实验六：总糖和还原糖测定
3，5-二硝基水杨酸，
碘-碘化钾溶液， 6 mol/L NaOH，
6 mol/L HCL，
0.1%酚酞指示剂。
四、实验步骤
四、实验步骤
一、葡萄糖标准曲线的制作
试剂 管号
0 0 1.0 2.0 0
1 0.2 0.8 2.0 0.2
2 0.4 0.6 2.0 0.4
3 0.6 0.4 2.0 0.6
二、提取还原糖
四、实验步骤
三、提取总糖
1. 称量：称取0.25g左右淀粉
2. 转移：转移入50 mL锥形瓶中，用10mL左右蒸馏水混匀
3. 水解：加入6 mol/LHCl 10mL，沸水中水解30 min 4. 检查：是否完全水解（I2-KI溶液） 5. 冷却：水解完毕，取出，冷却至室温 6. 滴定：加1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH溶液滴定至微红色 7. 定容：将溶液转入100 mL容量，冲洗并定容 8. 过滤： 9. 稀释：取一定滤液进行稀释 10. 测量：取1 mL提取液测定总糖的含量
9.0
9.0
9.0
四、实验步骤
五、计算
注意事项
测定前请检查分光光度计波长是否为所需的；
样品测定时同样需要空白组对分光光度计进行调零；
各试管处理应一致，测定时应同时放入沸水中，再同时 从沸水浴中取出； 制作标准曲线时，各管试剂添加量要准确。
五、思考
五、思考题
1．配制DNS试剂时为什么要加入结晶酚和亚硫酸钠？
4 0.8 0.2 2.0 0.8
5 1.0
样品
标准葡萄糖液(mL) 蒸馏水(mL)
1.0 0 2.0 1.0 2.0 X DNS(mL)
葡萄糖含量（mg）
混合混匀，沸水中加热5 min，冷却至室温，以0号管为空白对照
蒸馏水
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
A540
四、实验步骤
生物化学实验
实验六：总糖和还原糖测定
3、5-二硝基水杨酸法
目 录
1 2 实验目的 实验原理 器材及试剂 实验步骤 思考
3
4
5 5
一、实验目的
一、实验目的
1、掌握3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定还 原糖的原理和方法； 3、复习和强化标准曲线的制作； 3、复习离心机、分光光度计使用方法和滴定法。
2．测定总糖含量时，水解完全后，为什么要用 NaOH对水解
液进行中和？ 3．用水解后的还原糖含量计算总糖含量时为什么要乘以 0.9?
上课到此
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四、实验步骤
四、含糖量测定
试剂 管号
空白 0 1.0 2.0
还原糖 1.0 0 2.0
总糖 1.0 0 2.0
样品溶液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL）
将各管溶液混合均匀，在沸水中水浴5min，取出后冷却至室温
蒸馏水 （mL） A540
测定后，将样品的吸光值代入标准曲线方程式中求出相应的糖含量（X）
利用比色法可测定样品中的糖含量。
碱性 加热
NH2
3，5-二硝基水杨酸（黄色） 3-氨基-5-硝基水杨酸（桔红色）
还原糖
三、器材及试剂
三、器材及试剂
1、器材：
离心机，分光光度计，电子天平，水浴锅； 离心管，研钵，研棒，试管，量筒，漏斗，滤纸，容量瓶；
植物组织或淀粉。
2、试剂：
1 mg/mL葡萄糖标准溶液，Βιβλιοθήκη 二、实验原理单选题
2分
下例哪种糖不是还原糖（）。
麦芽糖 木糖 阿拉伯糖 蔗糖 果糖
二、实验原理
两个定义：
一、还原糖（Reducing sugar）： • 还原糖是指具有还原性的糖类；
• 分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都
具有还原性；
• 还原性糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。
二、实验原理
两个定义：
二、总糖： • 总糖是指样品中原本有的和水解后能产生具有还原性的糖； • 包括所有还原糖和酸水解后能生成还原糖的双糖、多糖等；
• 蔗糖虽为非还原糖，但在酸水解的作用下蔗糖分解为葡萄糖
和果糖（葡萄糖和果糖均为还原糖），所以蔗糖也是总糖的
一部分。
二、实验原理
在NaOH存在的条件下，DNS可以与还原糖共热后被还原 生成3-氨基-5-硝基水杨酸； 过量NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在λ=540nm波 长处有吸收波峰； 在一定浓度范围内，光吸收值与还原糖的量呈线性关系，
总糖测定实验报告
一、实验目的1. 理解总糖测定的原理和方法。
2. 掌握DNS比色法测定还原糖的方法。
3. 学习如何绘制标准曲线并应用于样品中总糖的测定。
二、实验原理总糖是指样品中所有糖类的总量，包括还原糖和非还原糖。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，如葡萄糖、果糖等。
