大蒜油软胶囊中大蒜新素的高效液相色谱测定法_张向兵
气相色谱测定不同工艺提取的大蒜油成分
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Ｄ Ａ 丁 ｓ 标准 品 （ 含量８ ８ ． ４ 岩 ，批 号
ｍ针筒微孔滤膜过滤，置于进样瓶
ｌ ０ ０ ３ ８ ４ — ２ ０ １ １ ０ ２ ， 中检 院 ） 、Ｄ Ａ Ｄ Ｓ 标 中上样分析。 准品 （ ８ ０ ％ ， 批号 １ ０ ０ １ ５ ０ ７ ０ ４ １ ，Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ ２ ． ４ 超临界提取大蒜油的测定 公司 ） 、冻 干 大蒜 （ 漳 州碧 山凯胜 食 采 用 超临 界设 备 １ Ｌ 萃 取釜 对 冻 品有限公司 ） 、新鲜大蒜籽 （ 市售 ） 、 干 大蒜 进 行萃 取 ，萃 取工 艺 ：萃 取 压 正 己烷 （ 色谱 级 ） 、乙醇。 力２ ０ Ｍ Ｐ ａ ，萃 取 温度 ４ Ｏ ｃ Ｃ Ｉ ，分 离 Ｉ 分析天平 （ 梅特勒 ～ 托利多国际 压 力 ８ Ｍ Ｐ ａ ，分离 Ｉ 温度 ４ ０ ｃ Ｃ Ｉ ，分离
理 功效 ， 其中 目前研究最多、也是最重 要 的活性 成分是其中的硫化合物 ，主要 存在于其挥发油 中，称之 为大蒜油 。
进样 口温度 ： ２ ２ ０ ｏ ｃ ； 检测器温度：
２ ５ ０ ｏ ｃ ； 载气： 氮气（ １ ｍ Ｌ ／ ｍ ｊ ｎ ） ； 氢气：
４ Ｏ ｍ Ｌ ／ ｍ ｛ ｎ ； 空气： ４ ０ ０ ｍ Ｌ ／ ｍ １ ｎ ｉ 分流 比：
２ ５ ： １ ； 尾 吹流量 ：３ ５ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ；进样量 ：
ｌ Ｌ 。
大蒜中的大蒜精油的含量大约是 １ ． ３ ２ ％ ，日常饮 食所摄入 的大蒜量难 以
发挥 出理 想 的生 理 功效 ，因此 ，必须
２ 样 品制备 ２ ． １ 标准品制备
分别 称 取 Ｄ Ａ Ｔ Ｓ和 Ｄ Ａ Ｄ Ｓ标 准 品 采取 高效 的提 取 手段 ，最大 限度地 提 ｌ ０ １ ． １ ３ ｍ ｇ和 ｌ ２ ７ ． ９ ２ ｍ ｇ置 于 １ ０ ｍ Ｌ 取、 富集其 风 味物 质和 功 能成分 。从 容 量瓶 中，用正 己烷 定 容至刻 度 ，然 大蒜 中提取 挥 发油 的成分 方 法主要 有 后分别移取 １ ． ０ ｍ Ｌ 置于 １ ０ ｍ Ｌ 容量瓶 水蒸气 蒸 馏法 、溶 剂提 取法 、超 临界 中，用 正 己烷 定容 至刻 度 ，此 溶 液含 二氧化 碳 萃取 法 、微 波辅 助 萃取 法、 大蒜 素浓 度 为 １ ． ０ ｌ ｌ ３ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 和 二烯 超声辅助萃取法等 。
大蒜精油中塑化剂的两种检测方法比对
Comparison of Two Detection Methods for Plasticizer in Garlic Essential OilOU Jinyu(Anhui Zhongqing Inspection and Testing Co.,Ltd.,Hefei 230088,China)Abstract :This paper mainly studied two rapid and accurate detection methods for 16Phthalic acid ester Plasticizer in garlic essential oil.The results showed that GC-MS-MS detection results showed that 16compounds could be well separated,and the peak shape was good,and the linearity was good in the range of 0.05~1.5μg /mL,the recovery rate of standard addition was 80%~110%,and the relative standard deviation was RSD2%~5%.The best detection method for 16Phthalic acid ester Plasticizer in garlic essential oil was found.Key words :gas chromatography-mass spectrometer;gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometer;garlic essential oil;plasticizer大蒜精油中塑化剂的两种检测方法比对欧金玉（安徽中青检验检测有限公司，安徽合肥230088）【摘要】本文主要研究了大蒜精油中16种邻苯二甲酸酯类塑化剂的两种快速准确的检验方法，结果显示：采用GC-MS-MS 能够很好地分离16种化合物，且峰形好响应高，在0.05~1.5μg/mL 范围内线性良好，加标回收率为80%~110%，相对标准偏差RSD 为2%~5%。
2006G_CMS法检测保健食品_大蒜油中大蒜素_付松
[作者简介]付松(1955-),女,学士,主任技师,主要从事食品卫生理化检验研究。
