白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养耐热性状差异研究

安徽农学通报，AnhuiAgri.Sci.Bull.2017，23（23）白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养耐热性状差异研究谢翎（安庆师范大学生命科学学院，安徽安庆246000）

摘要：该实验从菌株培养条件入手，模拟夏季田间高温环境，采用热胁迫的方法，研究白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养的耐热性状差异，以期筛选出耐热性更强的菌株。结果表明：小米培养基培养的Bb38菌株的耐热性能更好。关键词：球孢白僵菌；分生孢子；热胁迫；耐热性中图分类号S476文献标识码A文章编号1007-7731（2017）23-0015-2

StudyonHeatResistantPropertiesofBb38StrainsofBeauveriabassianaRespectivelyCulturedonMilletandSDAYMediumXieLing（SchoolofLifeSciences，AnqingTeachersCollege，Anqing246011，China）Abstract:Inthisstudy，thethermostabilitydifferenceofBb38Beauveriabassianastrainswhicharerespectivelycul⁃turedonmilletculturemediumandSDAYmediumaredetected.TheresultsshowthatthethermostabilityofBb38strainswhichareculturedonmilletcultureisbetterthantheotherone.Keywords:Beauveriabassiana；Conidium；Thermostability；Thermalstress

1前言白僵菌是一类寄主范围广且致病性强的昆虫病原真菌，在真菌分类学上属于丝孢纲（Hyphomycetes）丛梗孢目（Moniliales）从梗孢科（Moniliaceae）白僵菌属（Beauve⁃ria）。其菌体由菌丝和分生孢子组成，根据孢子形态可以将白僵菌分为球孢白僵菌和布氏白僵菌［B.brongniartii（Sacc.）Petch］。自1897年美国利用球孢白僵菌（Beauve⁃riabassiana）防治麦长蝽（Blissuslercoplerus）至今，其作为害虫生物防治的重要因子受到了广泛关注。由于白僵菌具有对环境和温血动物无害、易培养、杀虫谱广、致病力强等特点，目前已广泛应用于农林害虫的防治。然而，相关研究结果也表明球孢白僵菌分生孢子对不利环境的抗逆力在很大程度上决定着菌剂的生态适应性和田间应用效果。其分生孢子萌发和侵染害虫的主要制约因子是湿度，而温度与湿度具有互补与综合作用。当夏季田间温度高于35℃时，球孢白僵菌的孢子萌发和生长一般会受到抑制。因此，目前球孢白僵菌的大面积田间应用还面临着一定的难题。本研究从菌株培养条件入手，研究白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养的耐热性状差异，以期培养获得耐热性更强的白僵菌孢子。2材料与方法2.1菌种原始菌株为实验室保存分离的球孢白僵菌菌

株Bb38。2.2培养基配方SDAY培养基（W/V）葡萄糖4%，蛋白

胨1%，酵母粉1%，琼脂粉2%。小米粉培养基（W/V）：小米粉7.5%，琼脂粉1.5%。萌发液（W/V）：蔗糖2%，蛋白胨0.5%。

2.3培养球孢白僵菌菌株Bb38孢子配成浓度为1×106

孢子/mL浓度的孢悬液，取100μL接种涂布于SDAY或小米粉培养基中，置于25℃恒温培养14d至其完全产孢。2.4热处理分别钩取2种培养基上的适量孢子于冷却

后的2支离心管中，标记为S（表示SDAY培养基培养的孢子）、M（表示小米培养基培养的孢子）。在恒温振荡培养箱中25℃高速120r振荡。用血球计数板镜检，计算孢子数，将离心管中液体制成108孢子/mL的孢悬液。若达不到此浓度则继续钩取孢子、振荡均匀。在41℃、43℃与45℃水浴下，采取不同处理时间分别热激不同培养基中

收获的孢子，并检测其活孢率（详见表1、表2）。以上所有处理，均重复3次。表1SDAY培养基培养的白僵菌Bb38菌株分生孢子水浴处理方式处理0min30min60min41℃s13s1643℃s0

s33s3645℃s53s56

基金项目：安徽省教育厅重点项目资助（KJ2015A185）。作者简介：谢翎（1980—），男，安徽安庆人，博士，研究方向：生物技术。收稿日期：2017-10-12

