pYES2-EGFP酵母表达载体
PYGO2基因RNA干扰真核表达载体的构建
中 国图 书 资 料 分 类 号 Ｒ ３６ 文 献 标 识 码 ４
Ｃｏ ｓｒ ｃ ｉｎ ｆＰＹＧ０ ２ ｅ ａ ｙ ｔｃｅ ｐｒ ｓ ｉｎ ｅ ｔ ｏ ｎ ｔ ｕ ｔｏ ｏ ｕｋ ｒ ｏ ｉ ｘ ｅｓｏ ｖ ｃｏｒｆ ｒ ＲＮＡ ｎ ｅ ｆｒ ｎｃ ｉ ｔ ｒｅ ｅ ｅ ＷＡ ＮＧ Ｈａｄ ｎ ， Ｓ Ｘｉｈ ｉ ｉｏ ｇ Ｕ ｎ ｕ ， ＷＡ Ｇ Ｚｈａ ｘａ ｇ Ｍ Ａ ｏ ｇｈ ｉ Ｎ ｎ ｉｎ ， Ｙ ｎ ｕ ， Ｔ ＡＮ Ｇ ｏ ｉ ｕ ｗｅ
Ｄｐｒ ｅｔｆＮ ｕｏｕ ｅ ， ｅ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ｎ ｏ ｅｒ ｕｇｒ ｅｉ ｉ， ｈ ｉｔ ｏ ｉｌ Ｘａ ｎＣｔ， ｉｍ ｎ ｅａｔ ｎ ｏ ｅｒｓｒ ｒ Ｄｐ ｔ ｔ ｆＮ ｕｏ ｒｅ Ｍ ｄ ｎ ＴｅＦｒ ｓ ｔ ｉ ｉ Ｘａ ｍ ｇｙ ａｍ ｅ ｓ ｙ ｅｎ ｓＨ ｐａ ｏ ｆ ｅ ｍ ｙ ｅ
中华 神 经 外 科 疾 病 研 究 杂 志 （ ｈｎＪＮ ｕｏｕｇＤｓＲ ｓ ２０ ；（ Ｃ ｉ ｅｒｓｒ ｉ ｅ） ０ ９ ８ ２
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１７・ ２
文 章 编 号 ：６ １ ２ ９ （０ ９ ０ １７ — ８７ ２ ０ ）８—１７— ４ ２ ０
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论著 ・
Ｐ Ｇ ２ 因 Ｒ Ａ干 扰 真 核 表 达 载 体 的构 建 Ｙ Ｏ基 Ｎ
ｓｒｉ ｓｗｅ ｅ ｔａ ｓ ｒ ｅ ｔａｎ ｒ ｒ ｆ ｍ ｄ，ｐａ ｍｉ ｒ ｘｒ ｃｅ ａ ｄ ｒ ｃ ｍｂ ｎ ｎｔｖ ｃｏ ｒ ｄ ｎ ｉｅ ｙ ｔｅ ｒｓｒｃｉｎ ｍａ ｎ ｏ ｌ ｓ ｄ ｗｅｅ ｅ ｔａ ｔ ｄ ｎ ｅ ｏ ｉ ａ ｅ ｔｒ ｗｅｅ ｉｅ ｔｆ ｄ ｂ ｈ ｅ ｔ ｔ ｐ ｉ ｉ ｏ ｎ ｅ ｕｅ ｅ ａ ｌｓｓ ａ ｄ ｓｑ ｎｃ ａｙ ｉ．Ｔｈ ｅ ｏ ｉａ ｔｐ ｎ ｅｒ ｃ ｍ ｎ ｎ ＳＵＰＥＲ． ｒ ｂ ｐｕｏ—ＰＹＧＯ２ｗａ ｒ ｎ ｆｃｅ ｎｏ ｔｅ ｃ ｌ ｅ ｅｌ．Ａｔ４ ｓｔａ ｓｅ ｔｄ ｉ ｔ ｈ ｕｔ ｄ Ｃ６ ｃ ｌ ｕｒ ｓ ８ ｈ ａｔｒｔａ ｓｅ ｔｏ ｆｅ ｎ ｆｃｉｎ．ｔ ｅｗｈｏｅｃ ｌ ｐ ｏｅｎ ｒ ｘｒｃ ｅ ｎ ｈ ｒ ｔｉ ｅ ｅ ｓｄｅｅ ｔｄ ｂ ｅ ｔｒ ｌｔｗｉｈ ｒ ｈ ｌ ｅｌ ｒ ｔｉｓｗｅ ｅｅ ｔａ ｔｄ ａ ｄ ｔｅ ｐ ｏｅｎ ｌｖ ｌｗａ ｔｃｅ ｙ Ｗ ｓｅ ｂｏ ｔ ｎ ｇ ａ— ｎｉｍｏ ｓ ｏ ｔａ ｔ— ｕ ｅＰＹＧＯ２ｍｏ ｏ ｌｎ ｎｔｂ ｄｙ Ｒｅ ｕｌｓ Ｒｅ ｏ ｉａ ｔｐ ａ ｍｉｓｃ ｍｐｌｔｌ ｔｈ ｄ ｔｅ ｏ ｔｏ ｙ ｎ ｃｏ ａ ａ ｉ ｏ ． ｓ ｔ ｌ ｃ ｍ ｎ ｎ ｌｓ ｄ ｏ ｂ ｅｅｙｍａｃ ｅ ｈ ｕｃ ｍｅ ｂ ｔ ｅ ｔｉｔｏ ｍａ ｄ ｔｅ ｓ ｑ ｅ ｃ ｎａｙｉ． ｐ ｈｅｒ ｓｒｃｉｎ ｐ ａ ｈ ｅ ｕ ｎ ｅ ａ ｌｓｓ ＳＵＰ ｎ ＥＲ． ｕｒ—ＰＹＧＯ２ｅ ｐ ｅｓｏ ｅ ｔｒｉｔ ６ ｃ ｌｓｄ ｗ ｒ ｇ ｐ ｏ ｘ ｒｓ ｉｎ ｖ ｃｏ ｎ ｏ Ｃ ｅｌ ｏ ｎ—ｅ ｕ— ｌｔ ｈ ｒｔｉ ｅ ｅ ｆＰ ａｅ ｔ ｅ ｐ ｏｅｎ ｌｖ ｌｏ ＹＧＯ２ａ ８ ｈ ａｔｒｔａ ｓｅ ｔｏ ｎ ｈ ｅ ｏ ｉａ ｔｅ ｋａｙ ｔｃ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｅ ｔｒ ｒ ｄ ｔ４ ｅ ｒ ｆｃｉｎ ａ ｄ ｔｅ ｒｃ ｍ ｎ ｕ ｒ ｏｉ ｘ ｒ ｓｉｎ ｖ ｃｏｓｗｅ ｅ ｆ ｎ ｂ ｎ
