流式细胞术在临床肿瘤学中应用研究进展
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
流式细胞术实验方法及应用描述
抗与待测标本反应后，洗去未结合抗体再加
入荧光标记的二抗，形成有荧光的抗原--抗 体--抗体复合物。其操作复杂、费时，目前
兔抗小鼠
小鼠
很少用。在科研中需要一些新的抗体没有直
接抗体，只能采用此方法。 直接标记是在标记时加入连接着荧光素
单细胞悬液
胸水、腹水：胸、腹水50-100ml，加入1000U/ml 肝
素液，置于4℃ 冰箱中静置 6-12h
尿 液：收集24h 尿液，置4℃冰箱中自然沉淀 2h 冲洗液：300-500ml 生理盐水冲洗膀胱 ，冰箱内置 6-12h
间
标
羊抗兔
五、荧光标记
主要包括间接免疫荧光染色和直接免
疫荧光染色两种方法。 间接标记是采用特异的无荧光标记的一
四色分析：三色分析+ECD DNA含量分析： PI 凋亡与坏死分析： 凋亡用Annexin V-FITC/PI双染
四、标本的收集、单细胞悬液的制备
骨髓、外周血、细胞株、组织器官、 胸水、腹水、尿液脱落细胞等
1、骨髓及外周血细胞单细胞悬液的制备
骨髓及外周血都是天然的单个细胞，可直接标记， 再溶血。 单细胞的分离制备 分离液 离心 血液+生理盐水
二、流式细胞术的特点、优点
速度快 极短时间内可分析大量细胞，每秒可检测上万个 细胞，甚至几万个细胞。
多参数分析 可同时分析单个细胞的多种特性，获得单个细 胞多种信息，也可以根据其细胞表面标志的不同把 细胞群分为各亚群。
定性、定量分析细胞 通过荧光染色对单细胞的某些成分，如：DNA、 抗原或受体等进行定性、定量分析。 灵敏度高 荧光能检测到单个微粒上标有荧光分子少于 <600个 (如FITC或PE)；前向角检测到小于0.3um 颗粒。 分选感兴趣的细胞 纯度达99%，收获率可达90%。
临床免疫学：流式细胞术
荧光染料的选择
仪器所配置的激光光源的 波长，即荧光素的激发光 谱；
荧光素的发射光谱与检测 器的接收光谱；
染色细胞的抗原表达的相 对密度；
液相芯片技术（liquid chip tech，LP） 及原理
将流式检测技术和芯片技术 相结合，实现对可溶性物质 的分析；
以不同颜色的荧光微球作为 反应载体，将不同的生物探 针标记在微球上，将结合不 同探针的不同颜色的荧光微 球与被测标本反应，利用FCM 进行分析和定量。
✓ 流式微球阵列技术 （cytometric beads array, CBA）
阴性细胞上的Fc受体情况； 使用同一波长激发光的荧
光素时，其发射波长应不 相同；
荧光补偿
在做多色分析时纠 正荧光素发射光谱 重叠的过程，即从 一个被检测的荧光 信号中去除其他来 源的干扰信号。
荧光补偿调节
1、先将所有补偿和电压 调为“0”；
2、用同型对照或阴性对 照管调节电压使阴性群位 于“左下角”；
3、用单阳性管依次调节 相关通道荧光之间的补偿， 如FL1-%FL2， FL2-%FL1
阴性对照：未染色的待分析标本；
同型对照（抗体）：与荧光标记抗体相同 来源、相同标记、相同剂量、相同类、亚 类和型的未免疫的免疫球蛋白，用于消除 由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生 的背景染色。
阳性对照：
2. 淋巴细胞功能分析：CD25/CD69/CD71；胞内细胞 因子的检测
3.免疫系统疾病的诊断：免疫缺陷病；AIDS， CD4/CD8比值; 强直，HLA-B27;
循环肿瘤细胞检测在胃癌诊疗中的应用及研究进展
循环肿瘤细胞检测在胃癌诊疗中的应用及研究进展摘要：循环肿瘤细胞的检测是一种新兴的肿瘤诊疗技术，在胃癌诊疗中的应用和研究进展也备受关注。
本综述将详细阐述循环肿瘤细胞检测在胃癌诊疗中的应用及研究进展，包括其概念、检测技术、临床应用和未来发展方向。