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15安徽农学通报，AnhuiAgri.Sci.Bull.2017，23（23）［7］王茂媛，赖富丽，王建荣，等.牛大力茎的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2013，25（1）:53-55，91.［8］王金花，李丽，张琪，等.牛大力营养成分分析及其对珍珠鸡屠宰性能和肉品质的影响［J］.中国家禽，2012（12）:30-33.［9］黄翔，王晓平，陈晓白.中药牛大力抗疲劳抗应激作用的实验研究［J］.玉林师范学院学报，2014，35（2）:55-58.［10］周添浓，刘丹丹，唐立海，等.牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］.时珍国医国药，2009，20（10）:2585-2587.［11］韦翠萍，刘丹丹，唐立海，等.牛大力对小鼠免疫功能的影响［J］.广州中医药大学学报，2009，26（6）:539-542.［12］郑元升，蒲含林，麻建军.牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞增殖的双向调节作用［J］.广东药学院学报，2008，24（1）:58-61.［13］石焱，弓小雪，那婕.牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用［J］.临床军医杂志，2008，36（4）:530-532.［14］吕世静，黄槐莲，吴宋厦.牛大力对抗体及IL-2产生的影响［J］.上海免疫学杂志，1997，17（1）:56.［15］韦莹，马小军，董青松，等.牛大力离体培养与植株再生条件的优化［J］.湖北农业科学，2012，51（23）:5499-5502.［16］黄碧兰，徐立，李志英，等.牛大力茎段组织培养技术研究［J］.安徽农业科学，2008，36（32）:13993-13994.［17］陈石，杨兴玉，陈秀龙，等.牛大力外植体灭菌和增殖培养研究［J］.中国园艺文摘，2015（12）:17-18，150.（责编：张宏民）

表2小米培养基培养的白僵菌Bb38菌株分生孢子水浴处理方式处理0min30min60min41℃m13m1643℃m0

m33m3645℃m53m56

2.5检测孢子萌发率水浴处理完成后将样品置于恒温振荡培养箱中振荡培养一昼夜，然后用血球计数板计数，计算离心管中孢子的萌发率。每个样品重复观察3次，记录每次的孢子萌发数a、总孢子数b，则萌发率c（%）＝a/b×100，3次平均萌发率为d＝（c1＋c2＋c3）/3。

3结果与分析3.1Bb38孢子在小米和SDAY培养基上30min热处理后萌发率从图1中可以看出：无论实在小米培养基还是在SDAY培养基上，Bb38菌株的分生孢子随温度升高，萌发

率明显下降。在25～43℃，萌发率下降相对缓慢，在43～45℃，萌发率快速下降。在同一温度下，除在41℃附近时

小米培养基培养的分生孢子萌发率比SDAY低之外，其它温度下，前者都比后者的萌发率要高。

25414345温度（℃）

100806040200萌

发

率（℃）

图1Bb38孢子在小米和SDAY培养基上30min热处理后萌发率3.2Bb38孢子在小米和SDAY培养基上60min热处理后

萌发率从图2中可以看出：在小米和SDAY培养基上，Bb38菌株分生孢子的萌发率都随着温度的升高而下降。

同一培养基培养的分生孢子，相比于水浴30min的相同温度下，处理时间增加一倍后，萌发率极大降低。SDAY培养基上培养的孢子萌发率随温度疾速下降，在达到43℃时，萌发率已经为0。而小米培养基上培养的孢子萌发随温度下降，在25~41℃疾速下降，在41~45℃，下降相对变缓。整个温度下（25~45℃），小米培养基培养的分生孢子萌发率均高于SDAY。

100806040200萌

发

率（℃）

25414345温度（℃）图2Bb38孢子在小米和SDAY培养基上60min热处理后萌发率4讨论

本研究基于球孢白僵菌分生孢子的热胁迫反应（水浴处理），探究培养条件（2种不同培养基）对同一菌株耐热性的影响，发现小米培养基培养的Bb38菌株的耐热性能比SDAY培养基培养的Bb38菌株要好。球孢白僵菌分生孢子对不利环境的抗逆力在很大程度上决定着菌剂的生态适应性和田间应用效果，尤其是温度。不同培养基质造成了白僵菌孢子热稳定性的不同，可能是由于孢子在形成过程中营养摄取的不同，造成了其孢子内部结构或代谢形成了差异。也有可能孢子在成熟期基质中的不同离子强度、pH值或其他条件，造成了其最终热稳定性的不同。本研究对今后筛选耐热性菌株孢子生产和抗逆相关机制研究无疑是新的探索，其相关深层机理还有待于进一步研究。参考文献［1］林海萍，韩正敏，张昕，等.球孢白僵菌研究现状及提高其杀虫效果展望［J］.浙江林学院学报，2006，23（5）:575-580.［2］王国昌.不同湿度下球孢白僵菌对杨毒蛾的致病力［J］.农药，2007，46（3）:206-207.

［3］刘丹，吴淑贤，韩福生，等.白僵菌对沙棘木蠹蛾幼虫的致病力及其生物学特性研究［J］.河北农业大学学报，2009，32（2）:93-96.［4］查玉平，陈京元，夏剑萍.白僵菌防治森林害虫的研究与应用［J］.湖北林业科技报，2010，163:39-42.［5］徐四琼，孙倩，曾德亮.白僵菌研究与应用的现状及展望［J］.安徽农学通报，2005（7）:71-72.［6］李增智，黄勃，陈名君，等.分子时代的白僵菌研究［J］.菌物学报，2011，30（6）:823-835.

［7］张永军，金凯，罗志兵，等.转基因球孢白僵菌发酵产物对野生菌株的增效作用［J］.植物保护学报，2006，33（3）:246-250.［8］俞佳，冯明光.基于分生孢子热胁迫反应的球孢白僵菌耐热菌株筛选［J］.菌物学报，2006，25（3）:278-283.（责编：张宏民）

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