原核表达载体pET28a-EGFP的构建与表达
利 用 热 击 法把 得 到 的 重组 质 粒 ｐ Ｔ ８ —Ｇ Ｐ转 化 至 Ｅ ｃｌＢ ２ （ ｓｈｒ ｈａｃｌＢ ２ ） 受 态 细 胞 中， 大 肠 Ｅ ２ ａＥ Ｆ ．ｏ Ｌ １ Ｅｃｅｃ ｉ ｏ Ｌ １ 感 ｉ ｉ ｉ 当
埃 希 茵 Ｌ （ ｕｉ・ｅｔ ｉ培养 液 在 ６ ０ｎ 下 的光 密 度值 Ｄ ６ ＝０ ４时 ， 过 添 加 异 丙基 硫 代 ＢＤ 半 乳 糖 苷 Ｂ Ｌ ｒ Ｂ ｒ ｎ） ａ ａ ０ ｍ Ｄ０ ． ０ 通 —一 （Ｐ Ｇ 作 为 诱 导 剂诱 导 Ｅ Ｆ ＩＴ ） Ｇ Ｐ表 达 。结 果 表 明 ： 重组 质 粒 酶 切 鉴 定 及 测 序 结 果 正 确 。 在 自然 光 下 ， 化 子 在 转
减毒沙门氏菌为载体在HepG-2细胞中表达EGFP基因
基 础 研 究
不 同粒径 大小胶体 金 的制备
顾菲菲 高海 岗 陆建荣 ．
（ 江苏省苏州市动物卫生监督所，江苏苏州 ２ １ ５ １ ２ ８ ）
［ 摘 要］ 研究利用柠檬 酸钠作 为还原剂 ，采用 液相还原 法制备 了不 同大小的胶体 金纳米颗粒 ；用 紫外可见分光光度计对 胶体金颗粒 的形 貌和光 学吸收特性进行 了检测 …，结果表 明在一定浓度 下柠檬酸三钠 的加入量与胶体金粒径的 大小成反比 。
收特性进行了检测 ，揭示了柠檬酸三钠 的量与胶体金粒径大小的 放 在 电炉 上 加 热 ，然 后用 移 液枪 移 取４ ｍ ｌ 的氯 化金 加 入 到超 纯 水
关系。
１ 实验 试剂与处理
１ ． １ 实 验 试 剂
中 ，煮 沸 。待其 沸 腾后 加入 一定 量 的 １ ％的柠檬 酸 三钠溶 液 ，振 荡 混匀。待煮至颜色发生变化后 ，计时５ ｍ ｉ ｎ ，之后取下锥形瓶，冷
ａ ｔ ｔ ｅ ｎ ｕ ａ ｔ ｅ ｄ Ｓ ａ ｌ ｍｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｉ ｃ ａ ｓ ｅ ｒ ｏ ｖ ａ ｒ Ｔ ｙ ｐ ｈ ｉ ｍｕ ｒ ｉ ｕ ｍ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｄ ｉ ｎ ｇ Ｅｉ ｍｅ ｒ ｉ ａ ａ ｃ ｅ ｒ ｖ ｕ ｌ ｉ ｎ ａ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｏ ｆ ｆ ｅ ｒ ｓ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｇ ａ ｉ ｎｓ ｔ Ｅ． ａ ｃ ｅ ｒ ｖ ｕ ｌ ｉ ｎ ａ
ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ － Ｔ ｏ ｘ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍａ ｇ ｏ ｎ ｄ ｉ ｉ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ［ Ｊ ］ ． Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，２ ０ ０ ７ ， ７ ４（ １ ） ：５ Ｏ 一 ５ ６ ． 【 ３ ］ Ｋｏ ｎ ｊ ｕ ｆ ｃ ａ Ｖ，Ｗ ａ ｎ ｄ ａ Ｓ Ｙ，Ｊ ｅ ｎ ｋ ｉ ｎ ｓ Ｍ Ｃ，ｅ ｔ ａ １ ． Ａ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｎ ｔ
毕赤酵母表达系统资料整理
Mut+ 和Muts毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶一一A0X1及A0X2细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1基因产物，甲醇可紧密调节、诱导AOX1基因的高水平表达，较典型的是占可溶性蛋白的30%以上。
