刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌细胞ct26体外增殖和细胞周期的影响
全基因组重测序探索刚地弓形虫致病基因
首页 科技服务 医学检测 科学与技术 市场与支持 加入我们 关于我们安徽医科大学研究人员携手诺禾致源重测序团队，通过对2种刚地弓形虫的全基因组重测序变异检测研究，从基因组水平解释了2种虫株产生表型差异的原因，为弓形虫病的治疗和疫苗研发提供了理论依据。
该研究成果发表于2015年10月的BMC Genomics杂志（IF: 3.986）。
研究背景刚地弓形虫（Toxoplasma gondii Nicolle&Manceaux, 1908）寄生于人和许多种动物的有核细胞，但只能在猫科动物的肠道内繁衍，能够引起人畜共患的弓形虫病。
与北美和欧洲群体遗传结构不同，Chinese 1 (ToxoDB#9)是中国的弓形虫优势基因型。
在Chinese 1型弓形虫中，Wh3（强毒株）和Wh6（弱毒株）对小鼠表现出了不同的毒力。
本研究拟通过全基因组重测序技术，从基因组水平探究两种虫株表型及致病性差异的原因。
研究结果1 SNP、indel检测及注释与参考基因组比对发现，Wh3中共有505,856个SNPs，30,004个indels；Wh6中共有505,654个SNPs，30,658个indels。
进一步分析两样本特有变异，发现Wh3中特有SNP和indels分别位于2847和2452个基因中，Wh6中特有SNP和indels分别位于2868和2613个基因中（图1，图3）。
图1 SNPs、indels的对比分析及分布情况统计注：a为SNP韦恩图；b为indels韦恩图；c为SNP突变型分布情况；d为编码区indels长度分布情况图2 CNVs（左）和SVs（右）的分布情况统计图3 Wh3 （左）和Wh6（右）的全基因组变异情况图4 I、II、III型弓形虫与Chinese 1型弓形虫的ROP16和GRA15序列比对分析图5 三种弓形虫虫株的表达模式分析NGS项目文章全基因组重测序探索探索刚地弓形虫毒力相关基因BMC Genomics2 CNV、SV检测及注释与参考基因组比对发现，Wh3中共有2320个SVs，1942个CNVs；Wh6中共有4661个SVs，3080个CNVs。
刚地弓形虫ppt课件
中间宿主：人、羊、猪、牛、猫（除红细胞 外的有核细胞）都可寄生，只能无性生殖 感染期：猫粪中的卵囊、动物肉中的包囊或 假包囊 感染途径：经口、经皮肤、垂直传播
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三、致病
1 致病因子 （1）虫株毒力 （2）机体免疫状态 （属Opportunistic protozoiasis） 2 致病机制 tachyzoites 导致组织急性炎症和坏死 bradyzoites 是慢性感染的主要形式 cyst挤压器官组织，破裂后刺激机体发生变 态反应，形成肉芽肿，纤维化。 3临床分类：有先天性和获得性弓形虫病二类。
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六、防治原则
1加强肉类检疫、改变不科学的食肉习惯：不吃 生或半生的肉。 2 孕妇定期检查弓形虫抗体，不接触猫等动物。 3 药物治疗：对急性期患者应及时药物治疗，但 尚无理想的特效药物。乙胺嘧啶、磺胺类对增殖 期弓形虫有抑制生长的作用。常用制剂为复方新 诺明，亦可与乙胺嘧啶联合应用提高疗效，对孕 妇应忌用。 孕妇如在怀孕期4-5月感染则应作人工流产，4-5 月后感染者要用螺旋霉素，毒性小，器官分布浓 度高，为目前对孕妇的首选药。
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2．流行环节
传染源： 猫科动物为主的多种哺乳动物和鸟类。猫 粪+动物肉类：猪肉、羊肉等和蛋、奶制品。 传播途径：经口；胎盘为主，另外输血、器 官移植也可感染。对人来说，更多是由于吃 生可半生肉而感染。苍蝇、蟑螂可作为传播 媒介。 易感人群：胎儿、婴幼儿和肿瘤、AIDS患 者等免疫功能受累者。
刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
• 宿主免疫功能状态 • 症状，病程，愈后与被侵宿主组
织器官相关
（二）临床
—— 先天性弓形虫病 刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
• 母亲孕期感染，约50%胎儿受染
• 孕期前3个月感染，症状尤重，可 致流产、早产、死产或脑积水、小 脑畸形、小眼畸形等胎儿畸形，还 会增加妊娠的合并症
• 受染胎儿
• 出生时出现症状刚地/弓畸形虫形卡氏者肺孢，结肠小死袋纤亡毛虫率12% • 存活者，80%精神障碍，50%视力障碍 • 隐性感染，数月— 数年 — 成年，出现症状 • 典型表现：脑积水，大脑钙化灶，视网膜脉
7. 寿命：数月、数年、甚至终身
小结：
1. 感染阶段多：卵囊、包囊、假包囊、滋养体 刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
2. 寄生的组织部位多：所有有核细胞，特别是脑、 淋巴结、肌肉、心、肝、肺等
3. 中间宿主多：除人外，140多种哺乳动物，鸟 类，鱼类
4. 繁殖方式多：内二芽殖、二分裂、裂体增殖、 孢子生殖（无性）； 配子生殖（有性）
关注高危人群
• 易患弓形虫病者
刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
• 隐性感染易转化为急性/亚急性者
• 高危人群
• 恶性肿瘤 • 施行器官移植 • 长期接受放射治疗 • 应用免疫抑制剂/细胞毒剂 • 先天性免疫缺陷者 • AIDS等
四、实 验 诊 断
刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
1. 病原学：确诊
• 包囊形成与转归
刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
宿主免疫功能正常
包
存活
速殖子增殖减缓
活化
虫体分泌形成囊壁
囊
破裂
缓殖子释出
在中间宿主体内
刚地弓形虫卡氏肺孢结肠小袋纤毛虫
刚地弓形虫[调研知识]
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优选分析
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刚地弓形虫生活史图
优选分析
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在中间宿主体内
卵囊 吞食 包囊
假包囊
子孢子 缓殖子 速殖子
血流 速殖子
假包囊（急性期） 包 囊（慢性期）
中间宿主：除人外，尚有多种哺乳动物（包括与人关 系密切的有牛、羊、猪、猫、鼠等），鸟类、鱼类、 爬行类。
优选分析
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1、感染 ：
（1）阶段： 卵囊、包囊、假包囊、滋养体。
弓形虫寄生在人及其他多种哺乳动物除红细胞
外的几乎所有有核细胞内，引起人兽共患的弓形虫 病（toxoplasmosis）。孕妇在孕期感染可致流产、 早产、死胎 、畸胎；后天感染常损害脑、眼等多 种脏器，引起脑炎、癫痫、精神异常等。当宿主免 疫功能低下时，往往引起严重的后果，如AIDS患者 中有 5－10％的人合并弓形虫感染。是重要的机会 致病原虫（opportunistic protozoan）。
人体寄生虫学
（Human Parasitology）
中南大学湘雅医学院 寄生虫学教研室
优选分析
1
优选分析
2
刚地弓形虫
（Toxoplasma gondii)
优选分析
3
引言（introduction)
1908年法国学者Nicolle在突尼斯的一种啮齿