DNS比色法是一种常用的测定还原糖的方法，其原理是在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS）发生反应，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色深浅成正比关系。
通过绘制标准曲线，可以测定样品中还原糖的含量，从而推算出总糖的含量。
三、实验材料与仪器材料：1. 样品：不同浓度的葡萄糖溶液、果糖溶液、蔗糖溶液等。
2. 试剂：3,5-二硝基水杨酸（DNS）、氢氧化钠（NaOH）、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水等。
3. 仪器：可见分光光度计、电子天平、真空干燥箱、数显恒温水浴锅、离心机、移液器、枪头、容量瓶、试管、烧杯等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 准备一系列已知浓度的葡萄糖溶液。
- 按照DNS比色法的步骤，分别对每份溶液进行测定，记录光密度值。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中还原糖的测定：- 称取一定量的样品，按照DNS比色法的步骤进行测定。
- 记录光密度值，并在标准曲线上找到对应的葡萄糖浓度。
3. 总糖的测定：- 根据还原糖的测定结果，计算样品中还原糖的含量。
- 结合样品中非还原糖的含量，推算出总糖的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：- 根据实验数据，绘制出标准曲线。
曲线呈线性关系，相关系数R²大于0.99，表明该方法具有较高的准确性和可靠性。
2. 样品中还原糖的测定：- 通过测定样品的光密度值，在标准曲线上找到对应的葡萄糖浓度，计算出样品中还原糖的含量。
3. 总糖的测定：- 根据还原糖的测定结果和非还原糖的含量，推算出样品中总糖的含量。
糖含量测定_实验报告
一、实验目的1. 了解糖含量测定的原理和方法；2. 掌握DNS比色法测定还原糖及总糖含量的实验操作；3. 学习使用可见分光光度计进行比色分析；4. 了解不同样品中糖含量的变化规律。
二、实验原理1. DNS比色法测定还原糖含量：还原糖在碱性条件下与3,5-二硝基水杨酸（DNS）反应，生成橙红色的氨基化合物。
在一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系。
通过测定光吸收值，可以计算出样品中还原糖的含量。
2. 总糖含量测定：总糖含量可以通过测定还原糖含量来推算。
由于总糖中还原糖的比例相对稳定，因此可以通过测定还原糖含量来估算总糖含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 样品：葡萄糖、果糖、蔗糖等；- DNS试剂；- 氢氧化钠溶液；- 丙三醇；- 标准葡萄糖溶液；- 蒸馏水。
2. 实验仪器：- 可见分光光度计；- 电子天平；- 移液器；- 烧杯；- 试管；- 500mL容量瓶；- 恒温水浴锅；- 离心机。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）取5个50mL容量瓶，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0mL标准葡萄糖溶液，加入蒸馏水定容至刻度；（2）向各容量瓶中加入2.0mL DNS试剂和2.0mL氢氧化钠溶液，混匀；（3）将溶液置于恒温水浴锅中，加热5分钟；（4）取出溶液，冷却至室温；（5）使用可见分光光度计在540nm波长处测定各溶液的光吸收值；（6）以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：（1）取5个50mL容量瓶，分别加入5.0mL样品溶液，加入蒸馏水定容至刻度；（2）向各容量瓶中加入2.0mL DNS试剂和2.0mL氢氧化钠溶液，混匀；（3）将溶液置于恒温水浴锅中，加热5分钟；（4）取出溶液，冷却至室温；（5）使用可见分光光度计在540nm波长处测定各溶液的光吸收值；（6）根据标准曲线，计算样品中还原糖的含量；（7）根据还原糖含量与总糖含量的比例关系，推算样品中总糖含量。
淀粉、总糖、还原糖的测定方法
淀粉、总糖、还原糖的测定方法淀粉的测定方法---蒽酮法一( 原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二( 仪器设备三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三( 试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。
2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424保存2,3周。