AOX1基因调控分两步：抑制/去抑制机制加诱导机制。
简单来说，在含葡萄糖的培养基中，即使加入诱导物甲醇转录仍受抑制。
为此，用甲醇进行优化诱导时，推荐在甘油培养基中培养。
注意即使在甘油中生长（去抑制）时，仍不足以使AOX1基因达到最低水平的表达，诱导物甲醇是AOX1基因可辨表达水平所必需的。
AOX1基因已被分离，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。
AOX2基因与AOX1基因有97%的同源性，但在甲醇中带AOX2基因的菌株比带AOX1基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离Muts菌株。
在YPD酵母膏、蛋白豚、葡萄糖）培养基中，不论是Mut+还是Muts其在对数期增殖一倍的时间大约为2h ° Mut+和Muts菌株在没有甲醇存在的情况下生长速率是一样的，存在甲醇的情况下，Mut+在对数期增殖一倍的时间大约为4至6个小时，Muts在对数期增殖一倍的时间大约为18个小时。
菌株GS115 > X- 33、KM71 和SMD1168 的区另I]GS115、KM71和SMD1168等是用于表达外源蛋白的毕赤酵母受体菌，与酿酒酵母相比，毕赤酵母不会使蛋白过糖基化，糖基化后有利于蛋白的溶解或形成正确的折叠结构。
GS115 > KM 71 ' SMD1168在组氨酸脫氢酶位点（His4）有突变，是组氨酸缺陷型，如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。
这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。
GS115表型为Mut+，重组表达载体转化GS115后，长出的转化子可能是Mut+，也可能是Muts （载体取代AX01基因），可以在MM和MD培养基上鉴定表型。
诱导型和组成型启动子对酿酒酵母合成紫杉二烯的影响
够在细胞生长开始便表达异源酶从而产出目标化合 物 " 但采用组成型启动子调控 " 细胞必须能够耐受 产物的毒性 % 因而两种启动子各有利弊 " 针对不同 的目标化合物和表达体系 " 何种启动子更为适配不 能一概而论 " 需要进一步的探究 % 本文将研究在酵母中生产目标化合物紫杉二 烯 % 首先通过 过 表 达 截 短 的 羟 甲 戊 二 酰 辅 酶 : 基 因 ! ! " # %# 和 法 尼 基 焦 磷 酸 合 酶 基 因 ! & % ' (# $ $ 对酵母底盘的内源模块进行改造 " 在改造的底盘细 胞中导入外源紫杉二烯合 酶 基 因 ! #和?牛儿基 ! 4 ? 牛儿基焦磷酸合酶基因 ! # 模 块"从 而 实 4 $ $ + + 现酵母底盘 的 紫 杉 二 烯 生 产 % 在 此 基 础 上 将! 4基 因的启动子由诱导型替换为组成型 " 以进一步提高 产量 % 由于组成型启动子调控的基因能够在葡萄糖 的环境中表达 " 不仅有利于酵母细胞的生长 " 而且 无须使用 半 乳 糖 作 为 诱 导 剂 使 得 发 酵 成 本 更 为 低 廉 " 符合工业化生产的要求 %
3 ; " 1 1 > 1 " & # 6 ; / >9 7 6 7 & & % 6 7 & ; " 7 1 > 1 6 / 7 6 7B 7 6 C & % 4 6 ! 6 / 7 6 7+ * * * 9 )? " 6 7 / 2? $ $ G@ $ -@ A -@ A
&G F E D&
pHISi使用说明