【化学测定方法】GC/M S法检测保健食品)大蒜油中大蒜素付松,谢碧俊(四川省疾病预防控制中心,成都610031)[摘要]目的:建立大蒜油中大蒜素的GC/M S分析方法。
方法:样品用正己烷溶解定容后直接进样,大蒜素经HP-FFAP石英毛细管柱分离,用气相色谱-质谱联用仪(G C-M S)进行定性、定量分析。
结果:大蒜素浓度在01050~ 2100mg/m l范围内,线性关系良好,相关系数r=019990;高、中、低3种浓度的加标样品,平均回收率分别为103%, 9511%,100%;相对标准偏差(RSD)分别为2183%,1194%,2109%;本方法最低检出限为01005g/100g。
结论:本方法简便快速,结果准确可靠,适用于大蒜油中大蒜素的检测。
[关键词]大蒜素;GC/M S分析;保健食品[中图分类号]O65717+1[文献标识码]A[文章编号]1004-8685(2006)12-1461-02大蒜素(三硫二丙烯,C6H10S3)是大蒜类保健食品的主要功效成分,它具有抗菌、抗氧化、降血脂、预防动脉硬化、提高免疫力等作用。
大蒜素含量已成为评价大蒜类保健食品功效成分的重要指标。
大蒜素的含量测定有重量法[1]、滴定法[2]、气相色谱法[3]、液相色谱法[4]、气相色谱-质谱法[5]等。
重量法和滴定法操作繁琐、费时,灵敏度低,准确性差;后3种方法则简便、快速、灵敏,气相色谱法和液相色谱法均依据峰的保留时间进行定性,而气相色谱-质谱法则依据物质结构特征进行定性,定性、定量准确可靠。
通过实验,建立了大蒜油中大蒜素的GC/M S分析方法,本方法简便、快速、灵敏、准确,用于保健食品大蒜油的检测,取得令人满意的结果。
1材料与方法111仪器与试剂HP GC6890/M S5973型气相色谱-质谱联用仪;大蒜素标准品(纯度9912%):用正己烷(分析纯)配制浓度为5100m g/m l的大蒜素标准储备液,置冰箱冷冻室(-18e)保存。
高效液相色谱法测定蒜头果油分离出的神经酸含量
２０１８年 第 ４３卷 第 ６期
Ｍａｌａｎｉａ ｏｌｅｉｆｅｒａ ｏｉｌ ｂｙ ＨＰＬＣ
ＬＡＩ Ｆｕｂｉｎｇ，ＬＩ Ｗ ｅｉｇｕａｎｇ，ＬＡＩ Ｆａｎｇ，ＬＩＵ Ｘｉｏｎｇｍｉｎ，ＭＡ ｌｉ，Ｗ ＡＮＧ Ｙｉｆａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｎｅｒｖｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｍａｌａｎｉａ ｏｌｅｉｆｅｒａ ｏｉｌ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ２ （４．６ ｍｍ ×２５０ ｍｍ，５ ｍ），ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｏｆ ａｅｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｍｅｔｈａｎｏｌ一０．４％ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ—ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ（ｖｏｌ— ｕｍｅ ｒａｔｉｏ ８０：１２：５：３），ｆｌｏｗ ｒａｔｅ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ５ Ｌ，ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２６ ｏＣ ａｎｄ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ２０５ ｎｍ ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕＩｖｅ ｏｆ ｎｅｒｖｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅ—
ａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ １．０—２０．０ ｍｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ （ＲＳＤ）ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
高效液相衍生化法测定大蒜氨基酸指纹图谱
高效液相衍生化法测定大蒜氨基酸指纹图谱*杨 瑾1**,陈 坚***,李新霞1,高晓黎1(新疆医科大学药学院,新疆 乌鲁木齐 830011)摘要:目的 参照 中药材指纹图谱研究的技术要求(暂行) ,建立大蒜中氨基酸指纹图谱及技术参数。
方法 高效液相色谱法,以邻苯二甲醛为衍生化试剂,以0.045mol/ml磷酸盐缓冲液 乙腈 1,4-二氧六环 四氢呋喃(69.9 25.0 2.9 2.2)为流动相,337nm检测。
10个不同产地大蒜所得的色谱图用 中药色谱指纹相似度评价系统(2004年A版) 分析评价。
结果 精密度、重现性、稳定性实验RSD不大于3%。
指纹图谱共有峰6个,相似度在0.90以上。
结论 本方法稳定、准确,为进一步控制大蒜的质量提供依据。
