流式细胞仪 PPT课件
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流式细胞仪
三）淋巴细胞分类
CD3(T细胞，CD4、CD8))、CD19 （B细胞）、CD16、CD56（NK细胞）， 原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫 性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观 察与预后判断、移植免疫检测等。
R1 M1 M1
流式细胞术检测细胞表型
四）白血病的免疫分型
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素 标记的单克隆抗体作分子探针，多参数 分析白血病细胞的免疫表型，了解被测 白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
流式细胞仪数据分析
点图分析
流式细胞仪数据分析
直方图分析
图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞
五、 流式细胞术的应用
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞
周期 RNA含量 蛋白质含量
……
细胞功能
UL
254
2.40 37.47 461.36
UR 1067 10.08 816.86 468.89
LL 5291 49.98 19.57 4.41
LR 3975 37.55 418.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
Date acquired: 14-Jan-03 File: 7Gy 4hr.001 Source: dongbo DIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04
FCM分析白血病免疫表型, 快速、特异、 准确，重复性好，能区分细胞起源、划 分其分化发育阶段等，对白血病的诊断 与分型、治疗方案选择与预后判断、发 病机理研究等有重要价值。
医学专题流式细胞凋亡分析PPT文档
细胞凋亡的基因调控
诱导与抑制凋亡两大基因蛋白表达的平 衡，可对细胞的增殖、分化和死亡进行调 控，维持细胞群体的正常稳定性。当调控 失衡时，就会导致疾病，如肿瘤、AIDS、 霍奇金淋巴瘤等。
细胞凋亡的基因调控
常见的凋亡基因及其蛋白：
1 bcl-2 是研究最早的与凋亡有关的基因。 bcl-2基因是一种对细胞凋亡具有明显抑制 作用的癌基因。它是阻止细胞死亡的最后 途径，而对细胞周期无明显影响。它能抑 制由许多因子，如化疗药物、某些病毒、 p53、c-myc及生长因子等激发的凋亡。
细胞凋亡与疾病
细胞凋亡与皮肤病：
自身免疫性皮肤病，如皮肌炎、硬皮病 等，其免疫异常与自身反应性T、B淋巴细 胞凋亡缺陷有关。恶性黑色素瘤的发生、 发展与细胞凋亡基因调控失常而导致凋亡 障碍有关。此外，细胞凋亡与皮肤肿瘤自 动消退有关。
细胞凋亡与疾病
缺血性脑损伤和缺血性心脏病：
以往，脑缺血导致的细胞死亡被认为是 由于神经元广泛坏死所致。近来研究表明， 全脑或局部脑梗死均激活细胞凋亡过程。 大脑半球短暂缺血后，缺血中心区域神经 细胞很快坏死，但周围的神经细胞，以海 马CAI区的锥形细胞最为明显，要经过一个 潜伏期才出现延迟性神经细胞退化，即细 胞凋亡。
细胞凋亡与疾病
细胞凋亡与免疫系统疾病：
许多以免疫功能异常为主要特征的疾病 均存在细胞凋亡现象。细胞凋亡在免疫形 态的发生分化以及抗感染免疫和自身免疫 病的发生中起重要作用。
细胞凋亡与疾病
细胞凋亡与免疫系统疾病：
当凋亡过少、炎症反应过强时，易造成 变态反应或自身免疫病。当凋亡过多，机 体免疫力下降时，容易继发感染与肿瘤。 在细胞凋亡过程中， CD95(Fas)/CD95L(FasL)以及 CD40/CD40L之间的相互作用起了重要作 用。它们通过激活T淋巴细胞的自杀或杀伤 激活的B淋巴细胞，进一步调节免疫反应的 强弱。
(医学课件)CD34绝对计数PPT幻灯片
河
21
标本运送
采集标本应该在2-6℃环境下尽快 送检，注意避免标本冻结和过热。
内部送检可用具有防漏密封的塑 料袋和带盖的塑料容器等运送标本。
河
22
标本运送
外部运送标本，包装要求含有三 层体系：防水内容器；防水并含有吸 附材料的第二层内容器；坚固的外包 装。致病原血液标本应严格按照有关 规定运送。
河
6
造血干细胞的数量是造血干细胞移植 成功的关键因素
成功的关键
造血干细胞移植
造血干细胞的数量
恶性血液病
某些实体瘤
免疫性疾病 免疫缺陷病
心肌 血管 胰岛细胞
河
7
造血干细胞的检测方法
如何准确地计数造血干细胞的数量，什 么是有效的质量控制成了各大实验室探讨 的焦点。 常用的方法： 集落培养法 流式细胞术CD34+细胞计数法
河
8
集落培养法： 优点：干细胞计数结果与移植结果相吻合 缺点：很难标准化，只代表晚期干/祖细