关键词：胃癌循环肿瘤细胞检测研究进展胃癌（gastric cancer，GC）是一种常见的消化道恶性肿瘤，我国胃癌的发病率和死亡率均居恶性肿瘤第3位[1]。
尽管近年来诊断技术、手术技术和围手术期管理的发展，但GC的预后仍然很差。
由于早期GC往往无症状，并且由于大规模筛查不受欢迎，因此大多数患者被诊断时已经为晚期[2]。
循环肿瘤细胞（CTCs）是指从肿瘤内部脱落并在患者血液、体液中循环存在的单个肿瘤细胞。
作为一种新型的肿瘤标志物，CTCs的检测技术具有无创、动态监测和准确度高等特点，有望为胃癌诊疗提供新的手段[3, 4]。
本研究综述将重点探讨循环肿瘤细胞检测在胃癌诊疗中的应用及其研究进展。
一、CTCs的概念早在1869年，Thomas Ashworth 在尸检中发现转移性癌症患者血液中的循环肿瘤细胞（CTCs），这些细胞与原发肿瘤相似[5]。
CTC是肿瘤内部脱落并在患者血液、体液中循环存在的单个肿瘤细胞，因此其可提供关于肿瘤特性和肿瘤生长模式的关键信息，而且不受限于传统的病理活检样本的数量和位置。
然而，CTCs在血液中含量极微，故对检测技术要求较高。
因19世纪检测技术的限制未能进行进一步相关研究，直到几十年后才慢慢有方法来分离出CTCs，并对其进行相关研究。
据目前的研究CTC在血液中有多种存在形式，包括不同的分子分型[上皮型CTC（epithelial CTC，E-CTC）、间质型CTC（mesenchymal CTC，M-CTC）和混合型CTC]和细胞分型[单个CTC、循环肿瘤微栓（circulating tumor microemboli，CTM）和中性粒细胞CTM（CTC-neutrophil clusters）][1, 6]。
流式细胞技术在医学检验中的应用研究进展
流式细胞技术在医学检验中的应用研究进展摘要】流式细胞技术是目前较为先进的细胞定量分析技术，本文以大量文献资料作为基础，对当前该技术的研究结果进行总结，再结合临床工作经验，对流式细胞技术在医学检验中的应用进行综合论述，包括其工作设备、原理、技术流程等，最后以细胞免疫功能检测、白血病免疫分型检测作为对象进行分析，为流式细胞技术在医学检验中的进一步应用提供必要参考。
【关键词】流式细胞技术；流动系统；光学系统；细胞免疫功能【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）25-0372-02前言流式细胞技术（flow cytometry,FCM）是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。
该技术实现了大量细胞（10000个以上）的同步分析，可以从单一细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点。
20世纪早期流式细胞技术就开始应用于医学领域，获取了较为理想的效果，本文对其在医学检验中的应用进行综述。
1.流式细胞技术流式细胞技术是一种综合了多项科学成果的综合性技术，该技术涵盖一般性的细胞学知识和统计学理论，同时牵涉到生物学、流体力学、电子等生物技术学科，应用的原理并不复杂，结果也比较理想，但过程较为繁琐，对各环节的技术要求都较高。
目前的医学检验中，流式细胞技术也被称为流式细胞分析，主要借助流式细胞仪以及其他专业设备、辅助设备，对流式细胞仪，再分析测量结果，包括细胞的基本态势、特异性、功能情况等等。
20世纪后期以来，随着医疗技术和生物学、信息技术的持续进步，流式细胞技术在医学检验中的应用越发广泛，涵盖肿瘤检验、常规细胞检测、血液检验等多个领域，应用效果也较为理想。
2.流式细胞技术在医学检验中的应用2.1 应用设备流式细胞技术的原理虽然明确，但检测过程需要多项技术的支持，且各个环节的都要求给予精确化、规范化处理，这使得传统人工处理的方式不再适用，设备的应用价值也因此更加突出，目前主要的工作设备为流式细胞仪。
tbnk检测质谱流式