pHISi编号载体名称北京华越洋VECT76301pHISipHISi载体图谱:pHISi载体简介：pHISi is a yeast integration and reporter vector for use with the MATCHMAKER One-Hybrid System.pHISi contains the yeast HIS3gene downstream of the MCS and the minimal promoter of the HIS3locus(PminHIS).Cis-acting sequences of interest (i.e.,target elements)can be inserted into the MCS.Without activation by a target element,constitutive HIS3expression from PminHIS is very low in yeast,but allows enough growth to select for integration when constructing HIS3reporter strains. During library screening,the leaky expression of HIS3is controlled by adding3-AT to the medium.The yeast URA3and HIS3genes of pHISi can be used as selectable markers for integration into the nonfunctional ura3and his3loci,respectively,of the YM4271 host strain.Before integrating,the vector is linearized at the Xho I or Afl II sites(his3 locus)or at the Apa I site(ura3locus).The Kpn I site cannot be used for integration because it cuts within the coding region of the HIS3gene,and that region is deleted in YM4271.pHISi cannot replicate autonomously in yeast.The plasmid contains a bacterial Col E1origin(ori)and the ampicillin resistance gene(Ampr)for propagation and selection in E.coli.Unique restriction sites are in bold.。
真核表达载体pIRES2—AcGFP1—Ascl2的构建及表达
真核表达载体pIRES2—AcGFP1—Ascl2的构建及表达作者：陈彦霞刘津麟李涯松来源：《中国现代医生》2014年第21期[摘要] 目的构建真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2，并在真核细胞HEK293T细胞中表达，为今后研究Ascl2基因在Tfh细胞的相关分子机制奠定实验基础。
方法 PCR方法扩增健康人外周血单个核细胞中Ascl2基因，连接至pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点中，构建pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒。
通过脂质体转染法对HEK293T细胞进行转染。
Realtime-PCR及Westernblot方法分析转染pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒的HEK293T细胞中Ascl2表达情况。
