ELISA
elisa基本原理
elisa基本原理
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。
它的基本原理如下：
1. 固相吸附：首先，在试验板上吸附抗原或抗体。
通常使用多孔板（如96孔板），将要检测的抗原或抗体溶液加入到孔中，然后孔中的溶液经过吸附和固定，使抗原或抗体附着在孔壁上。
2. 样品处理：将待测样品加入到试验板中，与固定的抗原或抗体发生特异性的结合反应。
如果样品中存在目标抗原或抗体，它们将与固定在试验板上的抗体或抗原结合形成复合物。
3. 洗涤：通过洗涤步骤，将未结合的物质洗掉，以去除非特异性的成分，使只有特异性结合的复合物留在孔中。
4. 酶标记：加入酶标记的抗体或抗原，它们与目标抗原或抗体发生特异性的结合。
5. 洗涤：再次进行洗涤步骤，去除未结合的酶标记物。
6. 反应物添加：加入适当的底物，使酶标记物催化反应，产生可测量的信号。
常用的底物是染色剂，其颜色与酶标记物的酶活性成正比。
7. 反应停止：加入反应停止剂，停止底物的反应，防止颜色进一步发展。
8. 信号测量：使用光谱仪或酶标仪等设备测量反应产生的信号强度。
信号强度与目标抗原或抗体的浓度成正比。
通过比较待测样品与已知浓度标准曲线的信号强度，可以确定待测样品中目标抗原或抗体的浓度。
ELISA技术在生物医学研究、诊断和药物开发等领域广泛应用，可以检测多种疾病标志物和生物分子。
elisa标准曲线
elisa标准曲线Elisa标准曲线。
Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的实验技术，其原理是利用酶标记的抗体与待检测物质结合，通过底物的酶促反应来检测待测物质的含量。
在Elisa实验中，标准曲线是非常重要的，它可以用来定量测定待测物质的浓度，为实验结果的准确性提供保障。
一、标准曲线的制备。
制备Elisa标准曲线的第一步是准备一系列已知浓度的标准溶液。
这些标准溶液的浓度应当覆盖待测物质的预计浓度范围，通常会选择一个对数级数，以便后续的数据处理。
接下来，将这些标准溶液按照一定比例加入Elisa板中的孔中，然后进行相应的实验操作，最终得到各标准溶液对应的光吸收值。
二、绘制标准曲线。
通过测定各标准溶液的光吸收值，我们可以得到一组数据点，其中横坐标为标准溶液的浓度，纵坐标为对应的光吸收值。
接下来，利用这些数据点可以绘制出标准曲线，通常采用线性回归分析的方法，得到一条直线方程，用以描述浓度与光吸收值之间的关系。
标准曲线的斜率和截距分别代表了待测物质的浓度与光吸收值之间的线性关系，通过这条标准曲线，我们可以根据待测样品的光吸收值，反推出其浓度。
三、标准曲线的应用。
标准曲线在Elisa实验中起着至关重要的作用。
首先，它可以用来定量测定待测物质的浓度，通过对待测样品的光吸收值进行测定，然后通过标准曲线反推出其浓度，从而实现对待测物质的定量分析。
其次，标准曲线还可以用来评估实验的准确性和可靠性，如果标准曲线的相关系数R²接近于1，表明实验数据符合良好的线性关系，说明实验结果可信度较高。
最后，标准曲线还可以用来进行质量控制，监测实验过程中的误差和偏差，确保实验结果的准确性和可重复性。
四、注意事项。
在制备和应用标准曲线的过程中，有一些注意事项需要特别注意。
首先，标准曲线的制备过程中，应当严格按照实验操作规程进行，确保标准溶液的浓度准确无误。
其次，在绘制标准曲线时，应当选择合适的数据处理方法，确保得到的标准曲线具有良好的线性关系。
elisa实验原理
elisa实验原理Elisa实验原理。
Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析方法，主要用于检测和定量分析样品中的蛋白质、抗体、荷尔蒙、细胞因子等生物分子。
Elisa实验原理基于抗体与抗原特异性结合的原理，通过酶标记的二抗或底物来检测抗原-抗体结合物质。
下面我们来详细了解一下Elisa实验的原理。
首先，Elisa实验的基本原理是利用抗体与抗原的特异性结合。
在实验中，首先需要将待检测的抗原或抗体样品吸附在微孔板上，然后加入特异性的一抗，使其与待检测物质结合。
接着，加入酶标记的二抗，使其与一抗结合，形成抗原-抗体-酶标记二抗的复合物。
随后，加入底物，酶与底物发生反应产生显色物质，其光密度与待检测物质的浓度成正比。
最后，用酶标仪测定显色物质的光密度，从而定量分析待检测物质的浓度。
其次，Elisa实验的原理还涉及到酶标记技术。
在实验中，常用的酶标记方法有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。
这些酶标记的二抗在与抗原-抗体复合物结合后，能够与底物发生化学反应，产生显色物质或荧光物质。
通过测定显色物质或荧光物质的光密度，可以间接反映待检测物质的浓度。
此外，Elisa实验的原理还涉及到微孔板的使用。
微孔板通常采用聚丙烯或聚碳酸酯材料制成，具有多孔结构，能够同时检测多个样品。
在实验中，将待检测的样品加入微孔板孔道中，利用微孔板的高通量特性，可以快速、准确地进行多个样品的检测和分析。
