HPLC的使用步骤
高效液相色谱仪使用说明书
高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。
本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。
一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。
1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。
常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。
2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。
用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。
3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。
泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。
4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。
用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。
二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。
（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。
（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。
（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。
2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。
3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。
（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。
4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。
（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。
Waters 2695 操作规程
2695-2489 HPLC系统 操作规程
2695-2489系统的标准化操作规程
一、 开机及准备系统
开机自检
详见1.1
是 执行干灌注
详见1.6
管路是否已干？
准备流动相
详见1.2
否
执行湿灌注
详见1.7
灌注柱塞密封清洗
详见1.3
灌注针头清洗
详见1.4
设定流动相平 衡色谱柱
详见1.8
冲洗进样器
*特别提示: z 玻璃容器必须使用超纯水清洗； z 所有溶剂和溶液在使用前必须ᠭ0.45Ǻ m᧣滤ሻ过滤，并超声脱气1分钟； z ᠭ洁净᧣玻ሒᠤᕬፕ溶液和流动相，ᶲቿ污ᝦ
1.3 灌注柱塞密封清洗泵 (Priming the Plunger Seal Wash Pump)
操作步骤： 1. 回到Menu 画面，选择Diag。
z Develop Method： 编辑、修改、删除仪器方法。 z Run Sample： 执行样品注射、仪器分析条件。 z Diag： 诊断维护仪器。 z Config： 设置仪器系统装置。 z Log： 查询仪器使用记录。
5
Log：又称“日志”，是仪器的使用记录。 这是一个非常有用的工具，在这里可以查
1.10. 装载样品转盘 (Loading Carousels)
样品盘的颜色及编号如下
代号
颜色
A
蓝色
B
黄色
C
红色
D
绿色
E
白色
z 打开样品管理器门，放入样品盘。
编号 1 – 24 25 – 48 49 – 72 73 – 96 97 - 120
z 若要换下一个样品盘时请按Next。 z 将样品瓶放入样品盘内，并记录各瓶号名称. z 当所有样品盘都放入时，关起舱门转盘会自动定位。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法高效液相色谱使用方法⒈简介⑴色谱技术概述高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种基于物质在固定相和流动相之间分配行为的色谱分离技术。
它广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测等领域。
⑵仪器设备在进行高效液相色谱分析之前，需要准备好以下仪器设备：●高效液相色谱仪●进样器●色谱柱●柱温箱●检测器●数据处理系统⒉样品制备在进行高效液相色谱分析之前，必须进行样品制备。
样品制备的方法根据具体领域和分析目的的不同而有所差异。
常见的样品制备方法包括：●样品浸提：通过浸提操作从固体样品中提取分析物质，并将其溶解到适当的溶剂中。
●样品过滤：将样品中的不溶物或杂质去除，使样品更纯净。
●样品稀释：根据样品的浓度情况，选择合适的溶剂将样品稀释到适当的浓度范围内。
⒊方法优化在进行高效液相色谱分析之前，应对方法进行优化，以获得更准确、灵敏的分析结果。
方法优化的主要步骤包括：●流动相优化：选择合适的流动相组成，使分析物质在色谱柱中得到良好的分离。
●色谱柱优化：选择合适的色谱柱，以满足分析要求，如色谱柱的选择应考虑分析物质的特性和目标分离效果。
●进样量优化：确定适当的进样量，以保证在检测器中能够获得合适的信号。
⒋实验操作步骤⑴仪器准备●打开高效液相色谱仪和相关仪器设备的电源。
●检查仪器连接情况，确保各仪器之间的连接正常。
●准备好所需的溶剂和试剂，并验证其质量。
⑵色谱条件设置●设置流动相的组成和流速。
●选择适当的柱温。
●配置适当的检测器参数，如波长、灵敏度等。
⑶样品进样●将样品溶液注入到进样器中。
●设置进样器的参数，如进样量、进样模式等。
●冲洗进样器，使其准备好下一次进样。
⑷数据采集与处理●打开数据处理系统，并设置合适的参数，如采集时间、信号积分方式等。
●开始进行数据采集。