动物刚地梳趾鼠的肝脾单核细胞内发现，其滋养体 呈弓形，故名弓形虫。
优选分析
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三、致 病 （Pathogenic)
优选分析
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（一） 致病阶段：
速殖子（急性期），包囊（慢性期）
（二） 致病机制：
1、虫体毒力：
（1） 强毒株（RH株）（急性感染） （2） 弱毒株（Beverly株）（多为隐性感染） （3） 弓形虫毒素有：
大黄素对小鼠结肠癌CT26.WT细胞的抑制作用
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ：ＷＡＮＧ Ｐ ｅ ｉ —ｐ ｄ ａ ｎ，Ｅ —ｍ ａ ｉ ｌ ：１ ９ ８ ６ ７ １ ８ ８ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ
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广东医学 ２ ０ １ ３ 年６ 月 第３ ４ 卷第 １ ２ 期 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ｌ ａ Ｊ ｕ ｎ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ 。 Ｎ ｏ ． １ ２
CO_2气腹压力和持续时间对人结肠癌细胞增殖的影响
时间 （ 、２ ）作 用于 Ｓ４ ０细胞 ，作 用后 １ ，流式细胞仪观察细胞周期 变化；作 用后 １ 、２ 、３ 、 １ 、４ ｈ Ｗ８ ２ｈ ２ ４ ６ ４ 、６ 和 ７ ，ＭＴ法检测细胞增殖情况。结果：流式细胞仪检测细胞周期 结果显示，ｃ ８ ０ ２ｈ Ｔ Ｏ 气腹压 力对于 人结肠癌 Ｇ ／ ｌ 细胞数ห้องสมุดไป่ตู้有显著影 响 （ ０ ０ ） ０Ｇ 期 Ｐ＜ ．１ ，对 于 Ｓ 、Ｇ ／ 期 细胞周期 无影响 。而不 同ｃ 气 期 ２Ｍ ｏ 腹持 续作 用时问对于各 细胞周期 无影响 （ ０ ０ ） ｃ 气腹压 力与作 用时间对于各 细胞周期不存在 交 Ｐ＞ ．５ ， Ｏ
第４ ０卷 第 ６期 ２ｌ Ｏ ０年 ｌ １月
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医
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弓形虫
刚地弓形虫是艾滋病后期的一种主要 病原体
•多数病例是体内原有的原虫被激活所致 •通常形成多病灶过程，造成多发性脑脓肿： 可见中央坏死区域被充血组织环绕，其中含 有大量的原虫，有时可形成弥散性弓形虫性 脑炎 •弓形虫性脑炎可用乙胺嘧啶或磺胺类药物 治疗，但有患者无法耐受药物的副作用 •和其他机会性感染一样，对进行HAART治 疗的患者影响较小
弓形虫病的诊断、流行与防治
诊断：免疫学检查： Sabin-Feldman染色，IFA等
直接镜检（患者体液、脑脊液等）
动物接种
流行：感染率农村高于城市，兽医、屠宰工、医 生等职业感染率高。
防治：注意个人卫生，接触不洁物后要清洗消毒
不吃生的或未熟的肉类
不玩猫、犬、兔 治疗：磺胺嘧啶＋乙胺嘧啶，螺旋霉素等
终宿主 猫 猫 中间宿主 人及多种动物 多种动物
滋养体
无性 裂体增殖 配子生殖 孢子增殖 急性期假包囊 （速殖子） 慢性期包囊 （缓殖子）
卵囊 肠上皮细胞内发育 肠外有核细胞内发育
弓 形 虫 生 活 史 关 系 图
弓形虫生活史关系图
猫
其他中 间宿主
经胎盘感染
食动物肉、接触 动物分泌排泄物 经口感染
脑积水---大头畸形
小头畸形
先天性弓形虫病
斜视、脑瘫 斜视
斜视、弱智
弓形虫的IFA检查
弓形虫病的诊断
• 下列情况可确诊或有助诊断
