HE染色操作常规流程 - 360文档中心

冰冻切片HE染色步骤

冰冻切片HE染色步骤一、操作方法及步骤：①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。

②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。

小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。

③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。

二、冰冻切片时的注意事项：①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。

有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。

因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。

临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。

如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。

这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。

⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。

另者，调高冰冻点。

⑥用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。

因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。

HE染色方法与步骤吐血整理

HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。

he染色流程(一)

he染色流程(一)he染色简介•什么是he染色?•为什么需要he染色?流程1. 样本制备•获取组织样本(如组织切片)•将样本固定在载玻片上•进行脱水和透明化处理2. 血液片制备•获取新鲜血液样本•密度离心分离白细胞•将细胞悬液涂布在载玻片上•进行干燥和固定处理3. 染色液制备•准备hematoxylin溶液和eosin溶液•根据需要进行稀释4. he染色•将载玻片浸入hematoxylin溶液中，染色一段固定时间•洗去多余溶液•将载玻片浸入eosin溶液中，染色一段固定时间•再次洗去多余溶液•干燥载玻片5. 倒置显微镜观察•将he染色载玻片放置在倒置显微镜上•调整镜头和光照条件以观察染色效果•进行细胞组织结构的分析和判定结论•he染色是一种常用的细胞和组织染色方法•它可以用于观察细胞和组织的形态结构•he染色广泛应用于病理学和组织学领域，有助于疾病的诊断和治疗参考文献•[论文/reference]•[书籍/reference]注意：此处所提供的流程仅为示例，实际操作中可能存在差异。

请严格按照实验室标准操作，并遵循相关实验室安全规定。

he染色简介•什么是he染色?–he染色是一种常用的细胞和组织染色方法，用于观察细胞和组织的形态结构。

•为什么需要he染色?–he染色可以帮助病理学家和研究人员观察细胞和组织的结构，对疾病的诊断和治疗起到重要的作用。

流程1. 样本制备•获取组织样本(如组织切片)。

•将样本固定在载玻片上，保持其原始形态。

•进行脱水和透明化处理，以去除组织中的水分，便于染色。

2. 血液片制备•获取新鲜血液样本。

•密度离心分离白细胞，得到富含白细胞的细胞悬液。

•将细胞悬液涂布在载玻片上，形成血液片。

•进行干燥和固定处理，以保持细胞形态。

3. 染色液制备•准备hematoxylin溶液和eosin溶液，用于染色。

•根据需要进行稀释，以调整染色液的浓度。

4. he染色•将载玻片浸入hematoxylin溶液中，染色一段固定时间。

石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片和HE染色详细步骤石蜡切片和HE染色方法与步骤1(取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织(或其他组织)。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。

取下所需要的肝组织，切成一小块2,3mm厚。

注意事项:(1)取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

(2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2(固定将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30,50min。

注意事项:(1)一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

(3)固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

(4)材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。

标签上注明固定液、材料来源、日期等。

标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

3. 脱水50%酒精?70%酒精?80%酒精?95%酒精?100%酒精?100%酒精。

每级0.5h。

注意事项:(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

(2)在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

(3)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

(4)在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

(5)如需过夜，应停留在70%酒精中。

(6)脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象4. 透明1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ?纯二甲苯(1.5h) ?纯二甲苯(1.5h)。

he染色protocol[解说]

常规HE染色石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。

所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。

即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。

人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。

脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。

一般脱蜡至水的时间和步骤如下：HE染色脱蜡至水步骤步骤顺序试剂时间1 二甲苯Ⅰ脱蜡 5 min2 二甲苯Ⅱ脱蜡 5 min3 二甲苯Ⅲ脱蜡 5 min4 无水乙醇浸洗 1 min5 95%乙醇Ⅰ浸洗 1 min6 95%乙醇Ⅱ浸洗 1 min7 80%乙醇浸洗 1 min8 自来水冲洗3-5 min冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。