tbnk检测质谱流式TBNK（T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、NK细胞）检测是一种质谱流式细胞术，用于同时评估淋巴细胞亚群中的T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和NK细胞的含量和功能状态。
该技术在临床诊断、疾病监测和研究领域具有广泛的应用价值。
下面将详细介绍TBNK检测的原理、应用和研究进展。
TBNK检测基于质谱流式细胞术，可以同时检测多种细胞标记物，通过细胞表面标记物的特异性结合，对不同细胞亚群进行定量和鉴定，进而评估免疫系统的状态。
T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和NK细胞是免疫系统中重要的细胞类型，对于机体的免疫应答和免疫调节起着重要的作用。
在TBNK检测中，流式细胞术首先通过标记不同亚群细胞的特异性抗原，如表面CD3、CD4、CD8等抗原，对细胞进行区分。
然后通过流式细胞术将这些标记的细胞逐个引入质谱分析器中，通过质谱技术对细胞进行检测和鉴定。
质谱技术可以实现对细胞的快速分析，获得丰富的信息，不仅可以评估细胞的数量，还可以评估细胞的功能状态。
TBNK检测在临床诊断和疾病监测中具有广泛的应用价值。
首先，在免疫缺陷疾病的诊断中，TBNK检测可以评估T细胞亚群中CD4+和CD8+T细胞的比例，帮助判断患者的免疫状态和病情进展。
其次，在恶性肿瘤的治疗过程中，TBNK检测可以监测免疫细胞的数量和功能状态，评估治疗效果和预测患者的生存期。
此外，TBNK检测还可以用于感染性疾病的诊断和监测，通过评估自然杀伤细胞和NK细胞的活性，判断机体对病原体的免疫应答情况。
近年来，TBNK检测在研究领域得到了广泛的关注和应用。
一方面，通过TBNK检测可以研究免疫系统的发育和老化过程，揭示免疫细胞亚群在不同生理和病理状态下的动态变化。
另一方面，TBNK检测可以研究免疫细胞的功能调控机制，挖掘新的免疫治疗靶点和药物。
此外，TBNK检测还可以研究感染性疾病的病理机制，评估疫苗的免疫效果和安全性。
总结起来，TBNK检测是一种基于质谱流式细胞术的新兴技术，具有广泛的临床应用和研究价值。
流式细胞术简介
BD FACSCanto™
Tomorrow’s flow cytometer...today!
BD FACSCanto™ flow cytometer
BD公司自从1974年第一台商用流式细胞仪问世一直致力 于流式细胞仪的创新。 BD FACSCanto™ benchtop flow cytometer继承了这个传统。它的主要特这是： 1. 真6色容纳能力——从少量的样品量中获取每个细胞更 多的信息。 2. 敏感性(<50 MESF PE, <100 MESF FITC*) ——解决最 微弱的events。 3. 快速(10,000 events/sec) — 加速稀少事件的获取。 4. Low carryover (<0.1%) — 使样品污染最小化。 5. 更换透镜键盘化 —不用工具更换滤光片。 6. Fixed optical alignment — 免除用户调节。 7. 日常管理自动化 — 为科研节约更多时间。
flexibility and reliability. All of this technology is
accessible through a familiar user interface and
efficient ergonomic design. The BD FACSVantage SE
这个过程中经过处理的细胞和微粒被包在鞘液中通过一个聚焦的光源被激发出散射光荧光进而通过各种光学敏感元件测量这些光强度达到测量其物理性质和化学性质的目的并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群
流式细胞术简介
张林西 生命科学研究中心