– 病原学检查阳性者可确诊 – 免疫学3项检查(IgG, IgM, Cag)中有两项阳性者 – 免疫功能低下病人除检测弓形虫抗体外，建议采用 PCR和检测Cag的方法
• 诊断中的注意事项
– 要选用质量可靠的诊断试剂，注明厂家 – 严格区分弓形虫感染和弓形虫病 – 不宜以“抗弓形虫治疗有效”作为回顾性诊断
ART1基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞黏附和运动能力的影响
ART1基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞黏附和运动能力的影响熊薇;唐怡;王娅兰;徐剑侠【摘要】目的探讨单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1[mono(ADP-ribosyl) transferase-1,ART1]基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞黏附、运动和侵袭能力的影响及其机制.方法以携带ART1-shRNA的慢病毒感染小鼠结肠癌CT26细胞.将细胞分为实验组(感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞),NC-shRNA对照组[感染阴性对照慢病毒(negative-control-shRNA,NC-shRNA) CT26细胞]及未处理组(未经处理的CT26细胞);RT-PCR检测CT26细胞ART1 mRNA表达变化,Western blot检测ART1、RhoA、integrinβ1蛋白表达的变化;用细胞基质黏附、运动和侵袭实验观察ART1-shRNA对CT26细胞基质黏附、运动和侵袭能力的影响.结果获得稳定沉默ART1基因的CT26细胞株;RT-PCR和Western blot 结果均显示,实验组ART1 mRNA和ART1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01);Western b1ot结果显示实验组RhoA、integrinβ1表达均显著低于对照组(P＜0.01);实验组细胞黏附、运动、侵袭抑制率分别为70.72％,52.20％和60.00％.结论单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1 (ART1)基因沉默可降低CT26细胞的黏附、运动、侵袭能力,该作用可能与ART1沉默后下调RhoA和integrin β1活性有关.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2013(040)003【总页数】7页(P328-334)【关键词】单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1 (ART1);慢病毒;结肠癌;黏附;迁移【作者】熊薇;唐怡;王娅兰;徐剑侠【作者单位】重庆医科大学病理教研室-分子医学与肿瘤研究中心重庆400016;重庆医科大学病理教研室-分子医学与肿瘤研究中心重庆400016;重庆医科大学病理教研室-分子医学与肿瘤研究中心重庆400016;重庆医科大学病理教研室-分子医学与肿瘤研究中心重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R735.34;R363.21腺苷二磷酸核糖基化（ADP－ribosylation）反应在生理和病理生理过程中扮演着重要角色，包括影响细胞信号传递、转录调节、DNA修复、基因稳定性维持以及细胞增殖分化、黏附迁移。
ME49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性