最后，Elisa实验的原理还包括数据分析和结果解读。
实验结果通常通过酶标仪或荧光分析仪测定显色或荧光物质的光密度值，然后通过标准曲线法或双对数法等方法，计算出待检测物质的浓度。
最终，根据实验结果，可以对待检测物质的浓度进行定量分析和结果解读。
总之，Elisa实验原理基于抗体与抗原的特异性结合，利用酶标记技术和微孔板的高通量特性，通过测定显色或荧光物质的光密度值，实现对待检测物质的定量分析。
这种实验方法在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景，为科研人员和临床医生提供了一种高效、准确的生物分子分析方法。
ELISA的数据分析
ELISA的数据分析一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析蛋白质、抗体、激素等生物分子的存在和浓度。
本文旨在详细介绍ELISA数据分析的标准格式，包括数据处理、结果解读和统计分析等内容。
二、数据处理1. 数据收集：ELISA实验中，通常会测量标准曲线和样品的光密度值。
收集所有实验数据，包括标准曲线的各个浓度点的光密度值和样品的光密度值。
2. 数据校正：对于样品的光密度值，需要进行背景校正，即减去空白对照的光密度值。
计算每个样品的校正后光密度值。
3. 标准曲线拟合：使用标准曲线的各个浓度点的光密度值，进行曲线拟合，得到标准曲线的方程。
可以使用线性回归、多项式拟合等方法，选择最佳拟合曲线。
4. 样品浓度计算：根据样品的校正后光密度值，使用标准曲线的方程计算样品的浓度。
根据实验需要，可以进行对数转换、反函数转换等操作。
三、结果解读1. 样品浓度结果：根据上一步计算得到的样品浓度，可以得出每个样品的浓度值。
将浓度值按照实验要求进行单位转换，如ng/mL或IU/mL等。
2. 阳性与阴性判定：根据实验目的，确定阳性和阴性的阈值。
将样品浓度与阈值进行比较，判断样品是否为阳性或阴性。
可以根据实验要求设定不同的判定标准，如浓度大于阈值为阳性，小于阈值为阴性。
3. 数据可视化：将样品浓度结果绘制成图表，如柱状图、折线图等。
可以使用统计软件或数据处理软件进行图表绘制，以直观地展示实验结果。
四、统计分析1. 均值与标准差：计算样品浓度的均值和标准差，用于描述样品的集中趋势和离散程度。
可以使用Excel等软件进行计算。
2. 方差分析：如果实验中有多个组别或处理，可以使用方差分析（ANOVA）进行组间比较。
方差分析可以判断不同组别之间是否存在显著差异。
3. 相关性分析：如果实验中有多个变量，可以进行相关性分析，判断变量之间的相关程度。
可以使用Pearson相关系数或Spearman相关系数等方法进行计算。
间接elisa的原理及应用
间接ELISA的原理及应用1. 什么是间接ELISA间接ELISA全称为酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种常用的免疫学检测方法。
它依靠特定抗原和抗体之间的高度专一性反应，通过酶标记抗体或抗原的相互作用来检测目标物质的存在和浓度。
2. 间接ELISA的原理间接ELISA的原理是将待测物与特定抗原偶联到固定在微孔板上的抗原表面上。
然后引入与待测物特异性结合的酶标记抗体，使其与待测物结合。
接下来，通过添加底物，酶标记抗体催化底物的变色反应，从而间接检测出待测物的存在。
间接ELISA的步骤如下：1.固相涂布：将抗原溶液均匀涂布在微孔板上，使其在孔壁上固定。
2.阻断：加入一定浓度的非特异性抗体，使其与未吸附的表面结合，防止非特异性的结合。
3.加入待测物：将待测物标本加入到微孔板中与固相抗原发生特异结合。
4.加入检测抗体：加入配有酶标记的抗体，该抗体有望与待测物结合形成夹心免疫复合物。
5.洗涤：洗涤微孔板以去除未结合的物质。
6.加入底物：加入含有底物的试剂，底物受到酶催化产生变色反应。
7.阅读测量：使用酶标仪对底物反应产生的颜色进行定量检测。
3. 间接ELISA的应用间接ELISA广泛用于医学、生命科学研究、生物制药和农业领域。
以下是间接ELISA在不同领域的应用：3.1 医学领域间接ELISA在医学领域的应用非常广泛，主要用于以下几个方面：•临床诊断：可以用于检测疾病的早期诊断，如艾滋病、肝炎、结核病等。
•药物监测：可以测定药物的浓度，监测药物治疗的疗效和剂量。
•免疫学研究：可用于研究免疫系统的功能和疾病发生机制。
3.2 生命科学研究间接ELISA在生命科学研究中也有广泛的应用，主要用于以下方面：•蛋白质检测：可以用于检测目标蛋白质在细胞或生物体中的表达量。
•抗体研究：可以用于检测抗体在细胞或液体中的浓度，了解免疫应答和抗体产生的情况。
•基因表达：可以用于检测转基因植物或动物中目标基因的表达水平。
ELISA的原理和类型
ELISA的原理和类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测体液中的特定蛋白质或其他分子。
ELISA可用于诊断疾病、监测药物治疗效果、研究疾病发病机理等。
本文将介绍ELISA的原理和类型。