0 Background
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是70 年代发展起来的一种快速对单细胞定量分析和分 选的新技术，能定量分析细胞的生物化学成分。 其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方 法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得多种参 数（如DNA、RNA、蛋白质、细胞体积等）进 行多参数分析，为细胞生物学和生物医学的研究 提供了强有力的手段。
现代流式细胞术的临床应用与发展
１２ 感染及 其 治疗 效果 观 察 由于 Ｔ淋 巴细 胞 在 ．
人体免疫系统中承担着重要的功能， 因此 ， 当感染发 生时， Ｔ淋 巴细胞各亚群的变化往往 能很敏感地反
映感染的状态与程度。例如， 人类获得性免疫缺陷 病毒（ Ｖ） ＨＩ 主要侵袭 Ｃ ４ Ｄ Ｔ细胞而导致 Ｃ ４ 巴 Ｄ 淋 细胞减少 ， Ｉ ／ Ｄ 淋 巴细胞 比值 下降， Ｃ） Ｃ ８ ４ 甚至可降
其分选出来， 以便于进一步培养与研究。目前， 该技
术 已经广泛用于基础研究与临床应用， 在免疫学、 遗 传学、 血液学 、 肿瘤学等领域内发挥着重要作用。 １ 细胞免疫学中的应用
１１ 淋 巴细胞亚群分析 在免疫应答过程中， ． 末梢 血淋巴细胞发育成 为功能不同的亚群， 各亚群的数 量和功能发生异常 时， 就能导致机体免疫紊乱并产 生病理变化。Ｆ Ｍ 通过荧光抗原抗体检测技术对 Ｃ 种或几种淋巴细胞表面抗原进行检测， 从而进行 细胞分类及亚群分析。同时计算 出它们相互间的比
具有更好的单色性与激发效率， 因而大大提 高了检 测灵敏度 ， 同时将 固定的标本台改为流动的单细胞 悬液， 用计算机进行数据处理， 因而大大提高了检测 速度与统计精确性， 而且从同一个细胞 中可以同时 测得多种参数， 为生物 医学与临床检验学发 展提供
Ｃ４ Ｄ 细胞数增 加， Ｄ ／ Ｄ Ｃ ４Ｃ ８比值升高。当病毒 （ 如 乙肝病毒 、Ｂ病毒和 巨细胞包涵体病毒 ） Ｅ 感染发 生 时， Ｄ Ｔ细胞增多， Ｃ ８ Ｃ８ 对 Ｄ 细胞 的测定有助于对
感染的诊断和对治疗效果的动态观察。 目前 ， Ｃ Ｆ Ｍ 用的各种单克隆抗体试剂 已经发 展了百余种 ， 可对 各种血细胞和组织细胞的表型进行测定分析 。 １３ 其 它免疫 功 能性 疾 病 分 析・ 系统 性 红 斑 狼 疮 ．
流式细胞术基本原理与应用实验报告
流式细胞术基本原理与应用实验报告流式细胞术（Flow Cytometry）是现代细胞学研究的常用技术之一。
它以单个细胞为单位，通过光学探测技术，可以对大量不同的细胞表型进行识别、分类、计数、排序、细胞分析和分离等操作。
本次实验旨在研究流式细胞术基本原理、仪器结构与实验操作及其在生物学和医学中的应用。
一、流式细胞术基本原理流式细胞术是一种利用流式细胞仪和荧光染料或抗体等标记技术，快速、高效地鉴定、分类、计数和分离单个细胞的技术。
其基本原理是利用液体样品在流式细胞仪中快速流动，在荧光灯激发下，荧光成像技术将单个细胞的荧光信号检测、分析、处理并转化为数字信号，通过计算机软件进行图像分析和数据处理。
流式细胞术具有以下优点：1.高速：流式细胞术可以快速实现对数百个样品的扫描和分析。
2.高效：流式细胞术可以实现对纯化和分离指定细胞群的快速处理。
3.灵敏度高：流式细胞术可以检测微量的荧光信号和蛋白分子。
4.精度高：流式细胞术可以消除漂移和污染等影响因素，准确地测定样品中的细胞表型。
二、仪器结构与实验操作流式细胞仪由样品进样器、激光器、荧光探测器、FSC/SSC探测器、计算机控制器和数据分析软件等组成。
其基本操作步骤为：将样品置于进样器中，通过样品速度调节阀门调整样品流速，激活荧光标记，由荧光物质发射激光激发荧光，再由光学系统光学镜片收集所发出的荧光光子，并将其转换为电子信号，通过数据分析软件将处理过的信号转换为图像和数据。