ME49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性陆瑶瑶;苏瑞景;董辉;王梦瑶;杨玉荣【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2018(51)19【摘要】[目的]通过ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性的研究,了解该虫株速殖子的毒力特点,为深入研究弓形虫弱毒株的致病特征提供研究基础.[方法]以ME 49株弓形虫速殖子为研究对象,用血球计数板将速殖子梯度浓度稀释为＜10 0,100-106个/mL,腹腔注射昆明小鼠,死亡小鼠的组织直接涂片检测肺脏及肠系膜淋巴结速殖子或大脑组织中弓形虫包囊数量,肺脏常规石蜡切片进行H.E及IHC染色,统计涂片和MAT方法的结果分析弓形虫的感染情况,并统计小鼠的感染率和生存率.[结果]0-60 DPI,死亡小鼠组织涂片显微镜检查和MAT法检测小鼠血清中弓形虫IgG 抗体结果显示,＜10 0、100、101及≥102速殖子浓度组小鼠的弓形虫感染率分别为0、20％、60％及100％.104速殖子浓度组小鼠有3只分别在12、16、19 DPI死亡;10 5速殖子浓度组小鼠有2只在11 DPI死亡,1只在8 DPI死亡;106速殖子浓度组小鼠有2只在9 DPI死亡,在7、8、10 DPI各死亡1只,感染弓形虫的小鼠生存率为62.07％(18/29).对死亡小鼠的肺脏和肠系膜淋巴结直接涂片,显微镜镜检可见弓形虫速殖子;H.E及IHC染色,肺脏可以观察到弓形虫包囊及弓形虫抗原.对＜10 0、10 0、101及102处死小鼠的大脑组织研磨镜检,结果显示＜10 0和10 0感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数均为0;101感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数分别为60、100和0;102感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数量分别为20、40、40、60和0.60-600 DPI,10 3速殖子浓度组小鼠在184、435和569 DPI各有1只死亡,大脑中未检测到弓形虫包囊;105速殖子浓度组小鼠1只在188DPI死亡,大脑包囊数量为20,其余小鼠存活时间为590 DPI.[结论]本研究探讨了ME 49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性,≥102速殖子浓度可引起小鼠100％感染,106速殖子浓度可引起小鼠100％死亡,小鼠死亡的时间为7-19 DPI,感染小鼠生存率为62.07％ (18/29),大脑包囊成囊率为53.85％ (7/13),平均包囊量为0-53个包囊/小鼠大脑,最长存活时间590 DPI.ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性较弱,大脑可见弓形虫包囊,高浓度速殖子可引起小鼠死亡.【总页数】7页(P3800-3806)【作者】陆瑶瑶;苏瑞景;董辉;王梦瑶;杨玉荣【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002【正文语种】中文【相关文献】1.弓形虫RH株体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系的建立 [J], 吴焜;王琼;郝丽;程璐;陈晓光2.弓形虫RH株速殖子冻融上清影响成囊株速殖子细胞培养敏感性观察 [J], 孙新;Cozo.,G3.刚地弓形虫细胞培养的研究：II.RH株速殖子细胞培养上清对成囊株速… [J], 孙新4.ME49株弓形虫定位感染昆明小鼠海马的脑组织病理观察 [J], 李倩;刘建新;吴锋;龙伟;李小其;司开卫;程彦斌5.弓形虫速殖子与弓形虫缓殖子相互转换的研究进展 [J], 李学瑞;赵象忠;王艳华;张德林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