结果经Realtime-PCR及Westernblot方法，证实Ascl2基因能够在HEK293T细胞中正确表达。
结论成功建立表达Ascl2基因的pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒，并能在HEK293T细胞中表达，为进一步研究Ascl2在自身免疫性疾病中Tfh细胞的相关机制奠定了实验基础。
[关键词] Ascl2；HEK293T细胞；Tfh细胞；自身免疫性疾病[中图分类号] R73-3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）21-0005-03滤泡辅助性T淋巴细胞（T follicular helper，Tfh）是近年研究发现的CD4+T细胞的新亚群[1]。
它的特征性标志为CXCR5+、PD-1+、ICOS+、CCR7-、Bcl-6+。
Tfh细胞在机体的生发中心形成和B细胞分化中起重要作用，在对维持机体的免疫平衡发挥重要作用，它的功能失调与自身免疫性疾病及免疫缺陷病中扮演重要角色[2-4]。
新近研究发现一种bHLH（basic Helix-Loop-Helix，碱性螺旋-环-螺旋）转录因子：Ascl2（achaete-scute homologue 2）在Tfh细胞中选择性的表达上调[5]。
载体图谱
一、pGADT7(Amp)酵母表达载体(AD-Amp)AD forward primer: 5'-TAATACGACTCACTATAGGGC-3'AD reverse primer: 5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'F：GC AT CGA TAC ATG GC T TG T GCTACTCTGAR：GGCC GGATCC TTAAGAGAGGTAGCTGGGAGAD forward primer: 5'-TAATACGACTCACTATAGGGC-3'AD reverse primer: 5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'二、pGBKT7(Kan0酵母表达载体(BD-Kan)三、BIFC(Kan)验证互做蛋白表达载体（德国）四、pGR107(Kan)表达载体（PVX-10kb）吴建国MCS:ClaI/SmaI/SalI(pgR107)MCS:ClaI/AscI/NotI/SalI(pgR106) 五、BIFC(Amp)载体（美国）3075（nEYFP-329bp）3076 (cEYFP-218bp)F：GGC GAATTC ATG GCTTGTGCTACTCTGA R：GGC CCTAGG AGAGAGGTAGCTGGGAG TAA TAG TGA六、RNAI(Kan)载体-pFGC5941（王宗华）七、pGEX-4T-1(Amp)原核表达载体八：pET-29a(Kan)原核表达载体九、. pEGAD(Kan)植物表达载体*XbaⅠ cleavage blocked by overlapping dam methylation. Must grow in dam-strain to cut. Note, XhoⅠ is not unique.pTRV2(a) Genome organization of TRV. The TRV-RNA1 open reading frames (ORFs) correspond to 134 and 194 kDa replicase, movement protein (MP) and a 16-kDa cysteine-rich protein. The TRV-RNA2 ORFs corresponds to coat protein (CP), and the 29.4 and 32.8 kDa proteins. gRNA, genomic RNA; sgRNA, subgenomic RNA. Asterisks (*) indicate the readthrough of 134 kDa protein.