实训五 常用培养基的制备
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法在实验室中，培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础，正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基，并掌握正确的配制方法。
接下来，我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基（LuriaBertani 培养基）LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基，其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基，所需材料如下：胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤：1、称取上述成分，将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水，用玻璃棒搅拌，直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70（通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节）。
5、将培养基分装到锥形瓶中，每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞，用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中，在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基，需要准备以下材料：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下：1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水，搅拌溶解。
3、定容至 1L，搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌，方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）PDA 培养基常用于培养真菌，尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基，材料如下：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程：1、将马铃薯去皮，切成小块，称取 200g，放入锅中，加入约1000ml 去离子水，煮沸 20 30 分钟，直到马铃薯块变软。
实训五培养基的制备与灭菌
棉塞制作
五、实验内容
目前，有条件的实验室已使用.塑料试 管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞， 此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。
五、实验内容
（四）灭菌
1.培养基的高压蒸汽灭菌 ①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的
固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮 纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅 内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍 蒸汽流通，影响灭菌效果。
一、实验目的
1.学会一般培养基的制备原理、方法。 2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。
二、实验原理
培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用 人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、 氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生 物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢 活动。
二、实验原理
不同微生物对营养物质的要求各不相同。 因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。 一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基， 培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用 马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养 基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。
培养基的分装
四、实验方法
①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为 宜。
②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的 1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过 1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。
③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜， 灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。
3.每一小组准备lmL塑料吸嘴5支(湿热蒸汽灭
菌)，培养皿12套(干热灭菌）。
六、实验报告
写出你所制备的培养基的配方，并 分析其中所含物质对微生物生命活动所 起的作用。
⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气 阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲 腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。
下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。
用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。
其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。