关键词:大蒜;高效液相色谱;衍生化;指纹图谱中图分类号:R9 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2010)05-0509-03Determination of fingerprint of amino acids in garlic by derivation HPLCYANG Jin,CHEN Jian,LI Xin-xia,et al(Farmacy I nstitute,X inj iang M edical Univer sity,Ur umqi830011,China)Abstract:Objective Determ ination o f fing erprint and technical parameter of amino acids in garlic according to Specification about fingerpr int of Chinese herbal medicines(Tentativ e standard) .Methods A H PLC method w as used w ith o-phthaldialdehy de der iv atization,w ith the detectio n w av elength of337nm,the mobile phase was0.045M Phosphate buffer,acetonitrile,1,4-diox ane,tetrahydr ofuran(69.9 25.0 2.9 2.2).T en samples from differ ent habitats w ere analyzed and evaluated using the similarity evaluation system fo r chr omatogr aphic fing er print of traditional Chinese m edicine(Versio n2004A).Results The relative standard dev iation(RSD)of pr ecision and repro ducibility was no t more than3%.In the fing er-print of g arlic,chr omatogr aphic peak o wned by all of garlic sam ples w as six.The similarity of samples w as all above0.90.Conclusion T he method is accurate,conv enient,stable and the chrom atog raphic fing er prints can be served as a pow erful tool for the further quality control of garlic.Key words:g ar lic;H PLC;der iv ation;fingerpr int百合科葱属植物大蒜(Allium sativum L)的氨基酸可分成两类:一类是组成蛋白质的氨基酸,另一类是非蛋白质氨基酸。
高效液相色谱测定大蒜中甲醛的含量
高效液相色谱测定大蒜中甲醛的含量李云龙1，杨 莉1，谢凤梅1，干小燕1，伏 华2，杨延康2*（1.四川敏恩检测技术有限公司，四川成都 610000；2.成都圣恩生物科技股份有限公司，四川成都 610000）摘 要：建立了柱前衍生-高效液相色谱法测定大蒜中甲醛含量的分析方法。
样品经水提取，在酸性条件下与衍生剂2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，用二氯甲烷萃取、浓缩后，采用Agilent1 260高效液相色谱仪，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（1∶1），在355 nm波长处测定，外标法定量。
结果表明，甲醛在0.1～5.0 μg·mL-1线性关系良好，相关系数在0.999以上，在0.2～2.0 μg·mL-1浓度添加水平下，样品回收率在91.18%～99.62%，相对标准偏差在 0.313%～1.438%。
该方法具有良好的精密度、准确度和定量限，适用于大蒜中甲醛含量的检测。
关键词：甲醛；高效液相色谱；大蒜；衍生Determination of Formaldehyde in Garlic by HighPerformance Liquid ChromatographyLI Yunlong1, YANG Li1, XIE Fengmei1, GAN Xiaoyan1, FU Hua2, YANG Yankang2*(1.Sichuan Minen Testing Technology Co., Ltd., Chengdu 610000, China; 2.Chengdu Shengen Biotechnology Co.,Ltd., Chengdu 610000, China)Abstract: A liquid chromatography method has been established for the determination of formaldehyde content in garlic. The sample was extracted with water and reacted with the derivative 2,4-dinitrophenylhydrazine under acidic conditions to generate 2,4-dinitrophenylhydrazone. After