胞，培养时间长，不能当即判断采 集物的造血干细胞数量。
河
9
流式细胞术CD34+细胞计数法： 优点：干细胞计数结果与移植结果相吻合
快速，简单，方便。 目前已取代了集落培养法
河
10
标本标识
造血干细胞采集完成后立即抽样， 抽样前要将采集袋中的细胞与小辫中 的采集物混合5次以上，再封闭小辫， 剪取小辫中的采集物，在小辫上标记 供者编号、姓名及标本名称，送实验 室检测。
河
11
标本标识
所有检测标本应及时贴上标签，注明 患者姓名，标本类型，采集时间，申请 单和标本粘贴在一起送检，申请单要详 细填写患者的信息、标本类型及检测项 目，进行双平台检测时还需提供白细胞 计数和分类。
《NK杀伤实验》课件
《NK杀伤实验》PPT课件
# NK杀伤实验 学习NK杀伤实验的基本原理、实验步骤、数据处理和实验应用等内容。
什么是NK细胞
NK细胞是一类自然杀伤细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染细菌的能力，并参与调节免疫应答。
NK细胞的功能和特点
1 杀伤能力强
NK细胞具有高效杀伤肿瘤细胞的能力。
2 免疫调节作用
NK细胞能够调节其他免疫细胞的活性，影响免疫应答。
使用流式细胞仪软件分析细胞数据，包括细胞数量、活性和杀伤率等。
2
杀伤率的计算和绘图
根据实验数据，计算并绘制NK细胞的杀伤率图表。
实验应用
• NK杀伤实验在肿瘤免疫治疗中的应用 • NK细胞在感染性疾病免疫应答中的作用 Nhomakorabea结论
通过NK杀伤实验，我们可以评估NK细胞的活性和杀伤能力，为免疫治疗和疾病研究提供重要参考。
致谢
感谢实验室的师兄师姐们的帮助和支持，以及各位听众们的关注和支持！
NK杀伤实验的基本原理
1 使用流式细胞仪
流式细胞仪可用于检测和分析NK细胞的活性 和杀伤效果。
2 PI染色和CFSE染色
通过PI染色和CFSE染色，可以评估细胞存活和 增殖情况。
实验步骤
1. 细胞样本制备 2. PI染色和CFSE染色 3. 实验操作和数据采集
结果和数据处理
1
流式细胞仪数据分析
# NK杀伤实验 学习NK杀伤实验的基本原理、实验步骤、数据处理和实验应用等内容。
什么是NK细胞
NK细胞是一类自然杀伤细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染细菌的能力，并参与调节免疫应答。
NK细胞的功能和特点
1 杀伤能力强
NK细胞具有高效杀伤肿瘤细胞的能力。
2 免疫调节作用
NK细胞能够调节其他免疫细胞的活性，影响免疫应答。
使用流式细胞仪软件分析细胞数据，包括细胞数量、活性和杀伤率等。
2
杀伤率的计算和绘图
根据实验数据，计算并绘制NK细胞的杀伤率图表。
实验应用
• NK杀伤实验在肿瘤免疫治疗中的应用 • NK细胞在感染性疾病免疫应答中的作用 Nhomakorabea结论
通过NK杀伤实验，我们可以评估NK细胞的活性和杀伤能力，为免疫治疗和疾病研究提供重要参考。
致谢
感谢实验室的师兄师姐们的帮助和支持，以及各位听众们的关注和支持！
NK杀伤实验的基本原理
1 使用流式细胞仪
流式细胞仪可用于检测和分析NK细胞的活性 和杀伤效果。
2 PI染色和CFSE染色
通过PI染色和CFSE染色，可以评估细胞存活和 增殖情况。
实验步骤
1. 细胞样本制备 2. PI染色和CFSE染色 3. 实验操作和数据采集
结果和数据处理
1
流式细胞仪数据分析
流式基础原理ppt课件
1
荧光样本制备
双色直接染色
14
荧光素的激发和发射光谱区别
任何发荧光的物质分子都具有这两个特征光谱（nm）
激发光谱（Excitation，Ex）：
是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称 为吸收光谱。
吸收波峰（最大吸收波长）：Ex-Max
发射光谱（Emission，Em）：
18
Fluorescence Spectrum Viewer
19
Fluorescence Spectrum Viiewer
21
Fluorescence Spectrum Viewer
22
Fluorescence Spectrum Viewer
侧向角散射光信号（SSC）。
8
散射光信 号
Right Angle Light Detector
Cell Complexity
SSC
Incident Light
Source
Forward Light Detector Cell Surface Area
FSC
= 前向角散射光（FSC, Forward Scatter）
细胞功能
细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位
……
6
流式细胞仪 的检测信号
7
散射光信 号
• 当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束
方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为