⒌结果解释与分析根据采集到的数据，进行结果解释和分析。
根据对样品的分析目的，对结果进行合理解释，并得出相应的结论。
HPLC操作规程和注意事项
HPLC操作规程1。
所需的流动相,应该用合适的0。
45μm滤膜过滤。
2.样品溶液和标准溶液，也应该用合适的0。
45μm滤膜过滤，滤膜也分为水相和有机相。
3。
开机顺序：开泵，开检测器，进入色谱工作站.4.泵的启动:用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排放阀,用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml,设置高流速（9ml/min）或用冲洗键PURGE 进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后,将流速逐步回零或停止(STOP)冲洗,关闭排放阀。
5 。
将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需30分钟。
平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。
6. 检测器的开启：开启电源,选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15分钟方可用于分析测试.7。
压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。
如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗。
如果清洗不了，可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作.8.分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用适当经过滤和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水然后用甲醇冲洗，再用分析流速冲洗,各冲洗溶剂一般冲洗30—60分钟，特殊情况应延长冲洗时间,粗的柱子流速控制在0.5ml/min以下,细柱控制在0。
5ml/min以下。
9。
关机顺序:退出化学工作站,接着关检测器，最后关泵。
开机顺序刚好和关机顺序相反.HPLC使用注意事项1.含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜，最好加入叠氮化钠，防止细菌生长.2.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new?method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9．填写登记本，由负责人签字。
10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
hplc高效液相色谱仪使用方法
hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。
下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。
一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。
2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。
一般要求预热时间为30分钟到1小时。
二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。
根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。
2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。
可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。
3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。
设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。
4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。
一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。
5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。
柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。
三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。
2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。
3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。
进样过程中要确保无气泡进入柱。
四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。
监控色谱图，观察峰的形状和分离度。
根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。
2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。
进行数据处理和结果分析。
五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。
2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。
柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。
3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。
