实验六：总糖和还原糖测定

二、实验原理
单选题
2分
下例哪种糖不是还原糖（）。
麦芽糖 木糖 阿拉伯糖 蔗糖 果糖
二、实验原理
两个定义：
一、还原糖（Reducing sugar）： • 还原糖是指具有还原性的糖类；
• 分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都
具有还原性；
• 还原性糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。
3，5-二硝基水杨酸，
碘-碘化钾溶液， 6 mol/L NaOH，
6 mol/L HCL，
0.1%酚酞指示剂。
四、实验步骤
四、实验步骤
一、葡萄糖标准曲线的制作
试剂 管号
0 0 1.0 2.0 0
1 0.2 0.8 2.0 0.2
2 0.4 0.6 2.0 0.4
3 0.6 0.4 2.0 0.6
2．测定总糖含量时，水解完全后，为什么要用 NaOH对水解
液进行中和？ 3．用水解后的还原糖含量计算总糖含量时为什么要乘以 0.9?
上课到此
谢谢大家！
4 0.8 0.2 2.0 0.8
5 1.0
样品
标准葡萄糖液(mL) 蒸馏水(mL)
1.0 0 2.0 1.0 2.0 X DNS(mL)
葡萄糖含量（mg）
混合混匀，沸水中加热5 min，冷却至室温，以0号管为空白对照
蒸馏水
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
9.0
Y
A540
四、实验步骤
四、实验步骤
四、含糖量测定
试剂 管号
空白 0 1.0 2.0
还原糖 1.0 0 2.0
总糖 1.0 0 2.0
样品溶液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL）
将各管溶液混合均匀，在沸水中水浴5min，取出后冷却至室温
蒸馏水 （mL） A540
测定后，将样品的吸光值代入标准曲线方程式中求出相应的糖含量（X）
二、实验原理
两个定义：
二、总糖： • 总糖是指样品中原本有的和水解后能产生具有还原性的糖； • 包括所有还原糖和酸水解后能生成还原糖的双糖、多糖等；
• 蔗糖虽为非还原糖，但在酸水解的作用下蔗糖分解为葡萄糖
和果糖（葡萄糖和果糖均为还原糖），所以蔗糖也是总糖的
一部分。
二、实验原理
在NaOH存在的条件下，DNS可以与还原糖共热后被还原 生成3-氨基-5-硝基水杨酸； 过量NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在λ=540nm波 长处有吸收波峰； 在一定浓度范围内，光吸收值与还原糖的量呈线性关系，
生物化学实验
实验六：总糖和还原糖测定
3、5-二硝基水杨酸法
目 录
1 2 实验目的 实验原理 器材及试剂 实验步骤 思考
3
4
5 5
一、实验目的
一、实验目的
1、掌握3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定还 原糖的原理和方法； 3、复习和强化标准曲线的制作； 3、复习离心机、分光光度计使用方法和滴定法。
利用比色法可测定样品中的糖含量。
碱性 加热
NH2
3，5-二硝基水杨酸（黄色） 3-氨基-5-硝基水杨酸（桔红色）
还原糖
三、器材及试剂
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三、器材及试剂
1、器材：
离心机，分光光度计，电子天平，水浴锅； 离心管，研钵，研棒，试管，量筒，漏斗，滤纸，容量瓶；
植物组织或淀粉。
2、试剂：
1 mg/mL葡萄糖标准溶液，
二、提取还原糖
四、实验步骤
三、提取总糖
1. 称量：称取0.25g左右淀粉
2. 转移：转移入50 mL锥形瓶中，用10mL左右蒸馏水混匀
3. 水解：加入6 mol/LHCl 10mL，沸水中水解30 min 4. 检查：是否完全水解（I2-KI溶液） 5. 冷却：水解完毕，取出，冷却至室温 6. 滴定：加1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH溶液滴定至微红色 7. 定容：将溶液转入100 mL容量，冲洗并定容 8. 过滤： 9. 稀释：取一定滤液进行稀释 10. 测量：取1 mL提取液测定总糖的含量
9.0
9.0
9.0
四、实验步骤
五、计算
注意事项
测定前请检查分光光度计波长是否为所需的；
样品测定时同样需要空白组对分光光度计进行调零；
各试管处理应一致，测定时应同时放入沸水中，再同时 从沸水浴中取出； 制作标准曲线时，各管试剂添加量要准确。
五、思考
五、思考题
1．配制DNS试剂时为什么要加入结晶酚和亚硫酸钠？