刚地弓形虫
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
三、致病
2 临床表现
（2）获得性弓形虫病
食入包囊、卵囊，或速殖子经皮肤、黏膜侵入而感染。
1）免疫力正常受染者：多为隐性感染，感染者一般无症状。弓形虫在细胞内 寄生，以包囊的形式出现，局部可有慢性炎症。
2）免疫力低下受染者出现急性弓形虫病，可引起：
的统称；
5
• 香蕉形或新月形，一端较尖，一端较圆，一边扁平，一边隆起；
• 速殖子长4~7 µm，最宽处2~4 µm。
• 核位于虫体中央。
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
一、形态
弓形虫滋养体
6
瑞氏染色
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
荧光染色
一、形态
2 假包囊
由于宿主的免疫功能低下，弓形虫
染色试验
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
四、实验诊断
3 影像学诊断 X线或CT等可显示脑部病变
脑弓形虫病
脑弓形虫病
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
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肺弓形虫病
五、流行与防治
1 流行
弓形虫呈世界性分布，人和多种哺乳动物都可感染，人群感染率为 25%~50%，多数属于隐性感染。
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
五、流行与防治
2 防治
（1）治疗病人：乙胺嘧啶、磺胺类药物联合使用，孕妇应使用 螺旋霉素治疗。
（2）加强对动物的管理和肉类的检疫。 （3）加强卫生宣传教育。
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)
在体内的繁殖速度较快，形成的大量
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细 胞 周 期 蛋 白 ｃ ｃｉＢ１活 性下 降在 （ Ｍ 期 阻滞 中起源自主 要 作 用 。 ｙｌ ｎ ／
关键 词 ： 地 弓形 虫 ； 鼠结 肠 癌 ｅ２ 刚 小 ｔ ６细 胞 ； 期 阻滞 ； 咆 周 期 蛋 白 周 细 中 图分 类 号 ： ３ ２ ５ 文 献 标 识 码 ： Ｒ ８ Ａ
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２ Ｏ， ２６ （ ２） ０ｌ １
文 章 编 号 ：０ ２ ６ ４ ２ １ ） ２ ０ ８ ５ １ ０ —２ ９ （ ０ ０ １ —１ ８ —０
机 制 。 方法 取 对 数 生 长 期 的 小 鼠结 肠 癌 ｃ２ ｔ６细 胞 ， 立 弓形 虫 与 ｃ２ 建 ｔ６复 合 感 染 度 （ ｉ 分 别 为 １：ｌ ２：１ ４：１ ８：１ ｍｏ ） 、 、 、 、
１ ｌ ６： 的共 培 养 试 验 模 型 ， 台盼 兰排 斥 试 验连 续 ７ｄ绘 制 细胞 生长 曲 线 ； 式 细 胞仪 检测 ８： 流 １共培 养 模 型 组 ６ｈ １ 、４ｈ ４ 、２ｈ ２ 、８
呈 现 前 ４ｄ缓 慢 抑 制 ， ｄ后 细胞 大 量 死 亡 的 现 象 ， ８：１ 型 组 的增 殖 抑 制 作 用 最 明 显 ， 染 ７ｄ后 细 胞 抑 制 率 达 ８ ． ７ ４ 以 模 感 Ｏ ７