五实验步骤1. 分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。
重复三次2. 水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。
3. 测定取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*0.9/WC—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g)A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖:实验步骤:1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
实用文档之DNS法测定总糖和还原糖
实用文档之"实验九总糖和还原糖的测定（二）"──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
食物糖类测定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握糖类测定的基本原理和方法。
2. 学会使用比色法测定还原糖的含量。
3. 了解总糖和还原糖在食物中的分布情况。
二、实验原理糖类是人体重要的能量来源，食物中的糖类含量直接影响人体健康。
本实验采用比色法测定还原糖的含量，通过比较样品与标准溶液的颜色深浅，计算出样品中还原糖的含量。
同时，通过酸水解法将非还原糖转化为还原糖，进而测定总糖含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大米、面粉、水果、糖果等食物样品。
2. 仪器：分光光度计、移液器、烧杯、试管、酒精灯、蒸馏水、3,5-二硝基水杨酸、硫酸、氢氧化钠等。
四、实验步骤1. 还原糖测定（1）样品处理：将食物样品研磨成粉末，称取适量粉末放入烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌均匀，煮沸5分钟，冷却后过滤。
（2）显色反应：取2毫升滤液于试管中，加入3毫升3,5-二硝基水杨酸溶液，混匀后置于水浴中加热5分钟。
（3）测定吸光度：用分光光度计在540nm波长下测定样品的吸光度。
2. 总糖测定（1）酸水解：取1克食物样品放入烧杯中，加入10毫升硫酸，煮沸30分钟，冷却后加入10毫升氢氧化钠溶液，搅拌均匀。
（2）显色反应：取2毫升水解液于试管中，加入3毫升3,5-二硝基水杨酸溶液，混匀后置于水浴中加热5分钟。
（3）测定吸光度：用分光光度计在540nm波长下测定样品的吸光度。
五、实验结果与分析1. 还原糖测定结果根据实验数据，计算各食物样品中还原糖的含量，结果如下：- 大米：0.8%- 面粉：1.2%- 水果：1.5%- 糖果：2.3%2. 总糖测定结果根据实验数据，计算各食物样品中总糖的含量，结果如下：- 大米：2.0%- 面粉：2.5%- 水果：3.0%- 糖果：4.0%通过对比还原糖和总糖的含量，可以看出，糖果中的糖类含量最高，水果次之，大米和面粉含量相对较低。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了糖类测定的基本原理和方法，学会了使用比色法测定还原糖的含量。
还原糖和总糖的含量测定
还原糖和总糖的含量测定材料：小麦面粉；精密pH 试纸四、操作步骤1. 制作葡萄糖标准曲线取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作2. 样品中还原糖和总糖的测定（1）还原糖的提取准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。
将浸出液（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于4000r/min下离心5min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）总糖的水解和提取准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL 蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。
待三角瓶中的水解液冷却后，加入1 滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。
将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。
（3）显色和比色取4支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算：计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
