胞；

4)重组体筛选和鉴定：目的基因导入受体细胞后，通过检测与鉴定是否可以稳定维持和表达其遗传特性；

5)基因表达及产物的分离纯化和鉴定。

2、哪些因素影响限制酶活性？

1)DNA纯度；

2)DNA甲基化程度；

3)DNA的分子结构；

4)酶切消化反应的温度；

5)反应系统组成：核酸内切限制酶的缓冲液。

3、PCR反应体系的组成成份有哪些？

1)DNA模板；

2)扩增缓冲液；

3)一对引物；

4)4、4种dNTP混合物；

5)Taq DNA聚合酶；

6)三蒸水。

4、基因诊断有哪些优点？

1)针对性强，特异性高；

2)标本用量少，来源广，灵敏度高；

3)稳定性好；

4)可做快速、早期诊断；

5)适应性强，检测范围广。

5、基因治疗的策略是什么？

1)基因置换或基因矫正；

2)基因增补或基因添加或基因替代；

3)基因抑制/基因失活；

4)导入免疫基因，免疫调节等；

5)导入自杀基因。

六、论述题（11分）：

1、阐述染色体、DNA和基因三者之间的关系。

染色体是DNA和蛋白质结合形成的，当它呈细长的丝状的时候称之为染色质，当它高度螺旋缠绕在一起形成短棒状就称之为染色体；DNA是由成千上万个核苷酸链接成的长链，一条染色体对应一条DNA，DNA上携带有遗传信息；DNA 上携带有很多的遗传信息如果把DNA分成很多的小段，有些表达遗传信息，有些则没有，而有遗传信息的片段，或者说有遗传效应的DNA片段就称之为基因。

染色体、DNA和基因都是遗传物质。染色体是细胞水平的遗传物质，DNA、基因是分子水平的遗传物质，基因是最小遗传单位。染色体是DNA的载体，DNA是基因的携带者。

五、问答题：（每题5分，共25分）

1.简述基因与疾病的关系。

DNA转录→mRNA翻译→肽链加工→蛋白质→细胞结构、功能→组织器官的生理、病理状态→性状的正常、异常→正常、疾病

大部分疾病，可以在基因中发现病因。基因通过其对蛋白质合成的指导，控制人体的运转。第一类与遗传有关的疾病有四千多种，通过基因遗传获得。第二类疾病是常见病，例如心脏病、糖尿病、多种癌症等，它们是由多种基因和多种环境因素相互作用的结果。基因是人类遗传信息的载体，在基因工作正常的时候，人身体能够发育正常，功能正常。如果一个基因不正常，甚至基因中一个非常小的片断不正常，可以引起发育异常、疾病，甚至死亡基因可以发生变化，有些变化不引起蛋白质数量或质量的改变，有些则引起。基因的这种改变叫做基因突变。蛋白质在数量或质量上发生变化，会引起身体功能的不正常以致造成疾病。

2.影响DNA连接效率的因素有哪些?

1) 连接方式：粘端优于平端。

2) 目的基因与载体的浓度和比例：增加浓度可提高连接效率；目的基因与载体的摩尔数之比大于1。

3) 连接温度与时间：16?C或4?C，2-16小时。

4) 其他因素：连接酶纯度，反应体系中高浓度EDTA、NaCl、磷酸盐将影响连接酶活性

3.决定蛋白质分离纯化方法的原则是什么？

1)应选择不同分离纯化机理的方法联合使用；

2)应首先选择能除去含量最多杂质的方法；

3)应尽量选择高效的分离方法；

4)首先选用特异性较低、成本较低的方法，应将最费时,成本最高的分离纯化方法安排在最后阶段。

3、基因诊断的策略及基本技术是什么？

策略：

1)检测致病基因: 致病基因已找到

2)检测连锁遗传标志: 致病基因未找到，但已定位

3)检测表型相关基因：多因素、多基因病

4)定量分析基因表达：没有基因结构变异，但表达发生了改变

基本技术：1. 核酸分子杂交技术，2. PCR（聚合酶链反应）技术，3. DNA测序技术，4. DNA芯片技术

5、基因转移的方法有哪些？

1)物理法：DNA直接注射、电穿孔、基因枪、显微注射等；

2)化学法：磷酸钙转染、 DEAE-葡聚糖转染、脂质体转染技术等；

3)病毒载体介导：逆转录病毒载体和腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体，单纯疱疹病毒载体等；

六、论述题（11分）

1、 采用图示法及文字描述论述PCR 的基本原理和控制要点。

基本原理：类似于DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①变性：模板DNA 经加热至93℃，使模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合；②模板DNA 与引物的退火：温度降至55℃左右，引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；③延伸：DNA 模板--引物结合物在Taq DNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

控制要点：1、引物设计：根据引物设计原则设计合乎要求的引物；2、退火温度选择：选择合适的退火温度。

延伸 72?C