三、应用实验及其意义流式细胞术广泛应用于生命科学和医学领域，尤其在免疫学、细胞生物学、肿瘤学及感染病原体学等领域有着重要的应用价值。
例如，流式细胞术可以用于：1.研究细胞群体：通过流式细胞术可以研究特定细胞群体，了解其特征、性质和分布等信息。
2.检测表型：流式细胞术可以检测特定细胞表型，包括表面标记、抗原和细胞周期等特征。
3.筛选细胞亚群：利用流式细胞术分选技术，可以从样本中快速筛选出目标细胞亚群，为研究和治疗提供便利。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用一、流式细胞术的原理流式细胞术是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。
通过将单个细胞与特异性抗体结合，实现对细胞表面和内部抗原的定量和定性分析。
抗体通常与荧光染料标记，以便在流式细胞仪中产生光信号。
细胞在流式细胞仪中通过激光束，产生的荧光信号被光电倍增管收集并转换为电信号，从而实现对细胞特性的定量分析。
二、流式细胞术的应用1. 免疫表型分析流式细胞术可用于免疫表型分析，以了解免疫细胞群体的多样性、功能和活性状态。
通过检测特定免疫细胞表面标记物的表达水平，可以评估其发育阶段、激活状态和功能特性。
这种分析对于研究免疫系统功能、疾病发生机制和疫苗开发具有重要意义。
2. 细胞功能分析流式细胞术可用于分析细胞的生理功能，如细胞增殖、凋亡和吞噬作用等。
通过向流式细胞仪中添加特定的荧光染料或抗体，可以检测细胞内关键分子如DNA、RNA、蛋白质等，从而评估细胞的增殖和凋亡状态。
此外，还可以通过检测细胞表面的吞噬标记物，研究细胞的吞噬能力。
3. 基因表达分析流式细胞术可用于基因表达分析，以了解特定基因在细胞中的表达水平。
通过将RNA与特异性抗体结合，并使用荧光染料标记，可以检测细胞中特定基因的表达水平。
这种分析有助于研究基因功能、疾病诊断和药物筛选。
4. 病原体检测流式细胞术可用于病原体检测，以快速准确地识别和计数感染性疾病的病原体。
通过将特异性抗体与病原体结合，并使用荧光染料标记，可以在流式细胞仪中实现对病原体的定量和定性分析。
这种分析对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
5. 肿瘤诊断和治疗流式细胞术在肿瘤学中也有广泛的应用。
通过对肿瘤细胞的表面抗原、基因表达和细胞功能进行分析，有助于肿瘤的诊断、分类、预后评估和治疗策略的制定。
此外，流式细胞术还可以用于监测肿瘤细胞的耐药性和对治疗的反应，为个体化治疗提供依据。
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流式细胞术在临床肿瘤学中应用研究进展流式细胞术（flow cytometry，FCM)是利用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的
单细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析，并可以对特定的群体分选的细胞的分析技术，具有指标测量多、检测速度快、采集数据量大、分选纯度高、方法灵活、分析全面等特点。
随着流式细胞技术与方法的日益完善以及临床应用的不断拓宽，临床医学各个学科几乎都涉及到对流式细胞术的应用，在血液学、肿瘤学、免疫学、微生物学、细胞生物学-遗传学以及临床检验学等众多领域发挥着非常重要的作用[1，2]。
本文就对其在临床肿瘤学中的应用做如下综述。
1．FCM在肿瘤患者的病理检查中的应用
FCM在临床肿瘤学方向的应用主要是利用对DNA含量的测定进行包括癌前病变以及癌变早期的检出、化疗指导以及评估预后等工作。
迄今为止，病理形态学的诊断被认为是肿瘤诊断的“金标准”，但对于某些肿瘤，特别是在早期缺乏客观明确的诊断指标，不能提高诊断的正确率[3]。