23
流式数据分析形式
24
数据存 储
FCS 2.0格式 常以列表模式（LIST MODE)：将每个细胞的每个检测参
荧光样本制备
双色直接染色
14
荧光素的激发和发射光谱区别
任何发荧光的物质分子都具有这两个特征光谱（nm）
激发光谱（Excitation，Ex）：
是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称 为吸收光谱。
吸收波峰（最大吸收波长）：Ex-Max
发射光谱（Emission，Em）：
18
Fluorescence Spectrum Viewer
19
Fluorescence Spectrum Viiewer
21
Fluorescence Spectrum Viewer
22
Fluorescence Spectrum Viewer
侧向角散射光信号（SSC）。
8
散射光信 号
Right Angle Light Detector
Cell Complexity
SSC
Incident Light
Source
Forward Light Detector Cell Surface Area
FSC
= 前向角散射光（FSC, Forward Scatter）
细胞功能
细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位
……
6
流式细胞仪 的检测信号
7
散射光信 号
• 当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束
方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为
23
流式数据分析形式
24
数据存 储
FCS 2.0格式 常以列表模式（LIST MODE)：将每个细胞的每个检测参
流式分选原理ppt课件
Tips: 如何提升活力
• 无菌环境的控制 • 降低鞘液压力 • 增大喷嘴孔径，脆弱细胞必须要用大孔径喷嘴 • 包被样本收集管 • 温度控制 • 提升速度
流式分选仪的原理及应用
• 流式分选的原理 • 流式分选的影响因素 • 分选流程及注意事项
鞘液
• 必须使用盐离子缓冲溶液作为 鞘液，通常是PBS，不建议使 用生理盐水
高纯度分选,来自于分析的精度
Aria III 液滴32等分分析
Yield Mask
Tips: 如何提升分选的纯度
• 设置合适的分选模式 • 选择合适的喷嘴孔径 • 确保稳定的液流断点 • 设置正确的drop delay • 进行4路分选时，将纯度要求高的细胞分选设置在
最外的2路 • 减少样本的粘连 • 正确的设门 • 确保上样管路清洁后回测
• 特别需要维持合适的pH值， 通常为中性
• 无菌分选时，需要高压灭菌鞘 液（建议一直使用无菌鞘液）
• 一般不加NaN3 • 注意更换鞘液过滤器
合适样本类型
• 细胞大小一般不超过喷嘴孔径 1/5，绝不能超过1/3
• 建议无菌样本，容易维持上样针 部分的无菌条件
• 减少有高浓度PI的样本，以免残 留在管路内，影响后续样本活性
PSI Hz μm events/sec
分选最重要的问题
• Good Purity – 分选后所得到的细胞是否是想要的？ • Good Recovery – 分选后得到的细胞数量是否够用? • Good Viability – 分选后有多少细胞是活的？
Aria III — 高纯度 高得率
Sweet spot - 液滴断点自动监控 Accudrop - 液滴延迟自动调节 32等分液滴分辨率，精确分选模式
facs的原理及应用操作 ppt课件
FL2
TSuppr
10400M2a.0r5ker
89 84
Pati entI D:
2005.11.28 (C ontinued)
PatientN ame:
lupeng
Eventsacquired:
12000
Dataset:
[1]
Q Cel
lupeng02. 04
CD 3/CD 4
GatedEvents:
Conv
Q3
Event sacqui red:
10000
Dataset:
[1]
Q CelType
%L
GatedEve nts:
2457
Q1 CD 3-CD8 +
32
Q4
Q2 CD 3+CD 8+
21
Q3 CD 3-CD8 -
25
Fluorescence markers werefound.Manualoverride markers are in efect.
s:Gate
:
Marker
75 80 4
118 85 FL1
28 32
164 112 26
128172
FL2 100
Q1 Total Q2 Total
250
34
255
0
Q3
➢ 细胞洗涤缓冲液
Preparatio n: LysedW hol eBlood
GateC omposition(%):
Lymphs MonosGrans Debris 97
lupeng
Q2
样品处理--常见影响因素 DateAcquired:
2005兺 11懍 28粧 5: 09PM