染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。

常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。

特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。

苏木精必须氧化成熟后才能使用。

苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。

或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。

苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。

矾也是苏木精常用的媒染剂，如Harris苏木精的配制以硫酸铝钾（钾明矾）或铵明矾作为媒染剂。

不同媒染剂配制的苏木精染色强度不同。

苏木精作为一种基础染料对细胞核的核酸具有一定的亲和力。

苏木精不是“退行性”就是“进行性”染色，退行性染色是把切片在染液内留一段时间，然后从染液里出来用盐酸乙醇分化，去除过染的一部分。

这种方法最适合大批量的染色。

进行性染色切片在染液中染到自己想要得染色强度。

组织石蜡包埋切片HE染色的基本流程

组织石蜡包埋切片HE染色的基本流程一取材和固定取材后经固定24小时（4%PA灌注取材的后固定6~8小时）以后，流水冲洗24小时，置于70%~80%乙醇中，可长期保存。

二脱水和包埋1、95%ALC（二道）Ⅰ2~4hⅡ2h2、无水ALC（二道）Ⅰ1.5hⅡ1h3、二甲苯+无水乙醇（1：1）20min4、二甲苯（二道）Ⅰ10min（注：脱水透明esp.透明时间可适当延长）Ⅱ10min5、浸软蜡（50~52℃）（二道）Ⅰ30minⅡ1h6、浸硬蜡（58~60℃）（二道）Ⅰ30minⅡ30min7、包埋：注意温度、切面。

三切片修、切、展、贴、烤（烤片55~60℃）3~10h四HE染色1、二甲苯脱蜡五道，每道5~10分钟2、无水乙醇Ⅰ5minⅡ5min3、95%乙醇Ⅰ5minⅡ5mn4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、D．W．3~5min7、Harris苏木素液5min（冬天可适当延长，eg.20min）8、水洗9、0.5%盐酸酒精分色3~10seconds，镜下观察10、水洗蓝化15~30min（注意换水）11、70%乙醇5min12、80%乙醇5min13、伊红液（95%乙醇溶液）3~30seconds14、95%乙醇Ⅰ1minⅡ5min15、无水乙醇Ⅰ5minⅡ5min16、二甲苯+乙醇（1：1）5min17、二甲苯Ⅰ5minⅡ5minⅢ5min18、中性树胶封片。

HE染色注意事项：1.染色时调节pH值很重要。

如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。

因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。

染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2.切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。

如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3.切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

he染色流程步骤

he染色流程步骤HE 染色啊，这可是病理实验中的一项重要技术呢！就好像是给组织细胞精心打扮一番，让它们能更好地展现在我们眼前。

首先得准备好切片，这就像是给模特准备好展示的舞台。

切片要切得薄而均匀，就像裁衣服一样，得有好手艺。

然后把切片放到烤片机上稍微烤一下，让它能稳稳地待在那儿，就像给它定个型。

接下来就是染色的关键步骤啦！先把切片放到苏木精溶液里泡一泡，这苏木精就像是神奇的魔法药水，能让细胞核变得蓝汪汪的，特别好看。

就好像给细胞核穿上了一件蓝色的漂亮衣服。

染完细胞核，就得让细胞质也美起来呀。

这时候就要用到伊红溶液啦，把切片放进去，细胞质就会染上那鲜艳的红色，哇，一下子就生动起来了，就像给细胞质化了个美美的妆。

染完色可还没完事儿呢！还得经过一系列的脱水、透明步骤。

就好像给化好妆的模特做最后的整理，让一切都更加完美。

脱水呢，就像是把多余的水分挤出去，让切片变得更清爽。

透明呢，则像是给切片罩上一层薄薄的面纱，让它更有朦胧美。

最后一步就是封片啦！把切片用盖玻片封起来，就像是给模特穿上了一件华丽的外套，保护好它。

你说这 HE 染色是不是很神奇呀？就这么一步步的，把那些原本我们肉眼很难看清的组织细胞变得清晰又漂亮。

它就像是一个小小的魔法，让我们能更好地了解身体内部的奥秘。

想想看，如果没有 HE 染色，我们怎么能那么清楚地看到细胞的结构和形态呢？怎么能对疾病做出准确的诊断呢？它可是病理诊断的重要手段之一呢！所以啊，一定要好好掌握 HE 染色的流程步骤，这可关系到我们对生命的探索和了解呢！可不能马虎哟！这就像是学一门手艺，得用心去学，才能学好。