HPLC的使用步骤
高效液相色谱法测定止痛药由David L. Zellmer和罗伯特 - 威廉姆斯（基于由得克萨斯州A＆M大学的玛丽安海曼的实验）1997年4月版本1.02（轻微的补充和修正），2000年5月该方法我们将使用高效液相色谱法（HPLC）分离市售的止痛药乙酰水杨酸，咖啡因和对乙酰氨基酚。
你必须选择一个产品，至少有两个在它上面的成分。
该软件包应该给你制造商组成。
在分析的结论，你可以比较你的结果，与包装上指明的。
不要以为包是正确的的。
书面报告的目的是，建立你的分析信誉。
下面给出我们分离的化合物的结构。
一个化合物已增加，水杨酸。
这种物质将我们的内部标准，将在不断的金额加入到我们所有的标准和未知的运行。
我们的色谱柱将是一个30厘米C - 18柱，在性格上比较非极性。
我们的流动相，将水，甲醇和醋酸的混合物。
通过不同的水 - 甲醇混合，我们可以控制我们的溶剂的极性。
通过改变醋酸，我们可以改变它的pH值。
在酸性条件下，我们可以期望，对乙酰氨基酚或咖啡因氮原子（两个看起来像他们可能会弱碱）拿起一个质子和成为一个高度极性的离子，而乙酰水杨酸和水杨酸（包括弱酸）继续作为弱极性分子。
另一种可能性是对乙酰氨基酚不拿起任何质子，但在自己的权利非常极性。
这可能是一个足够强大的弱酸阴离子存在羟基，如果失去一个质子，在流动相的pH。
由于“像吸引了像”我们所期望的乙酰水杨酸和水杨酸列交互举行，而对乙酰氨基酚或咖啡因通过更迅速。
现实生活中是从未相当简单，所以我们必须发挥我们的溶剂组成，运行的色谱，我们得到什么。
我们希望看到的是类似下面的模拟色谱。
3分钟，高峰期可能是对乙酰氨基酚或咖啡因，8分钟可两个氨基酸之一，但不要指望它。
你必须制定一种方法，一旦你已经达到基线分离，以确定您的峰。
这是地方标准进来，我们将准备标准溶液，对乙酰氨基酚，乙酰水杨酸，咖啡因和水杨酸。
这些都将结合创建一系列的校准解决方案，将使我们能够确定峰，峰面积和浓度的标准之间的关系是什么。
_HPLC基础高效液相基本原理和使用方法
_HPLC基础高效液相基本原理和使用方法HPLC（高效液相色谱）是一种分离和分析化学品的常用技术。
它通过将需要分离的化合物溶解在流动相中，然后在高压马达的驱动下，将混合物通过填充了固定相的柱子，利用固定相与流动相间的相互作用来分离混合物中的成分。
HPLC主要由柱子系统、流动相系统、检测系统和数据处理系统组成。
HPLC的基本原理是通过不同样品成分与固定相之间的相互作用来分离化合物。
固定相可以是各种各样的填料，如硅胶、C18烷基硅胶等。
当样品进入柱子时，各个成分会以不同的速度进行吸附和解吸，从而分离出各组分。
流动相系统是HPLC中的重要部分，它主要负责将混合物带入柱子和在柱子中移动。
流动相可以是无机溶液，也可以是有机溶剂与无机溶液的混合物。
常见的流动相包括水，甲醇，乙酸和醋酸等溶液。
检测系统用于检测流出柱子的化合物并生成信号。
HPLC的常见检测器包括紫外-可见光谱检测器（UV-Vis）和荧光检测器。
它们通过测量样品在不同波长下的吸收或荧光发射来定量分析各个组分。
数据处理系统用于接收和处理从检测系统获得的信号。
它可以通过线性回归方法将信号转换成样品浓度，并通过柱子排列和峰面积积分来确定样品中各成分的含量。
在使用HPLC之前，首先要准备样品。
样品的制备涉及样品的提取、纯化和浓缩等步骤。
样品提取方法的选择取决于所分析样品的性质和所需分离的化合物类型。
接下来，需要准备流动相。
选择适当的流动相是成功分析的关键。
流动相的选择根据所需分离的化合物种类，以及固定相和样品的亲疏水性来确定。
然后，选择适当的柱子。
柱子的选择取决于分析目标和分离条件。
HPLC柱子的尺寸和填料类型会影响分析的时间和分离的效果。
之后，需要设置检测器，并根据所需分析的化合物选择合适的检测器。
对于紫外-可见光谱检测器，需要选择合适的波长以提高灵敏度和分辨率。
在实际操作中，还需要考虑一些其他因素。
例如，设置压力和流速以控制样品在柱子中的流动速度。
还需要进行一些温度调节，以确保溶剂和柱子的稳定性。
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HPLC的使用步骤
HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相
色谱技术，用于分离和分析溶液中的化合物。
下面是HPLC的使用步骤：
1.样品准备：首先，需要准备样品。
根据所研究的化合物性质，选择
适当的提取和纯化方法。
确保样品的浓度适当，并将其溶解于适当的溶剂中。
2.设定仪器参数：接下来，需要设置和检查仪器的相关参数。
这包括
选择适当的色谱柱、流动相、检测器和流速等。
根据样品特性和分离要求，选择合适的操作条件。
3.预洗色谱柱：在开始实验之前，需要进行柱子的预洗。
这可以通过
将流动相在柱子上通过一段时间来完成。
这有助于去除残留杂质并稳定柱子。
4.校准仪器：为了确保准确的分析结果，需要校准仪器。
这可以通过
使用标准样品来完成。
选择适当的标准物质，根据其峰面积和浓度绘制标
准曲线。
5.注射样品：将样品溶液注射到色谱仪中，通常使用自动注射器。
确
保样品注射量适当，以避免柱子过载。
6.运行分离：开始运行仪器，以分离样品中的化合物。
流动相以设定
的速率通过色谱柱，用于分离化合物。
这个过程可能需要一段时间，取决
于样品的复杂性。
7.监测检测器信号：使用合适的检测器监测流经柱子的化合物。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
通过检测器产生的信号，可以确定样品中的目标化合物的存在和浓度。
8.数据分析：分析检测器产生的信号，并将其转换为峰面积。
使用标准曲线和峰面积，可以计算出样品中目标化合物的浓度。
进行数据分析和处理，以获取所需的结果。
9.定性和定量分析：根据所需的目标，确定化合物的质量和纯度。
可以使用定性和定量方法来确定目标化合物的结构和浓度。
10.清洗和保养：在使用HPLC之后，需要对仪器进行清洗和保养。
这包括冲洗色谱柱、清洗注射器和流动相贮存器。
确保所有的部件都干净，没有残留物。
这些步骤提供了使用HPLC进行分离和分析化合物的基本指南。
根据具体的实验目的和所研究的化合物，可能需要进行调整和优化。
在进行实验之前，还应详细了解仪器的操作手册，并充分理解实验的目的和原理。