extraction and concentration with dichloromethane, the sample was subjected to Agilent 1260 high-performance liquid chromatography on a C18 column (4.6 mm×250 mm，5 μm). The mobile phase is acetonitrile water (1∶1), measured at a wavelength of 355 nm, and quantified using external standard method. The results indicate that formaldehyde has a good linear relationship at 0.1～5.0 μg·mL-1, with a correlation coefficient above 0.999. At the addition level of 0.2～2.0 μg·mL-1 concentration, the sample recovery rate ranges from 91.18% to 99.62%, and the relative standard deviation ranges from 0.313% to 1.438%. This method has good precision, accuracy, and quantitative limit, but the containers require special treatment and rigorous operation, making it suitable for the detection of formaldehyde content in garlic.Keywords: formaldehyde; high performance liquid chromatography; garlic; derivative甲醛是一种可以直接作用于氨基、羟基和羧基等多种官能团的原生质毒物，能够作用生成次甲基衍生物，破坏生物细胞蛋白质和机体酶，对人体皮肤、肝脏、肾脏造成危害，还会影响消化功能[1]。
高效液相色谱法测定大蒜提取物中蒜氨酸的含量
高效液相色谱法测定大蒜提取物中蒜氨酸的含量蒋利;常军民【摘要】目的建立高效液相色谱法测定大蒜提取物中蒜氨酸含量的方法 .方法采用YMC-Pack ODSA(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:0.02%三氟乙酸水溶液;流速:0.5 mL·min-1;紫外检测波长:214 nm.结果在14.7～294 mg·L-1范围内,峰面积与蒜氨酸浓度呈较好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为100.1%,RSD 为2.0%(n=9).结论该法操作简便,重现性好,结果准确、可靠.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2009(024)001【总页数】2页(P21-22)【关键词】大蒜;提取物;蒜氨酸;高效液相色谱法【作者】蒋利;常军民【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R927.2大蒜为百合科葱属植物蒜(Allium Sativum Linn．)的干燥鳞茎，具有抗菌、抗病毒、预防心血管疾病和抗肿瘤等生物活性［1］。
蒜氨酸又名蒜碱，化学名为S－烯丙基－L－半胱氨酸亚砜［S－allyl－L－(+)－cysteine sulfoxide］，白色针状结晶，易溶于水，不溶于乙醚等非极性有机溶剂，以稳定、无臭形式存在于大蒜鳞芽中，是完整、未受损大蒜中含量最丰富的非蛋白类含硫氨基酸，是大蒜中主要的含硫化合物。
研究表明，蒜氨酸具有降血酯、抗动脉粥样硬化、提高机体免疫等功效［2，3］。
有关大蒜中蒜氨酸的含量测定已报道较多，但大蒜提取物中蒜氨酸的含量测定未见报道，因此笔者建立高效液相色谱法测定大蒜提取物中蒜氨酸的含量，为大蒜制剂的质量标准提供参考依据。
1．1 仪器岛津 LC－20A系列高效液相色谱仪，DAD检测器，岛津LC－20A色谱工作站;赛多利斯BP211型电子天平(德国)。
大蒜中蒜氨酸及大蒜素检测方法研究进展
大蒜属葱科葱属植物，在我国具有悠久的种植历 史。由于其独特的辛辣风味和保健功能，大蒜在国内 的产量和销量一直较高，临床对其功能性的研究也非 常广泛。几个世纪以来，大蒜都被认为是药用食材， 在常见疾病的治疗中作为传统处方药物使用。有报道 指出，食用大蒜可降低几种癌症的发病率，并能降低 胆固醇、抑制血小板聚集、降血压，从而降低心血管 病的风险，同时具有杀菌、抗氧化、消炎等生物活性 功效 [1-2]。这些治疗功效，主要归因于其含有大量的有
些方法存在专一性靠、更准确的手段，其极
性的特点适宜采取液相色谱法进行检测。Emiko 等 [6] 首 先采用液相色谱法对大蒜和算制品中的蒜氨酸进行测
测条件为负离子模式选择离子监测（m/z=160、176）， 方法检出限为 0.01 μg/mL。
2 大蒜素的检测方法研究
◎ 商春锋，周一冉，付 彤 （济宁市食品药品检验检测中心 ，山东 济宁 272100）
Shang Chunfeng, Zhou Yiran, Fu Tong (Jining Center for Food and Drug Control, Jining 272100, China)
