山东省烟台市2019届高三3月高考诊断性测试(一模)试卷(生物 解析版)

1.下列关于真核细胞结构和功能的叙述，不正确的是

A. 分泌蛋白的加工与内质网、高尔基体有关

B. 细胞核是细胞遗传和代谢的控制中心

C. 细胞膜的功能特性与膜蛋白有关而与磷脂分子无关

D. 不是所有细胞都具有复杂的生物膜系统

【答案】C

【解析】

【分析】

真核细胞与原核细胞相比，最大的亲本是具有核膜包被的成形的细胞核；真核细胞的基本结构包括细胞膜、细胞质和细胞核，其中细胞膜的主要成分包括磷脂和蛋白质，细胞质包括细胞质基质和细胞器，细胞核的结构包括核膜、核仁、核孔和染色质。

【详解】分泌蛋白在核糖体合成后，需要先后经过内质网和高尔基体的加工才能通过细胞膜分泌到细胞外，A正确；细胞核中含有遗传物质DNA，是细胞遗传和代谢的控制中心，B正确；细胞膜的主要成分是磷脂和蛋白质，其功能主要与蛋白质的种类和数目有关，与磷脂也有关，C错误；原核细胞只有细胞膜一种生物膜，没有复杂的生物膜系统，D正确。

2.许多基因的启动子内富含CG重复序列，若其中的部分胞嘧啶(C)被甲基化成为5-甲基胞嘧啶，就会抑制基因的转录。下列与之相关的叙述中，正确的是

A. 在一条单链上相邻的C和G之间通过氢键连接

B. 胞嘧啶甲基化导致表达的蛋白质结构改变

C. 基因的表达水平与基因的甲基化程度无关

D. 胞嘧啶甲基化会阻碍RNA聚合酶与启动子结合

【答案】D

【解析】

【分析】

基因的表达过程包括转录和翻译，其中转录指的是以DNA的一条链为模板合成RNA的过程，翻译指的是以mRNA为模板合成蛋白质的过程。

【详解】在一条脱氧核苷酸单链上相邻的C和G之间不是通过氢键连接，而是通过“-脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖-”连接，A错误；胞嘧啶甲基化导致的是表达过程中基因转录被抑制，对已经表达的蛋白质结构没有影响，B错误；由于基因的表达水平与基因的转录有关，所以与基因的甲基化程度有关，C错误；根据题意“胞嘧啶甲基化会抑制基因的转录”可推知，

抑制的实质就是阻碍RNA聚合酶与启动子结合，D正确。

3.核DNA被32P标记的精子与未被标记的卵细胞受精后，在不含放射性标记的培养基中连续分裂两次，下列分析正确的是

A. 放射性细胞数量与所有细胞数量之比逐代减少

B. 放射性DNA分子数与所有细胞总DNA分子数之比逐代减少

C. 可以确定含有放射性的细胞数，因为分裂后期姐妹染色单体均分到两极

D. 无法确定含有放射性的细胞数，因为分裂后期非同源染色体自由组合

【答案】B

【解析】

由于DNA的半保留复制，含有标记的DNA分子在未标记的原料中连续复制两次，带有放射性标记的DNA分子数与所有细胞总DNA分子数的比例将逐代减少，A错误。B正确。有丝分裂后期姐妹染色单体分开后随机进入两个子细胞中，第一次分裂产生的子细胞都含有放射性，但第二次分裂后含有放射性的细胞数无法确定，C错误。受精卵进行有丝分裂，不会发生基因重组，D错误。

【考点定位】放射性同位素标记与细胞分裂

4.下列关于生物进化的叙述，错误的是

A. 环境条件保持稳定，种群基因频率就不会发生变化

B. 不是所有的变异都可以为生物进化提供原材料

C. 同一环境中往往存在很多不同物种，它们之间在相互影响中共同进化

D. 隔离的实质是阻断基因交流，种群间不能进行基因交流不意味着新物种形成

【答案】A

【解析】

【分析】

现代生物进化理论的基本观点：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变；突变和基因重组产生生物进化的原材料；自然选择使种群的基因频率发生定向的改变并决定生物进化的方向；隔离是新物种形成的必要条件。