（ ＜ Ｏ Ｏ ） 流 式 细 胞 仪检 测发 现 ８： 模 型 组 弓形 虫 可在 各怍 用 时 间 明显 改变 ｃ２ Ｐ ． １； １ ｔ６细 胞 周 期 分 布 ， Ｇ ／ 使 Ｇ 期细 胞 百分 比 下 降 ， ： Ｍ 期 百 分 比显 著 升 高 （ Ｏ ０ ） ２ Ｇ／ Ｐ ． １ ， ４ｈ达 到 作 用 高 峰 ， Ｇ ／ 期 百 分 比 升 高 １ ． ７ ，８ ｈ则 细 胞 Ｇ ／ 期 百 分 比 下 使 ：Ｍ ２ ７ ４ Ｍ 降； 弓形 虫感 染 ｃ ６细 胞 ３ ２ ， ｔ ２ ～ ４ｈ 细胞 ｃ ｃ ｄ ２转 录 水 平 在 各 时 间 点未 见 明 显 变 化 ， 胞 ｃ ｃｉ １从 转 录 水 平 和 蛋 白水 平 均 呈 细 ｙｌ Ｂ ｎ 现 为 感 染 ３ ｈ时表 达 增 强 ， 后 各 时 间点 均 明显 降 低 的 现 象 ， ｙ ｌ Ｂ 随 ｃ ｃ ｎ １基 因 转 录水 平 在 感 染 后 ２ ｉ ４ ｈ只达 到 对 照 组 的 １ ． ５ 。 ６ ５ 结 论 弓形 虫 ＲＨ 株 速 殖 子 可 明 显 抑 制 小 鼠结 肠 癌 ｃ２ ｔ６细 胞 体 外 增 殖 ， 染前 期 以诱 导细 胞 发 生 （ Ｍ 期 阻 滞 为 主 要 机 制 ， 感 ／
Ｅｆ ｅ ｔ ｆ Ｔｏ ｐｌ ｓ ａ ｇｏ ｄｉ ｔ ｃ ｚ ｉｅ ｎ ｐ ｏ ｉｅ ａ ｉ ｎ ｆ ｃ ｓ ｏ ｘｏ ａ ｍ ｎ ｉ ａ ｈｙ ｏ ｔ ｓ ｏ ｒ ｌｆ ｒ ｔｏ ａ ｄ ｃ ｌ ｃ ｃ ｅ ｏ ｏ ｓ ｏ ｏ ａ ｅ ｅ ｌ ｔ ６ ｎ ｅ ｌ ｙ ｌ ｆ ｍ ｕ ｅ ｃ ｌ ｎ ｃ ｎｃ ｒ ｃ ｌｓ ｃ ２
刚 地 弓形 虫 ＲＨ株 速 殖 子对 小 鼠结肠 癌 细 胞 ｃ２ ｔ６体 外 增殖 和 细 胞 周期 的影 响
高 剑， 叶 彬 ， 卫 华 ， 武 孔 景
摘 要 ： 目的 研 究 刚地 弓形 虫 ＲＨ 株 速殖 子对 小 鼠结 肠 癌 ｃ２ ｔ６细 胞 体 外 增 殖 和 细 胞 周 期 的 影 响 ， 探 讨 其 作 用 的分 子 并
Ｃｈｍ ｇｑＤ ｇ Ｍ ｅ （ ｔ ｄＡａｌ ｖ ｒ ｉ ，Ｃｈｏ Ｕ７ ｅ ｓｌ ｚ ｉ ｎｇｑ ｎｇ ４ ０１ ｉ ００ ６，Ｃ＾ｉ ａ） ｎ
ＡＢＳ ＲＡＣＴ： ｅｏ ｊｃｉｅｗａ ｏ ｉｖ ｓｉａｅｔｅｃ ａ ｇ ｓｏ ｒ ｌ ｅａｉｎａ ｄｃ ｌ ｃ ｃｅｏ ｕ ｅｃ ｌｎｃ ｎ ｅ ｅｌ ｔ ６ｉ Ｔ Ｔｈ ｂｅ ｔ ｓｔ ｎ ｅ ｔ ｔ ｈ ｈ ｎ ｅ ｆｐｏ ｉ ｒｔ ｎ ｅｌ ｙ ｌ ｆ ｖ ｇ ｆ ｏ ｍｏ ｓ ｏｏ ａ ｃ ｒｃ ｌｃ２ ｎ
ｂｙ ７． ｇｏ ｄｉ ａ ｈ ｏｉｅ ． Ｔｈｅ ｃ ｍ ｉａｎ ｃ ｌｕ ｅ ｍ ｏ ｌ ｔ ６ ｅｌ ｉｈ ｄｉｆ ｒ ｎｔ ｍ ｏｕ ｓ ｏｆｔ ｃ ｚ ｉｅ ｏ Ｔ． ｇｏ ｄｉ ’ ｎ ｉ ｃ ｙｚ ｔ ｓ ｔ ｏ ｔ ｔ ｕ ｔ ｒ ｄｅｓ ｏｆｃ ２ ｃ ｌｓ ｗ ｔ ｆｅ ｅ ａ ｎｔ ａ ｈｙ ｏｔ ｓ ｆ ｎ ｉ ＲＨ ｓ ｒ ｉ （ ｈ ｏｐ ｒ ｉ ｓ ｂｅ ｗｅ ｎ ａｃ ｚ ｉｅ ｎｄ ｃ ｌｓ ａ ｅ ｌ ： １，２ ：１， ４ ： １，８ ： ｌ ｎ １ ： １， ｒ ｓ ｅ ｔｖｅｙ） ｗ ｅ ｅ ｅ ｔ ｂｌ ｈｅ ｔａｎ ｔ ｅ ｐｒ ｏ ｔｏｎ ｔ ｅ ｔ ｈｙ ｏ ｔ ｓａ ｅ ｌ ｒ ａ ｄ ６ ｅ ｐ ｃｉ ｌ ｒ ｓ ａ ｉ ｄ， ｓ ｔ ｅｇｒ ｈ ｏｗｔ ｕｒ ｅ ｔ ｅ ｌ ｒ ｅ ｉｅ ｔ ｄ ｂ ｒ ｐ ｌ ｅｃ ｏｒｎｇ ｍ ｅ ｈ ｈ ｃ ｖ ｓｏｆｃ ２６ ｃ ｌｓ ｗｅ ｅ ｄ ｌｎ ａ ｅ ｙ ｔ ｙ ａｎ ｂ ｕ ｏｌ ｉ ｔ ｏｄ，ａ ｌ ｎｄ ｆｏｗ ｙ ｏｍ ｅ ｒ （ ｃｔ ｔ ｙ ＦＣＭ ） ｗａ ｄｏ ｅ ｏ ａ ａ ｓａ ｐｔ ｄ ｔ ｎ
ｈ细胞 周 期 改 变 ； 用半 定 量 ＲＩ ＣＲ 方 法 分别 检 测 ｃ２ 采 ＇ Ｐ ｔ ６细 胞 ｃ ｃｉＢ１ ｃ ｃ ｙｌ ｎ 、 ｄ ２基 因 转 录 水平 变化 ； ｅ ｔｒ ｌｔ方 法 检 测 细 胞 Ｗ ｓｅｎ ｂｏ
周 期 蛋 白 ｃ ｃ ｎ １ 白水 平 变 化 。 结果 台 盼 兰 排斥 试 验 发 现 各 比 例 组 弓形 虫 均 能有 效 抑 制 小 鼠 ｃ ６细 胞 的 体 外 增 殖 ， ｙｌＢ 蛋 ｉ ｔ ２ 且