摘 要：大蒜是人们生活中必不可少的食材，具有显著的保健及药用价值，主要是由于其含有大量的有机含 硫化合物。本文分别对大蒜中蒜氨酸及大蒜素的国内外分析检测方法的研究进展进行了综述，结合物理及化学特 性介绍了萃取处理、仪器分析等操作的发展，为大蒜及其制品中的活性风味物质含量的客观评价提供技术保障。
36 / 现代食品 XIANDAISHIPIN
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Industry Review 行业综述
前体物质和大蒜素测定的研究进展分别进行讨论。
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作者简介：张向兵（1975－），男，本科，主管技师，主要从事卫生理化检验和相关研究工作。*通讯作者，张丁，E－mail：zhangd222@hncdc．com．cn
·化学测定方法·大蒜油软胶囊中大蒜新素的高效液相色谱测定法
张向兵，张伟，苏永恒，银恭举，张丁*河南省疾病预防控制中心，郑州450016
摘要：目的建立大蒜油胶囊中大蒜新素的高效液相色谱测定方法。方法样品处理后，采用乙腈水溶液（80+20）做流动相，C18柱分离，240nm波长下二极管阵列检测器检测。结果该法在0．2μg/ml～400μg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0．9999，相对标准偏差均小于6，回收率为97．8%～101．3%，检
测限为0．5ng，定量限为1．65ng～4μg。结论本法样品前处理简单，检测快速，定性定量准确，回收率高，精密度好，适用蒜油胶囊中大蒜新素含量的测定。关键词：大蒜新素;高效液相色谱中图分类号：O657．7+2文献标识码：A文章编号：1004－8685（2013）09－2062－03
HPLCmethodfordeteminationofallitridiingarlicoilsoftcapsuleZHANGXiang－bing，ZHANGWei，SUYong－heng，YINGong－ju，ZHANGDing*HenanCenterforDiseaseControlandPrevention，Zhengzhou450016，China
Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofallitridiingarlicoilsoftcapsulebyHPLC．Meth-odsTheseparationwascarriedonanC18columnbyusingthemobilephaseconsistingofacetonitrile+water（80+20）．Theflowratewas1．0ml/min．TheabsorptionwascarriedoutbyPDAusingthewavelengthat240nm．Re-sultsThemethodshowedgoodlinearityin0．2μg/ml～400μg/mlwiththecorrelationcoefficientof0．9999andtheRSDswerelessthan6%，andtherecoverieswere97．8%～101．3%，withthedetectionlimitof0．5ngandquantitativerangeof1．65ng～4μg．ConclusionThemethodissimpleandrapidwithhighrecoveryrateandgoodprecision，itcanbeusedforanalysisofallitridiingarlicoilsoftcapsule．Keywords：Allitridi；HPLC
大蒜新素（Allitridi），是以大蒜的鳞茎为主要原料提取的产品，也可化工合成。化学名称是二烯丙基三硫醚，分子式C6H10S3，相对分子质量178．34，常温下为淡黄色油状液体，微溶于水，溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。大蒜新素主要存在于大蒜的鳞茎中，由大蒜中的大蒜氨酸在大蒜酶作用下转化产生［1］，具强烈的大蒜臭和辣味。它具有抗菌抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化延缓衰老、抗癌、防治心血管疾病等多种保健作用［2］。其本身无毒、无副作用，无残留和耐药性，能活化细胞，增强抗病能力，能去脂降压、降血糖、调节肠胃，因而广泛应用于养殖、药品和保健食品等各个行业［3］。关于大蒜新素的含量测定有多种检测方法，有比色法［4］、重量法［5］、气相色谱法［6］、气相色谱－质谱联用法等［7］，但操作较复杂，本文应用高效液相色谱方法对大蒜油胶囊中大蒜新素的含量进行了测定，该法操作简单，具良好的稳定性和重复性，为大蒜油胶囊中大蒜新素的含量提供了参考方法。
1材料与方法
1．1仪器与试剂
Waters2695高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测
器（美国waters公司）；WatersXbridge－C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；乙腈（色谱纯，Fisher）；超纯水