【详解】影响基因频率改变的因素有不随机交配、自然选择、遗传漂变和迁移等，因此环境条件稳定所时，种群基因频率也会发生改变，A错误；突变和基因重组可以为生物进化提供原材料，而不可遗传变异不能为生物进化提供原材料，B正确；同一环境中往往存在很多不同物种，它们之间在相互影响中共同进化，C正确；新物种形成的标志是生殖隔离，而地理

隔离也能够种群间基因的交流，因此种群间不能进行基因交流不意味着新物种形成，D正确。

5.科研人员将铁皮石斛的带芽茎段经植物组织培养得到原球茎，并探究6-BA与2，4-D诱导原球茎增殖的最适浓度组合，实验结果如下图。下列叙述正确的是：

A. 0.5mg·L－16-BA与0.8mg·L－12，4-D是促进原球茎增殖的最适浓度组合

B. 实验结果表明2，4-D对原球茎增殖作用具有两重性

C. 实验结果表明6-BA和2，4-D协同使用的效果优于单独使用

D. 6-BA和2，4-D对原球茎的增殖起调节作用

【答案】D

【解析】

【分析】

据图分析，实验的自变量是究6-BA浓度和2，4-D浓度，因变量是原球茎增殖数。在实验浓度范围内，当两种溶液的浓度都为0时，原球茎增殖数最少；当6-BA浓度为0.5mg/L、2，4-D浓度为0.8 mg/L时，原球茎增殖数最多。

【详解】根据以上分析已知，在实验浓度范围内，当6-BA浓度为0.5mg/L、2，4-D浓度为0.8 mg/L时，原球茎增殖数最多，但是不能证明此组合为促进原球茎增殖的最适浓度组合，A错误；与2，4-D浓度都为0的对照组相比，其他浓度的2，4-D都表现为促进作用，因此不能说明2，4-D对原球茎增殖作用具有两重性，B错误；由于缺乏两种溶液单独使用的对照组，因此无法比较6-BA和2，4-D协同使用的效果与单独使用的效果的关系，C错误；据图分析可知，不同浓度的6-BA和2，4-D组合，原球茎的增值数不同，说明6-BA和2，4-D 对原球茎的增殖起调节作用，D正确。

6.有甲乙两对表现型都正常的夫妇，甲夫妇中男方的父亲患白化病，乙夫妇中女方的弟弟是血友病患者(其父母正常)。下列叙述错误的是

A. 若甲夫妇的女方家系无白化病史，则甲夫妇所生子女不会患白化病

B. 无论乙夫妇的男方家系是否有血友病史，所生女孩都不患血友病

C. 调查两种遗传病的发病率都需要对多个患者家系进行调查

D. 无论乙夫妇的男方家系是否有血友病史，所生男孩中患血友病的概率为1/4

【答案】C

【解析】

【分析】

白化病为常染色体隐性遗传病，血友病为伴X隐性遗传病，假设两种疾病分别受A、a与B、b控制。两对夫妇都正常，基因型都为A_X B X_、A_X B Y，其中甲夫妇中男方的父亲患白化病，则甲丈夫的基因型为AaX B Y；乙夫妇中女方的弟弟是血友病患者(其父母正常)，则乙妻子的基因型可能为1/2A_X B X b。

【详解】若甲夫妇的女方家系无白化病史，则甲夫妇的相关基因型为AA、Aa，后代不可能患白化病，A正确；由于乙丈夫没有血友病，相关基因型为X B Y，因此他们生的女儿都不可能患血友病，B正确；调查两种遗传病的发病率，都需要在人群中随机调查，C错误；关于血友病，乙夫妇的基因型为1/2X B X b、X B Y，所生男孩的发病率为1/2×1/2=1/4，D正确。7.某学校研究小组利用叶面积相等的A、B两种植物的叶片分别进行了以下组实验(假设两组实验在相同且适宜的温度下进行，且忽略光照对呼吸作用的影响)：