##ELISA的原理1.涂覆：将待测物质（抗原或抗体）固定在微孔板上。
2.结合：加入样本液，待测物质与样本中的目标分子结合。
3.探针：加入与目标分子结合的第二抗体，或标记有酶的第二抗体。
4.显色：加入底物，酶与底物发生反应，形成可见的颜色变化。
5.检测：通过测量颜色强度或荧光强度来定量检测目标分子的浓度。
根据酶与抗体/抗原结合的方式，ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等不同类型。
###直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA类型之一、在直接ELISA中，待测物质被直接固定在微孔板上，然后加入与待测物质特异性结合的第一抗体。
随后加入与第一抗体结合的酶标记的第二抗体，最后通过显色反应来检测目标分子的浓度。
###间接ELISA在间接ELISA中，待测物质被固定在微孔板上，然后加入与待测物质特异性结合的第一抗体。
接着加入与第一抗体结合的未标记的第二抗体，最后再加入与第二抗体结合的酶标记的第三抗体。
通过酶与底物的反应来检测目标分子的浓度。
###竞争ELISA竞争ELISA是一种测定待测物质浓度的方法。
在竞争ELISA中，待测物质与酶标记的抗体结合时，用于检测的抗体与酶标记的抗体之间存在竞争。
通过测量酶的活性来确定待测物质的浓度。
###间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理。
在此类型的ELISA中，待测物质被固定在微孔板上，然后加入抗体，抗体与待测物质结合。
接着加入酶标记的抗体，酶标记的抗体与待测物质结合。
通过测量酶的活性来确定待测物质的浓度。
ELISA原理和几种方法
ELISA原理和几种方法ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay）是一种基于免疫学原理的广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的试验方法。
其原理是利用酶标记的抗体特异性结合待检测样品中的抗原，通过酶的催化作用可产生可测量的信号，从而得到待检测物质的含量或者存在与否。
1.直接和间接ELISA直接ELISA方法利用抗体的特异性与待测抗原结合，然后使用酶标记的二抗与抗体结合，最后通过酶促反应产生可测量的信号。
这种方法的优势是快速、简便、灵敏，但可能会受到待测样品中其他成分对结果影响。
间接ELISA方法在抗原检测过程中引入第二抗体，即先将待测样品中的抗原与特异性抗体结合，然后再添加酶标记的二抗，最后通过酶促反应产生可测量的信号。
间接ELISA方法具有较高的灵敏性和特异性。
2.竞争ELISA竞争ELISA方法主要用于检测待测样品中含有的抗原或者小分子的结合物。
这种方法将标记好的抗原和样品中的抗原同时参与竞争与抗体结合，通过比较信号减弱程度来推断待测样品中的抗原含量。
竞争ELISA方法适用于测定一些药物、激素、多肽等小分子物质。
3.夹心ELISA夹心ELISA方法与间接ELISA类似，不同之处在于在固定的抗原上添加待测物和酶标记的抗体，形成“抗原-待测物-抗体-酶标记抗体”的夹心结构。
夹心ELISA方法可以检测血清中的抗体或者病原微生物，具有高灵敏度、高特异性的优点。
4.反应速率ELISA反应速率ELISA方法是通过等量连续添加底物，通过酶催化反应的速率来测定待检测物质的含量。
这种方法通常更加灵敏，并且可以测定底物转化的程度，可以应用于药物浓度测定和代谢物鉴定等领域。
总之，ELISA方法是一种非常重要的生物学检测技术，可以快速、简便地检测待测物质的含量或者存在与否。
不同的ELISA方法适用于不同的检测对象和目的，在生物医学研究和临床诊断中起到了重要的作用。
ELISA的数据分析
ELISA的数据分析一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析方法，用于检测蛋白质、抗体等生物分子的存在和浓度。
本文旨在详细介绍ELISA数据分析的标准格式，包括数据处理、结果解读和统计分析等内容。
二、数据处理1. 数据收集：在ELISA实验中，需要记录标准曲线和样品的吸光度值。
通常使用ELISA读板仪测量样品的吸光度，每个样品需进行重复测量，记录平均值。
2. 标准曲线绘制：根据已知浓度的标准样品的吸光度值，绘制标准曲线。
通常使用对数坐标绘制，将吸光度值作为纵坐标，浓度作为横坐标。
使用线性回归分析确定标准曲线的方程。
3. 样品吸光度校正：根据标准曲线的方程，计算样品的浓度。
将样品的吸光度值代入方程，得到样品的浓度值。
三、结果解读1. 样品浓度计算：根据样品的吸光度值和标准曲线的方程，计算样品的浓度。
注意，吸光度值必须在标准曲线的线性范围内。
2. 结果单位：根据实验的目的和样品的性质，确定结果的单位。
例如，浓度可以以mg/mL、ng/mL等单位表示。
3. 数据可视化：将样品的浓度值绘制成柱状图、折线图等形式，以便更直观地展示结果。
四、统计分析1. 数据质量控制：检查实验数据的质量，包括吸光度值的重复性和标准曲线的拟合度。