(b) TRV based VIGS vectors. TRV cDNA clones were placed in betweenthe duplicated CaMV 35S promoter (2×35S) and the nopaline synthase terminator (NOSt) in a T-DNA vector. LB and RB refer to left and right borders of T-DNA. Rz, self-cleaving ribozyme. MCS, multiple cloning sites.十、十一、1103-YFP十二：pBINPLUS十三、pBin438。
8 常用载体通用引物
EF-1α Fwd
BGH
pBudCE4.1/lacZ/CAT
CMV-Profor,T7
c-mycrev,EBVrev
pBV220
pBV220F
PBV220R
pCAL-c
T7/Tac-Profor
T7-Terminator
pCAL-n
T7/Tac-Profor
T7-Terminator
M13rev/Tac-Profor
pcDNA3
T7/CMV-Profor
BGH rev/SP6
pcDNA3.1(+/-)
pcDNA3.1F/T7/CMV-Profor
BGH rev
pcDNA3.1/His(_A,_B,_C)
T7/CMV-Profor
BGH rev
pcDNA3.1/myc-His(_A,_B,_C)
BAC1
BAC2
pBAD
pBAD-F
pBAD-R
pBAD/HisABC
pBAD-5'
pBBR1MCS
T3/M13rev
T7/M13for
pBD-GAL4
pBD-GAL4-F
PBD-GAL4-R
pBI121
35S
NOS
pBIND
GAL4-Bdfor
T3,EBVrev
pBK-CMV
M13F/T7
M13R/T3
载体名称
上游引物（5'primer）
下游引物（3'primer）
P3*FLAG-CMV
CMV-30(825-854)
CMV-24(1129-1152)
pAc5.1/V5-His(_A,_B,_C)
pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞的研究
５ Ｔ ＡＣ Ｔ ＡＣ ＇ Ｔ Ｔ ＧＴ ＡＧＣ ＣＧ Ｃ ３ 从质 粒 ｐＲ Ｓ ． － Ｔ Ｔ 一 ， ｌ Ｅ ２
Ｅ Ｆ Ｇ Ｐ中扩 出增 强型绿色 荧光蛋 白。其 Ｐ Ｒ循环 为： Ｃ
９ ℃３ｍｉ ，９ ℃３ 、５ ℃３ 、７ ℃ １ｍｉ 循 ５ ｎ ４ ０ｓ ５ ０Ｓ ２ ｎ
段 的方 向（ ｎ ｌ ￣ Ｂ ｍ Ｉ 酶切有带而ＨｉｄＩ Ｈｉ Ｉ Ｈ ａ Ｈ 双 ｄ Ｉ ｎ ｌ 单 Ｉ
１ 材 料 与方 法
１１ 试验 材料 ．
酶 切 没 有 带 的 质 粒 为 反相 连 接 ） ，回 收 Ｈｉ ｄＩ 、 ｎ Ｉ Ｉ Ｂａ 双 酶 切所 得 的条 带 ，然 后 与经 Ｈｉ ｄＩ 、 ｍＨ Ｉ ｎ Ｉ Ｉ Ｂ ｍＨ Ｉ 酶切的 ｐ ｅＴ ｇ连接 ，最 后用 Ｈ ｎ ＩＤ ａ 双 Ｓｃ ａ ｉｄ Ｉ Ｉ￣ Ｂ ｍＨ Ｉ 酶切鉴 定是否 成功构 建 了分 泌型真 核表 ａ 双
环３ ２次 ，最后 ７ ℃ １ ｎ延伸 一次 。 ２ ０ ｍｉ １３ 表 达载体 的构建 及酶切 鉴定 ． 回收 Ｐ Ｒ产 物并 与 ｐ Ｃ ＭＤ１ 一 ８Ｔ连接 ， Ｈｉ Ｉ 用 ｎ Ｉ、 ｄ Ｉ Ｂｍ Ｉ ａ Ｈ 双酶切 和 Ｈ ｎ Ｉ 酶切 的方 法鉴定插 入片 ｉｄＩ 单 Ｉ
３８ ｌ