实验一：将A、B两种植物的叶片分别放置在相同的密闭小室中，给予充足的光照，利用红外测量仪每隔5min测定小室中的CO2浓度，结果如图1所示。

实验二：给予不同强度的光照，渊定A、B两种植物叶片的CO2吸收量和CO2释放量，结果如图2所示。

请据图分析回答：

(1)实验一中固定CO2能力较强的植物是___________；实验一从开始经过10min，A植物通过光合作用制造的有机物总量比B植物___________；实验过程中，若突然降低光照强度，

则叶绿体中ADP、C3和C5中___________的量会短时间增加。

(2)实验一25~40min期间两个密闭小室内CO2含量相对稳定的原因是___________。

(3)从实验二结果看，若单独种植A、B两种植物，种植密度过大，则净光合速率下降幅度较大的植物是___________，判断的依据是___________。

【答案】 (1). B植物少 ADP和C3

(2). 植物叶片光合作用消耗的CO2与植物叶片呼吸作用释放的CO2相等

(3). B植物 B植物的光饱和点大于A植物，B植物比A植物更适于生活在强光下；种植密度过大，植株接受的光照强度减弱，导致B植物净光合速率下降幅度比A植物大

【解析】

【分析】

据图1分析，二氧化碳是光合作用的原料，图中密闭小室内二氧化碳浓度降低，是由于光合作用吸收二氧化碳所致，分析题图曲线可知，与A植物相比，B植物的密闭小室内二氧化碳浓度降得更低，说明B植物能更有效地利用低浓度二氧化碳。分析图2可知，纵轴表示二氧化碳的吸收或释放量，因此表示的是植物净光合作用强度与光照强度之间的关系，植物A 的光的饱和点较低，植物B光的饱和点高，因此A植物可以更有效地利用弱光，可能是阴生植物，B可能是阳生植物。

【详解】（1）根据以上分析已知，实验一中固定二氧化碳能力较强的是B植物。图1显示，实验一从开始经过10min时，A、B两种植物的净光合作用是相等的，但是从图2中光照强度为0时二氧化碳的释放量可知，A植物的呼吸速率低于B植物，根据净光合速率=实际光合速率-呼吸速率可知，A植物通过光合作用制造的有机物总量比B植物少。实验过程中，若突然降低光照强度，则光反应产生的ATP和[H]减少，三碳化合物的还原也随之减弱，因此叶绿体中ADP、C3量会短时间增加，而C5量会短时间减少。

（2）实验一中，一段时间后两个密闭小室内CO2含量相对稳定，不增加也不减少，说明此时两种植物叶片光合作用消耗的CO2与植物叶片呼吸作用释放的CO2相等。

（3）根据图2分析已知，B植物的光饱和点大于A植物，B植物比A植物更适于生活在强光下。因此若单独种植A、B两种植物，且种植密度过大，则植株接受的光照强度减弱，导致B植物净光合速率下降幅度比A植物大。

【点睛】解答本题的关键是掌握光合作用的过程以及影响因素，明确二氧化碳是光合作用的原料之一，进而判断图1能够利用低二氧化碳浓度的植物的种类以及图2中两种植物对光照的需求。

8.血糖水平是调节胰岛素和胰高血糖素分泌的最重要因素，血糖平衡的意义在于为机体各种组织细胞的正常代谢活动提供能源物质。请回答下列问题：

(1)血液中胰岛素与胰高血糖素的摩尔比值，在不同生理状况下是不同的，当机体处于

___________状况时，该比值明显下降，此时机体物质代谢的变化是___________。

(2)当血糖浓度上升时，胰岛B细胞分泌的胰岛素增加，引起靶细胞膜上的葡萄糖转运载体的数量增加，其意义是___________，从而降低血糖浓度。

(3)在验证胰岛素具有降低血糖浓度作用的实验设计中，若以正常小鼠活动状况为观察指标，注射胰岛素溶液和葡萄糖溶液的顺序应是___________。

(4)某糖尿病患者由胰岛B细胞损伤引起，患者血液中含有抗胰岛B细胞的抗体和效应T细胞，据此推测：该糖尿病是针对胰岛B细胞的一种___________病；胰岛B细胞的损伤是机体通过___________兔疫导致的。