实验报告还原糖测定(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习还原糖的检测原理和方法。
2. 掌握斐林试剂的使用方法。
3. 通过实验了解还原糖在食品、生物样品中的应用。
二、实验原理还原糖是指在水溶液中能将斐林试剂还原成砖红色沉淀的糖类物质。
斐林试剂是一种含有CuSO4和NaOH的混合溶液，在加热条件下，Cu2+被还原成Cu2O，形成砖红色沉淀。
还原糖与斐林试剂反应，生成砖红色沉淀的多少与还原糖的浓度成正比。
三、实验材料1. 试剂：斐林试剂、NaOH溶液、CuSO4溶液、葡萄糖标准溶液、蒸馏水。
2. 仪器：试管、试管架、酒精灯、恒温水浴锅、移液器、滴定管。
四、实验步骤1. 准备斐林试剂：将CuSO4溶液和NaOH溶液按1:9的比例混合，现配现用。
2. 配制葡萄糖标准溶液：准确称取1.0g葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml，配制成10mg/ml的葡萄糖标准溶液。
3. 样品处理：准确称取待测样品0.1g，用蒸馏水溶解并定容至10ml，配制成0.01mg/ml的样品溶液。
4. 实验步骤：a. 取一支试管，加入1ml斐林试剂；b. 取另一支试管，加入1ml样品溶液；c. 将两支试管同时放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态2分钟；d. 观察颜色变化，记录结果。
5. 结果处理：a. 将实验结果与葡萄糖标准溶液进行对照；b. 计算样品中还原糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 实验结果：样品溶液加入斐林试剂后，加热至沸腾，观察到样品溶液变为浅蓝色，随后逐渐变为棕色，最终形成砖红色沉淀。
2. 结果分析：根据实验结果，样品溶液中加入斐林试剂后，发生了还原反应，生成了砖红色沉淀。
这说明样品中含有还原糖，且其浓度与斐林试剂反应生成的沉淀量成正比。
六、实验讨论1. 实验过程中，样品溶液加热至沸腾时，需保持沸腾状态2分钟，以确保还原糖与斐林试剂充分反应。
2. 实验结果中，样品溶液的颜色变化过程为浅蓝色→棕色→砖红色沉淀，说明还原糖在加热条件下，与斐林试剂反应生成砖红色沉淀。
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
葡萄酒中总糖和还原糖的测定
七、思考题
❖ 1、根据测定步骤,正确完成实验的操作要点 是什么？
❖ 2、为什么滴定过程要保持沸腾？ ❖ 3、为什么对样品要进行预备滴定？
知识回顾 Knowledge Review
五、计算
X F 1000 (V1 /V2)V3
X FGV 1000 (V1/V2)V3
❖ 式中：X——总糖或还原糖的含量,g／L； ❖ F——费林溶液Ⅰ、Ⅱ各 5 mL相当于葡萄糖的克数,g； ❖ V1——吸取的样品体积,mL； ❖ V2——样品稀释后或水解定容的体积,mL； ❖ V3——消耗试样的体积,mL； ❖ G——葡萄糖标准溶液的准确浓度,g／mL； ❖ V——消耗葡萄糖标准溶液的体积,mL.
❖ 测还原糖用试样：准确吸取一定量的样品〔V1于 100 mL容量瓶中,使之所含还原糖量为 0.2～0.4g,加 水定容至刻度.
❖ 2 、 样品测定
❖ 以试样代替葡萄糖标准溶液,参照费林试剂标 定同样操作,记录消耗试样的体积〔V3,结果 按式〔4计算.
❖ 测定干葡萄酒样品时,加入一定量样品水解液, 正式滴定需用葡萄糖标准溶液滴定至终点.
三、试剂
❖ 盐酸溶液〔1＋1； ❖ 费林溶液； ❖ 标准葡萄糖溶液 2.5 g／L； ❖ 次甲基蓝指示液 10g／L； ❖ 氢氧化钠溶液：200 g／L.
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
四、测定步骤
❖ 1、试样的制备
❖ 测总糖用试样：准确吸取一定量的样品〔V1于 100mL容量瓶中,使之所含总糖量为 0.2～0.4 g,加 5 mL盐酸溶液〔1＋1.加水至 20 mL,摇匀.于 68±1℃ 水浴上水解 15 min,取出,冷却.用200 g／L氢氧化钠 溶液中和至中性,调温至 20℃,加水定容至刻度〔V2.
DNS法测定总糖和还原糖精选文档
D N S法测定总糖和还原糖精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
试剂管号012345678葡萄糖00.20.40.60.8 1.0 1.2 1.4 1.6标准液(ml)蒸馏水2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.00.80.60.4 (ml)水杨酸1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5溶液(ml)葡萄糖00.20.40.60.8 1.0 1.2 1.4 1.6含量(mg)将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。