其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。
调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。
其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
实训指导-培养基的制备.
实训指导——培养基的制备【实验目的】1．掌握培养基制备的基本过程。
2．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
【实验材料】1．试剂氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝兔血、牛肉膏、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
2．器材锥形瓶、量筒、吸管、精密pH试纸、无菌试管、硅胶塞、天平、高压蒸气锅、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
【实验方法】1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、校正pH、澄清过滤、分装、灭菌、质量检查和保存。
(1) 调配成分：在锥形瓶或大容量烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基处方用量准确称取各种成分，使其充分混合。
(2) 溶解：将调配好的混合物在沸水浴中，使其完全溶解。
(3) 校正pH：一般将培养基的pH调至7.2~7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1~0.2变动。
若用NaOH校正，高压蒸汽灭菌后pH下降0.1~0.2；若用NaCO3校正，高压蒸汽灭菌后pH升高0.1~0.2。
(4) 滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤，固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
(5) 分装：①基础培养基：一般分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高度的1/4~1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端有1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管容量的1/4~1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固；④琼脂平板：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
(6)灭菌：①由耐热物质配制成的培养基(如普通营养琼脂等)常用高压蒸汽灭菌，条件为103.43kPa，15~20min；含糖培养基以68.95kPa，10~15min为宜，以免破坏糖类物质；②不耐高热的物质配制成的培养基，如糖类、明胶和牛乳等常用流通蒸汽灭菌，方法是加温80~100℃30min，每天1次，连续3天；③富含蛋白质的培养基(如含血清或鸡蛋清的培养基)需用血清凝固器灭菌，方法是将配制好的培养基摆放在血清凝固器内(一般做成斜面)，第1天75℃、30min，第2天80℃、30min，第3天85℃、30min，在3次灭菌的间隙将培养基取出，置35℃孵箱中过夜；④对高营养液态的不耐热培养基，如血清、细胞培养液等，则可用滤过除菌。
实验五培养基的制作及灭菌
实验五培养基的制作及灭菌实验目的：1.学习培养基的制作方法。
2.掌握培养基的灭菌技术。
实验步骤：1.准备所需材料和设备，包括琼脂、蒸馏水、酵母粉、葡萄糖、盐以及烧杯、量筒、试管等。
2.称取所需的琼脂，按照所需制作的培养基的浓度要求，将琼脂加入一个烧杯中。
3.加入适量的蒸馏水，并用玻璃转子搅拌均匀，直到琼脂完全溶解。
4.将琼脂溶液转移到一个大容器中，继续搅拌一段时间，以使溶液均匀充分。
5.在此过程中，可以将所需添加的其他成分进行称量，如酵母粉、葡萄糖和盐。
根据配方要求逐一加入琼脂溶液中。
6.继续用玻璃转子搅拌溶液，直到所有成分完全溶解。
7.将培养基溶液倒入装有文化管的试管中，每个试管约装满一半。
8.置于培养基外表面有菌或细菌孢子的地方，将试管口用针灼烧，使培养基杀菌。
9.将装有培养基溶液的试管加入至高温高压灭菌锅中，进行高温高压灭菌。
10.灭菌完成后，将试管从高温高压灭菌锅中取出，放置在室温下冷却。
11.等试管冷却至室温后，将试管翻转，使培养基均匀附着在试管内壁。
实验结果：制作好的培养基溶液应呈均匀透明的状态，无沉淀物和杂质。
实验注意事项：1.在称取琼脂时要小心，避免粉尘飞扬和吸入。
2.加入蒸馏水时要慢慢倒入，避免烧伤。
3.加入其他成分时要保持适当的温度，避免成分无法溶解。
4.灭菌时应注意安全，避免受烫伤。
5.使用高温高压灭菌锅时要严格按照使用说明操作，避免安全事故发生。
实验讨论：在制作培养基的过程中，要严格控制各种成分的比例，以确保培养基的浓度和配比符合要求。
另外，灭菌步骤也是非常重要的，只有有效灭菌才能确保培养基无菌。
培养基的制作与灭菌是微生物学实验中常用的操作，它是为了提供细胞生长所必需的营养物质和环境，并排除外界的其他微生物干扰。
通过制作培养基，可以为后续的微生物培养提供基础设施，为微生物的生物学研究提供必要的条件。
总结：本实验主要介绍了培养基的制作方法和灭菌技术。
通过制作培养基和灭菌步骤，可以为后续的微生物培养提供必要的条件，确保培养基无菌和符合要求。
培养基的制配的实训报告
一、实训目的1. 掌握培养基的基本概念和制备方法。
2. 学习不同类型培养基的特性和应用。
3. 提高实验室操作技能，确保实验的准确性和安全性。
二、实训环境1. 实验室：具备无菌操作条件，配备高压蒸汽灭菌器、电子天平、高压锅、三角瓶、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台等设备。
2. 原料：黄豆饼粉、尿素、K2HPO4、MgSO4.7H2O、NaCl、AEO9、糊精等。
三、实训原理培养基是微生物生长繁殖的必需物质，根据其成分和用途可分为多种类型。
本实训主要制备一种适用于脂肪酶生产的培养基。
四、实训过程1. 称量与溶解- 称取10g糊精、30g黄豆饼粉、10g尿素、0.5g K2HPO4、0.5g MgSO4.7H2O、1g NaCl和0.5g AEO9，置于1000mL的三角瓶中。
- 加入少量去离子水，用玻璃棒搅拌至糊精完全溶解。
- 将溶液转移至高压锅中，补足至1000mL。
2. 灭菌- 将高压锅加热至121℃，维持15分钟，进行高压蒸汽灭菌。
3. 冷却与分装- 将灭菌后的培养基冷却至室温。
- 将培养基分装至无菌试管中，每管10mL。
4. 调pH值- 使用pH计测定培养基的pH值，调节至9.0～10.0。
5. 接种与培养- 将制备好的培养基置于26℃恒温培养箱中培养48小时。
五、实训结果1. 培养基制备成功，无杂菌污染。
2. 脂肪酶产量达到预期水平。