【答案】 (1). 低血糖肝糖原分解加强，一些非糖物质转化为葡萄糖加快

(2). 促进葡萄糖进入细胞

(3). 先注射胰岛素溶液，后注射葡萄糖溶液

(4). 自身免疫细胞免疫和体液

【解析】

【分析】

血糖平衡的调节：

（1）胰岛素的作用：①促进各组织、细胞对血糖的吸收；②促进葡萄糖的氧化分解；③促进肝脏、肌肉组织合成糖原；④促进葡萄糖转化为非糖物质；⑤抑制肝糖原的分解；⑥抑制非糖物质转化为葡萄糖。

（2）胰高血糖素的作用：①促进肝糖原分解；②促进非糖物质转化为葡萄糖。

【详解】（1）胰岛素与胰高血糖素分别具有降血糖和升血糖的作用，当血糖浓度降低时，胰岛素与胰高血糖素的比值会明显降低，此时胰高血糖素会促进肝糖原分解和一些非糖物质转化为葡萄糖，进而使得血糖浓度上升到正常水平。

（2）当血糖浓度升高时，胰岛素分泌增加，引起靶细胞膜上的葡萄糖转运载体的数量增加，促进葡萄糖进入组织细胞，进而降低血糖浓度。

（3）该实验的目的是验证胰岛素具有降血糖的功能，因此在实验过程中应该先注射胰岛素观察小鼠的低血糖症状，再注射葡萄糖看看小鼠的低血糖症状是否会消失。

（4）根据题意分析，该糖尿病患者体内产生了攻击自身成分的抗体和效应T细胞，说明该

病为自身免疫病；患者血液中含有抗胰岛B细胞的抗体和效应T细胞，说明胰岛B细胞的损伤是机体通过细胞免疫和体液兔疫导致的。

【点睛】解答本题的关键是掌握胰岛素和胰高血糖素的产生和生理功能以及免疫调节的相关知识点，明确抗体是体液免疫产生的，效应T细胞是细胞免疫过程中产生的。

9.光裸的岩石上生长出森林是一个漫长而艰难的演替过程，大致经历以下几个阶段：棵岩阶段→地衣阶段→苔藓阶段→草本植物阶段→灌木阶段→森林阶段。

请回答下列问题：

(1)光裸的岩石上生长出森林发生的演替类型为___________。灌木阶段与草本植物阶段相比，其物质循环、能量流动及___________等生态功能增强，使其抵抗力稳定性增强。(2)森林中的植物存在明显的分层现象，形成群落的垂直结构，分层现象的意义是

___________。研究人员对灌木阶段A、B、C三种不同植物种群的年龄组成进行统计，结果分别为增长型、增长型和衰退型，依据该结果，不能判断出在灌木阶段物种丰富度的变化情况，原因是___________。

(3)在现实生活中，人类的许多活动正在影响着群落的演替。人类可以砍伐森林、填湖造地、捕杀动物，也可以封山育林、治理沙漠、管理草原，甚至可以建立人工群落。由此说明

___________。

【答案】 (1). 初生演替信息传递

(2). 提高群落利用阳光等环境资源的能力年龄组成只能反映种群的发展趋势，不能反映物种的数目变化

(3). 人类活动往往会使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向进行

【解析】

【分析】

群落的演替包括初生演替和次生演替，其中初生演替是指一个从来没有被植物覆盖的地面，或者是原来存在过植被，但是被彻底消灭了的地方发生的演替；次生演替是指原来有的植被虽然已经不存在，但是原来有的土壤基本保留，甚至还保留有植物的种子和其他繁殖体的地方发生的演替。人类活动往往会使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向进行。