（18．2MΩ·cm，Millpore公司）；BP211D十万分之一电子
天平（德国Sartorious公司）；大蒜新素对照品（中国药品生物制品检定所，88．4%）；0．45μm微孔滤膜（有机，天津市科亿隆实验设备有限公司）大蒜油胶囊（河南某生物医药科技有限公司，批号为201201、201202、201203三批）。1．2实验方法
1．2．1样品处理取0．5000g样品置于25ml容量瓶
中，用20ml四氢呋喃溶解，摇匀，用乙腈定容。用0．45μm微孔滤膜滤过后上机测定。1．2．2标准曲线的配制精密称取56．6mg大蒜新素
·2602·中国卫生检验杂志2013年8月第23卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Aug2013，Vol23，No9对照品（88．4%），用乙腈溶解并定容到50ml，配制为1000μg/ml的标准储备溶液。用1000μg/ml的标准储备溶液逐级稀释得到10μg/ml的标准溶液。同时分别精密吸取1000μg/ml和10μg/ml的标准溶液0．10ml，0．20ml，0．50ml，1．00ml，2．00ml，4．00ml置于10ml容量瓶中，用流动相定容到刻度，摇匀。得到12种浓度依次为0．10μg/ml，0．20μg/ml，0．50μg/ml，1．00μg/ml，2．00μg/ml，4．00μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的大蒜新素标准系列应用液。1．2．3色谱条件色谱柱：WatersXbridge－C18，250mm×4．6mm，5μm；流动相：乙腈+水溶液（80+20）；PDA检测器200nm～400nm扫描采集，240nm定量测定；流速：1．0ml/min；进样量：10μl；柱温：30℃。1．2．4样品测定取制备好的样品溶液，在标准溶液相同的色谱条件下进行分析测定，保留时间和紫外光谱定性，峰面积定量。2结果与讨论2．1流动相的条件选择由于大蒜新素中存在两个C－C双键，属于二烯烃类化合物，具有亲电子性质，因而选择了质子给予体溶剂乙腈做为溶剂来配制标准溶液来保证溶液的稳定性。同时按照反相液相色谱分离的原则，决定优选乙腈与水的流动相组合来摸索分析条件，通过反复调整，选择了乙腈+水（80+20）作为流动相。2．2测定波长的选择利用二极管阵列检测器对大蒜新素标准溶液在190nm～400nm处进行波长扫描，得到紫外扫描曲线图（图1），从图1上看到，随着波长的增大，其紫外吸收越来越小，而在235nm～260nm是一平缓区，260nm以后紫外吸收明显减少。考虑到在样品主要溶剂为四氢呋喃，其紫外截至波长为220nm，而溶质中也可能存在未知的紫外吸收干扰，综合考虑灵敏度和干扰性，选择了240nm作为测定波长。虽然灵敏度有所降低却能保证色谱图较为干净理想。图1大蒜新素的紫外扫描图（190nm～400nm）2．3样品提取方法的选择由于样品属于液体油状样品，加入流动相乙腈无法溶解，采用其它提取方案又会增加操作步骤，造成待测物质损失，因此选择了四氢呋喃做为溶剂来溶解样品后，乙腈稀释样品的方法来保证回收率。由于本样品的油脂含量很高，经反复实验加入四氢呋喃20ml才能够完全溶解，否则加入乙腈后会发现有油状液滴存在于容器底部。从标准溶液和样品溶液的色谱图（图2）上看出，色谱峰的分离度和峰形较好，出峰时间较短，在完全满足分析要求的情况下回收率较高。若无法分离，还需重新考虑提取方案。
图2标准溶液和样品溶液的色谱图2．4标准曲线和线性范围
在选定的色谱条件下对1．2．2的12种标准系列应用溶液进行测定（n=6），以浓度为横坐标，平均峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，在0．1μg/ml～400μg/ml的范围内，回归方程为A=8584C+3829，r=0．99999．线性关系很好。本法线性范围较宽，达到了3个数量级。在线性范围内，可根据精密度试验的结果（见图1），选择不同的标准工作曲线来满足不同的定量精度。2．5准确度试验及精密度
取标准系列应用溶液按本法条件连续进样6次，每次10μl，分别计算大蒜新素的相对标准偏差（RSD，见表1）结果表明，在0．2μg/ml～400μg/ml的范围内，其RSD均小于6%，达到了一定的分析精密度。
表1大蒜新素浓度和相对标准偏差对照表（n=6）浓度（μg/ml）0．100．200．501．02．04．0102050100200400
RSD%16．14．755．352．621．080．690．460．290．080．110．073．17
2．6回收率试验
取样品1．00g置于100ml容量瓶中，分别加入100μg/ml标准溶液0．50ml，1．00ml，2．00ml后按本法测
定，同时作试剂空白。计算本法回收率（表2）。由表2可见，本法平均回收率范围为98．4%～100．2%，说明在此范围内样品和标准的测定结果准确度和精密度较好。
表2方法回收率（n=6）样品本底值（μg/ml）加标浓度（μg/ml）测定均值（μg/ml）扣除本底后均值（μg/ml）加标回收率（%）RSD（%）12050168．948．997．80．24100219．499．499．40．10200322．6202．6101．32．72（下转第2066页）
·3602·中国卫生检验杂志2013年8月第23卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Aug2013，Vol23，No9