六、实训总结1. 本实训成功制备了适用于脂肪酶生产的培养基，为后续实验提供了基础。
2. 通过实训，掌握了培养基制备的基本步骤和注意事项，提高了实验室操作技能。
3. 认识到培养基制备过程中无菌操作的重要性，确保实验结果的准确性。
七、改进意见1. 在称量过程中，应注意精确称量，避免误差。
2. 在灭菌过程中，应确保高压锅的压力和温度达到要求，以保证培养基的无菌性。
3. 在分装过程中，应注意无菌操作，避免污染。
4. 在培养过程中，应注意观察培养基的形态和颜色变化，及时发现问题并采取措施。
培养基配方
培养基配方1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
培养基制配的实训报告
1. 掌握培养基的基本原理和制配方法。
2. 学会实验室无菌操作技术，提高实验室基本技能。
3. 培养团队合作精神，提高实验操作能力。
二、实训环境1. 实验室环境：温度适宜、通风良好、光线充足。
2. 实验器材：无菌操作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、移液器、培养皿、试管、玻璃棒、酒精灯、镊子等。
3. 实验材料：牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、无菌生理盐水、无菌试剂等。
三、实训原理培养基是微生物生长繁殖所必需的养料，其主要成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。
本实训以牛肉膏和蛋白胨为主要碳氮源，葡萄糖为碳源，琼脂为凝固剂，蒸馏水为溶剂。
四、实训过程1. 称量：按照配方要求，准确称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等固体试剂。
2. 溶解：将称量好的固体试剂放入烧杯中，加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 调节pH：用精密pH计测定溶液pH，根据需要用1mol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至适宜范围。
4. 灭菌：将溶解好的培养基倒入锥形瓶中，用酒精灯进行灭菌处理，防止微生物污染。
5. 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，加入适量的蒸馏水，使培养基浓度适宜。
6. 倒平板：将冷却至50℃左右的培养基倒入培养皿中，用无菌玻璃棒均匀铺平，待凝固后备用。
7. 分装：将制备好的培养基分装至无菌试管中，密封，备用。
1. 培养基制备成功，符合实验要求。
2. 学生掌握了培养基的基本原理和制配方法。
3. 学生提高了实验室无菌操作技能。
六、实训总结1. 通过本次实训，使学生了解了培养基的制备过程，掌握了培养基的基本原理和制配方法。
2. 学生通过无菌操作，提高了实验室基本技能。
3. 实训过程中，学生培养了团队合作精神，提高了实验操作能力。
本次实训取得了良好的效果，达到了预期的目的。
在今后的实验教学中，我们将继续加强实验室基本技能的培养，提高学生的综合素质。
同时，针对实验中出现的问题，及时进行总结和改进，确保实验教学的质量。
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实训五常用培养基的制备
目的要求熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH。
仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。
方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。
(一)肉膏汤培养基
1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后，加热溶解。
矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。
置高压蒸汽灭菌器内，121.3℃20min灭菌即成。
3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。
(二)营养琼脂培养基
1．成分肉膏汤1000ml，琼脂粉20～30g。
2．制法将琼脂粉加入肉膏汤内，煮沸使其完全溶解，矫正pH7.4～7.6，过滤分装于试管或三角烧瓶中，以121.3℃灭菌20min。
可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。
此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。
(三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。
供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。
(四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或细菌运动性观察。
(五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2～3g牛肉渣及肉膏汤5～6ml，液面盖以一薄层石蜡油，经121.3℃20～30min灭菌后保存冰箱备用。
此培养基用于厌氧菌的培养，必须注意，此培养基在使用时，将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min，以驱除管内存留的氧气。
(六)pH的测定与矫正
1．精密pH试纸法取精密pH试纸一条，浸入欲测的培养基中，半秒后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。
在滴加1mol/L氢氧化钠后，应充分摇匀，再用试纸测定，直至调到pH在所需的范围内。
2．标准比色管法
(1)取与标准比色管大小一致的试管2支，按(实图5-1)每管内加入不同的溶液。
①培养基5ml(对照管)；②标准比色管；③培养基5ml加0.02%酚红指示剂0.25ml；④蒸馏水管。
(2)对光观察比较两侧观察孔内颜色是否相同，培养基若为酸性(一般呈酸性)，则向③管中慢慢加0.1mol/L氢氧化钠，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至③④两管
相加的颜色与①②两管相同为止。
1.对照管
2.标准比色管
3.检查管
4.蒸馏水管
(3)记录5ml培养基用去0.1mol/L 氢氧化钠的量，按下列公式计算培养基总量中需加1 mol/L氢氧化钠的用量。
所需1mol/L氢氧化钠量＝5ml培养基所
培养基总体积数 1
需0.1mol/L氢氧化钠毫升数×------------------ × ------
5 10
(4)加入1mol/L氢氧化钠于培养基后摇匀，再作一次矫正试验，如pH不在所需范围，应重新测定。
目前，常用的培养基均已商品化，不需要测定及矫正pH，按说明使用即可。