【详解】（1）群落的演替包括初生演替和次生演替，光裸的岩石上生长出森林发生的演替类型为初生演替；生态系统的功能包括物质循环、能量流动和信息传递。

（2）森林生态系统中的植物具有垂直分层现象，提高群落利用阳光等环境资源的能力；根据题意分析，研究人员统计出了三种植物种群的年龄组成，但是年龄组成只能反映种群的发

展趋势，不能反映物种的数目变化，因此不能判断出在灌木阶段物种丰富度的变化情况。（3）根据题意分析，人类可以砍伐森林、填湖造地、捕杀动物，也可以封山育林、治理沙漠、管理草原，甚至可以建立人工群落，说明人类活动往往会使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向进行。

【点睛】解答本题的关键是了解群落的演替的相关知识点，能够区分群落和种群的特征，明确人类活动往往会使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向进行。

10.有人从一个野生型红眼果蝇种群中偶然发现了朱红眼(a)、亮红眼(b)两个隐性突变型个体，已知a基因位于2号常染色体上，但b基因在染色体上的位置未知。现利用纯合亮红眼雄果蝇和纯合朱红眼雌果蝇为亲本进行杂交实验，F1雌雄个体相互交配得F2，结果如下表，回答下列问题：

(1)分析实验结果，亮红眼突变基因b___________(填“在”或“不在”)2号染色体上，做出此判断的理由是___________。该杂交实验中纯合朱红眼雌果蝇的基因型是___________，F2突变型雌果蝇中杂合子所占的比例是________。

(2)若该果蝇的正常刚毛(D)和小刚毛(d)、裂翅(E)和直翅(e)分别受一对等位基因控制。现有三个纯合品系：①正常刚毛裂翅、②正常刚毛直翅、③小刚毛裂翅。假设D/d、E/e这两对等位基因都位于X染色体上，请以上述品系为材料，设计实验对这一假设进行验证。(不发生染色体变异和染色体交换，写出实验思路、预期实验结果、得出结论) ___

【答案】 (1). 不在 F2性状分离比接近9:7，是9:3:3:1的变式，a、b基因符合自由组合定律 aaBB 4/7

(2). 选择②×③杂交组合进行正反交，观察F1雄性个体的表现型。预期实验结果及结论：若正交得到的F1中雄性个体与反交得到的F1中雄性个体正常刚毛/小刚毛、裂翅/直翅这两对相对性状的表现均不同，则证明这两对等位基因都位于X染色体上。（或选择②×③杂交组合进行正反交，观察F1个体的表现型。预期实验结果及结论：若一组子代为正常刚毛裂翅雌:正常刚毛直翅雄=1:1，另一组子代为正常刚毛裂翅雌:小刚毛裂翅雄=1:1，则证明这两对等位基因都位于X染色体上。或选择①雄性正常刚毛裂翅×②雌性正常刚毛直翅，①雄性

正常刚毛裂翅×③雌性小刚毛裂翅进行杂交实验，观察子代表现型。预期实验结果及结论：若前者子代正常刚毛裂翅雌:正常刚毛直翅雄=1:1，后者子代为正常刚毛裂翅雌:小刚毛裂翅雄=1:1，则证明这两对等位基因都位于X染色体上。）

【解析】

【分析】

根据题干信息和表格分析，子一代和子二代的表现型在雌雄性中没有差异，说明两对等位基因都在常染色体上；子二代的性状分离比接近于9:7，是9:3:3:1的变形，说明两对等位基因位于两对同源染色体上，遵循基因的自由组合定律，且子一代野生型的基因型为AaBb，子二代野生型为A_B_，突变型为A_bb、aaB_、aabb。

【详解】（1）根据以上分析已知，由于子二代性状分离比接近9:7，是9:3:3:1的变式，说明a、b基因符合自由组合定律，所以亮红眼突变基因b不在2号染色体上；已知子一代的基因型为AaBb，则亲本纯合朱红眼雌果蝇的基因型为aaBB，子二代中突变型雌果蝇基因型及其比例为A_bb:aaB:aabb=3:3:1，其中杂合子占4/7。