使用统计方法判断数据是否满足正态分布和方差齐性的假设。
2. 统计检验：根据实验设计和研究问题的需要，选择适当的统计方法进行数据分析。
常用的统计方法包括t检验、方差分析、相关分析等。
3. 结果解释：根据统计分析的结果，得出结论并解释实验的意义。
注意结果的可靠性和统计学显著性。
五、总结ELISA数据分析是一项重要的实验技术，能够帮助研究人员了解蛋白质、抗体等生物分子的浓度和相互作用。
本文介绍了ELISA数据分析的标准格式，包括数据处理、结果解读和统计分析等内容。
通过合理的数据处理和统计分析，可以得出准确可靠的实验结果，并为进一步的研究提供支持。
ELISA的概念、原理、操作步骤
ELISA的概念、原理、操作步骤ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorentAay)的简称。
它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。
此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
(一) 原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、��9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
(二) 操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1. 包被：用0.05MH9.�短妓嵫伟�被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg ／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
(简称洗涤，下同)。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0. 1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“ "、“-"号表示。
ELISA的原理和类型
ELISA的原理和类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常见的免疫学实验技术，用于检测和诊断环境样品、食物、血液以及其他生物样品中的特定分子（如蛋白质、抗体、抗原等）。
ELISA具有高灵敏度、高特异性和较低的成本，广泛应用于医学、农业、环境科学和食品工业等领域。
间接式ELISA是最常用和经典的类型，其原理基本分为四步：1.固相吸附：将待测抗原分子固定在微孔板上，一般使用多孔质料（如聚合物）涂覆表面。
2.阻塞：为了防止非特异性结合，可以在固相吸附的基础上加入一层非特异性蛋白质（如牛血清白蛋白，BSA）来阻止未被抗原结合的空位。
3.特异性抗体结合：在孔中加入与抗原特异性结合的抗体，抗体会和已固定的抗原结合形成抗原-抗体复合物。
4.标记酶和底物检测：将酶标记的二级抗体加入孔中，与特异性抗体结合，再加入一种底物，使酶发生反应，并产生可观察的信号，如颜色反应。
夹心ELISA和间接式ELISA的步骤类似，但有所区别。
夹心ELISA在特异性抗体结合前和后都进行了固相吸附，因此可以检测出更弱的信号。
夹心ELISA也有更高的特异性，因为特异性抗体的结合位置被抗原所固定。
竞争ELISA用于测量待测样品中特定抗原的浓度。
与其他ELISA类型不同的是，竞争ELISA中待测物和标准抗原竞争与已固定抗原的特异性抗体结合。
待测样品中特定抗原的浓度越高，抗原与抗体结合的信号就越弱。
竞争ELISA的原理和标准曲线相关，用标准曲线中不同抗原浓度对应的信号强度来计算待测物的浓度。
直接ELISA是一种较少使用的类型，它通过直接将酶标记的特异性抗体与待测抗原结合，然后检测酶标记物的反应来获得结果。
直接ELISA省略了二级抗体的使用，所以比其他类型的ELISA快速，但灵敏度较低。
ELISA技术的应用范围非常广泛，如检测疾病诊断和筛查、食品卫生检测、生物制药质量控制以及环境监测等。
它通过测量特定分子的浓度，可以定量评估样品中待测物的含量，从而实现对疾病、食品质量或环境污染的检测、监测和控制。
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实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中脂联素水平。用纯化的抗体包被微孔
板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂联素抗原、生物素化的抗人脂联素抗体、
HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化
成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂联素呈正相关。用酶
标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板：一块（96孔）
2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，
然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10ng/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成5ng/mL，
2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312ng/mL，0.156ng/ml，0.078ng/ml样品稀释液直接
作为标准浓度0ng/mL，临用前15分钟内配制。
如配制5ng/mL标准品：取0.5ml10ng/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的
Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预
先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul
检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测
溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。
标本的采集及保存
1. 血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，
或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分
钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试
剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标
准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，
轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul（取1ul检测溶液A加99ul
检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩
干。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩
干。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔
有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与
底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进
行检测。
注：
1. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
2. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B
工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或
检测溶液B工作液。
4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，
酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需
要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的人脂联素，且与其它相关蛋白无交叉反应。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘
出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物
的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样
品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
4. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
5. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6. 底物请避光保存。
检测范围：
0.078ng/mL-5ng/mL
说明
1. 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2. 有效期：6个月
3. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任
何影响。
5. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。