实验 动物 与 比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔ ｙＡ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｉ ｄ ｉｅ ａｏａ ｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｅＭｅｉ ｎ ｏ ｖ ｃ
Ｏ ｔ ０ ８２ （） ｃ． ０ ， ５ ２ ８
ｐ ｅＴ ｇＥ Ｐ真核 表 达 载体 的构建 及其 Ｓ ｃ ａ ． ＧＦ 转 染鸡 胚胎 成纤维 细胞 的研 究
文通过构 建 了含报 告基因 Ｅ Ｐ增 强型绿色 荧光蛋 ＧＦ （
白） 的分 泌型真 核表 达载 体 ｐ ｅ Ｔ ｇＥ Ｐ，设计 Ｓ ｃ ａ — ＧＦ 正交优化 实验 ，找到质粒转 染鸡胚胎成 纤维细 胞 的 最佳转 染条件 ，为研究 目的基因在鸡胚 胎成纤 维细
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pYES2-EGFP
编号 载体名称
北京华越洋生物VECT2420 pYES2-‐EGFP
载体基本信息
出品公司: -‐-‐
载体名称: pYES2-‐EGFP
质粒类型: 酿酒酵母荧光蛋白表达载体
表达水平: 高拷贝
诱导方法: 半乳糖
启动子: GAL1
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 6.7 K b
5' 测序引物及序列: EGFP-‐N-‐F: T GTACGGTGGGAGGTCTAT
3' 测序引物及序列: CYC1 T erminator: G TGACATAACTAATTACATGATG
载体标签: /
载体抗性: 氨苄
筛选标记: URA3
备注: 利用半乳糖诱导蛋白在酿酒酵母中表达EGFP荧光蛋白。
产品目录号: -‐-‐
稳定性: 稳定 Stable
组成型/诱导型: 诱导型
病毒/非病毒: 非病毒
其他酵母表达载体：
p416GFD pPIC9
p53blue pPIC9K
pACT2-AD pPIC9k-His
pAD-GAL4-2.1 pPICZA
pADH2 pPICZB
pAUR123 pPICZC
pBridge pPICZαA
pCL1 pPICZαB
pDEST32 pPICZαC
pDisplay pPICZαD
pDR195 pPICZαFC
pESC-His pPICZαGB
pESC-Leu pPink-HC
pESC-TRP pPink-LC
pESC-URA pPinkα-HC
pFA6a-FGP(S65T)-kanMX6 pRS316
pFLD pRS403 pFLD/CAT pRS405 pFLDαpRS406 pGADT7-T pRS414 pGAG424 pRS415 pGAPZA pRS416 pGAPZB pRS41H pGAPZαB pRS426 pGAPZαC pRS426gal pGBKT7 pSEP1 pGBKT7-53 pSEP2 pGBKT7-Lam pSEP3
pHIC-PI pSos
pHIL-D2 pSos-MAFB pHIL-S1 pUG66
pHis2 pYC2/CT pHisSi-1 pYC2/NTA pMETA pYC2/NTB pMETB pYCP211 pMETC pYEPlac112 pMETαA pYEPlac195 pMETαB pYES2
pMETαC pYES2-EGFP pMyr pYES2-kan pPIC3.5 pYES2-NTA pPIC3.5K pYES2-NTB pPIC6B pYES2-NTC pPIC6C pYES3/CT pPIC6αA pYES6/CT pPIC6αB pYES-DEST52 pPIC6αC pYIP211 pYX212 pYIP5 SUMOprotease pYRP7
Ycp22lac-EGFP Ycplac33。