（2）根据题意分析，该实验的目的是验证D、d和E、e都位于X染色体上，则可以选择具有相对性状的②正常刚毛直翅与③小刚毛裂翅进行正反交实验，观察F1雄性个体的表现型。若正交得到的F1中雄性个体与反交得到的F1中雄性个体正常刚毛/小刚毛、裂翅/直翅这两对相对性状的表现均不同，则证明这两对等位基因都位于X染色体上。

【点睛】解答本题的关键是掌握基因的自由组合定律及其实质，能够根据子二代性状分离比“9:7”是“9:3:3:1”的变形判断两对等位基因遵循基因的自由组合定律，进而判断子一代和亲本的基因型。

11.分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数，请回答下列问题：

(1)分解尿素的微生物含有的酶是___________，为筛选出能分解尿素的微生物，配制培养基时应以___________作为唯一氮源，因此该培养基属于___________培养基。

(2)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________。常用来统计样品中活菌数目的方法是___________。

(3)该小组对分解尿素的微生物进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是___________，然后将1mL样液稀释10000倍，在3个平板上用涂布法分别涂布0.1mL稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取___________作为结果；3个平板的菌落数分别为39、42和45。

据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为___________个。

【答案】 (1). 脲酶尿素选择

(2). 高压蒸汽灭菌稀释涂布平板法

(3). 检测培养基平板灭菌是否合格菌落数目稳定时的记录 4.2×106

【解析】

【分析】

由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH 升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，PH升高，指示剂变红。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。

【详解】（1）分解尿素的微生物含有脲酶；培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源，利用培养基对分解尿素的微生物进行筛选，应该用选择培养基，配制培养基时应以尿素作为唯一氮源。

（2）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是高压蒸汽灭菌法；常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用于活菌的计数。

（3）为了检测培养基平板灭菌是否合格，应该在接种前随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间。在稀释涂布平板法计数时，应该选择菌落数目稳定时的记录职位结果；3个平板的菌落数的平均值=（39+42+45）/3=42个，则每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数

=42÷0.1×10000=4.2×106个。

【点睛】解答本题的关键是对于微生物培养技术的掌握及分解尿素的菌的分离和计数的掌握应用，能够利用题干提供的数据和公式计算单位体积中分解尿素的微生物活菌数。

12.用基因工程技术生产羧酸酯酶CarE)制剂的流程如下图所示。回答下列问题：

(1)①过程所需的酶是___________。在构建基因表达载体过程中，构建的重组质粒上启动子的本质和作用是___________。

(2)实现②过程常用PCR技术，该技术的前提是要有___________，以便合成引物。为了便于

扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是___________。

(3)过程③将重组表达载体导入大肠杆菌时，首先用Ca2+处理大肠杆菌，目的是___________。然后将___________溶于级缓冲液与该大肠杆菌混合，在一定温度下完成转化。

【答案】 (1). 逆转录酶启动子的本质是一段有特殊结构的DNA片段；作用是供RNA 聚合酶的识别、结合以驱动目的基因的转录

(2). 一段已知目的基因的核苷酸序列使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

(3). 使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态重组质粒（基因表达载体）

【解析】

【分析】

分析图解：图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的DNA；过程②表示利用PCR 技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞（大肠杆菌）；过程④表示通过筛选获得工程菌。

【详解】（1）图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的DNA的过程，需要逆转录酶的催化；基因表达载体的组成成分包括目的基因、标记基因、启动子、终止子等，其中启动子的本质是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的识别、结合以驱动目的基因的转录。

（2）利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物；根据题意分析，在构建基因表达载体时，需要在引物的5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连。

（3）在将目的基因导入大肠杆菌时，需要先用钙离子处理大肠杆菌，使得大肠杆菌处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组质粒溶于缓冲液中与该大肠杆菌混合，在一定温度下完成转化。

【点睛】解答本题的关键是识记基因工程的操作步骤，通过操作步骤确定图中各标号表示的生理过程，明确将目的基因导入微生物需要先用钙离子处理使得微生物细胞处于感受态。