所以利用FCM分析细胞DNA的含量的精确度好、分辨率高的特点，不仅可以对肿瘤生物学行为的判断提供客观且准确的资料，而且还可以应用于肿瘤的早期诊断和良恶性肿瘤的鉴别诊断。
一般来说具有某些癌变潜能的病变称之为癌前病变，如何正确识别癌前病变则是对肿瘤的早期诊断和预防恶性肿癌具有重要的意义。
采用FCM检测DNA非整倍体的出现，可以作为诊断癌前病变发展癌变的有效标志，从而评估出癌前病变性质及其发展趋势，有助于对癌变早期的诊断[4]。
方法首先将实体的瘤组织进行解聚后再分散，制备成瘤组织的单细胞悬液，采用荧光染料（碘化吡啶 PI)进行染色，分析细胞的DNA含量。
DNA含量能直接表示出细胞的倍体情况，其中非倍体细胞数量与肿瘤的恶性程度相关。
非整倍体细胞峰的存在可作为肿瘤诊断的有力证据。
癌前病变发生率与细胞的不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。
[5]
2．FCM在肿瘤患者的免疫功能检查中的应用
肿瘤患者的机体免疫功能异常与恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后有密切关系。
在机体免疫正常情况下，组织中含有的T淋巴细胞及其亚群的数量相对稳定，一旦某一T淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常，机体就会出现免疫调节紊乱，发生一系列的免疫病理、生理变化。
所以T淋巴细胞亚群分析可以作为反映细胞免疫功能的重要指标，并且在肿瘤免疫监测中起着重要的作用[6，7]。
T淋巴细胞根据细胞表面抗原的不同分成CD4+和CD8+细胞等，根据免疫功能的不同分成辅助性T细胞(Th)、抑制性T细胞(Ts)和细胞毒性T细胞(Tc)等。
CD4+分子是成熟T细胞的表面标志，CD4+分子表达在Th细胞表面，CD8+分子多数表达在Ts和Tc细胞表面。
T细胞CD4+/CD8+比值为表现机体免疫系统紊乱的敏感指标，当机体免疫功能受到抑制时，CD4+值下降，CD8+值上升，比值减少。
当T细胞总数或CD4+/CD8+比值减少，此时可视为免疫调节功能紊乱，容易发生自身免疫性疾病或肿瘤。
CD4+细胞的降低尤以Th1细胞的减少更为显著，表达CD4+分子的Th1细胞主要产生IL-2、IFN-r等主宰细胞免疫。
一旦出现Th1向Th2漂移，机体的抗肿瘤免疫将受到严重干扰。
肿瘤患者外周血中Treg细胞明显增高，可显著抑制免疫应答，与T细胞活性下降及促进肿瘤生长有关。
肿瘤患者的抑制性T细胞(Ts)活性与肿瘤的进展程度有关，随着病程进CD8+细胞升高的越明显[8，9]。
目前，FCM可方便和快速地获得肿瘤患者的T淋巴细胞亚群的表达情况。
FCM通过对T 淋巴细胞亚群分析，测定患者T淋巴细胞各亚群数量，从而了解T淋巴细胞的分化功能，达
到鉴别新的T淋巴细胞亚群的目的。
更重要的是对诸如肿瘤、免疫性疾病、感染性疾病等疾病，可以通过研究其特异性淋巴细胞亚群或者某些免疫细胞是否存在、缺乏或者过度表达细
胞表面标志物，来达到诊断病情、分析发病机制、观察疗效和检测预后等的目的[10]。
3.FCM在肿瘤患者化疗中的应用
FCM不仅对恶性肿瘤的DNA定量分析有用，对化疗中肿瘤DNA的分布直方图的变化也
可以起到评估疗效，了解细胞的动力学改变，在肿瘤化疗中的应用意义尤其显著。
临床工作
者可以根据细胞各时期分布的情况，与化疗药物对细胞动力学的干扰理论相结合，设计出最
佳的治疗方案，再根据DNA直方图可以直接地看出肿瘤细胞的杀伤改变，及时对治疗方案进
行调整改进，选取更有效的药物以使对肿瘤细胞达到最强的杀伤效果。
总之，FCM在肿瘤的早期诊断、预后检测及疗效评估等方面己显示出明显的优势。
【参考文献】
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