你说是不是呢？你要是学会了这一手，那可就厉害了，感觉就像掌握了打开生命奥秘大门的钥匙呢！。

HE染色方法与步骤吐血整理

HE染色方法与步骤吐血整理HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。

HE染色技术(长沙)

HE染色流程图㈡
进95%酒精或蒸馏水（2分钟左右）伊红（1分钟左右）梯度酒精各1分钟（80%1缸、95%2缸、100% 2缸）二甲苯（1缸，3～5分钟）封片、阅片 ** 染色
脱水透明 **
四、染色结果
细胞核被苏木素染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。胞浆被伊红染成深浅程度不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色，胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红细胞呈橘黄色，核仁呈红色，蛋白性液体呈粉红色。
组织透明及目的
• 组织脱水后，要经过一个浸蜡前的中间溶剂透明过程，才能进行浸蜡。 • 目的：组织经脱水后、浸蜡前必须经过某些既能与脱水剂相混合又能溶解石蜡的中间溶剂处理。组织在中间溶剂时，组织间隙内存留的脱水剂完全为中间溶剂所取代时，组织就呈现透明状态，此时即可进行浸蜡。透明液多采用二甲苯，组织经无水乙醇脱水后转入二甲苯透明，组织的大小、厚薄不同，透明时间也不同，一般为30～60分钟。##
在整个染色过程中不让切片干涸：
• 切片完全干涸，会使组织收缩和出现裂痕即出现所谓“龟裂”现象。也会使部分细胞核透明不良，看起来像黑色的细胞核，即形成“黑核”，影响阅片。
福尔马林沉着及“黑核”
HE×400
烤片温度过高、风干不彻底x400
刀痕x40
封片不当，示气泡
网膜结节冰冻切片x200
三、HE染色的流程
HE染色流程图（一） HE染色流程图（二）
HE染色流程图㈠
经过固定的组织取材成小块组织后 10%甲醛或AF液（10%甲醛：95%酒精：冰醋酸=8：1：1） 75%酒精（1.5小时）
85%酒精（1.5小时）
脱水** 95%酒精2缸（各1小时） 100%酒精3缸（各1小时）二甲苯（2缸，各1小时）石蜡（3缸，各1小时）包埋成蜡块备切片用透明** 浸蜡** 包埋**

HE染色方法步骤

HE染色方法步骤
“HE 染色过程”
试验前准备: 4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片
试剂名称:无水乙醇,氨水,冰乙酸,盐酸,二甲苯,中性树胶，HE 染液配制试剂:
1%盐酸乙醇分化液配制：
36%—38%盐酸：1ml
75%乙醇：99ml
1、0.2%氨水配制:
25%—28%氨水：0.2ml
自来水：100ml
pH 值在7.5—8之间
试验过程：记录试验的具体步骤，
1，烤片：2小时，温度60℃（目的：使组织切片与载玻片贴合的更加紧密）
2.切片脱蜡至水：
①二甲苯Ⅰ：10min
②二甲苯Ⅱ：10min
③无水乙醇Ⅰ：5min
④无水乙醇Ⅱ：5min
⑤95%乙醇：2min
⑥90%乙醇：2min
⑦80%乙醇：2min
⑧70%乙醇：2min
⑨自来水洗：2min
3.染色：
①苏木精染色：10min
②自来水洗：1min
③1%盐酸乙醇分化：数秒
④自来水洗：1min
⑤0.2%氨水返蓝：30s±
⑥自来水洗：1min
⑦伊红染色：5min
⑧自来水洗：速洗
4. 37℃烘干0.5h以上，中性树胶封固。